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【中文名称】:小鼠醛固酮(ALD)ELISA试剂盒
【英文名称】:Mousealdosterone,ALDELISAKit
【产品货号】:CL-D3268
【产品规格】:96T/48T
【保存条件】:2-8℃低温保存
【保质期】:6个月,提供试剂盒最新批次
让ELISA实验不失败的经验
ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在操作过程中总是会出现或大或小的问题,比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。小鼠醛固酮(ALD)ELISA试剂盒做ELISA的经验总结:
1、包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保存抗原很重要,我做重组蛋白时,师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。还有有的包被原可能不是蛋白,对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被,我把方法简要的列出如下:①亲和素生物素:先亲和素先包被载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法均匀、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱过夜或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质自然干固在固相表面。③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。
2、小鼠醛固酮(ALD)ELISA试剂盒包被液的选择,一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下最终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
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酶联免疫吸附试验(又称酵素免疫分析法,Enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA)利用抗原抗体之间专一性键结之特性,对检体进行检测;由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计其键结机制后,配合酵素呈色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用呈色之深浅进行定量分析。
间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为:
将已知之抗原固著于塑胶孔盘上,小鼠醛固酮(ALD)ELISA试剂盒完成后洗去多余之抗原
加入待测检体,检体中若含有待测之一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结
洗去多余待测检体,加入带有酵素之二次抗体,与待测之一次抗体键结
洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
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