在2021最新版的Methods in Molecular Biology·Lung Cancer第10章(127页开始)介绍了使用naica®六通道微滴芯片数字PCR系统检测NSCLC患者ctDNA样本中的19种活化和耐药位点，并对检测方法进行了详细的描述。naica®六通道微滴芯片数字PCR系统检测流程文中阐述，naica®六通道微滴芯片数字PCR系统多重检测速度快，每个患者样本可获得大量突变信息，通过naica®六通道微滴芯片数字PCR系统进行液体活检可实现高灵敏度和高效的治疗监测，早期发现治疗耐药性。Methods in Molecular Biology是Springer出版的权威分子生物学方法学系列著作，共1110册，涵盖了生物学的方方面面。包括生命科学、药物科学、化学、药学、材料学、细胞生物学、生物化学、人类基因组学、植物性、免疫学等。Lung Cancer就肺肿瘤生物学常用的实验方法进行了深入的讨论和细致的描述，包括用于建立肺癌诊断和预后的相关研究方法。naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

法国Stilla Technologies公司开发的—款多重PCR专用预混液：naica®multiplex PCR MIX（见表1），专用于naica®六通道微滴芯片数字PCR系统的多重检测。并对naica®multiplex PCR MIX的多重检测性能进行了详细评估。当面对有限的样本量时，可保证多重数字PCR检测的灵敏度和准确性；在复杂背景基因存在的情况下，依然能精确检出低丰度的目的基因。★ naica®multiplex PCR MIX在naica®六通道微滴芯片数字PCR上进行6个靶标的同步准确定量采用0.2~13000cp/ul的DNA样品，使用10X naica®multiplex PCR MIX在naica®六通道微滴芯片数字PCR系统上进行6个靶标的线性范围分析，结果显示6个靶标的R2均＞0.99，说明在naica®六通道微滴芯片数字PCR系统上，能够可靠地实现6靶标同步准确定量（图1)。与2X和5X浓度的数字PCR预混液(dPCR Mixes)相比，10X浓度的数字PCR预混液体积加入量降低了50％至80％，最大限度地提高样品加入量。尤其是在检测低浓度样品或稀有靶标时，样品加入量的增加可提高检测灵敏度。▲ 图1：使用naica®multiplex PCR MIX在naica®六通道微滴芯片数字PCR上进行6个靶标的线性分析，分别在蓝色、青色、绿色、黄色、红色和红外线6个通道进行检测。每个稀释点的DNA浓度分别为：0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000 cp/ul，每个稀释度进行3次重复。结果显示6个靶标的R2均大于0.99，说明所有靶标的结果都高度真实可靠。★ 在复杂的背景基因下，对低丰度目的基因进行精确定量数字PCR的—个重要技术优势是能够在存在多个靶标扩增的情况下检测到低浓度靶标。为了评估naica®multiplex PCR MIX的稳定性。使用同一个目标DNA模板的不同浓度系列稀释液（0.2~ 13000 cp/uL)进行检测，同时其中掺入5种外部靶标模板（每个靶标的浓度为3000 cp/ul)。在不同测试条件下，结果均呈现良好的线性关系（图2A和2C)。这些结果与同一DNA 靶点在不同浓度下单独检测以及在不添加外部靶标的情况下获得的结果具有可比性（图2B和2D）。▲ 图2：使用naica®multiplex PCR MIX的扩增结果真实可靠。将pUC18质粒（图A和B)和pUC57质粒（图C和D)的13000至0.2 cp/ul的系列稀释液在5个外部扩增靶标背景下（每个靶标为3000 cp/ul(A,C)）和在不含外部靶标(B,D)的情况下进行定量检测，3次重复。线性拟合系数 R2>0.99，表明在不考虑多重背景的情况下，对所有靶标的测定结果都是真实可靠的。5个外部靶标的相对标准偏差保持在2.3％至3.1% (n=21)，显示出极好的重复性。★ naica®multiplex PCR MIX应用亮点☑  实现数字PCR方法多重检测的高度稳定性和高检测灵敏度；☑  可在naica®六通道微滴芯片数字PCR系统的动态范围内同时定量检测6个独立的DNA靶标，均具有良好线性关系；☑  5X和10X的数字PCR预混液，提高了naica®六通道微滴芯片数字PCR系统高阶多重检测能力；☑  10X PCR MIX比5X PCR MIX降低50％的体积用量，从而增加DNA的加入量。在检测低浓度样品或稀有靶标时，样本加入量的增加可提高检测灵敏度。表1 naica®multiplex PCR MIX货号及规格naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

我是一颗小小的细胞，从哪里来到哪里去，被安排的明明白白。图源：网络别看我小，我可厉害了，我可是生物体形态结构和生命活动的基本单位哈，可以形成组织，组织形成器官，器官组合形成个体。图源：网络我可以通过分裂，一分为二，二分四，以此类推，我逐渐变多，但是为了不让我太膨胀，科研小伙伴非要给我测下数，他们用了一个试剂名叫胰酶，将我们分散，然后又将我们稀释，我的兄弟姐妹都被冲到好远，我也找不到它们，大部分我们还是活的好好的，那些体弱多病的经过这么一折腾game over了 ，科研小伙伴为了区分死活，还给我们用台盼兰染色，这样我们就很容易被区分，还能算算存活率。图源：网络不过我们也都是见过大场面的，什么大风大浪我们都经历过（内心os），正在这沉思中，我就被装到了一个名叫细胞计数板的板板上，就听外面的科研小伙伴说，数上不数下，数左不数右，别打扰我，我都数错了，还得重新按计数器。作为细胞的我，看着他们摇摇头，现在都啥年代了，还得用手动算，我之前见过一台很高端的仪器，既能当显微镜观察我，又可以数数我有多少的复制品，把我拍的可美了。我给大家介绍一下，它就是Rebel正倒置一体显微镜，方便小巧，一机多能，小小的身体，大大的能量。作为显微镜，Rebel具有优秀的硬件素质：8MP高分辨率彩色相机高度还原色彩、Apple iPad Pro触控显示操作就像玩APP一样简单、内置10X目镜全视观察技术、远程滑鼠式控制器（电动调焦），想怎么拍就怎么拍，高能LED光源寿命长……优点太多啦，就不多说了，怕骄傲。Rebel还可以进行智能细胞计数，几秒内快速分析图像，告别以往费时费力的人工计数，轻轻一点，自动计算存活率，so easy。实现多张图片采集，多次计算，消除人为误差，精准度特别高。轻松实现自动捏合缩放，查看单个细胞进行质控和纠偏，还可以快速计算不同直径大小的细胞数。Rebel细胞计数不挑耗材，在培养皿、玻片、血球计数板上通通可以。今天就介绍到这吧，期待我们下次再见。

小明师兄：师妹，你上午去哪儿了？又跑出去玩啦？小红师妹：怎么会，我一上午都在显微镜室里看细胞。小红师妹：师兄，你会用那台显微镜不？我上午让张老师带我拍了一次，但是那个软件太复杂了，我怕按错了，你带带我吧。小明师兄：我记得你材料不多啊，一上午还没拍完啊？小红师妹：材料是不多，但是每个材料都要花好久去调节那些参数，哎，拍一个好看的图片太费时间了……小红师妹：师兄，我记得你之前拍的超级快，最后的图片效果还好，你是怎么调的?教教我呗。小明师兄：你用的那台机器我也没办法，要调节的东西太多了……小红师妹：那你之前咋拍的？小明师兄：我用的孙老师课题组的Echo显微镜拍的，等会儿我问问孙老师的显微镜下午有空不？有空就借用一小会，把你的材料拍完。小红师妹：好嘞，下午拍完请你喝奶茶。叮铃铃，下午啦！小红师妹：哇，师兄，这台显微镜好好看。Revolve Generation 2正倒置一体荧光显微镜不过这台显微镜的目镜在哪？怎么观察啊？小明师兄：这台显微镜直接采用高清屏幕进行观察的，目镜是内置的，打开屏幕直接用就可以了。小红师妹：这个屏幕是苹果的？小明师兄：嗯，这台显微镜为了更好的进行人机交互，并呈现更好的图像质量，所以使用了一台IPAD PRO作为显示和操作终端。小红师妹：这个操作界面真的好简洁，直接都能看懂。小明师兄：嗯，把你的样品放上去，我们就可以进行观察啦。小红师妹：它是圆形的视野，和显微镜目镜里看到的好像。小明师兄：嗯，它采用的是独特的全视野技术，所以可以呈现和目镜一样的观察视野大小。小红师妹：那这个好方便啊，上午我用眼睛盯着目镜筒，不但眼睛累，背都酸了。小明师兄：参数调整和拍照等都直接触控操作就可以。小红师妹：师兄，这台机器可以拍荧光吗？我记得明场和荧光的相机不一样的。小明师兄：当然可以了，这台机器设计独特，它装了两个相机，明场使用彩色相机，荧光使用单色相机，保证两种观察方式都能得到最好的效果。小红师妹：那它咋切换荧光滤片啊，外面都看不到。小明师兄：所有的荧光切换都是电动的，只需要在屏幕上点击就可以，相机的切换也是全电动的，非常快速方便。小红师妹：师兄，它的光源是啥啊？之前那台机器张老师一直和我强调开灯预热，关灯冷却，这台咋不用？小明师兄：这台用的高能LED光源，不需要预热冷却的，那台需要冷却是怕影响灯的寿命，高能LED可以随开随用，不需要考虑寿命问题的。小红师妹：这真的太方便了，要不让咱们老师也买一台。小明师兄：我当然和她提过啦，老师说很快就到。【部分图源：网络，侵删】

显微镜是每个生物学实验室中必备的仪器，是样品观察中不可或缺的一部分，但是为何实验室需要购买那么多种显微镜呢？不同的显微镜之间具体差异在哪？我的样品用哪种显微镜观察更加合适？如何用显微镜拍出一张符合要求的图片？敬请关注，你要的答案都在直播间里。主要内容：1、显微镜基础知识简介2、如何用显微镜拍出符合出版要求的图片3、ECHO全新革命性创新显微镜介绍主讲老师：刘晨阳毕业于河南大学，熟悉不同公司不同类型显微镜的操作与应用，毕业后就职于北京深蓝云生物，高级应用工程师，具有多年的显微镜实战经验和理论知识，对显微镜应用领域有深入了解和独到的见解。扫描下方海报内二维码进入直播间 赶紧扫描上方二维码报名参加吧！

