人们在节食减肥的时候常常将食物折算成热量，实际上不同类型的热量减肥效果并不相同。一项最新研究表明，在节食减肥的时候限制膳食脂肪比限制碳水化合物更加有效。   “与减少脂肪摄取相比，减少碳水化合物可以更有效的降低胰岛素分泌和增强脂肪燃烧，"研究人员说。“因此许多人认为减少碳水化合物摄取能够更好的减肥。但有趣的是，我们的志愿者在限制膳食脂肪时减掉了更多的脂肪。"研究人员招募了19名没有糖尿病的肥胖男女，让他们24小时呆在病房从事同样的活动，严格控制他们的每一口食物。第一阶段，研究人员通过限制碳水化合使膳食热量减少30%，脂肪含量不变。第二阶段，研究人员通过限制脂肪使膳食热量减少30%，碳水化合物含量不变。    研究显示，低碳水化合物膳食可以减少胰岛素的生产，让人体燃烧更多的脂肪。但低脂肪膳食能让人减掉更多的脂肪，虽然它对胰岛素生产或脂肪燃烧没什么影响。研究人员之前曾建立过一个人类代谢的数学模型，这项研究证明了这一模型的正确性。  “我们的数据显示，在节食减肥的时候不同类型的热量之间并不能划等号，"不过，随着时间的推移不同节食方案的减肥差距可能会慢慢缩小，“现实生活比科学研究复杂得多，你减肥的时候还应当考虑，哪一种节食方案更容易接受并且长期坚持。"    

这些妙招也有助于缓解污染环境对人体的伤害。1、常备人工泪液    环境污染还会对眼睛和呼吸器官造成刺激。经常感觉眼睛发痒?你很有可能得了结膜炎。对于轻微症状，含有透明质酸、不含防腐剂的人工泪液就能起到缓解作用。使用时，必须将人工泪液充盈于整个眼部。倘若症状严重，可以使用含有聚维酮碘和羧甲基纤维素成分的滴眼液。2、洗涤鼻腔    外出回来后，除了洗脸，你还需要清洗最容易吸入污染物的鼻子。可以用清水或是生理盐水洗涤鼻腔，将污染物清除掉，同时缓解因缺水而引起的鼻腔干燥。3、饮茶排毒    五味子茶有助于缓解咳嗽和过敏性皮炎症状，葛根茶则具有不错的重金属解毒功效。此外，蜂蜜水也有助于增强人体免疫力。五味子茶：1.2 升水中加入 30 克五味子，然后加热煮到水量减半。葛根茶：2升水中加入 50 克葛根，水开始沸腾后，关火 10-15 分钟，然后继续煮。蜂蜜柠檬茶：将2片柠檬与1勺蜂蜜加入250ml温水中充分搅拌即可。     其实想要拥有白皙靓丽的脸蛋并不是太难的事情，只要我们平时都做好肌肤的护理工作，养成良好的生活习惯就可以很好的达到护肤的效果咯!上面小编介绍的这些女性护肤知识大家都记住了吗，平时要严格要求自己哦，这样才能保证肌肤的年轻哦!    

    抗体就是有抗原进入你体内发生抗原抗体反应后后产生的，医生说你又抗体就是乙肝表面抗体阳性。如接种乙肝过疫苗，一般会产生抗体；如没接种过产生抗体就是曾经感染过乙肝病毒，但病毒量少，范围小，加之个人身体因素不足以发病，故而产生了抗体。

   ELISA试剂盒准确阐明特定生物体内的突变率对于研究人员而言是一件极其困难的事情。在近期发表于《美国科学院院刊》（PNAS）杂志上的一项研究中，宾夕法尼亚州立大学的Kateryna Makova和同事们阐明了出现这种情况的原因。    以往的研究都是将焦点集中在突变率的区域性差异上，而Makova和研究小组则同时检测了4种不同的突变类型，以前从未有人在单次分析中完成过这样的工作。他们利用一种叫做秘密Markov模型（HMMs）的统计学技术侧重分析了小插入和缺失、核苷酸置换和单核苷酸微卫星重复变异，搜索了具有相似突变率的邻近基因组片段，将它们归为一类，由此揭示了6个不同的遗传差异区域：分别命名为“hot”、“del/sub-warm”、“ins-warm”、“cold auto”、“cold X”和 “microsatellite”。     论文的共同作者Francesca Chiaromonte 说：“HMMs鉴别的6个区域可以揭示整个基因组大部分的突变率差异。我们看到在接近染色体顶端端粒处有很多的hot和warm区域，而在染色体中段和X染色体上有一些cold区域。看起来唯一随机的状态就是microsatellite状态。     这意味着在靠近染色体的两端处突变发生更为迅速，而在中部突变率降低。ELISA试剂盒更重要的是，研究人员发现一些突变事件相比于另一些变化更为迅速。 研究小组还将这些突变类型与基因组特征中一长串的参数联系起来。     Chiaromonte说：“我们尝试将基因位置和功能标记与我们的状态联系起来，我们的研究发现极其有趣且有些出乎意外。我们发现基因、功能性标记和预测增强子、启动子过多占据在hot区域和insertion-warm区域中。因此我们认为这些hot区域具有重要的功能，且突变迅速，好像这些功能性区域更快速突变具有某些优势。”    该研究还对一直以来突变率评估其准确性存在争议的原因提供了一种合理的解释。通常谱系研究比系统发育研究的突变率要高。“我们发现谱系研究中我们的hot区域获得了非常高的SNPs富集。这就解释了它们会给出更高突变率的原因，”Chiaromonte说。两类研究都是准确的，只是它们观测的是基因组的不同部分。     这些研究发现的一个直接用途就是可以改善对疾病相关基因变异的筛查。现在的变异筛查会导致许多的假阳性结果。但如果科学家们知道一种特殊的变异发生在一个“hot”区域，相比于“cold”区域其由于较高的突变率导致假阳性的可能性就更高。     ELISA试剂盒新方法还可用于鉴别定位在基因之外的功能区域从而更深入地了解基因组。目前，研究人员将焦点放在了物种间进化上更为保守的含有基因的区域，以鉴别功能性元件。通过计算整个基因组景观中突变率差异，可以提高在非基因区域进行这类分析的精确度 

