多功能微孔板读板机 SpectraMax iD5

一种快速、高通量的病毒中和抗体检测方法

新冠病毒的出现导致了世界范围内的新冠大流行，为了理解病毒的发病机理并开发疫苗，亟需快速开发多种研究工具。检测病毒感染和疫苗接种后的免疫反应对新冠病毒的研究十分重要。由于中和抗体是免疫反应和疫苗效价的关键生物标志物，患者血清样本中的中和性抗体水平是用于监测有效性的重要参数。人体血清中和抗体的鉴定常使用传统方法例如蚀斑减少中和试验 (PRNT) 来检测。然而，该方法使用活的、具备感染性的病毒加入到靶细胞中，所以需要生物安全三级实验室以及耗时费力的细胞培养。数据结果的分析耗费时间并且不能自动化。此外，假病毒中和试验 (pVNT) 方法使用改良型的病毒，可以在生物安全二级实验室完成，但此方法需要细胞培养和荧光成像来测得中和抗体活性，因此，也不适用于样品的高通量筛选。 此 GeneScript cPass 新冠病毒中和抗体检测试剂盒采用免病毒中和测试法 (sVNT) 来克服传统的病毒中和实验的缺点。它采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 的模式，如图 1 和图 2 所示。

在血清样品中通过化学发光免疫实验检测新冠 IgG 抗体

作为新冠病毒免疫反应的一部分，感染者体内会产生病毒特异性抗体，在出现症状后的一至三周内，这些抗体可以在血液中被检测到。IgG 和 IgM 几乎同时出现，而 IgG 在更长时间内维持一个高水平。在血清中，由于感染病毒或接种疫苗而产生的可检测到的抗体可以防范将来被新冠病毒感染。但这些抗体持续的时间长短和提供保护的程度是有关新冠病毒仍需密切调查的众多问题之一。在人体血清中，通过免疫实验来检测新冠抗体是增进我们了 解这种疾病以疫及苗研究的重要工具。Promega LumitTMDx SARS-CoV-2 免疫实验使用了带有 SmBiT 和 LgBiT ( 这是 NanoLuc 荧光素酶的两个亚基，只有当它们通过结合相互靠近时，才具有功能 ) 标记的新冠病毒刺突蛋白受体结合区域(RBD) 的一个片段。当这些标记过的病毒蛋白片段与含有新冠病毒抗体的样品一起孵育时，他们将与抗体结合，将 SmBiT 和 LgBiT 两个亚基结合到一起，并产生功能性的荧光素酶。添加 Lumit 检测试剂，在微孔板光度计上测量产生的荧光信号。 Lumit 实验中，样品的添加和测读如图 1 所示。没有清洗的步骤并且一小时内测得结果，使得这个实验可以应用于高通量筛选。SpectraMax iD5 多功能酶标仪具有超冷光电倍增管(PMT)，可以为 Lumit Dx 新冠病毒免疫实验提供高灵敏度的发光检测。

使用定量发光试验检测病毒诱导的细胞病变效应

病毒感染哺乳动物细胞通常会降低细胞活力，并对细胞造成明显的影响，如形状或大小的改变，或与邻近细胞融合。这些变化被称为细胞病变效应 (CPE)，可以通过光学显微镜或成像系统对细胞病变效应进行评估，或者使用更多的定量检测手段对其进行测定。 Promega 公司的 Viral ToxGlo 检测试剂盒可以检测活细胞中存在的 ATP，并提供一种简单的发光检测方法来定量细胞活力。由于病毒诱导的 CPE 会耗尽细胞中的 ATP，导致发光信号的减少，因此可以定量检测宿主细胞中病毒诱导的 CPE。使用简单的混合 读取工作流程，即可轻松地在 SpectraMax iD5 多功能微孔板读板机上检测到试验结果，并使SoftMax Pro 软件进行分析 ( 图 1 )。这里，我们展示了如何使用 ViralToxGlo 检测试剂盒来测定病毒感染的哺乳动物细胞中的病毒感染力和半数组织培养感染剂量 (TCID50)，以 及如何测量化合 物的抗病毒效力。本研究采用了之前描述的两种病毒感染模型 : 甲型 H1N1 流感病毒 1 感染 Madin-Darby 犬肾 (MDCK) 细胞，人冠状病毒株229E(HCoV-229E)2 感染 MRC-5 人肺成纤维细胞。将两种具有抗病毒作用的化合物利巴韦林 3 和瑞德西韦 4 应用于暴露于病毒的细胞，并测定其抗病毒效力。

