使用BiopharmaLynx 1.3软件自动进行快速的双硫键分析单克隆抗体，高分辨质谱数据对于解析又Lys-C酶切产生的分子量较大的肽段提供了坚实的基础，再加上检测错配双硫键的功能

2010年，沃特世首次推出了基于UPLC®技术的200Å孔径的体积排阻色 谱(SEC)1。这些体积排阻UPLC (SE-UPLC)色谱柱由亚2 µm直径的亚乙基 桥杂化(BEH)颗粒组成，与纯硅胶基质颗粒相比，这种颗粒的结构和 化学性质更为稳定。正是有了这些结构更加稳定的颗粒，SE-UPLC才 得以问世。然而，小颗粒和窄内径4.6 mm SE-UPLC色谱柱并不适用于 HPLC系统。因此，沃特世基于稳定耐用的BEH填料推出了兼容HPLC、 颗粒直径为3.5 m、内径为7.8 mm的体积排阻HPLC色谱柱(SE-HPLC)。 从而让拥有HPLC仪器的实验室能够充分利用这一独特颗粒技术的优势， 这些优势还包括与硅胶基质SEC颗粒相比BEH颗粒能耐受更高反压的能 力。本应用纪要将重点介绍专为分离大分子蛋白质而设计的200Å和 450Å孔径色谱柱的性能特征，内容涉及分离度、柱间重现性和色谱 柱稳定性。此外，还将介绍在分离较大蛋白质时，这些亚4 m色谱 填料与更大粒径(5和8 m)的标准HPLC颗粒相比在分离度和样品通量 方面的显著优势。

以HPLC、UHPLC和UPLC系统为对象，通过评估分离度和容量比较了低扩散 LC系统的性能改进。计算了各系统的柱外谱带展宽，UHPLC(Arc Bio系统)和UPLC(H-Class Bio系统)平台的计算结果与预期相同，远小于HPLC系统(Alliance)。利用肽分析专用反相梯度方法举证说明低扩散系统的作用，证明了三种不同LC平台间分离度和峰容量的提升。无论是复杂分析物的常规分析还是方法开发，都需要注意仪器平台之间的性能差异，这样才能够为生物分子的分析提供适合的解决方案。

许多USP梯度洗脱方法都使用填料粒径>3 m的色谱柱，这些方法可在多 种LC系统上有效地运行。本研究在三种不同的LC系统上(Alliance HPLC系统、ACQUITY Arc UHPLC系统和ACQUITY UPLC H-Class PLUS系统)成 功运行了USP富马酸喹硫平杂质分析方法。这三种液相色谱系统上的结果 均符合USP系统适应性要求，并且在分析未知样品中的杂质浓度时得到了 非常一致且重现性良好的结果。

蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别、蛋白分泌、信号转导等生命过程中发挥了中医院的作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体。特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着重要的影响。因此，发展分离效率高，检测灵敏度好的糖基化分析方法对单克隆抗体药物分析具有十分重要的意义。