    别看橘子个头不大，橘子可以说全身是宝，橘皮、橘络、橘核、橘肉都是“天然药物"，具有润肺、止咳、化痰、健脾、顺气、止渴的功效。ELISA试剂盒橘子浑身宝 一个橘子等于五味药橘皮 清新口气    新鲜的橘皮中含有大量的维生素C和香精油，具有理气化痰、健脾胃等功能。将其咀嚼后吐掉残渣，重复数次，对去除口腔异味比较有效。橘皮泡茶，味道清香，还能通气提神。陈皮 有助消化    橘子干燥成熟的外皮，以陈者佳。陈皮是晒干的橘子皮，而且越陈越好。陈皮味辛、苦，性温，归脾、胃，功效健脾开胃，主治消化不良。陈皮可以和大米一起熬粥，或者用来炖汤。采收陈皮时，去其白内皮后的红色外皮叫橘红，去红外皮后的白色内皮叫橘白，临床也专用，二者功效同陈皮，但前者侧重燥湿化痰，后者则长于和胃化湿。 橘络 保护血管    橘子里白色网状的丝络，叫“橘络"，因为其中含有一种名为“芦丁"的营养素，所以有苦味。但这种物质能使人的血管保持正常的弹性和密度，减少血管壁的脆性和渗透性，防止脑溢血的发生。橘络可以直接吃，也可用来泡水喝。ELISA试剂盒橘核 缓解经痛    橘核有理气、温胃、止痛的作用，既能驱寒，又能止痛，因此有助女性缓解痛经。建议用橘核沏茶，一般用3~5克；如果疼得厉害，可以用到10克。橘肉 生津止渴    橘肉含水量高，能生津止渴。现代研究证明，橘子富含维生素C、胡萝卜素、叶酸等营养成分，并且还含有抗氧化、抗过敏成分，能减少冠心病、中风及高血压的发病率。ELISA试剂盒  

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此外，研究人员又利用RNA干扰技术评估了91个已证实存在突变的基因对肝癌细胞生长的影响，发现ARID1A、VCAM1和CDK14等基因突变可能与肝癌发生、转移密切相关。ELISA试剂盒特别是，ARID1A基因突变在多种人类肿瘤中均被发现有突变发生，比如：卵巢癌、子宫内膜癌、胃癌、肾癌、膀胱癌等。在我们的这项研究中，ARID1A基因在13%肝癌组织中均发生突变。有同行预测，该基因有可能是继TP53基因之后，又一个肿瘤基础研究和开发应用的明星分子。此外，VCAM1除了突变外，还在多数肝癌样本中表达下降。而与细胞增殖相关的CDK14基因突变则会增强该基因功能，导致细胞生长加快，促进转移。此项研究选择了10例HBV阳性肝癌患者，收集每一例患者手术后的癌旁组织、原发癌组织和肝内转移的门静脉癌栓。利用基因组学领域内的最先进的DNA序列分析仪，对这些样本进行全外显子组测序分析，结合生物信息学技术仔细识别每一例患者的三种样本间的DNA序列的微小差异，从而发现在肿瘤细胞存在347个突变基因，ELISA试剂盒平均每个肿瘤样本有30-40个基因突变，其中大多数基因突变是第一次在肝癌细胞中被发现，并且在原发灶和转移灶中同时出现。说明肝癌的发病和转移与基因突变密切相关，并且转移相关基因在原发癌中就已经发生了突变。随后研究人员在更大规模的肝癌样本中对基因突变进行了验证，证明研究的结果是准确可信的。　　　　

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人ELISA试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点，在实验室的应用已经相当普及，绝大多数是用于检测未知样本中抗原的浓度。现在市面上的人ELISA试剂盒既有国产也有进口，数量繁多令人目不暇接，而且质量也是参差不齐，那么我们怎样才能选出最适用的产品呢？首先要根据我们所要检测的分子进行检测，除此以外也还有一些需要加以考量的因素。如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就是交叉反应的一个因素。尽管现在购买源自指定动物的抗体越来越容易，我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行人ELISA试剂盒检测时，检测用的二抗必须特异性针对检测一抗，而不能与捕获抗体起反应。如果检测用二抗与捕获抗体结合，实验特异性就会大打折扣。通常我们选用源自不同宿主的捕获抗体和检测一抗，来避免上述问题。与此同时，了解试剂盒中提供的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），以免这些buffer含有可能影响抗原抗体相互作用的组分，使检测结果收到影响。

利用一种新技术来同时分析活小鼠体内的大量miR，研究人员鉴定出几种miR参与血液形成。当他们让这几种miR中的miR-150失去功能时，他们发现小鼠能够更加有效地再生化疗所破坏的白细胞和血小板。缺乏这种这种miR的小鼠没有表现出不良的健康影响。相反地，携带活性miR-150 的小鼠很难再生新的血细胞。研究人员说，“我们希望发现这些参与血液形成的特异性miR将给我们提供方法来不仅帮助癌症病人在化疗中存活下来，而且也使得化疗更加有效。”化疗杀死血细胞，也能够杀死癌细胞，因此经常伴随着致命的结果。如今，某大学干细胞研究人员鉴定出一种方法，他们希望这种方法有朝一日将有助于接受化疗治疗的癌症病人维持一种健康的血液供应。