使用 ELISA 方法检测大麻中总的黄曲霉毒素

介绍 大麻在美国许多州变得合法化，州立机构正在为种植者、零售商、检测实验室制定自己本地的法规和要求。比如，2019 年 1月，加州在当地法律基础上，开始实施大麻相关法规，所有的大麻商品都必须经过检测，以确保消费者安全。大麻中的潜在污染物包括霉菌毒素，曲霉菌属真菌的有毒产物，食用后可导致人类或动物患病和死亡。加州大麻管控局要求对大麻产品进行最常见和最危险的霉菌毒素测试：黄曲霉毒素 B1, B2,G1, G2，赭曲霉素A。这些毒素的上限是 20 ppb，与 FDA 对大多数食品规定的水平相同。其他州对黄曲霉毒素水平有自己的要求。 试纸条检测 (Strip test) 和酶联免疫吸附试验 (ELISA) 是两种常见的、成本相对较低的食品和饲料样品中霉菌毒素检测方法。ELISA 是在 96 孔板上操作，具有高通量的优点；而在试纸条上，一次只能检测两个样品。AgraQuant TotalAflatoxin 4/40 ELISA kit (Romer Labs) 试剂盒可用于定量食品和饲料成分中的黄曲霉毒素，具有同时检测 44 个不同样品的能力，当需要检测大量的样品时，可以节省大量的时间。 在此，我们阐述了 AgraQuant Total Aflatoxin 4/40 ELISA 试剂盒如何与 SpectraMax ABS Plus 酶标仪、SpectraMax iD5多功能酶标仪联用，检测最常见的大麻产物之一 - 花当中的黄曲霉毒素 B1、B2、G1 和 G2 的水平。样品的制备和 ELISA 的一般流程如图 1 所示。

采用重组 C 因子法在 Molecular Devices 四款不同型号多功能微孔板读板机上进行定量检测

在制药和医疗器械生产过程中，对污染物样品的监测是一个 关键步骤。内毒素存在于革兰氏阴性细菌的细胞壁中，是一种 常见的污染物，可引起发烧、炎症、头痛、恶心，甚至死亡。 内毒素的常规检测方法是鲎试剂溶酶法 (LAL)，核心成分由鲎 的血液中提取而来。在内毒素存在的情况下，LAL 通过酶促级 联凝固，可以通过比浊法或显色法定量 ( 图 1A )。这些方法涉 及多个酶的步骤，并取决于鲎的可用性。 2021 年 2 月 5 日，国家林业和草原局、农业农村部发布公告， 调整后的的《 国家重点保护野生动物名录 》正式发布，将我 国分布的鲎科动物 ( 中国鲎、圆尾蝎鲎 ) 升级为国家二级保护 动物。 中国药典 2020 年版 9251 细菌内毒素检查法应用指导原则中 指出，目前新的细菌内毒素检测方法不断出现，以适应特殊品 种细菌内毒素检查的需要，或减少鲎试剂的使用量。如重组 C 因子法 ( 见附 )、微量凝胶法等。

定量检测血清样本中 SARS-CoV-2 Spike ( 刺突蛋白 ) 和 Nucleocapsid ( 核衣壳蛋 白 ) 的 IgG 抗体

快速、准确和常用的分子水平检测技术对于应对 SARS-CoV-2 (COVID-19) 的大流行发挥着重要作用。为了加深我们对感染 和免疫之间关系的理解，检测感染和检测抗体都尤为重要。 重要的挑战是要探索出能够满足这些检测需求的灵敏、一致 的和易用的检测方法，并且这些检测方法的成本是在合理范 围 内。目前 市 面上针对感 染 最 准确 的 检 测 方法 是 针对 病 毒 mRNA 的定量 RT-PCR，然而，它并不能够反映出免疫反应的 过程。鉴于目前重点仍然是放在开发更有效的方法以识别病 症，而在抗体检测的分析方法的开发层面的进展仍然不足。目 前市场上的抗体测试有很多假阳性结果，因此他们都不是了解 SARS-CoV-21 免疫反应细微差别的可靠方法 1。因此，对于 研究 COVID-19 免疫和抗体应答来说，一种可靠的、高通量的 方法亟需开发。

