做ELISA试剂盒已是轻车熟路

纪宁生物

2015/04/07 09:26

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跟着自己技术水平得进步，或多或少地也把握了ELISA体系的脾气，也是熟能生巧吧，现在做方阵，以前检测一种抗体用整整一下战书还算得晕晕的，现在给我十个八个的从包被到显色，一个工作日基本搞定。
ELISA试剂盒可是在新老手操纵过程中老是会泛起或大或小的题目，本人在刚开始做ELISA时就面对良多灾题，固然有师兄师姐铺路，但仍是经常做得乌烟瘴气，好比说花板，假阳性，全显色，全部显色，显色比空缺还低。

常用封锁剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用（5%－10％）；还有一些稀有用到的各种动物血清（主要为了排除相似蛋白干扰）和酪蛋白等等。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。但终极选用什么，要依据试验详细来实践。

应留意以下原理：因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，ELISA试剂盒这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。

小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。