Lady森and乡亲们，大家好：我们来自ECHO显微镜家族，家中有三个兄弟，我们都属于“R”字辈的，大家都叫我们Revolution、Revolve和Rebel，一看名字，就知道我们肯定与众不同。来中国有些年了，我们的身影遍布各个科研院所，以独一无二的美学设计和强大的功能性受到大家的欢迎，这不，今天举行显微镜比拼大赛，我们都报名参加了，都非常有信心赢得比赛。第一场：眀场显微镜赛场先放个VCR让大家见见我Rebel的本事。★独特的人体工程学设计：让操作人员避免了长时间的固定工作姿势造成的身体疲劳和颈椎损伤，使用我们拍照眼不花，脖子不疼，想怎么拍就怎么拍。★简单易用的软件：易学易用，无需高频培训，使用视网膜触控屏进行操作，带来出乎意料的成像体验，看着就是倍爽。★自动细胞计数：轻松几步，细胞数就出来了，所有的细胞都在我的掌控范围之内，想看哪个，我还能画个圈圈给你展示出来，666。第二场：荧光电动显微镜专场按惯例先上VCR。我呢，是Revolve Generation 2正倒置一体电动荧光显微镜，化繁为简，功能升级，本领更大；当当当——隆重推出DIGITAL HAZE REDUCTION（DHR）实时数字化图像处理功能，增加宽场荧光显微镜图像锐度，抑制噪声，减少模糊，提高荧光检测分辨率；精确Z-Stacking功能帮您全景深观察样品，较厚样品荧光检测效果出众。★独有的实时DHR数字降噪技术，通过数字化图像处理，在镜下实时显示高分辨图像，清晰展现样本细微结构，颠覆传统成像效果。★Z轴高精度自动层扫，配合实时DHR数字降噪技术，在保持高分辨率的同时，对较厚样本进行全景深扫描合成，实现全景深观察。我拥有最流行的触屏操控方式，配备智能荧光成像系统，将Z-Stacking全景深成像和DHR数字降噪功能有机联合，提升分辨率，告别照片模糊，为您打造全新的成像体验。第三场：全电动显微镜专场这里的比拼异常激烈，到我Revolution上场了。★我是高度集成的一体机：部件高度集成内置，节省空间，避免繁琐调试及维护；触屏式操控观察工作站，界面直观简洁，易于学习，方便使用。★无与伦比的高清体验配备国际顶级的光学部件，结合超高清显示屏及增强型DHR图像处理技术，快速获取超高分辨率、高清晰度图像。★智能化全自动多功能系统：TimeLapse延时摄影、独有的Hyperscan快速成像、Multi-well Point孔板导航成像、MOSAIC大视野成像、Focus Map自定义多点聚焦、Z-Stacking多层扫描大景深成像、DHR智能实时数字化降噪。我在神经领域、癌症研究、类器官观察、脑研究、3D活细胞成像等领域应用非常广泛，在科研人员的研究进展方面提供了巨大的帮助作用。｜申请试用｜我们的仪器可以申请试用哦！扫描下方二维码关注“深蓝云生物科技”公众号，点击“云活动”→“试用中心”即可。

欧洲分子生物学实验室研究人员Moritz Kueblbeck, Andrea Callegari等在bioRxiv分享了一项基于CRISPR方法优化的技术文章，目的在于提升从基因编辑产生的细胞中筛选纯合子的效率。众所周知，使用CRISPR精确敲入 (knock-in) 外源性DNA后，产生的基因编辑克隆需要严格的筛选才能得到目的克隆（纯合子）。基于常规PCR和Southern Blot检测目的克隆的方法耗时长、需要大量劳动力。因此研究人员对传统方法进行了优化，采用荧光标记蛋白和naica数字PCR联合的方法，精准快速的实现了基因编辑后目的克隆的筛选，大大降低了检测的人力、物力、时间成本。亮点：☑  采用数字PCR和荧光标记的方法，可以在基因组编辑的早期阶段进行检测，整个流程只需要大约3-4小时即可获得结果，能够及时停止“不理想”的编辑克隆的培养，节省人力物力成本。☑  数字PCR方法只需要检测少量的细胞，相较于Southern Blot大大减少样本制备时间。☑  基于naica®微滴芯片数字PCR系统的多重检测能力和Crystal Miner软件的荧光补偿校正功能，能够快速、可靠的对CRISPR编辑细胞进行定量筛选检测。文章内容分享背景原理介绍：CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats），规律间隔成簇短回文重复序列，是一种RNA引导的基因组编辑技术,能对基因进行精确性敲除,敲入,替换等,从而实现探究基因功能,修复致病基因等目的。但是，CRISPR技术也会导致有潜在危险的“脱靶”问题，带来不可预测的基因变化，因此对于CRISPR基因编辑的脱靶情况需要灵敏且精准的验证及检测。▲CRISPR结构示意图研究目的：提升从基因编辑产生的细胞中筛选纯合子的效率。传统方法筛选目的克隆的局限性：基因编辑后，筛选纯合子的方法是生成杂合克隆后，通过轮次迭代产生纯合子，整个过程耗时甚至能长达一年，且容易发生脱靶修饰。使用常规PCR区分纯合克隆和杂合克隆的方法只能检测到目的基因，还需要金标准Southern Blot检测脱靶整合的情况，然而，Southern Blot是一种耗时且低通量的技术，需要相对大量的基因组DNA和细胞材料，这些材料的制备会浪费大量的时间和人力成本。优化后的新方法：针对上述问题，Moritz Kueblbeck等人优化了CRISPR的实验流程，改进了CRISPR的转染效率，通过添加荧光标签蛋白实现CRISPR编辑的克隆菌落中相关标记蛋白的正确亚细胞定位，并通过dPCR 来定量目的基因和脱靶基因组编辑事件。通过该方法，快速、可靠的对荧光标记CRISPR编辑细胞进行了定量筛选。【见下图】▲Moritz Kueblbeck等人优化的CRISPR纯合子筛选实验流程▲PCR进行两种细胞系中的标签基因检测。U2OS- TPR-SNAP标签基因整合总数检测 （左）；HK- Nup93-mEGFP标签基因整合总数及目的标签基因检测（右）。矩形图代表克隆，每个红点代表一次测量结果。对于多重荧光检测实验，进行荧光溢出的补偿校正是十分必要的。本研究使用naica®微滴芯片数字PCR系统进行多重检测，并使用Crystal Miner软件进行荧光补偿校正分析，确保每一个荧光基团被单一检测通道捕获，得到的结果精准可靠。如想对荧光补偿校正有更多了解，请复制下方链接地址到浏览器进行查看：http://dx.doi.org/10.1016/j.bdq.2016.10.002原文链接如下：https://doi.org/10.1101/2021.06.23.449557CRISPR WEBIANR相关视频链接：▲点击上方图片观看相关视频naica®微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司的naica®微滴芯片数字PCR技术在进行核酸检测时具有独特的优势。系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片（或高通量Opal芯片）作为数字PCR过程的唯一耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要两个半小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获得的数据真实可靠。

2021年度欧洲产品设计奖近日揭晓，美国ECHO Revolve正倒置一体电动荧光显微镜凭借出色的外观设计、功能设计荣获欧洲产品设计工业/生命科学/医疗/科学机械类的最高荣誉白金奖。Revolve颠覆了大家对显微镜的认知，是对传统显微镜设计的重新思考，在工作流程、易用性和功能方面做了很大的创新，使显微镜变得更时尚，功能更强大 。Revolve 是世界上第一款多功能显微镜，将四台显微镜合二为一，可轻松在正置和倒置之间进行转换。使用户不再因为所拍摄样品的不同而分别购置正置和倒置两类显微设备，一机满足多种样品成像，具备眀场、暗场、相衬、荧光和偏光等功能，是真正的多面手。同时显著降低了设备成本，节省实验空间。传统显微镜操作繁琐，很难上手。Revolve打破传统，采用12.9英寸Retina显微屏，触控操作，智能控制，成像更便捷，给您带来前所未有的使用体验。使枯燥的实验变得简单有趣，轻松获得您想要的图片。欧洲产品设计奖（European Product Design Award）是由法玛尼集团主办的国际设计大奖，是唯一与欧洲议会联合颁发的设计奖，也是欧洲最有影响力的设计奖项之一。EPDA旨在表彰有才华的国际产品和工业设计师的努力，鼓励他们通过实用的、深思熟虑的创作来改善我们的日常生活。将工业/生命科学/医疗/科学机械类的最高荣誉白金奖颁给Echo Revovle，说明Echo Revolve在设计理念，仪器功能上得到大家的认可和肯定，Echo必将在自己的领域发挥极致，大放异彩，敬请期待。｜申请试用｜我们的仪器可以申请试用哦！扫描下方二维码关注“深蓝云生物科技”公众号，点击“云活动”→“试用中心”即可。

你想要显微镜拍照像玩手机APP一样简单吗？想要拍出的图片清晰度直接可用于出版吗？想要更智能更时尚的操作和数据传输吗？想要拍照更轻松而不用长时间盯着目镜筒吗？那么Revolve Generation 2正倒置一体电动荧光显微镜来喽，化繁为简，功能升级；隆重推出DIGITAL HAZE REDUCTION（DHR）实时数字化图像处理功能，增加宽场荧光显微镜图像锐度，抑制噪声减少模糊，提高荧光检测分辨率；精确Z-Stacking功能帮您全景深观察样品，较厚样品荧光检测效果出众。这就是我，既有颜又有才！科研小伙伴是否遇到过，使用宽场荧光显微镜荧光拍摄不够清晰？使用共聚焦拍摄速度慢，而且荧光容易淬灭？小编给大家捋捋，看看到底应该怎么选，拒绝焦虑。宽场荧光显微镜与激光共聚焦成像效果区别▷ 激光共聚焦：使用激光点对样品进行逐点扫描，通过共轭聚焦技术，可有效避免邻近点光线干扰，获得更高分辨率。但对于活细胞荧光观察伤害性大，光漂白严重，由于是逐点扫描，所以成像时间长。▷ 宽场荧光显微镜：使用场光源对样本进行全视野照明成像，会出现光噪声、散射和炫光等现象，降低了图像分辨率，针对较厚样本大多只能平面成像。但拍摄速度快，对于活细胞荧光成像伤害性小，可有效避免光漂白。Revolve Generation2是您的不二之选，为什么这么说呢，往下看 ↓☑  独有的实时DHR数字降噪技术，通过数字化图像处理，在镜下实时显示高分辨图像，清晰展现样本细微结构，颠覆传统成像效果。☑   Z轴高精度自动层扫，配合实时DHR数字降噪技术，在保持高分辨率的同时，对较厚样本进行全景深扫描合成，实现全景深观察。新一代Revolve正倒置一体电动荧光显微镜，拥有最流行的触屏操控方式，配备智能荧光成像系统，将Z-Stacking全景深成像和DHR数字降噪功能有机联合，提升分辨率告别照片模糊，为您打造全新的成像体验。｜申请试用｜我们的仪器可以申请试用哦！扫描下方二维码关注“深蓝云生物科技”公众号，点击“云活动”→“试用中心”即可。

