小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒

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【中文名称】：小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒

【英文名称】：Mousegrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit

【产品货号】:CL-D3269

【产品规格】:96T/48T

【保存条件】：2-8℃低温保存

【保质期】：6个月，提供试剂盒最新批次

小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒ELISA检测中常用的酶底物

②终止液：2 mol/L硫酸(含0.1 mol/L亚硫酸钠)；③测定波长：492nm。

TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。其氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数，如果HRP量少，过氧化氢溶液和TMB过量时，则形成蓝色的阳离子根。降低pH，即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌(图4—3)。小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min，但随后本底显色就不断加深，国内有人认为使用1％SDS作为终止剂，可使鲜蓝色24h内保持不变，阴阳性对比十分明显，但在我们实验室发现1％SDS对上述显色有较强的褪色作用，目前仍以硫酸作为终止剂较为理想。ELISA中，底物反应显色后，常选择其具最大吸收的波长450nm比色测定结果。而’Madersbacher和Berger等为提高以TMB作底物的ELISA测定的敏感性，选择显色呈指数加深时的波长405nm比色测定。他们首先测定一系列已知浓度的标准品在450nm和405nm的值，证实A450nm/A405nm之比为3.2，然后在使用波长405nm测定含低浓度待测物的标本得到的OD值再乘以常数3.2，即为待测标本在波长450nm处的真值。该种双波长测定方法可使ELISA测定范围提高3倍。TMB的显色反应虽与OPD一样同属氧化还原反应，但前者的反应是可逆的，如终止液中存在还原剂(维生素C及亚硫酸钠、SDS等)，则可反应显色迅速消退。TMB虽然溶解度相对较低，但由于其高检测敏感性及无致突变作用，现已基本上取代了OPD而成为HRP最为常的色原底物。

在商品ELISA试剂盒尤其是国内的产品中，TMB色原底物常为已配好的A及B两种液态试剂，其中一种是含一定浓度过氧化氢的溶液，一种为TMB溶液，鉴于过氧化氢、TMB在溶液中相对不稳定的特点，因此，我们在使用ELISA试剂盒时，如发现底物A和(或)B出现颜色，或二者各取一滴混合后显色，说明该试剂盒的底物溶液已变质或已受污染，必须废弃。

在ELISA测定时，TMB色原底物的具体配方为①显色底物溶液：先将TMB以0.1 mol/L的浓度溶于二甲亚砜，然后，再将其以1 mmol/L和H202以3.0 mmol/L的浓度溶于0.2mol/L醋酸钠/枸橼酸缓冲液(pH4.0)，即可应用。②终止液：2 mol/L硫酸。③测定波长：450nm。

ABTS也是HRP的一种高灵敏底物。在H：O：存在下，ABTS的氨盐转变为易发生歧化的阳离子根(图4—4)。阳离子根为绿色，与OPD的黄色氧化产物相比更适于可见光测定(测定波长入＝414nm)。上述显色也不稳定，10 mmol/L叠氮钠是较为理想的终止剂，可使显色稳定数十小时，且可减少阳离子根的歧化。另有人报道用1.25％NaF终止反应效果较好。

ABTS在目前国内的ELISA试剂盒中基本上没有应用，但在国外ELISA试剂盒偶见有应用。

在ELISA测定时，ABTS色原底物的具体配方为①显色底物溶液：先将ABTS以2 mmol/L和H202以2.5 mmo!/L的浓度溶于0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH 4.2)，即可应用；②终止液：10 mmol/L叠氮钠；③测定波长；414nm或405nm。

除上述三种外，HRP的氧化还原底物尚有O-dianisidine(ODA)，5—氨基水杨酸(5—AS)以及dicarboxindine等。

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小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒

酶联免疫吸附试验（又称酵素免疫分析法，Enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。

间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：

将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原

加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结

洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结

洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。