细胞突变可引起失明、失聪以至癌症等不同的致命病征或身体残缺，过往科学家已发现，细胞突变往往源于细胞内出现错误的运动方式，但对于具体情况却所知不多，更遑论如何作治疗。 香港科技大学生物化学系讲座教授张明杰与其研究团队，对人体细胞内用以运输蛋白质的一种重要的“机动蛋白6(Myosin VI)”进行了长达8年的研究，终于成功找到其运动模式，成为细胞生化学的重大突破。研究团队指，掌握“机动蛋白6”运动模式是纠正变异细胞的关键，未来更有机会发现所有相关疾病的根治方法。细胞内的蛋白质包含细胞所需要的营养、生长因子、信号肽、离子等，是确保细胞健康、人体正常运作的重要物质。某专家介绍称，细胞内有多种负责运输蛋白质的“机动蛋白”，但是绝大部分的“机动蛋白”都是往同一方向运行，只有“机动蛋白6”是往相反方向走，“蛋白质可以循环再用，因此需要有运输器将它们来回的双向运送，所以在‘机动蛋白’中，‘机动蛋白6’是特别重要的。”

抗原的摄取  任何血清学试验都依赖于具有高效价、特异性强的抗血清的产生，而抗血清的制备离不开抗原的收集、保存和提取。采回的害虫饥饿24h后，将等体积的磷酸缓冲液（PBS）滴入备用的害虫中，研磨后加入过量的PBS（PH=7.4）,在4℃下搅拌24h,然后以4000-5000r/min的速度离心20h,分离上清液。沉渣用上法重复抽提一次。将两次所得的上清液混合后，置于4℃下更换多次冷盐水透析24h或48h。透析液用冰冻干燥法或反透析法进行浓缩。浓缩液用紫外分光光度计测定蛋白质含量，得到适当浓度的蛋白质溶液即位抗原。光度酶联免疫分析常被称为ELISA试剂盒法，即酶联免疫吸附分析。它最早由Engvall和Perlmann与Van Weeman和Schuurs同时建立，并用于医学研究。它利用酶标记物同抗原抗体复合物的免疫反应与酶的催化放大作用相结合，既保持了酶催化反应的敏感性，又保持了抗原抗体反应的特异性，因而极大地提高了灵敏度。同时它又是一种非均相分析，即在反应中的每一步都有洗涤过程，从而除去了未反应物质和干扰物质。

此项研究工作是由德国弗莱堡大学SabineRospert课题小组与西班牙巴塞罗那基因组研究中心生物学家LucianoDiCroce博士领导的研究小组共同协作完成。在新研究中研究人员针对ZRF1独特的结构特征及其作用机制进行了研究。DiCroche将研究焦点集中到影响染色质结构的蛋白质复合物上，并生成了相关的转录物。进而科学家们在一系列的实验中证实ZRF1通过对染色质中的一种组蛋白进行可逆性修饰，从而确保在有限的时间内生成特异的转录物。此外研究人员还证实分子伴侣ZRF1在转录及翻译过程中在不同的位置及时间点发挥着双重功能。过去年轻的未婚女子出入社交场所通常会有年长的女伴（chaperone）陪同，以监督并防止女孩们与年轻男孩随意的约会。生物学家将“chaperone”一词延伸到细胞生物学中，从而用“分子伴侣”来专门指代阻止蛋白质发生错误接触的一类蛋白。尤其是在蛋白质的合成过程中，蛋白质间一旦发生错误的接触则可导致非常严重的后果。过去的研究证实在核糖体的子单位后面有一条重要的隧道（tunnel），这条隧道是核糖体工厂“装配线”的主要出口，在更多的氨基酸被加上去后，它将多肽链不断地送出。

研究负责人、费城儿童医院移植免疫学部Wayne W. Hancock 博士说：“这项临床前研究从原理上证实了，利用一种药物调控一类特殊的免疫抑制调节性T（Treg）细胞亚群，能够安全地控制肿瘤生长。它确实推动该领域通向了一种潜在的重要的免疫新疗法。” Hancock说：“在免疫学中有一个基础矛盾：为什么免疫系统不会阻止癌症？答案非常复杂，很多涉及了免疫系统元件间的微妙平衡：尽管免疫保护我们对抗疾病，但过度积极的免疫反应有可能触发危险的、甚至是威胁生命的自身免疫反应攻击机体自身。” 在当前的研究中，Hancock将焦点放在了称之为Foxp3+ Tregs细胞的免疫细胞亚型上。已知Foxp3+ Tregs细胞能够限制自身免疫，但也往往抑制了抗肿瘤免疫反应。“我们需要找到一种方法来减小Treg功能，使得既能够实现抗肿瘤活性，又不会导致自身免疫反应。” Hancock研究小组证实，抑制p300酶可以影响另一种蛋白Foxp3的功能，Foxp3在控制Tregs细胞生物学中发挥关键作用。通过敲除表达p300的基因，研究人员安全地减小了小鼠体内Treg细胞的功能，限制了肿瘤生长。值得注意的是，他们通过采用一种在正常小鼠中抑制p300的药物，在获得了对p300和Tregs细胞相同的效应。 Hancock将进一步探讨靶向p300的免疫治疗。Hancock说，这些临床前研究结果为转化进入临床提供了令人兴奋的可能性。制药公司已表示有兴趣调查这一方法是否可作为一种可能的癌症治疗。 这项旨在下调Treg细胞功能的抗肿瘤研究，站在了Hancock的另一部分Treg细胞研究工作的相对面 。在2007年发表在《Nature Medicine》杂志上的一项动物研究中，他通过提高Treg细胞功能来抑制免疫反应，使得机体更好的耐受了器官移植。在当前的研究中，他通过减小Treg细胞活性，使得免疫系统能够攻击不速之客——肿瘤。在两项研究中，他以相反的方向利用了一个表观遗传过程：用乙酰基来修饰关键酶。“这是免疫功能的阴阳两个面，”他说。