日期：2021年9月2日时间：星期四  15:00

中药显微鉴定是利用显微镜观察植(动)物药材内部的细胞、组织构造及细胞内含物，明确其显微特征，从而达到鉴别目的的一种鉴定方法，是中药四大传统鉴定方法之一具有简便、经济的特点。1977年版《中国药典》规定了药材显微鉴定，之后显微鉴定被广泛应用于药材和中成药的鉴定，2020年版《中国药典》收载的显微鉴别更是达到2140项。一、中药显微镜鉴定遇到的问题及需求1、使用操作问题：随着显微鉴定被广泛列入中药材、中成药的鉴别项下，显微鉴定又需要操作者具备丰富的理论知识和实践经验，使得显微鉴定成为检验人员的负担。需求：操作要足够简单，减少操作人员的学习时间成本。2、制片带来的观察问题：太软，太硬的材料难以切片，切片厚度太厚或不均一。需求：为满足整体观察需要，对显微镜的景深有很高要求。3、粉末状药品及特殊质地药品难以制片需要整体观察的问题。需求：为满足大面积样品整体观察需求，要求成像面积比较大。4、为了分辨不同药品之间的区别问题：既需要高分辨的局部高清成像用以分辨细胞器等细微结构，又需要在整体上对整个药品进行完整的全视野成像。需求：为满足细胞器等细微结构的荧光检测，要求显微镜的放大倍数和分辨率比较高。5、除明场观察外，部分药材鉴定需要荧光标记观察药材细微结构的问题。需求：既需要彩色明场观察又需要高灵敏度荧光观察。▲ 虫草明场切片二、传统显微镜在中药材显微鉴定中的使用1.手动光学显微镜，操作步骤多，效率低，无法快速精准的进行大视野成像，无法进行自动的景深扩展不能满足较厚样品的观察需求。▲ 图源：网络2.体视镜虽满足厚样品的观察需求但物镜分辨率不够，导致图像细节不清晰，不同层面的荧光串扰也严重影响了荧光成像效果。▲ 图源：网络3. 虽然配有自动载物台的电动显微镜可以解决较大面积样品大视野成像的问题，但是由于积木式设计所带来的操作及调试的繁琐使得显微鉴定成为检验人员的负担。▲ 图源：网络4. 针对性的玻片扫描系统，针对扫片的大视野成像的需求进行了部分优化但还是难以解决操作繁琐问题。同时因为高度的特化性不能满足特殊样品（不能进行制片的样品，粉末状样品，微生物样品）的观察需求。▲ 图源：网络由此可以看出，传统显微镜在中药鉴定领域存在诸多问题，有没有一款显微镜既可以满足中药鉴定的所有需求，又操作简便，减少操作人员的学习时间成本？答案是肯定的REVOLUTION为您在中药鉴定领域带来前所未有的使用体验。三、REVOLUTION在中药鉴别中的优势1.突破性的设计REVOLUTION采用正倒置一体的设计，兼具五种观察方式为一体同时配备智能化的软件系统，满足中药显微鉴定领域的切实需求。2.强大的软件功能3.独有的高速全视野明场/荧光扫描将20倍镜下多色荧光全视野扫描速度提升到了1分钟，是传统显微镜速度的10倍，极大提高了用户的工作效率。4.全自动Z轴全景深观察在高倍镜(等于及高于40倍物镜)下，在保持高分辨观察的同时，可以对厚度较大的样本进行全景深扫描，合成，实现全景深观察。5.Digital Haze Reduction(DHR)功能该技术可以在镜下实时显示高分辨图像，分辨率比传统成像提高了一倍，成像速度与普通荧光成像速度相同。通过该功能，用户可以观察到更加细微的结构。▲ DHR前▲DHR后6.一体化的硬件设计与智能化的软件搭配突破了人机交流的鸿沟，触屏式极简化操作，极大降低了学习难度，用户经过简单培训，2小时即完全掌握操作方法极大的提高了实验效率，减轻了实验人员的操作负担。四、总结：REVOLUTION全电动荧光显微镜从用户的实际需求出发，通过颠覆性的设计与智能化的软件，在满足中药鉴定所有需求的同时，降低了用户的学习成本使用户轻松简便的进行中药显微鉴定，减轻了实验操作人员的负担，极大的提高了实验效率。｜申请试用｜我们的仪器可以申请试用哦！扫描下方二维码关注“深蓝云生物科技”公众号，点击“云活动”→“试用中心”即可。

法国Stilla Technologies公司的naica®微滴芯片数字PCR系统用于评估有效再生数Re（effective reproduction number）。有效再生数Re（effective reproduction number）为一段时间内由单个感染者引起的新感染的平均数量，作为监测疾病动态、是区域和国家政策提供信息以及评估干预措施有效性的一个关键指标，在COVID-19大流行期间被广泛用于跟踪疾病动态。通常有效再生数Re根据临床病例数据进行评估（以下简称Rcc），如观察病例、住院和/或死亡，可能因检测和报告的变化而产生偏差。瑞士联邦理工学院科学家在medrxiv发布的跟踪研究表明，废水中SARS-CoV-2 RNA的动态可以用于近实时评估Re，不依赖于临床数据，也不存在来自临床测试和报告策略的相关偏差。文章中，使用数字PCR方法的定量检测废水和固沉积物病毒RNA载量，提供一个独立的数据集来估计Re(以下称为Rww)，能对原有Rcc评估补充，以提供一个更完整的图像式传染动力学。废水中SARS-CoV-2 RNA的纵向测量可用于评估不同地区的Re，并提供对COVID-19动态的独立评估。鉴于在此次大流行期间广泛进行废水取样，这些Re值可直接作为一种快速、低成本的方法，为公共卫生政策提供信息。该方法可适用于其他病原体，包括那些没有临床数据的病原体。图1:苏黎世(CHE)废水Rww 评估：A. 2020年9月1日至2021年1月20日期间测定的N1和N2标记(分别为绿色和黄色)的RNA载量。B. 同一时期确诊病例(紫色)。C. 根据病例报告得到的感染发生率时间序列(上)和根据N1和N2标记物的归一化RNA载量(下)，分别为绿色和黄色。归一化方法请见原文中方法描述，条形区域表示50次重复的平均值±标准偏差。D. Rww与Rcc 对比。彩色线表示原始数据点，带状区表示50次重复的的置信度95%的置信区间。图2:圣何塞(美国)污泥Rww 评估：A. 2020年11月15日至2021年3月19日期间测定的N、S和ORF1a基因(分别为蓝色、绿色和黄色)RNA载量。B. 同期确诊病例(紫色)。C. 根据病例报告的感染发生率时间序列(上)和归一化的RNA载量(下)。归一化方法请参考原文方法。条形图表示50次重复平均值±标准偏差。(D)Rww 与Rcc 对比。彩色线表示原始数据点，带状区表示50次重复置信度95%的置信区间。文章发现Rww 与Rcc结果一致，但两者时间上存在滞后，图2D。通常来说，Rww 或者Rcc 时间不准确的原因，推测是因为未能在最佳时间捕捉脱落，或者因为在观察期间临床病例的报告延迟改变。在这种情况下，Rcc可能由于漏报和增加测试延迟，导致存在偏差。根据测试调整的案例重新估计，结果更接近于Rww，尤其是11月/ 12月，图S1B。文章中作者调整了采样频率和易感性，通过建立噪声模型和对脱落负荷分布（SLD）进行反卷积，将废水中的RNA测量与原始感染发生率联系起来，准确描述脱落的时间动态和足够大的集水区，个体差异可能会趋于平均，随着前瞻性抽样研究报告结果，可以得出最优SLD ，从而提供更准确的废水和固体沉积物的Rww。从废水中获得Re为追踪疾病动态提供了一种独立的方法。基于废水的流行病学检测方法可在全球用于跟踪COVID-19大流行(https://www.covid19wbec.org/covidpoops19)，Rww 评估方法非常强大，不受测试和报告策略的影响，因此跨地理区域的评估更具可比性。通过估计Rww进行废水监测是一种低成本、快速并可对不同区域水质进行比较的方法，同时也能实现以接近实时的方式跟踪疾病传播动态。图片medRxiv是由美国冷泉港、BMJ和耶鲁大学联合运营的免费的、非营利性服务平台。2019年6月25日正式上线，专注于临床研究的科研人员可以在medRxiv平台上分享未经过同行评议的研究，从而有助于及时传播最新的发现，也有助于研究人员接收反馈进而完善研究内容。原文链接：https://doi.org/10.1101/2021.04.29.21255961针对于naica®微滴芯片数字PCR系统，我们提供新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒，货号：AK900103。参考国家CDC与WHO指南方法，生信分析新型冠状病毒的开放读码框1ab（open reading frame, ORF1ab）、核壳蛋白（nucleoprotein，N）区域保守序列，优化引物探针，降低病毒变异的影响；利用三荧光通道的优势，加入人源管家基因作为内标进行监控，实现单孔多重三基因检测，结果更可靠。详情点击：https://mp.weixin.qq.com/s/uXv2JLTg1YJsQJFW9IGHzAnaica®微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司的naica®微滴芯片数字PCR系统在进行核酸检测时具有独特的优势。该系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片（或高通量Opal芯片）作为数字PCR过程的耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要2.5小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获得的数据真实可靠。naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

上一篇文章跟大家介绍了qPCR实验中引物设计及加样的相关操作技巧，今天我们再跟大家分享其他的实用技巧，这些入门级知识一定要掌握牢固哦。1、阴性对照的技巧：阴性对照一般是指用水代替模板的反应孔，体系中除了模板，包括了其他的反应组分。由于qPCR的高灵敏性，阴性对照有出现扩增信号的情况，那么在针对这类问题时，我们需要判断其原因所在。使用染料法进行qPCR实验时，首先查看阴性对照的溶解曲线主峰是否跟阳性孔的主峰位置一致。如果一致，要看两者Cq相差多少，比如，针对某一种引物的实验样品Cq值为28. 5，阴性对照的Cq值为33. 6，由于Cq值相差大于5，如果按95%的扩增效率计算，两者模板量相差28倍之多，对分析数据影响不大，所以实验样品的Cq值还是可以采用的；但是，如果两者的Cq值仅相差 1~2，这说明阴性对照中有较大的模板污染，则需要考虑更换试剂或引物，分区加样，重新实验。如果不一致，阴性对照主峰对应的Tm值小于阳性孔的Tm值，则可能是引物性能不好，无模板或使用低浓度模板下会出现引物二聚体，这种情况则需要考虑更换引物，保证引物特异性以及扩增效率。▲ 图1：溶解曲线主峰位置基本一致时，S3是实验样品，NTC是阴性对照，两者Cq相差大于5，实验样品的Cq值还是可以采用的。▲ 图2：溶解曲线主峰位置不一致时，STD-1是高浓度样品，STD-5是中浓度样品，STD-8是低浓度样品，NTC是阴性对照。随着模板浓度降低逐渐出现引物二聚体，导致扩增效率不准确。使用TaqMan探针法进行qPCR实验时，由于探针法的高特异性，如果阴性对照出现扩增信号，很大可能是模板污染或气溶胶污染导致，操作时注意分区加样，避免污染。2、结果分析的技巧：进行相对定量分析时，最常用到的是 2-ΔΔCq法，但是这种方法比较粗放，因为它的前提是假定所有引物的扩增效率都为100%。更为准确的定量则需要考虑不同引物扩增效率的差别。可首先用梯度稀释的模板测试各引物的扩增效率E，获得实际扩增效率之后，后续实验只需要在软件中直接输入扩增效率E值，即可计算更精准的相对定量值。在Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统中可在分析界面输入扩增效率E值，完成更精准的相对定量值的计算，如图所示：Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。▲ Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统