【应用文章下载】利用基于 HTRF 的 Tag-lite 技术检测胰高血糖 素 GLP-1 受体的 Kd 值

Cisbio 的 Tag-lite HTRF 平台能 够 有效 地 用 HTRF 荧 光 团标记目标位点上感兴趣的蛋白。细胞表面受体可以插 入 SNAP-tag 质粒中，然后用这种结构转染细胞并表达 标记的受体。通过添加 snap -lumi4-Tb 底物，用铽 (Tb) 穴状化合物标记受体。为了进行结合试验，受体的配体 用 HTRF 受体荧光团标记，例如 d2。当 d2 配体与铽标 记的受体结合时，可以使用具备 HTRF 功能的微孔板读 板机检测受体到配体的时间分辨荧光共振能量转移 (TRFRET) ( 图 1)。 Cisbio 提供了多种标签和兴趣蛋白标记编码的质粒，以 及已经用这些结构物转染的冷冻细胞。该结构体能够表 达标记蛋白，如受体，可以用铽标记，同时其受体配体 ( 激动剂或拮抗剂 ) 用受体荧光团标记。Tag-lite 平台适 用于广泛的应用，如受体二聚化、配体结合分析和第二信 使评估。结合动力学可以研究药物 - 蛋白质复合物的结 合和解离速率，是优化候选药物体内疗效的必要步骤 。

【应用文章下载】布鲁氏菌病诊断的新方法—荧光偏振技术

荧光偏振试验 (FPA) 是一种抗原 / 抗体相互作用的简单 技术，该试验基于物理原理：在溶液中，分子的旋转的 速度与其质量有关。小分子的自旋速度较快，从而使光 快速去极化，测得的偏振值较低，而大分子的旋转速度 较慢，因此对光的去极化更少，测得的偏振值较高。FPA 以毫偏振单位 (mP) 来衡量去极化的程度。在测试期间， 将血清样品与被荧光染料标记的抗原小分子孵育，在布 鲁氏菌属的抗体的存在下，形成了大的荧光复合物。在阴 性样品中，抗原是未结合的状态，与布鲁氏菌属阳性样 本相比，这些较小的抗原分子旋转得更快，因此引起光 的更大去极化。

【干货分享】：酶标仪在植物对逆境胁迫应答中应用

人们已经发展出很多检测手段来探索和揭示植物免疫机制和植物抗逆机制，包括高通量测序技术、显微成像技术、色谱-质谱联用技术等，其中酶标仪检测技术作为一种高通量微孔板检测技术，且操作简便的方法，在生物医学、药物研发、农业和微生物学等领域得到了广泛应用。

【应用文章下载】如何利用远红外荧光对细胞内活性氧进行检测Molecular Devices

活性氧 (Reactive oxygen species，ROS) 是 一类由细胞有氧代谢产生的具有化学反应 活性的一类含氧分子，参与细胞信号转 导、免疫防御以及维持体内动态平衡等各 项生理活动。然而当细胞处于环境压力 时，胞内的 ROS 含量水平就会急剧上升造 成核酸、蛋白和脂类物质的氧化损伤[1]， 从而引起许多生理、病理变化，诸如男性 不育、癌症的发生等等[2]。胞内 ROS 含量水平通常采用荧光探针，尤 其绿色荧光探针来检测。然而由于绿色荧 光检测和成像易受细胞自发荧光的影响[3]， 因此远/近红外染料常被用来检测 ROS 含 量从而避免细胞自发荧光的干扰。