当前， HER2阳性类型乳腺癌用抑制HER2蛋白功能的药物进行治疗。要被归类为HER2阳性，患者必须有比正常更多的HER2基因副本。HER2驱动肿瘤生长，一些HER2阳性患者的基因副本可能有多达20份。这项最新研究结果发表在12月7日的Cancer Discovery杂志上，研究人员对8 例DNA测序研究包括约1500名患者的数据进行了分析。1500例患者中，25例有HER2基因突变，而基因未扩增。分析13个基因突变后，七个被发现能推动癌症的增长。在实验室分析中，这些突变对抗HER2药物拉帕替尼和曲妥珠单抗的反应良好。虽然两个突变耐拉帕替尼，但它们对来那替尼（Neratinib）的反应良好，来那替尼是一个较新的抗HER2药物，目前正处于Ⅱ期临床试验。Bose还警告说，一些突变被认为是“沉默”的，这意味着他们并没有驱动肿瘤的生长，因此可能会不响应抗HER2药物。这项研究的结果直接导致了开展第二阶段的临床试验，以测试HER2基因突变患者是否将受益于抗HER2药物的。该试验将包括Ⅳ期HER2阴性的乳腺癌患者。他们的HER2基因被测序以寻找基因突变。如果突变存在，它们将除了标准治疗外，还应给与来那替尼

近期研究发现“角膜内皮细胞与ROCK抑制物一起移植有望恢复视力”。再生医学，或者说利用专门培养的组织和细胞来治疗损伤和疾病，在治疗包括心脏、胰腺和软骨在内的多种器官疾病方面取得成功。然而，利用再生技术来治疗角膜内皮---角膜内表面的单细胞层---疾病的疗效性并不是太好。，“角膜内皮功能障碍是严重性视力受损的主要原因，这是因为角膜内皮细胞起着维持角膜透明的作用。当将体外培养的CECs注入到角膜组织后，注入的CECs因房水流动而被冲洗走，导致它们的附着性较差。以前的研究证实Rho相关激酶信号干扰这种附着。我们发现将体外培养的CECs与抑制ROCK的低分子量化合物(ROCK抑制物Y-27632)一起进行移植，能够成功地让角膜恢复透明。”研究人员以兔细胞作为研究对象，在实验室培养兔角膜内皮细胞(CECs)，并将它们注射到角膜内皮受损的兔眼的前房。基于角膜内皮功能的恢复情况，他们发现当把体外培养的兔CECs与Y-27632一起进行注射时，兔角膜在注射后48小时再次获得完全的透明度。相比之下，如果只注射兔CECs而不注射Y-27632，则导致角膜模糊不清和严重性肿胀。研究人员没有观察到与细胞注射疗法相关的并发症。当CECs与Y-27632一起注射而重建的角膜内皮表现出正常的六边形细胞形状。鉴于兔CECs在体内高度增殖，研究人员利用猴角膜内皮细胞(CECs)开展另一轮实验，而且猴CECs更加类似于人CECs。在这些灵长类动物中进行CECs移植也能够成功地让角膜长期保持透明，同时产生单层六边形细胞，这就提示着利用ROCK抑制剂改变细胞附着性能可能是一种有效地治疗人角膜内皮疾病的方法。尽管人们已经开发出外科技术来替换受损的角膜内皮，但是这些操作程序在技术上比较困难，而且因捐献的角膜比较短缺而面临挑战。上海纪宁生物科研有限公司

当这样的交流变得日益重要的时候，对新实验的大胆尝试也变得重要起来——而这些实验与物理学家们以往的经验可能截然不同。在一项旨在制造弹性血管的生物工程项目中，Enejder和同事们想要监测植入纤维素基质的肌肉细胞的生长。与CARS一起，Enedjer和同事们利用SHG观察了植入的细胞。他们很高兴地发现，自己可以监测到被植入细胞是如何与纤维素网进行接触，开始生成胶原蛋白纤维的。在组织工程研究中，这种方法可以大大帮助确定最优参数。尽管纸张中的植物纤维素SHG成像看不到，但是细菌分泌的植物纤维素确实拥有一种有规律的模式，能够产生SHG信号，Enejder解释说，“仅仅依赖别人文章里说的哪些可以观测是不行的，你得自己去试才没人能够否定荧光探针和分子染色在细胞内行为探测上的实力，但是这种标记办法仍然有诸多问题。如何标记是一个问题，尤其是对整个有机体而言。有些标记只能在已死亡的细胞内有作用；其他的标记标记方法则会损伤细胞，或者干扰所研究的生物过程。非标记的显微技术提供了一种能够大幅度降低人为干扰的活体观察技术。虽然有些技术仍然依赖内源性荧光基团，不过它们基本上可以摒弃荧光技术，也就避免遇到光漂白这个常见问题。这些新技术探测的是光在通过生物样品时被吸收或者改变时发生的微小变化，而不是探测被激发荧光基团的光子。这种办法依赖在高光功率密度下观察到的非线性光学过程。一言以蔽之，激光脉冲可以被用来“看”化学组成：脂质里面的C-H键，蛋白质里的酰胺键，还原态或者氧化态的生物分行。”