肥胖是指脂肪层的堆积，减肥不仅是为了更美，也是为了更健康，肥胖已被证明会增加多种疾病的发生风险，如心血管疾病、癌症、脂肪肝等，但对于大多数人来说，控制体重却非常困难。减肥则主要通过刺激脂肪组织产热增加全身的能量消耗，运动和节食是我们最常见的方式，但运动和节食太累和痛苦，难以坚持；因此有很多人选择使用药物来进行体重的控制。现有刺激脂肪产热药物大多以β3-肾上腺素能受体（β3-AR）为靶点，通过激活β3-AR及其下游信号通路，活化解偶联蛋白（UCP1），从而引起脂肪组织产热。但是β-AR激动剂会导致血压增加，可能诱发心血管疾病。因此需要一种更低风险和安全的药物靶点。美国加州大学旧金山分校糖尿病中心的研究人员对之前报道的一个与UCP无关的产热机制进行了进一步探索，研究者们将该机制的验证以《Wireless optogenetics protects against obesity via stimulation of non-canonical fat thermogenesis》为题发表在《Nature Communications》上。这个与UCP无关的产热机制涉及依赖于ATP的Ca2+通过肌/内质网Ca2+-ATPase2b (SERCA2b)和Ryanodine受体2 (RyR2)的无效循环（无效循环指两物质自由能始终存在差异，自由能一高一低，即该循环发生必须从循环外注入能量）。之前研究发现作用于RyR2-Calstabin复合体的化学稳定剂S107可以增强Ca2+无效循环，刺激非UCP1依赖的产热，并保护UCP1缺失的小鼠在寒冷暴露后不会降低体温。但是S107是全身性给予小鼠的，无法排除脂肪组织以外的其他组织，如骨骼肌，可能有助于UCP1非依赖性产热的可能性，因此本文采用了独特的光遗传学方法，对脂肪细胞进行特异性操作，以严格测试非典型脂肪产热治疗肥胖的可能。光遗传学是对体内神经元或细胞活动进行时间和空间操作的强大工具。传统的光遗传学研究需要光纤系绳和/或大型头戴式接收器，使其在一般代谢研究中应用受限。而无线供电的光遗传学设备使光能够高效、稳定地传递到行为自由的动物的外周神经，因此本文开发了一种可植入小鼠皮下脂肪组织的无线光遗传学装置，同时该装置刺激的细胞也与之前不同，刺激脂肪细胞而非常见的神经细胞。无线光遗传学装置可以通过光激活转入channelrhodopsin2 （ChR2，光门控的、向内整流的阳离子通道，传输质子和单价Na+，K+和二价阳离子Ca2+，Mg2+）的神经细胞，并可以驱动神经元去极化。而该研究更进一步，将ChR2转入小鼠和脂肪细胞，通过光诱导脂肪细胞激活Ca2+循环的脂肪产热，增加全身能量消耗。首先对细胞层面的可行性进行分析，确定转入ChR2的米色脂肪细胞可以被光激活膜去极化触发细胞内Ca2+内流，通过Echo Revolve正倒置一体显微镜对转入ChR2脂肪细胞在光激活下的Ca2+含量，如视频显示的，光激活后，细胞内Ca2+含量明显升高。且对耗氧量分析发现，光激活的脂肪细胞耗氧量明显增加。进一步对体内脂肪是否会被激活进行检测，通过对温度，耗氧量等的检测确定，光激活后小鼠激活部位温度升高，整体耗氧量增加，表明非UCP1依赖的产热途径在体内脂肪细胞中可以被激活并发挥作用。通过对高脂肪饮食（HFD）的分析发现，光激活小鼠其体重增加明显少于对照组，表明非UCP1依赖的产热途径足以保护小鼠免受饮食诱导的体重增加。此项研究也首次证明了脂肪特异性冷刺激模拟可以通过激活非典型产热来预防肥胖。Echo Revolve正倒置一体显微镜Echo Revolve展现了其非凡的灵活性，可以轻松地实现正置和倒置显微镜转换，创新性地把正倒置显微镜合二为一，开启了显微镜Hybrid时代。▲ Echo Revolve正倒置一体显微镜☑   视网膜屏显示技术：比拟目镜人眼观察效果。☑   全视野观察： 更清晰，更方便。☑   多通道荧光：多达4个EPI荧光通道，无须暗室，就可以轻松快速地完成多色荧光显微分析。☑   自动化操作：通过iPad Pro点触操控相机及荧光通道之间的切换，实现了完全自动化操作。☑   App应用软件：基于IOS的Echo App是与Apple团队合作研发的专业显微镜软件。☑   精湛的工艺尽显高端品质：实现非凡的性能。｜申请试用｜我们的仪器可以申请试用哦！扫描下方二维码关注“深蓝云生物科技”公众号，点击“云活动”→“试用中心”即可。

减数分裂通过产生单倍体细胞和基于同源重组（HR）产生的遗传变异来支持有性生殖。HR通过重组交换(CO)、同源染色体之间的联会，交换等来确保减数分裂染色体分离，同时保证遗传变异在育种过程中发挥作用。在植物中，同源重组可以通过几种技术检测到，例如通过减数分裂染色体分析进行细胞学检测，通过测序进行基因分型和分离群体中的分子标记或荧光标记株系（FTLs）。FTLs在拟南芥中是测量花粉或种子中减数分裂重组事件的有力工具。但FTLs不适用于作物，因为在基因组特别大的作物中产生FTLs既费力又昂贵。此外，不同的作物或某些基因型不适合遗传转化。作为替代，使用小孢子(四分体或花粉核)基因分型或测序用于直接检测减数分裂产物中减数分裂重组的结果。然而，作物小孢子的测序/基因分型相当昂贵，因此可以进行检测的数量有限，特别是对于大基因组物种如谷物。在受精前测量雄配子的减数分裂重组率有样本量大，分子标记分析独立和即时重组交换分析的优势，但配子DNA含量有限，测序/基因分型方法通常依赖于全基因组扩增(WGA)。而直接通过PCR反应分析单个配子进行基因分型也由于单倍体配子的低DNA含量无法达成。在大麦中，单花粉核基因分型是通过荧光激活细胞分选从种内杂种中分离出单个单倍体花粉核，然后进行WGA和多位点KASP基因分型或单细胞基因组测序完成的。单个单倍体花粉核的DNA有限，且WGA价格较高，导致分析样品的数量有限，无法完成高通量的分析。德国莱布尼茨植物遗传和作物植物研究所的科学家近日在《The Plant Journal》上发表了一篇减数分裂重组率测量的相关文献，该文章采用naica®微滴芯片数字PCR系统对配子中减数分裂重组率进行测量，实现高通量和低成本的基因分型。使用基于naica®微滴芯片数字PCR系统的基因分型分析，无需大量预先进行的WGA就可完成对大麦花粉细胞核中减数分裂重组率的高通量测量。在取得花粉后，将花粉中的花粉核取出，并通过流式进行纯化，将得到的花粉核加入naica®微滴芯片数字PCR系统的Mix中进行检测，从而得到减数分裂重组率，通过对总共>42，000个单个花粉核进行基因分型(每株分析多达4900个核)，在杂交植物中测量了两个着丝粒和两个远染色体间隔内的减数分裂重组率。花粉核中确定的重组频率与分离群体中的检测到的频率接近。▲ 图1：用naica®微滴芯片数字PCR系统进行大麦单花粉核基因分型的工作流程。（a）杂交植物的花药；(b)通过使用不同筛孔大小的过滤器(100和20微米)在悬浮液中分离花粉和花粉核。(c)花粉核用碘化丙锭染色，并流式分选到数字PCR反应Mix中。(d)将25微升数字PCR反应Mix(包括分选的花粉核)装入sapphire芯片的四个腔室之一。(e)在Geode中进行液滴生成和热循环。(f)在热循环之后，在naica® Prism 3中扫描sapphire芯片，然后在Crystal Miner软件中进行数据分析该文章在进行花粉核减数分裂重组率的检测时采用双探针法，如前期可行性验证时检测的InDel3118和InDel3135之间的区间Id 3-1，用HEX标记Barke (B)等位基因特异性探针(绿色)，用FAM标记Morex (M)等位基因特异性探针(蓝色)(图2b)，研究者将来自亲本基因型的花粉核以1∶1的比例混合，同时也检测了Id 3-1杂合的杂交植物的花粉核。在亲本混合样本检测中，两种亲本基因型的液滴相等，两种标记显示相同的荧光(B的HEX或M的FAM)(图2b)。在杂交材料样本检测中下，预计会出现代表重组事件的不同液滴群，即同时显示两种颜色的液滴(InDel3118为HEX，InDel3135为FAM，反之亦然)(图2b)。在实际检测中发现，亲代基因型得到了数量大致相等的液滴，它们对两种标记物显示出相同的荧光(图2d，e，绿色和蓝色矩形)。在对杂交植物的花粉核的检测中，检测到具有两种颜色(HEX和FAM)的液滴，表明重组事件(图2e，红色矩形)。此外，可以区分只有一个标记成功扩增的液滴(图2d，e，簇I和iii)以及没有任何扩增的液滴(图2d，e，簇ii)。表明使用naica®微滴芯片数字PCR系统对单个花粉核进行包裹和基因分型是完全可行的。▲ 图2。用naica®微滴芯片数字PCR系统进行大麦花粉单核基因分型。(a)在大麦染色体1和3上定义四个染色体间隔的的InDel或单核苷酸多态性(SNP)标记。(b)以Id 3-1为例的基于naica®微滴芯片数字PCR系统的花粉核基因分型分析:两种荧光探针的可能组合能够区分重组和非重组花粉核。（c）有效微滴阵列原始视图。每个腔室通常包含大约25000个稳定的有效液滴。在任何通道(FAM或HEX)中成功扩增的液滴是浅灰色的，而暗灰色的液滴是阴性的。(d，e)来自芯片室的基于naica®微滴芯片数字PCR系统的花粉核基因分型数据，在软件中显示为来自以1:1比例混合的亲本基因型的花粉核的点图(d)和来自与Id 3-1杂合的杂交植物的花粉核的点图。(e)通过两个HEX标记的(绿色方框)或FAM标记的等位基因探针(蓝色方框)将两个非重组亲代群体检测为具有成功基因分型的微滴。在亲代基因型混合物(d)的点状图中以灰色框表示HEX和FAM双阳性微滴为假阳性+噪声。杂交植物中HEX和FAM双阳性微滴为包括假阳性和噪音在内的重组群体，显示为红色方框(e)。簇(I)和(iii)代表仅成功扩增一种标记的微滴naica®微滴芯片数字PCR系统具有极高的分辨率，因此在那些成功扩增标记物的微滴中，也可以观察到微滴内的细胞核(图2c)，研究者通过对微滴包裹核的数量分析进一步优化实验，通过用热稳定的限制性酶预处理花粉核来提高基因分型的效率，且因为细胞核数量与单个包裹细胞核的微滴数量呈正相关，提出上样细胞核的最佳区间（不同物种的不同大小细胞核有差异）。本文基于2色探针进行检测是非常成功的，而进一步通过6色平台可以同时进行更多组基因分型检测，将获得多重基因分型数据，也可以对相同或不同染色体上的一个以上染色体间隔的重组率进行平行测量，或者对CO干扰强度/存在的测量。总的来说，基于naica®微滴芯片数字PCR系统的单个大麦花粉核基因分型在种内杂种植物的规定染色体间隔内提供了可靠、快速和高精度的减数分裂重组测量。来自一系列具有不同细胞核和基因组大小的物种的细胞核的成功包裹表明，所提出的方法广泛适用于单个细胞核的基因分型。德国莱布尼茨植物遗传与作物研究所(IPK)的Stefan Heckmann教授和Yun-Jae Ahn博士也给我们在线分享了他们的研究成果，想要直观的去了解这篇文章的详细内容，请点击https://mp.weixin.qq.com/s/KNXVs6rOt8MYpBjzuKZZ9A进行观看哦。本文链接：https://doi: 10.1111/tpj.15305naica®六通道微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