【应用文章下载】利用MolecularDevices微孔板读板机对细胞内氧化自由基吸收能力(ORAC)进行分析

活性氧簇 (Reactive oxygen species， ROS) 是由细胞内正常代谢反应，环境压力 以及紫外辐射产生的一类物质，包括过氧 自由基、羟基自由基、超氧离子和单线态 氧。氧化自由基吸收能力 (oxygen radical absorbance capacity，ORAC) 分析是一 种用来评估生理液、食品、饮料以及天然 产物抗氧化能力的标准方法，它可以定量 检测样品清除自由基的能力。通常自由基 能够与细胞内组分发生反应，破坏正常组 织，引起基因突变，破坏细胞周期正常运 转，导致癌症和其他疾病。这里我们展示的是如何利用 Molecular Devices 荧光微孔板读板机 Gemini™ XPS 及SoftMax Pro 软件联合 Cell Biolabs 的 OxiSelect™ ORAC Assay 来检测不同果汁 的抗氧化能力，并突出了该方法简单易行 的特点。

【应用文章下载】利用SwordELISABoosters在皮克水平下检测炎性细胞因子MolecularDevices

传统的 ELISA ( 酶联免疫吸附实验 ) 方法使用辣根过氧化物酶 (HRP) 底物3, 3’, 5, 5’-四甲基联苯胺 (TMB) 通常无法检测低丰度分析物， 例如炎性细胞因子。S w o r d Diagnostics 公司开发出新一代 ELISA 检 测技术-Sword ELISA Booster，可直接替代作为金标准的传统 ELISA 检测试剂，将灵敏度提升 30 倍。

利用荧光偏振检测功能的新抗体检测方法—Molecular Devices

在不同的研究人员中，以抗体为基础的治 疗药物的细胞系开发过程可能有很大不同。 最终目标是找到可以稳定产生大量单克隆 抗体的细胞克隆。 IgG 产物检测在开发和生产单克隆抗体的 多个阶段都是非常重要的一步 ( 图 1 )。通 常 IgG 定量的方法都需要专门的仪器和技 术人员，例如 HPLC 和表面干涉测量，或 是要花费大量时间的 ELISA 检测 ( 酶联免 疫吸附实验 )。尽管 ELISA 是蛋白定量的 成熟方法，但它也是一种冗长的、多个步 骤的实验过程 ( 表 1 )。这里，我们向大家 介绍使用 Valitacell 公司的 Valita®TITER 实验来检测抗体开发和生产过程中 IgG 的 方法。

【酶标仪应用】酶标仪在植物研究领域中的应用实例MolecularDevices

在基于哺乳动物细胞的研究中，酶标仪主要应用于: (1) 常规分子检测，如核酸、蛋白浓度及酶活性分析等；(2) 信号转导研究， 如一些细胞信号事件如 ROS，修饰的检测；(3) 整体细胞水平的分析，如细胞的活力、凋亡和杀伤等。然而在植物领域中，酶标 仪的应用则偏向前两个方向，此外，植物领域的酶标仪应用普遍度也不及动物，但这并不限制酶标仪在该领域的应用前景。在此， 我们结合常见的应用案例介绍酶标仪在植物领域中的应用，提升酶标仪在植物研究中的应用价值，并进一步协助植物的科研发展。

【应用文章下载】细胞活力和毒性分析Molecular Devices

靶向细胞的科研研究和药物研发避免不了细胞活力的分析和追踪。但依据实验的最终目的和关注参数的不同，细胞活力的体 现，检测方法也会不一样。例如细胞增殖检测适用于比较不同细胞株增殖能力，而细胞毒性分析则可以用于探究候选药物是否有 细胞毒性等。从分析仪器上来说，现阶段主流的检测平台，如显微镜，流式细胞仪和实时荧光定量pcr仪等都可用于细胞活力的分 析，但不同的平台所关注的指标，灵敏度和通量会有所差异，因此需要依据所回答的生物学问题和指标选择合适的检测平台。在 上述平台中，酶标仪提供了96、384孔板的高通量细胞活力检测方法，灵敏度上能和经典的[3H]胸腺嘧啶掺入法(Thymidine Incorporation Assay)相媲美，因此成为了主流的科研和工业研发中细胞活力和毒性分析平台。相应的，细胞活力分析也成为了酶 标仪的基础应用之一，也是Molecular Devices (MD)关注的主要应用。