    跟着自己技术水平得进步，或多或少地也把握了ELISA体系的脾气，也是熟能生巧吧，现在做方阵，以前检测一种抗体用整整一下战书还算得晕晕的，现在给我十个八个的从包被到显色，一个工作日基本搞定。    ELISA试剂盒可是在新老手操纵过程中老是会泛起或大或小的题目，本人在刚开始做ELISA时就面对良多灾题，固然有师兄师姐铺路，但仍是经常做得乌烟瘴气，好比说花板，假阳性，全显色，全部显色，显色比空缺还低。常用封锁剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用（5%－10％）；还有一些稀有用到的各种动物血清（主要为了排除相似蛋白干扰）和酪蛋白等等。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。但终极选用什么，要依据试验详细来实践。    应留意以下原理：因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，ELISA试剂盒这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。     小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

酶联免疫吸附试验（ELISA）自问世以来，以其敏感性高，特异性强，操作简便、安全，开创了免疫学诊断的新纪元在临床诊断方面得到了广泛的应用。但是ELISA试剂在它的研究、生产及使用中常常会碰到非特异性显色问题，ELISA试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物，操作不当等因素都会导致这样的结果。本文就在实验过程中产生的一些原因及如何采取一些措施，消除非特异性显色作以分析。1、试剂盒特异性因素1.1 固相载体的选择        ELISA中常用的固相载体有微量滴定板、小珠和小试管三种，以微量滴定板最为常见。它具有良好的吸附性能，孔底透明度高，空白值低，各板之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各产品的质量差异很大。因此，在选择ELISA试剂盒同时要对其使用的微孔板型号进行认证，评估。1.2包被物的纯度        在酶联免疫测定尤其是间接ELISA中，试剂的特异性取决于使用抗原的纯度。目前由于技术条件的限制，包被用抗原或抗体的纯度不可能达到100%，所以有些非特异性显色不可避免，只能尽可能提高纯度，提高特异性。目前使用的包被抗原一般为合成多肽抗原。1.3包被抗体的效价具有高亲和力和高特异性的包被抗体，是决定试剂特异性的重要方面。1.4 封闭        是ELISA中重要的一步，目的是封闭固相载体表面尚未被所占据的空隙，减少后续步骤中非特异性蛋白的干扰。2、检验标本中含有酶标记物的干扰物2.1内源性干扰物        风湿因子（RF）、黄疸等，类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体，多数为IgM类，能充当抗原成分与固相及酶标抗体反应，从而呈现非特异性显色。黄疸血标本中常含有内源性过氧化物酶，如用辣根过氧化物酶为标记物，就有可能产生非特异性显色。2.2 外源性干扰物         常因样品采集、贮存、处理不当造成如样品溶血，被细菌污染，标本凝集不全等。溶血标本，红细胞溶解破裂，释放出血红素形成，而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP（辣根过氧化酶），有国内报道酶免HBsAg试剂检测溶血标本时可造成假阳性。如在冰箱中保存过久，其中的IgG可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。因此，血标本在采集处理时应小心，在冰箱中保存不易过久。标本凝集不全时，血清中会残留部分纤维蛋白原，也易造成假阳性。3、操作过程中的问题造成假阳性3.1加样        对于间接ELISA标本一般都要进行稀释，如果加样不准就会造成误差，尤其当稀释倍数大时，很小的绝对误差，会导致较大的相对误差，使阴性（或弱阳性）标本呈阳性（或阴性）。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。目前，大部分血站都已使用全自动酶免加样系统处理标本，可较好地避免以上误差。3.2洗涤        在ELISA中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步，应引起操作者重视。无论是手工操作还是机器操作，得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关，ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。3.3 温育         每种试剂都有其最佳反应模式，其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高，反应时间长，会造成整板本底高，阳性率高。温育一般用湿盒或水浴，反应板不宜叠放，以保证各板温度都能迅速平衡，为避免蒸发，板上应加盖。3.4酶标仪判读        作为记录测定结果的仪器，酶标仪的性能稳定与否，决定结果的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正；其次酶标仪波长设置要正确，最好使用双波长，一个检测波长，一个参比波长，以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰。此外，在用酶标仪读数时最好先擦试微孔板底部并压平板条。由于各种酶标仪性能有所不同，使用中应详细阅读说明书         综上所述，尽管目前国际上以及我国有了部分标准血清或参比血清（血清盘），但是酶联免疫吸附技术目前在技术上尚未做到标准化。受方法学及技术条件的限制，在酶联免疫吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性，我们可以通过以上措施把非特异性显色降至最低限底，从而提高检测的特异性，并得到更准确、可靠的实验结果。

    试剂盒的包被用抗原用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。    换言之，包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用于。这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联结多发生在Fc段上，抗体结合点暴露于外，因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。蛋白质抗原大多也可采用与抗体相似的方法包被。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充分暴露，在这种情况下，直接包被效果不佳，可以采用间接的捕获包被法，即先将针对该抗原的特异抗体作预包被，其后通过抗原抗体反应使抗原固相化。此间接结合在固相上的抗原远离载体表面，其抗原决定簇也得以充分暴露。    间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大提高，因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法，试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。间接包被的另一优点是抗原用量少，仅为直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可采用特殊的包被方式。例如，在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。可将聚苯乙烯板先经紫外线照射（例如30W紫外灯，75cm照射12小时），以增加其吸附性能。固相载体先用碱性蛋白质，如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被，也可提高核酸的结合力。也可用亲和素生物素系统作间接包被，即用亲和素先包被载体，然后加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。    脂类物质无法与固相载体结合，可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。抗心磷脂抗体的ELISA试剂一般采用这种包被方式。