目前已开发多种工具可以进行PCR引物的设计，但大多数工具只考虑避免发夹结构形成、3'末端核苷酸的选择、引物解链温度等问题，并没有考虑内在扩增子的特征以及没有预测给定扩增子和引物对的PCR扩增效率。Izaskun Mallona等人[1]使用了一种基于90个引物对组合的统计方法，扩增来自细菌、酵母、植物和人类的模板，扩增子大小在74到907bp 之间，以确定影响PCR效率的参数。最终开发了一个拟合数据的广义加法模型，并构建了PCR Efficiency在线分析工具（http://130.60.24.89/efficiency.html），允许从给定序列开始获得针对PCR 优化的寡核苷酸，并可以预测出扩增效率。有个这款小工具，还怕做不好PCR实验吗？现在快快试用我们的数字PCR系统和实时荧光定量PCR系统，你们就知道预测工具好不好用了。naica®微滴芯片数字PCR系统naica®微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成由25,000-30,000个微滴组成的单层二维阵列，该单层微滴阵列形成后直接进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。仅需2.5小时即可获取结果。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。参考文献：[1] Izaskun M ,  Julia W ,  Egea-Cortines M . pcrEfficiency: a Web tool for PCR amplification efficiency prediction[J]. BMC Bioinformatics, 2011, 12(1):404.

实时荧光定量 PCR（qPCR）自问世以来，就受到了广大生命科学实验工作者和医院检验工作者的极大关注，使得该技术得到了很快的普及。虽然qPCR技术目前应用方向十分广泛，但是仍碰到很多用户在实验中存在着由于不当操作而数据精度不高、重复性差、可信度差等问题。在这里，我们根据实际工作中的经验以及参考万谦等人[1]的研究，给大家详细说明一些有助于提高实验质量的操作技巧，希望能给大家带来一定的帮助。1、引物的操作技巧：使用引物设计软件进行设计时，在操作界面上设定相应的参数，扩增子参数一般设定范围为80 ～ 200bp，扩增子长度越短，扩增效率越高，可选择设定在110bp，110bp在后期的扩增中仅用10s，其余的参数均默认，软件即给出引物列表，一般选用评分高或者靠前的，因为评分越高或越靠前的引物对形成引物二聚体的可能越小。对于引物设计有疑惑，可观看深蓝云直播课“引物探针的设计和设计软件的介绍”，点击图片进入直播课堂哦。（可点击下方图片到直播课）引物一般由试剂公司合成，为干粉状态，在溶解前，最好用高速离心机低温快速离心30s，使得引物干粉汇聚到管底，避免损失引物。引物收到后，需要先摸索引物的退火温度和终浓度，以达到较理想的qPCR扩增效果，其次测定引物的扩增效率，通常在非正式实验时，假定引物的扩增效率为100%，扩增产物在指数期呈现2n的增长。在正式实验时，考虑到引物的扩增效率实际不是100%，所以需要测定引物的扩增效率以修正结果。一个测定引物扩增效率的简单方法如下: 以cDNA样品或标准品为模板，依次稀释 101、102、103、104、105、106 倍，采用前期摸索好的qPCR扩增条件，得到6个Cq值，然后以log（模板浓度）为X轴变量，以Cq值为Y轴变量作回归直线图，得到直线的斜率，扩增效率 = 10( －1 /斜率) － 1，整个数据计算可以在Excel中完成，也可在qPCR软件中直接得出。2、反应体系配制技巧：正式实验时，每个样本至少3个重复，为了消除各重复之间的系统误差，可配置3.2个反应体系，将所需的所有试剂和模板加在同一个PCR管中，充分涡旋混匀后，再分装到3个重复孔中，这样可有效减小系统误差。另外，一些实验者为了节省试剂，采用10μL反应体系，我们认为这是不可取的，因为体积太小，加样误差会大，这样做得不偿失，建议使用20μL以上的反应体积。如上操作，可以在较大程度上消除由于加样不准造成的系统误差。如表1所列，“优化前”是5管中分别依次加入模板和各反应试剂，最后得到的Cq值标准偏差为2.66；“优化后”是使用模板和各反应试剂的混合液，然后分装至5管中，最后得到的Cq值标准偏差为0. 32；由上述可见，数据精度得到极大的改善。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。▲ Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统参考文献：[1]万谦, 陆华. 实时荧光定量PCR的一些操作技巧[J]. 实验科学与技术, 2012(S2):189-190.

由中国细胞生物学学会细胞器生物学分会和清华大学蛋白质研究技术中心联合主办的第二届活细胞与超高分辨成像高级研讨会将于2021年7月31日至8月6日在北京清华大学举行。本会议邀请了国内在显微成像领域有着深入研究的知名专家进行报告，并针对报告内容设计相应的上机实验。北京深蓝云生物科技有限公司将就宽场荧光光学显微镜的技术创新进展等相关内容做精彩报告，同时还有Echo Revolution全自动荧光显微镜上机实验操作哦，恭候您的咨询。光学显微镜成像是细胞研究的重要技术手段，在揭示细胞形态、动力学、相互作用和定位等方面都起到了重要的作用。Echo Revolution全自动荧光显微镜将XYZ三轴全部实现电动化，从而实现自动完成多图拼接的大视野高分辨率成像，而电动化的Z轴可以帮助用户实现自动聚焦、自动定焦和Z-Stacking多层扫描大景深成像。Echo Revolution全自动荧光显微镜还添加了延时摄影功能，可以帮助用户实现长时间观察和时间回溯，使用户可以进行更全面的观察实验。Echo Revolution全自动荧光显微镜在蛋白互作荧光观察（BIFC）、多蛋白共定位观察、染色材料高分辨成像、细胞长时间形态观察摄影、多位点导航成像，在类器官研究、模式生物成像、药物筛选、神经学研究、癌症研究等方面有广泛的应用。温馨提示：报名方式（名额有限，报名从速哦）：1. 链接：http://xjpt-life.mikecrm.com/8w3Ztbj2. 扫描二维码：

2021年7月15日星期四（北京时间：11:00PM），德国莱布尼茨植物遗传与作物研究所(IPK)的Stefan Heckmann教授和Yun-Jae Ahn博士将在线分享：基于naica®六色微滴芯片数字PCR系统无需全基因组扩增 (WGA)，高通量绝对定量检测大麦单花粉核减数分裂重组率”的研究。本次网络研讨会将讨论关于开发单个花粉核基因分型，实现数字PCR高通量绝对定量检测四个特定染色体间隔内的减数分裂重组率。主题：naica®六色微滴芯片数字PCR系统高通量绝对定量检测大麦单花粉中核减数分裂重组率日期：2021年7月15日（周四）时间：北京时间11:00PM内容简介：植物育种利用减数分裂重组产生的新等位基因组合。在受精前直接测量配子中的减数分裂重组率，从单个个体中筛选出大量的样本，无需隔离种群分子标记分析，无需费时的细胞学观察的交叉互换（Cross Over）检测。目前由于花粉核DNA含量有限(～5 pg/单倍体细胞核），大麦花粉单核基因分型方案需要先进行全基因组扩增（WGA），再进行PCR分型或单细胞测序，从而限制了分析样本的数量。德国莱布尼茨植物遗传与作物研究所(IPK)科学家，基于Stilla® Technologies 公司的naica®六色微滴芯片数字PCR系统，开发了一种单花粉核基因分型检测方法，在不进行WGA的情况下，以高通量测定四个特定染色体间隔内（两个着丝粒和两个远端）的减数分裂重组率。通过对花粉核的热稳定性限制性酶消化提高了基因分型检测的效率，完成了42,000多个花粉核进行了基因分型。杂交花粉核中测得的减数分裂重组率与隔离种群测得的重组率一致。基于naica®六色微滴芯片数字PCR系统，通过多重分析可在两个染色体间隔同时检测，进一步提高了样本通量。该系统同时兼容基于多种不同核大小和DNA数量的农作物细胞核，证明基于naica®六色微滴芯片数字PCR系统的单核基因分型检测方法具有广泛适用性。该成果“High-throughput measuring of meiotic recombination rates in barley pollen nuclei using Crystal Digital PCR™”已发表于The Plant Journal ( IF 6.417 ) PubDate : 2021-05-05 ,DOI: 10.1111/tpj.15305主讲人：Evi Lianidou博士（雅典大学分析化学和临床化学）德国莱布尼茨植物遗传与作物研究所(IPK)，隶属于德国莱布尼茨科学联合会，坐落于德国Gatersleben，研究定位以作物为主要对象，研究野生和栽培植物的遗传多样性，并利用这些材料，开展具有原创性的科学发现和技术创新，并实现农作物的分子改良。经过长达70多年的收集，保存了151,000多份不同作物的种质资源，是欧洲最大的种质资源收集与保藏中心，为IPK和世界相关研究人员研究作物基因和基因组演变、发展和表达规律提供了独一无二的研究材料。注册页面：注册链接：https://u9cm7yjb.pages.infusionsoft.net/

