抗原的摄取 任何血清学试验都依赖于具有高效价、特异性强的抗血清的产生,而抗血清的制备离不开抗原的收集、保存和提取。采回的害虫饥饿24h后,将等体积的磷酸缓冲液(PBS)滴入备用的害虫中,研磨后加入过量的PBS(PH=7.4),在4℃下搅拌24h,然后以4000-5000r/min的速度离心20h,分离上清液。沉渣用上法重复抽提一次。
将两次所得的上清液混合后,置于4℃下更换多次冷盐水透析24h或48h。透析液用冰冻干燥法或反透析法进行浓缩。浓缩液用紫外分光光度计测定蛋白质含量,得到适当浓度的蛋白质溶液即位抗原。
光度酶联免疫分析常被称为ELISA试剂盒法,即酶联免疫吸附分析。它最早由Engvall和Perlmann与Van Weeman和Schuurs同时建立,并用于医学研究。它利用酶标记物同抗原抗体复合物的免疫反应与酶的催化放大作用相结合,既保持了酶催化反应的敏感性,又保持了抗原抗体反应的特异性,因而极大地提高了灵敏度。同时它又是一种非均相分析,即在反应中的每一步都有洗涤过程,从而除去了未反应物质和干扰物质。
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