前几日有位老师询问ELISA试剂盒美国R&D和德国IBL哪家更好。我公司业务经理热情解答，R&D是老牌儿的ELISA试剂盒生产厂家,质量稳定可靠. IBL公司也不错,有客户用过,性能也比较稳定.但是相比较R&D的试剂盒客户回应最多效应也最好。 R&D公司的ELISA试剂盒产品分原装进口和进口分装两种选择，如果经费拮据,直接选择R&D分装最好. 不仅价格划算还节省时间和精力。如果您有任何产品疑问或需求都可以来电询问或网站留言。我公司的产品覆盖面广，种类丰富，质量稳定可靠，经营各种进口ELISA试剂盒、血清及抗体以其卓越的品质赢得了世界各国科研及临床诊断机构的青睐。E-(Hu)（01）-05150 人组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒 ，英文名： Cathepsin K，cath-K ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05151 人骨形成蛋白(BMPs)ELISA试剂盒 ，英文名： bone morphogenetic proteins，BMPs ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05152 人血凝素(HA)ELISA试剂盒 ，英文名： hemagglutinin，HA ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05153 人脂肪分化相关蛋白(ADRP)ELISA试剂盒 ，英文名： adipose differentiation-related protein，ADRP ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05154 人钙调结合蛋白(CALD)ELISA试剂盒 ，英文名： Caldesmon，CALD ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05155 人钙调磷酸酶(CaN)ELISA试剂盒 ，英文名： calcineurin，CaN ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05156 人低密度脂蛋白(LDL)ELISA试剂盒 ，英文名： low density lipoprotein，LDL ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05157 人骨碱性磷酸酶(BALP)ELISA试剂盒 ，英文名： bone alkaline phosphatase，BALP ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05158 人环磷酰铵(CTX)ELISA试剂盒 ，英文名： Cyclophosphamide，CTX ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05159 人β羟丁酸(β-OHB)ELISA试剂盒 ，英文名： Beta-Hydroxybutyric Acid，β-OHB ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05160 人高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)ELISA试剂盒 ，英文名： High density lipoprotein cholesterol，HDL-C ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05161 人高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒 ，英文名： High density lipoprotein，HDL ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05162 人α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)ELISA试剂盒 ，英文名： α-glutathione S-transferases，α-GST ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05163 人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒 ，英文名： Homocysteic acid，Hcy ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05164 人游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒 ，英文名： free fatty acids，FFA ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05165 人骨粘连蛋白(ON)ELISA试剂盒 ，英文名： osteonectin，ON ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05166 人叶酸(FA)ELISA试剂盒 ，英文名： Folic acid，FA ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05167 人内毒素(ET)ELISA试剂盒 ，英文名： endotoxin，ET ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05168 人环孢素A(CsA)ELISA试剂盒 ，英文名： Cyclosporine A，CsA ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05169 人白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒 ，英文名： Leukotriene C4，LT-C4 ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05170 人细胞色素C(Cyt-C)ELISA试剂盒 ，英文名： Cytochrome-C，Cyt-C ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05171 人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒 ，英文名： lipoprotein lipase，LPL ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05172 人脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒 ，英文名： lipoprotein α，Lp-α ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05173 人骨胶原交联(Cr)ELISA试剂盒 ，英文名： Crosslaps，Cr ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05174 人Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试剂盒 ，英文名： cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen，CⅠCP ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05175 人脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒 ，英文名： deoxypyridinoline，DPD ELISA Kit ，ELISA试剂盒规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05176 人环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒 ，英文名： Cyclic guanosine monophosphate，cGMP ELISA Kit ，规格： 96T/48TE-(Hu)（01）-05177 人白三烯B4(LTB4) ELISA试剂盒 ，英文名： Leukotriene B4，LT-B4 ELISA Kit ，规格： 96T/48T

1.ELISA试剂盒包被抗原的选择包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类.天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被,对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上,再通过特异性反应使抗原固相化).ELISA试剂盒经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板.小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板上,一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上.2.包被液的选择一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话,也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液.3.包被温度的选择通常是4-8度条件下过夜或者37度保温2小时,我们强烈建议4-8度条件下包被,有利于蛋白活性的保持.4.ELISA试剂盒包被浓度的选择包被的最适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,要明确针对特定包被抗原的最适包被浓度需要通过实验来确定.