经过20世纪生命科学的快速发展，我们对疾病、遗传生命本质等方面的认识都有了长足的进步，但还有一个领域仍有太多的未解之谜困扰着我们，那就是神经科学，我们仍未了解意识是如何产生的？大脑是如何进行认知的？记忆产生的具体机制是什么？当然也包括神经系统相关疾病的发病机制，如阿尔兹海默症的发病机理等等，这些问题的解决对整个人类发展都具有重要意义，科学家也在不断探索，以期获得真相。意识是如何产生的？这是作者最好奇的问题，在作者的观点中意识很大程度上是和记忆相关，记忆已经证实是源于突触的微小改变，脑内电活动的改变引发第二信使分子传递信号，产生突触蛋白的修饰，这些暂时性变化最终转化为突触结构的永久变化后，长时程记忆就产生了。在对记忆的研究过程中人们在海马中发现了记忆产生相关的LTP（长时程增强）和LTD（长时程抑制），因为海马细胞构筑和组成体系简单，且海马可以从大脑中移出切成脑片，在体外可以存活数小时，可以进行电流刺激并记录突触反应，因此成为研究突触传递的理想部位。▲ 图1：海马微环路我们的身体是一个整体，激素、外界刺激、大脑活动等都会影响我们的记忆产生，在《The FASEB Journal》期刊杂志上发表的一篇题为《Rapid actions of anti‐Müllerian hormone in regulating synaptic transmission and long‐term synaptic plasticity in the hippocampus》的文章就将激素与大脑认知发育和功能联系了起来，分析了抗缪勒氏管激素(Amh)与突触传递及突触可塑性的关系。研究人员通过PCR、Western Blot检测Amh基因及其受体在雄性和雌性小鼠海马中的表达情况，同时采用ECHO正倒置一体荧光显微镜对免疫荧光染色材料观察其真实表达情况（如下图）。图中可以看出，CA1神经元的胞体和树突均为Amh阳性(图2A,C)，而仅在CA3神经元胞体出现Amh阳性染色(图2E,G)。Amhr2在CA1(图2B,C)和CA3(图2F,G)的表达模式与Amh相似。表明Amhr2与Amh在神经元胞体和树突共定位(图2D,H)。▲ 图2：anti-Müllerian激素(Amh)和配体特异性II型受体(Amhr2)在小鼠海马中的蛋白定位。冠状切片使用荧光标记，Amh(红色;A、E) Amhr2(绿色;B,F)和DAPI(核染色;蓝色;C、G)。在每个面板的左上角插入框中显示了框区域的高倍图像。A和E显示阿蒙氏角(cornu Ammonis, CA) 1和CA3 对Amh染色阳性。B、F显示CA1、CA3对Amhr2染色阳性。D和H显示 Amh-和amhr2阳性染色共定位于细胞体和树突(箭头)。进一步分析发现，外源Amh蛋白增加了突触传递和长期突触可塑性。Amh暴露也增加了CA1突触的兴奋性突触后电位。这些结果表明，Amh可能在学习和记忆方面发挥作用，并可能是认知发育和功能的性别差异的原因。Echo Revolve正倒置一体显微镜Echo Revolve展现了其非凡的灵活性，可以轻松地实现正置和倒置显微镜转换，创新性地把正倒置显微镜合二为一，开启了显微镜Hybrid时代。▲ Echo Revolve正倒置一体显微镜☑   视网膜屏显示技术：比拟目镜人眼观察效果。☑   全视野观察： 更清晰，更方便。☑   多通道荧光：多达4个EPI荧光通道，无须暗室，就可以轻松快速地完成多色荧光显微分析。☑   自动化操作：通过iPad Pro点触操控相机及荧光通道之间的切换，实现了完全自动化操作。☑   App应用软件：基于IOS的Echo App是与Apple团队合作研发的专业显微镜软件。☑   精湛的工艺尽显高端品质：实现非凡的性能。｜申请试用｜我们的仪器可以申请试用哦！扫描下方二维码关注“深蓝云生物科技”公众号，点击“云活动”→“试用中心”即可。

数字PCR技术自1999年提出概念，实现了目标核酸拷贝数浓度的绝对定量的技术突破，为核酸精准定量和基因检测提供了全新的思路。数字PCR技术具备无需标准品、高精准度、高灵敏度、高分辨力、多通道等技术特点，目前广泛应用于前沿生命科学应用领域，如先进的基因/细胞治疗、干细胞移植、病原微生物定量、肿瘤个体化诊疗/液体活检等多个前沿领域，为生命科学、临床医学、药物开发、计量科学等科学家探索更高灵敏度、更精准测量，提供了全新的路线和工具。为更好地让广大学者了解数字PCR技术，快速完成qPCR方法到数字PCR方法的转化，Gene-π数字PCR学堂——核酸绝对定量分析及高阶多重数字PCR应用训练营（西湖大学站）将于2021年07月19日在杭州召开。聚焦于数字PCR原理、实验操作、应用进展、结果分析、高阶多重dPCR实验方案、生物医药研究领域中数字PCR技术的方法及应用等核心内容，训练营将携资深技术专家，为广大学员带来从理论到实战、从入门到精通的饕餮盛宴。培训时间地点时间：2021年07月19日地点：浙江杭州西湖大学-云栖校区--3号楼312会议室培训日程参会报名您在PCR实验操作中是否遇到过问题？如何在实验过程中设置质控要求？在什么浓度范围内检测是准确的？数字PCR的最低检测限如何评估？数字PCR引物探针设计和qPCR有什么区别及如何评估其质量？在本次训练营中都可以得到答案，心动了吗？心动了就赶紧报名吧！场地有限，报名从速哦。可以通过扫描下方二维码进行报名哦！敲黑板了！我们的初衷是--真诚地把先进技术和应用带给大家!只要您提交了报名申请，经主办方审核通过后，收到报名成功确认通知，就可以参加我们的培训班啦！因场地有限，先到先得哦。赶紧报名吧！联系我们详情咨询方式：电话：010-57256059，15801106547邮箱：info@cycloudbio.com

2021年6月4日中国计量科学研究院发布全球首个新型冠状病毒核糖核酸假病毒弱阳性口腔粘液基质标准物质(高浓度和低浓度)。▲规格：200μL/管（研制单位：中国计量科学研究院）新冠病毒核酸检测最常见的样品为咽拭子，但目前国内外尚未有以口腔粘液为基质的新型冠状病毒核糖核酸检测标准物质。通过模拟临床检验咽拭子样本的基质和病毒浓度，可最大限度地重现新冠病毒核酸临检样本检测过程，对咽拭子样品从RNA提取至核酸扩增检测的全过程进行质控，为新型冠状病毒检测实验室的弱阳性和位于灰区的检测结果提供判定参考，满足了国家卫健委新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南中的新型冠状病毒核酸检测过程质量控制的要求，并可用于新型冠状病毒检测试剂盒性能验证。该标准物质是采用重量法，将NIM-RM5203新型冠状病毒（2019-nCoV）假病毒核糖核酸标准物质添加到人工模拟的口腔粘液基质中制备而得。将重量法配制值作为标准物质ORF1ab基因和N基因的标准值。资源来源于：中国计量科学院。

对现代显微镜而言，基本功能可以拆解成三块：光学成像、图像采集、图像处理与分享。所谓光学成像，即尽量还原镜下样品的形态，色彩等信息；图像采集即将镜下观察结果转换为照片或视频；图像处理与分享，即对样品进行标注，测量并分享。现代显微镜生产商根据以上三功能，进行产品设计与研发：各厂商针对三功能进行再次拆解，开发部件：根据观察样本和应用方向的不同，各厂商开发了针对性的部件来满足用户要求，不同样本需要各个部件完美配合才能得到好的成像效果，以常见的免疫荧光观察为例，一套专业免疫荧光显微镜的构成，为荧光光源+萤石物镜+荧光激发块+高速高灵敏相机+荧光分析处理工作站，部件种类繁多，配置复杂，如果用户对显微镜不够了解，很容易配错。当前显微镜观察方式基本分为7种，各厂商针对性开发了不同部件，并且不约而同采用了模块化，积木式设计。模块化设计顾名思义，用户可以通过更换不同部件，来得到不同的功能，积木式设计则是为模块化设计提供一个基本光学显微底座，通过外接方式来实现功能扩展。如上图，积木式显微镜结构设计带来的好处是显而易见的。它可以用一个基本框架，实现尽可能多的功能，但是凡事都有两面性，积木式设计也有如下几个问题：1. 系统复杂，不易学习掌握 。2. 外置部件设计使系统庞大，接线多，占地空间大 。3.  搬运困难，需要专业人员拆卸装箱后才能搬运，搬运后还需要专业人员再次安装调试。我们可以参考一下，照相工具的演化如图：我们常用的照相工具，这些年来经历了三步演化，专业单反-微单-智能手机。对显微镜的未来而言，积木式设计肯定不会消亡，它服务于专精市场，同时集成式设计会是显微镜未来的一个主要方向，通过集成式设计，突出常用功能，简化机械与人机界面，实时数据分享，让显微镜变得易学好用，无缝实时传输图像。一体化极简设计：高清成像：实时图像分享：我们相信，集成化，极简化，网络化是显微镜的未来方向与目标。Echo Revolution全自动荧光显微镜Echo Revolution全自动荧光显微镜，将XYZ三轴全部实现电动化，从而实现自动完成多图拼接的大视野高分辨率成像，而电动化的Z轴可以帮助用户实现自动聚焦、自动定焦和Z-Stacking多层扫描大景深成像。Echo Revolution全自动荧光显微镜还添加了延时摄影功能，可以帮助用户实现长时间观察和时间回溯，使用户可以进行更全面的观察实验。▲ Echo Revolution全自动荧光显微镜｜申请试用｜我们的仪器可以申请试用哦！扫描下方二维码关注“深蓝云生物科技”公众号，点击“云活动”→“试用中心”即可。

