小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒

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【中文名称】：小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒

【英文名称】：MouseN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit

【产品货号】:CL-D3270

【产品规格】:96T/48T

【保存条件】：2-8℃低温保存

【保质期】：6个月，提供试剂盒最新批次

ELISA小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒检测中常用的酶底物

一、辣根过氧化物酶HRP

HRP最常用的色原底物有邻苯二胺(OPD)、2，2’—吖嗪—(3—乙酰苯基噻唑磺酸—6)[2，2’—azino-di(3—ethylben2thiazolinesulphonicacid-6)，ABTS](杂环吖嗪)、四甲基联苯胺(TMB)和4—氨基安替比林：苯酚耦联底物对等。上述色原底物受HRP作用主要有两种形式的反应：①氧化还原底物的氧化作用，如OPD、ABTS等；②一个氨基芳香剂与另一个芳香基化合物的氧化耦联，如4—氨基安替比林：苯酚等。

1、氧化还原色原底物

OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一，其在HRP的作用下，由过氧化氢(H202)氧化而聚合成2，2’—二氨基偶氮苯(DAB)。在pH5.0左右时，DAB在波长450nm处有广范围的最大吸收，当pH值降为1.0时，最大吸收波长移动至492nm，同时摩尔消光系数变大，显色加深(图4—2)。因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。实际工作中，用强酸尤其是盐酸终止反应后，显色并不稳定，常随时间增长而颜色加深，这是由于反应后剩余的过氧化氢继续氧化OPD而产生非酶催化的DAB的结果。有人在强酸反应终止液中加入还原剂如亚硫酸钠，因还原剂可迅速完全地将剩余的过氧化氢还原而阻止了OPD的非酶氧化，结果显色稳定，数十小时内不变，而且无需避光。OPD的缺点是其对机体具有致突变作用。由于OPD的不稳定性，现在的商品试剂盒中，OPD均以片剂或粉剂供应，临用时再溶解于相应的缓冲液。

在ELISA测定时，小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒OPD色原底物的具体配方为①显色底物溶液：在0.1mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH5.0)中含20 mmol/L OPD和12 mmol/L H202，或10 mmol/L OPD和5.5mmol/L H202；

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酶联免疫吸附试验（又称酵素免疫分析法，Enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。

小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：

将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。

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