    在我公司崛起并发展的这些年中，抱以“客户至上"的态度，将产品做到质量保证百分百，再加上至善至美的服务，得到客户的认可。在2015年3月的销售统计中，我司品牌ELISA试剂盒成为ELISA客户们的新一代热门追捧！第一、积极的售后服务    试剂产品的售后服务是一个品牌的诚信保证，是建立品牌美誉度的标杆工程。公司售后服务究竟做的好不好，反映该公司是不是有以客为先的理念，是不是实力来建立清楚的费用核算和组织体系及资源体系。     我公司快速反应的售后服务机制也是客户们赞扬的一大优点，我公司有专业的技术人员可以为客户们解决售前、售中、售后的ELISA技术问题。近期问题解决示例：    问题1：新手做ELISA，板子平底圆底和V型底怎么选择？还有结合力选择高还是中的怎么去确定？    解析：市面上可以见到的有F、C、U、V四种底部，由于大多数ELISA是从底部观测，F和C底的观测面积较大，比较常用。高吸附酶标板，蛋白吸附量较大（抗体用量也最省），但是非特异性吸附也会相应提高，检测背景较高；中吸附，蛋白吸附量较小，但是非特异性吸附也小，检测背景较低；低吸附，主要适用于时间分辨荧光检测这类对背景有较高要求的；氨基或其他特殊表面，适用于食品安全小分子间接竞争法。    问题2：看了一些帖子，说是通过抗原浓度，抗体的稀释倍数，设立梯度来确定效果，可是我想问测的的结果怎么看哪个效果好呢？看了一篇文献他是说OD450值为1左右条件作为最佳条件，很是不解啊，我是做双抗夹心法的。    解析：这个确实有好几种因素来确定，双抗夹心的话，有包被抗体的浓度、缓冲液的选择、孵育时间等好几种因素，您要测试最佳的效果，就要控制变量的方法来确定。    一般来说，如果你是夹心法的话主要要用棋盘法确定一抗和抗原的浓度，二抗一般不需要怎么摸条件，你选一到两个说明书上推荐的浓度即可。棋盘法中选OD值在1左右的一抗浓度，（此时，应该有多个1对应的浓度）你要选一个在这个浓度下，测抗原的线性拉得最宽的那一个。如果一抗浓度太高，想要测的抗原基本都可被吸附，这样就达不到灵敏检测的目的；如果一抗浓度太低，OD值比1小太多又会增大误差。另外，抗体稀释液一般就是在洗涤液中加入一定浓度的不相关蛋白。这样可以减小非特异吸附（吐温和蛋白均有此作用），你直接用PBS的话可能会造成阴性OD过高第二、至始至终，诚信面对您    我公司成为热门追捧的公司除了优质的ELISA试剂盒产品与完善的服务，还有诚笃的品德与态度！树立诚信经营的理念，还记得公司刚成立时，上海恒远王总说：“我们从诚信开始，把好质量关，站稳脚跟，迎接产品发展的新常态。"  

购买我公司ELISA试剂盒，我们不仅可以为客户提供免费代检测服务，还能够为您提供技术指导，在使用的过程中有任何相关实验问题都可以来电咨询我们，我们会第一时间为您安排解决。已经是2015年3月了，3月1日下午来自北京的霍老师订购我司小鼠-MPOELISA试剂盒，其中有一些相关实验问题，我公司陈经理第一时间为霍老师安排技术人员解决问题。8月1日，霍老师通过QQ的方式联系了陈经理，经过详细的介绍之后，霍老师决定购买了我司的小鼠-MPOELISA试剂盒。今日上午，霍老师打来电话来说，小鼠-MPOELISA试剂盒实验问题已决定，感谢霍老师对我公司的信任！ 

    自今日开始之后，又进入了忙碌科研季，我们的老朋友中国药科大学实验室又将展开ELISA试剂盒实验，李同学是近期实验的学习者之一，通过搜索资料时来到了我公司网站。经过一番浏览，联系到我司业务员咨询产品“大鼠胰岛素受体ELISA检测试剂盒”。    洽谈之后李同学才知道，原来中国药科大学已经于我公司合作多年，又经过细致的咨询与了解之后决定订购我司试剂盒。产品使用过程中，由我公司技术专员跟踪指导，公司携手中国药科大学完成ELISA实验！该负债老师也赞道效果很好，继而之后李同学还推荐了师姐师弟到我们公司订购。在此，非常感谢大家对我司ELISA试剂盒的支持与认可！我们也将会以客户为中心不断的改善，您有任何问题都可以提出来。

用 途：人NSE ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的NSE 。本试剂盒可以检测天然和重组的NSE 。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。试验原理：人NSE 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NSE 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将NSE 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中NSE 的浓度呈比例关系。操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。操作步骤1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育15分钟。避免光照。8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

国产ELISA试剂盒的基本原理就是将抗原抗体固定到特定的载体上进行反应，并通过酶催化底物发生化学变化将抗原抗体反应通过颜色的形式显现出来。主要步骤分为如下5个部分：（1）将抗原抗体反应固相化：即试验中的包被环节，使抗原或抗体吸附于固相载体表面。其机制可能是聚苯乙烯表面间的疏水基团可以无选择性地吸附蛋白分子。国产ELISA试剂盒此物理性吸附不破坏蛋白分子结构，国产ELISA试剂盒保持其生物学特性和免疫学活性； （2）封闭：固相吸附蛋白是非特异性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力，为了保障抗原抗体反应的特异性，因此，国产ELISA试剂盒包被剩余的固相表面应该用抗原抗体反应无关蛋白封闭。一般认为牛血清白蛋白是最为理想的封闭剂，也可用脱脂奶粉、明胶、牛血清替代。（3）抗原抗体反应：抗原或抗体在适当的介质下可进行特异的抗原抗体反应。（4）酶反应：酶可以通过共价键与抗原或抗体连接形成结合物，当抗原抗体反应的时候，被检测靶目标中也结合了酶分子。（5）底物反应：结合在抗原抗体中的酶分子，可以促使底物发生颜色反应，国产ELISA试剂盒检测人员可以通过颜色来判定是否有免疫反应的存在，并可通过颜色的深浅判断标本中相应抗原或抗体的含量（颜色反应与抗原抗体的含量成正比），可以裸眼观察，也可借用酶标仪在适当的波长读取吸光度值。