自从引入联合抗逆转录病毒疗法 (ART) 以来，HIV-1感染已从一种致命疾病转变为一种可控制的慢性疾病。然而，虽然ART可有效抑制个体的病毒复制，但它并不能治愈HIV-1感染。这是由于患者体内存在一个潜伏病毒库（latent resservoir），其中包含一小部分具有复制能力的完整原病毒（约占1-5%），在ART停止后为病毒复制提供“燃料”。因此，科学家若想通过消除该病毒库达到HIV-1治愈的目的，就不得不对这些完整原病毒进行准确评估。但是，接受ART治疗的患者可能具有载量非常小的完整潜伏病毒库，在有限的血液采样中进行检测，可能会遗漏这些潜在储库。▲图源：网络（侵删）在过去的几年里，已经出现了几种基于PCR与二代测序 (NGS) 相结合来检测病毒库的方法。比如基于双重dPCR方法来量化HIV-1患者的完整原病毒，即IPDA（intact proviral DNA assay）方法，该方法通过双重实验检测HIV-1基因组中的PSI和ENV两个靶点。另一种常见方法是Q4PCR，其在HIV-1全长测序方案中引入了四重qPCR，在全长测序之前评估HIV-1基因组的完整性。尽管这些方法提高了检测灵敏度并且可以提供全长的 HIV-1序列，但其成本效益不高，需要多步人工操作且耗时较长。比利时根特大学、根特大学数字PCR联盟、艾滋病毒治疗研究中心等科学家近日在知名期刊《Methods》上发表了一篇HIV-1病毒库研究相关文献，文章对IPDA方法和Q4PCR方法进行集成，并在naica®微滴芯片数字PCR系统进行验证，该方法增加了IPDA 方法检测HIV-1的靶点数量，提高了检测灵敏度，实现对潜伏病毒库的精准定量。研究方法：结合IPDA和Q4PCR方法，设计基于naica®微滴芯片数字PCR系统的三重数字PCR实验。☑ PSI靶点-FAM蓝色探针标记☑ ENV靶点-HEX绿色探针标记☑ GAG靶点 & POL靶点-Cy5红色探针标记▲ 靶点对应的基因组位置图研究结果：☑ 使用J-Lat 8.4细胞系（每个细胞含有1拷贝的HIV-1基因组）进行单重实验，并测定naica®微滴芯片数字PCR系统三重试验的性能，结果显示定量结果和理论值一致，重复性好；各靶标阴阳性微滴区分良好。▲ 对阳性对照J-Lat 8.4细胞的拷贝数进行量化-设定PSI、ENV、GAG/POL单重检测及IPDA和三重等多重实验，并对DNA剪切情况进行校正（DSI）☑ 使用naica®微滴芯片数字PCR系统直接定量来自HIV-1患者的五个PBMC样本，这些样本病毒载量较低，且均经过ART治疗，检测结果显示5个患者均检出了HIV-1。此外，发现一个比较有趣的现象，在患者SLR_26样本中几乎没有检测到ENV且PSI也只有非常低的信号，该结果表明PSI和ENV序列中可能存在缺失或突变，如果只检测这两个靶点的话，该病人可能被判读为HIV-1阴性。幸运的是，使用naica®微滴芯片数字PCR系统设计的三重实验，GAG或POL基因正常检出，表明该样本含有HIV-1。▲ 使用naica®微滴芯片数字PCR系统对5个HIV-1病人的PBMC(每百万个)进行定量文章结论：通过naica®微滴芯片数字PCR系统对HIV-1患者潜伏病毒库进行了量化，相较于传统方法增加了亚基因组区域的检测数量，提高了对潜伏病毒库的检测的灵敏度，降低结果误判的可能性，且该方法甚至可以在未来开发的5色或6色的数字PCR系统中进一步放大。原文链接如下：https://doi.org/10.1016/j.ymeth.2021.05.006单位简介：根特大学（Ghent University），简称UGent，由荷兰国王威廉一世于1817年创办，迄今已有200多年历史，是比利时学术排名第一的世界顶尖研究型大学，一直以其极高的学术水平享誉全球，2020年世界大学学术排名中位列第66名，根特大学校友中诞生了4位诺贝尔奖得主。随着数字PCR技术的发展，根特大学已成立数字PCR联盟，该联盟致力于开发数字PCR检测和数据分析工具，同时该平台还会不定期举办数字PCR培训课程，帮助广大学子及专业人士更好的了解和应用数字PCR技术。naica®微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司的naica®微滴芯片数字PCR系统在进行核酸检测时具有独特的优势。该系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片（或高通量Opal芯片）作为数字PCR过程的耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要2.5小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获得的数据真实可靠。

近日，Echo Revolution全自动荧光显微镜落户在中国农业科学院。Echo Revolution全自动荧光显微镜以其独特的、智能化的正倒置一体的设计，XYZ三轴全电动化，自动聚焦、自动定焦和Z-Stacking多层扫描大景深成像备受老师们的好评和认可，同时感谢各位老师们的大力支持，顺利完成安装培训并启用！▲ 现场装机图Echo Revolution全自动荧光显微镜Echo Revolution全自动荧光显微镜，将XYZ三轴全部实现电动化，从而实现自动完成多图拼接的大视野高分辨率成像，而电动化的Z轴可以帮助用户实现自动聚焦、自动定焦和Z-Stacking多层扫描大景深成像。Echo Revolution全自动荧光显微镜还添加了延时摄影功能，可以帮助用户实现长时间观察和时间回溯，使用户可以进行更全面的观察实验。Echo Revolution全自动荧光显微镜在蛋白互作荧光观察（BIFC）、多蛋白共定位观察、蛋白移动延时摄影、染色材料高分辨成像、细胞长时间形态观察摄影、多位点导航成像以及便捷细胞计数和测量功能等方面可为用户提供更便捷的观察需求。▲ Echo Revolution全自动荧光显微镜非常感谢用户对我们平台的认可，同时也希望Echo Revolution全自动荧光显微镜为越来越多的用户提供更简洁高效的观察方式。如果也想get同款Echo Revolution全自动荧光显微镜，请联系我们。申请试用我们的仪器可以申请试用哦！扫描下方二维码关注“深蓝云生物科技”公众号，点击“云活动”→“试用中心”即可。

高带宽、低时延、高度可靠的5G技术将万物互联，数字传输效率的极大提高，不仅改变我们的生活，更是推动各行业升级发展。深蓝云生物公司Echo互联网系列显微镜-REBEL，REVOLVE和REVOLUTION，与您一起进入5G时代，突破时间和空间限制，让您相隔千万里，随时随地、多人多点实时查看高品质图像，传输图片和录制视频。北京A医院病理科Rebel互联网显微镜体验分享：此医院是一所以神经外科为先导，以神经科学集群为特色，集医、教、研、防为一体的国际先进临床、科研、教学基地，国家重点学科医教研防一体化三级甲等综合医院。Rebel互联网显微镜用户反馈：Q1:老师您觉着Rebel互联网显微镜的易用性怎么样？答：“这太方便了，可以直接看图像，解放双眼，特别是对于戴眼镜的非常友好。”Q2:在远程会诊上的帮助大吗？答：实  时  性：“这个我能远程让我们帮扶单位现场按照我的想法调整切片位置，调整参数，我这边来确认，这沟通多直接，肯定提高效率。”任意地点：“解决我出差中的大问题了，远程会诊约着更方便了，原来必须在本院系统才行，我特别看好网络互联。”Q3:在教学方面是不是也有一定的发挥空间？答：多人多点：“全国学习班可以直接看同一个成像位置，不用搬仪器，大家远程就可以直接线上进行病理片子的解决，方便的很。”即  时  性：“你们这个还有个好处，有的时候新鲜样本不能放太久，这种在哪都能看，不会受样本的时效性影响，实验室有人做，我在哪看都行，检验科的使用更多。”现场互联网显微镜视频演示：实时共享，多点联动。操作显示可以随意放置，符合老师工作时的人体工程学：可外接目镜镜筒，帮助老师观测习惯的过渡：

MIQE指南中明确提出，进行qPCR实验时必须测定以下检测性能特点：PCR的效率、线性动态范围、LOD和精密度。1、PCR的效率：强大和精确的qPCR测定通常具有高效率。在报告目的基因相对于参照基因的mRNA浓度时，PCR效率是非常重要的。ΔΔCq方法是测定样本和用来标准化的单个参照基因之间浓度差异的最常见的方法之一。如果计算出目的基因与参照基因的Cq值的差异(ΔCq)，就可以将不同样本的ΔCq值直接进行比较。值得注意的是，两个基因的比较，必须在相似的扩增效率下进行。然而最常见的方法不一定是最合适的，相反已经开发了更为普通的定量模型用于校正扩增效率的差异[1]和多个参照基因的使用[2]。PCR扩增效率必须通过校准曲线法建立，因为校准法简单、快速、重现好，保证了PCR的平均反应效率、分析灵敏度和检测方法的稳健性。扩增效率，要通过校准曲线线性部分的斜率计算，具体计算公式为：PCR效率= 10-1/slope-1，即以初始模板浓度的对数为X轴(自变量)，以Cq值为Y轴(因变量)作图。理论上效率的最大值为1.00 (或100%)，此值表明每个循环周期的产物量加倍。理想情况下，所报道的平均PCR效率的CI (可信区间)或SE (误差)值应该通过两次校准曲线法得到。发表文章时，除了要提交每个定量目标的校准曲线外，还要提供校准曲线的斜率和在Y轴上的截距。PCR效率的差异会产生不同斜率的校准曲线。随着模板量的变化，目的基因和参照基因Cq值的差异并非固定不变，因此，按照固定Cq值计算得到的相对浓度是不准确的，可能会产生误导结果。大于40的Cq值是可疑的，由于其效率较低，建议不要报道。然而这种随意设定Cq临界值的做法是不科学的，因为这些值可能很低(可消除有效的结果)也可能很高(能增加假阳性结果)。2、线性动态范围：PCR反应的动态范围应该呈线性，即最高或最低的定量拷贝数应该通过平均校准曲线法得到，提交的文章应该包括线性动态范围。校准曲线的产生依赖于所使用的模板，动态范围应跨越至少3个数量级，最好扩大到5或6个1og10浓度范围。校准曲线的线性区间必须包括目标核酸的定量范围。由于定量下限的界定往往很混乱，因此应该报告提交文章中所谓线性范围内最低浓度处的变异。另外还必须报告线性相关系数( R2值)，并且最好提供整个线性动态范围内的CI值。3、检测限：检测限定义为能够检测到95%的阳性标本的最低浓度。换言之，将浓度在LOD水平处的待测样本进行多次重复测定，测得无效结果的概率小于5%。低拷贝PCR的出现是随机有限的，而且不可能发生单次PCR的LOD值小于3个拷贝数的情况。然而，如果进行多次反应，则可通过数字PCR获得低浓度范围的准确定量。事实上，可将浓度校准品进行有限稀释，并按照泊松分布计算PCR反应的失败率和成功率。4、精密度：引起qPCR变异的因素很多，包括影响退火和变性的温度差异、取样误差导致的浓度变异和随机误差。qPCR的精密度主要受浓度影响，并随拷贝数增加而降低。最好进行多次重复测定，并将以SD误差线形式表示的批内变异(重复性)和校准曲线的CI (可信区间)在图中标示出来。变异系数CV不能用来描述Cq，但可用来表示拷贝数与浓度的变异。技术引起的变异应区别于生物学变异。生物学复制可直接导致组间或不同处理方法间qPCR结果的显著性差异。对于诊断分析，还需要报告不同地点和不同操作者的批间精密度(重现性)。资料来源：2020版MIQE指南Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。参考文献：[1] Pfaffl M W . A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR[J]. Nucleic Acids Research, 2001, 29(9):e45.[2] Hellemans J ,  Mortier G ,  Paepe A D , et al. qBase relative quantification framework and software for management and automated analysis of real-time quantitative PCR data[J]. Genome Biology, 2007, 8(2).