   在ELISA试剂盒的使用过程中常见的问题有很多，例如加样器不精确，尤其是10ul以下的加样器，对结果影响极大; 保温设备不良; 洗涤用水不规范。那么如何解决这些问题呢?下面我们一起来了解下!　　1、在使用过程校正加样器，10ul以下加样器最好采用进口产品(芬兰、法国等);　　2、仔细校正温度到37℃，水浴箱为佳;　　3、必须使用去离子水或蒸馏水，不得用自来水、矿泉水等。　　4、认真阅读。　　样品加样　　1、加样时一定要仔细。加样后，再检查，以防漏加、错加。　　2、加样后，反复抽吸3次混匀，防止血清聚集孔底，导致非特异性吸附。　　洗涤不彻底　　1、每次注水洗涤，应静止30秒钟;　　2、选用吸水纸作为衬垫，每次洗涤后扣干孔内水分;　　3、选用塑料洗涤瓶。ELISA试剂盒加酶反应漏加滴加后，认真检查各孔。　　结果判断　　1、包括阴性对照孔在内，各孔显色普遍偏深;　　2、包括阳性对照在内，各孔均无显色;　　3、阳性对照不显色，而其它样本显色正常;　　4、有些标本显色不深，判断阳性困难。　　此外，ELISA试剂盒一定要在2-8℃存放。不得过高，也不得冻存(冻存后，酶液将失效)。对照品对照品为冻干品，按对照管标示，加入相应体积的去离子水或蒸馏水复溶，充分溶解混匀。　　有关ELISA试剂盒使用过程中需要注意的相关事项就是这些，希望对大家有所帮助。

    ELISA试剂盒的结果判定分为定性和定量两种 ，在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。那么两类结果如何判断呢？南京森贝伽生物技术为您解析： （1）间接法和夹心法这类反应的定性结果可以用肉眼判断。目视标本也无色或近于无色者判为阴性，显色清晰者为阳性。但在ELSIA中，正常人血清反应后常可出现呈色的本底，此本底的深浅因试剂的组成和实验的条件不同而异，因此实验中必须加测阴性对照。阴性对照的组成应为不含受检物的正常血清或类似物。在用肉眼判断结果时，更宜用显色深于阴性对照作为标本阳性的指标。目视法简捷明了，但颇具主观性。在条件许可下，应该用比色计测定吸光值，这样可以得到客观的数据。先读出标本（sample，S）、阳性对照（P）、和阴性对照（N）的吸光值，然后进行计算。计算方法有多种，大致可分为阳性判定值法和标本与阴性对照比值法两类。a．阳性判定值 阳性判定值（cut-off value）一般为阴性对照A值加上一个特定的常数，以此作为判断结果阳性或阴性的标准。用此法判断结果要求实验条件十分恒定，试剂的制备必须标准化，阳性和阴性的对照品应符合一定的规格，须配用精密的仪器，并严格按规定操作。阳性判定值公式中的常数是在这特定的系统中通过对大量标本的实验检测而得到的。现举某种检测HBsAg的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，阳性对照品HBsAg的含量标明为P=9±2ng/ml。每次试验设2个阳性对照和3个阴性对照。测得A值后，先计算阴性对照A值的平均数（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（P-N）必须大于一个特定的数值（例0.400），试验才有效。3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而已另两个阴性对照重新计算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上范围，则该次实验无效。阳性判定值按下式计算：阳性判定值=NCX+0.05，标本A值＞阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。应注意的是，式中0.05为该试剂盒的常数，只适合于该特定条件下，而不是对各种试剂均可通用。根据以上叙述可以看出，在这种方法中阴性对照和阳性对照也起到试验的质控作用，试剂变质和操作不当均会产生"试验无效"的后果。b.标本/阴性对照比值 在实验条件（包括试剂）较难保证恒定的情况下，ELISA试剂盒这种判断法较为合适。在得出标本（S）和阴性对照（N）的A值后，计算S/N值。也有写作P/N的，这里的P不代表阳性（positive），而是病人（patient）的缩写，不应误解。为避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的间接法ELISA中，有些作者定出S/N为阳性标准，现多为各种测定所沿用。实际上每一测定系统应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应注意的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，以致反应后产生的本底可能较正常人血清的本底低得多。因此，这类试剂盒规，如N（2）竞争法在竞争法ELISA中，阴性孔呈色深于阳性孔。阴性呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争抑制物的量，一般调节阴性对照的吸光度在1.0-1.5之间，此时反应最为敏感。竞争法ELISA不易用自视判断结果，因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异，一般均用比色计测定，读出S、P和N的吸光值。计算方法主要也有两种，即阳性判定值法和抑制率法。ELISA试剂盒a. 阳性判定值法与间接法和夹心法中的阳性判定值法基本相同，ELISA试剂盒但在计算公式中引入阳性对照A值，现举某种检测抗HBc的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照为不含抗HBc的复钙人血浆，阳性对照中抗HBc含量为125±100u/ml。每次试验设2个阳性对照和3个阴性对照。测得A值后，先计算阴性对照A值的平均值（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（N-P）必须大于一个特定的数值（例如0.300）,试验才有效。3个阴性对照A值均应小于2.000，而且应≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而以另2个阴性对照重新计算×NCX；如有2个阴性对照A超出以上范围，则该次实验无效。阳性判定值按下式计算：阴性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX，标本A值≤阳性判定值的反应为阳性，A＞阳性判定值的反应为阴性。 b. 抑制率法 抑制率表示标本在竞争结合中标本对阴性反应显色的抑制程度，按下式计算：抑制率（%）= （阴性对照A值-标本A值）×100%/阴性对照A值，一般规定抑制率≥50%为阳性，＜50%为阴性。