2021年全国植物生物学青年博士（后）学术论坛——“蓁叶”论坛将于2021年6月26-28日在河南省开封市中州国际饭店（河南省开封市大梁路8号）举行，北京深蓝云生物科技有限公司将携带相关产品亮相此次大会，我们将在A4展位恭候您的参观咨询。此次论坛为促进年轻科研人员之间的学术交流与合作，提高博士生的科研和创新能力，展现我国植物生物学领域青年研究人员的优秀科研成果，由中国植物生理与植物分子生物学学会、中国科学院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所主办，河南大学省部共建作物逆境适应与改良国家重点实验室、棉花生物学国家重点实验室（河南大学）承办，围绕植物生物学中的重大科学问题、关键技术，共同探讨学术前沿，交流科研成果。深蓝云展台产品展示naica®下一代数字PCR平台naica®全自动微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成由25,000-30,000个微滴组成的单层二维阵列，该单层微滴阵列形成后直接进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。仅需2.5小时即可获取结果。▲ naica®微滴芯片数字PCR系统Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；无传统目镜设计，拥有明场，相衬，荧光，偏光等观察方式，可兼容活细胞观察，病理切片，免疫组化，免疫荧光，荧光原位杂交等。▲ Echo正倒置一体显微镜Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。▲ Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统

从古至今，人类一直在追寻更高更远的真相，从远洋航行到太空探索，人们不断征服一个个宏伟的目标，但是人们肉眼所见的宏观世界不是世界的全部，还有人眼无法看清的微观世界，它同样也吸引着无数人去探索和追寻。无论宏观还是微观事物，我们的观测都是基于三维空间的属性，即XYZ三维，而对事物形态变化的观察则需要再引入一个衡量因素--时间T，因此对事物观察的最完备方式一定是XYZT的同时记录，即形态+时间的长时间摄影，这也是显微镜的终极功能。经过三百多年的发展，现代显微镜提出分辨率、景深、视野等概念，并不断提出解决方案，显微镜已经初步满足我们对微观世界观察的需求，帮助我们记录下微观世界的空间和时间。微观世界观察最重要的是细节的分辨，分辨率的概念便由此诞生，分辨率是指人眼可以区分的两个点之间的最小距离，只在XY维度有效，根据瑞利判据，Rayleigh Criterion，正常人能分辨的极限是明视距离25cm处0.2mm的两个点，当我们使用显微镜后，我们可以看清更小距离的两个点，这便提升了我们观察的分辨率。随着现代研究的不断深入，人们对分辨率的要求也在不断提高，而科学家们也在不断的提升显微镜的分辨率，如电子显微镜将分辨率提升至纳米级别，实现了对病毒的观察，超高显微成像技术，将显微镜的分辨率从200纳米提升到几十纳米，实现了对活细胞细胞器的观察。分辨率的提升也带来了新的问题，即视野和景深的减小，当用普通中央照明法（使光线均匀地透过标本的明视照明法）时，显微镜的分辨距离为d=0.61λ/NA，可见光波长范围为400—700nm，取其平均波长550nm，波长是固定常量，因此，增大NA数值，即可得到更小的D值，也就是可以分辨的两点之间的距离更小，可以让人眼看清楚更小的物体。NA值即数值孔径，描述了透镜收光锥角的大小，NA = n * sinα，即透镜与被检物体之间介质的折射率（n）和孔径角（2α）半数的正弦之乘积。n为物镜与样本之间介质的光折射率，当显微镜物方介质为空气时，折射率n = 1 , 采用折射率高于空气的介质，可以显著提高NA值，水浸介质是蒸馏水，折射率为1.33；油浸物镜介质是香柏油或其它透明油，其折射率一般在1.52左右，接近透镜和载玻片的折射率，因此，油镜的NA值高于空气镜。孔径角又称“镜口角”，是透镜光轴上的物体点与物镜前透镜的有效直径所形成的角度，增大镜口角，可以提高正弦值，其实际上限约为72度（正弦值为0.95），乘以香柏油折射率1.52，可以得出最大NA值为1.45左右，代入分辨率计算公式，可以得出常规显微镜极限XY平面分辨率为0.2um左右。NA值还会直接影响显微镜的视野亮度（B）。由公式B∝N.A.2/ M2 我们可以推出，亮度随数值孔径（N.A.）的增大或者物镜倍率（M）的降低而增加。从理论上来说，我们应该追求尽可能高的NA值，以获得更好的XY平面分辨率和视野亮度。然而凡事都有两面性，XY平面分辨率的提升，会带来Z轴景深和观察视野的减小。显微镜一般都是垂直向下取景的，通过视场直径内观察到的物体表面凸起的位置与凹下的位置都能够看的很清楚时，那么凸点与凹点之间的高度差就是景深了，对于显微镜来说景深越大越好，景深越大在观察高低不平整的物体表面时，能够得到更好更立体的清晰度画面，大景深有助于我们对微观世界进行垂直方向形态的观察，也就是XYZ三维形态中的Z轴信息。景深就是象平面上清晰的象所对应物平面的前后空间的深度：dtot=(λ*n)/NA + n/(M∗NA) * e，dtot：景深，NA ：数值孔径，M ：总放大率，λ：光波波长, （通常λ=0.55um），n: 试样与物镜之间介质的折射率（空气: n=1、油: n=1.52）根据这个公式，我们可以知道，Z轴景深与XY平面NA值成反比。除了景深外，视野也受到NA值的影响，通过仪器固定注视一点时所能看见的空间范围即视野，它的计算与物镜的放大倍数直接相关，观察所看到的实际视野直径等于视场直径除以物镜的放大倍数，目镜会表明对应视场数，如10/18，即放大倍数10倍，视场直径18mm，因此当目镜确定后，放大倍数越大则观察的视野越小。XY平面分辨率是对局部细节的解析，而视野则决定了我们对样本的观察范围，视野必然是越大越好，但受限于当前的技术，我们必须采用高倍物镜，才可以得到良好的NA值，因此,视野和NA值有间接的负相关系。当我们需要观察的样本大于我们的视野时，每次观察只能看到一个局部，为了解决这个问题，拼图技术便应运而生。通过在XY方向移动样本，连续拍下不同位置的图像，最后拼接在一起，就可以得到一张全视野的图像。▲镜下局部视野▲拼接后全视野▲手动拼接▲自动拼接(图源：Echo显微镜)拼接分为手动和自动两种，手动拼图成本低廉，但是对人员的操作水平，经验要求很高，如上图，操作人员稍有不慎，就会出现图片接缝问题，同时手动拼图速度慢，不适合大批量，高通量样本处理，比如医院病理科日均上百病理切片观察，手动拼图方式无法满足要求。自动拼图的核心部件是全自动载物台，结合软件，可自动实现全自动，大范围全视野拍摄，结合自动Z轴对焦补偿，即可得到全视野的清晰图像。Echo Revolution 全自动荧光显微镜Echo Revolution全自动荧光显微镜，将XYZ三轴全部实现电动化，从而实现自动完成多图拼接的大视野高分辨率成像，而电动化的Z轴可以帮助用户实现自动聚焦、自动定焦和Z-Stacking 多层扫描大景深成像。Echo Revolution全自动荧光显微镜还添加了延时摄影功能，可以帮助用户实现长时间观察和时间回溯，使用户可以进行更全面的观察实验。

一般情况下，实时荧光定量PCR引物设计原则中会提到扩增子大小对实时荧光定量PCR的扩增效率有一定作用。所以通常建议使用相对较短的扩增子长度，范围为50到150个碱基对（bp）。由于小片段不太容易在传统PCR中所用的琼脂糖凝胶上显现，因此这种小片段扩增在传统PCR中检测更为困难。qPCR的出现使得扩增小于100bp的基因片段成为可能。本文将为大家介绍扩增子大小对qPCR产量的影响，表明使用小片段检测的优势所在。将大豆的RR和Lectin基因作为研究对象，各基因的正向引物被保留，反向引物以+/-40bp的步进移动以增加扩增子的大小。将正向引物保持在探针附近，以使探针在延伸步骤中被Taq聚合酶的核酸外切酶活性快速水解。RR扩增子大小分别为83、121、160、198、248、319和362bp。Lectin扩增子大小分别为：81、109、158、197、228、288、342和363 bp（图1）。▲图1：所用引物和探针的位置采用TaqMan探针法和SYBR Green染料法对不同的样本进行qPCR检测，结果表明扩增子的大小可直接影响检测结果：随着扩增子长度的增加，Cq值整体呈现增加的趋势（表1和表2）。在SYBR Green检测结果中，扩增子长度的增加对Cq值的影响不太明显，但在TaqMan检测结果中，可以发现83bp和362bp扩增子对应的Cq值可最大相差15.63。▲表1：使用TaqMan法对不同长度扩增子的qPCR检测▲表2：使用探针法和染料法对不同长度扩增子的qPCR检测如图2所示，是使用不同的引物获得的扩增曲线线性图谱，对于较短的扩增子，可以被更早地检测到荧光信号（较低的Cq值）以及具有更高的荧光强度（较高的平台期）。对于较长的扩增子，其扩增效率一定程度上降低。83bp和121bp扩增子的扩增效率约为100%，随着扩增子长度的增加，扩增效率呈下降趋势，362bp扩增子的扩增效率最低可以达到50%。▲图2：不同长度扩增子的扩增曲线注：横坐标为循环数，纵坐标为荧光强度综上所述，发现扩增曲线的动力学效应随扩增子大小的变化而变化，扩增子越小，平台期的荧光强度越高。尤其是在TaqMan检测中，更要注意扩增子大小的设计，为了获得较高的扩增效率以及较低的Cq值，其扩增子长度应控制在50-150bp之间。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。参考文献：The influence of amplicon length on real-time PCR results. 2017.