多功能酶标仪SpectraMax iD3

教你两步完成肝素效价的测定

肝素首先从肝脏发现而得名，它也存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中，是一种由动物结缔组织的肥大细胞合成的粘多糖，是由二种多糖交替连接而成的多聚体。它是一种天然的抗凝血物质，在体内外都有抗凝血作用，临床上常用其钠盐或钙盐。肝素钠或肝素钙注射液主要是从猪或牛的肠粘膜中提取 的硫酸氨基葡聚糖的钠盐或钙盐，作为迅速达到抗凝作用的首选药物，被广泛用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等。随着药理学及临床医学的进展，肝素的应用不断扩大。 肝素类产品的效价不能用化学或物理的方法进行确切测定，只能采用生物检定法测定，即利用药物对生物体的作用并与标准品加以比较以测定其效价和生物活性的一种方法。目前体外的抗凝活性实验主要有血浆法和生色底法，血浆法虽然可以全面衡量肝素的抗凝活性，却很难标准化；生色底物法测定 肝素钠的抗 IIa 因子和 Xa 因子活性虽然不能完全反映肝素钠的活性，但国际上通常采用这种方法来确定肝素钠的效价。欧洲药典 5.0 版和我国药典均采用该方法，美国药典从 2009 年开始采用生色抗 IIa 因子测定法代替此前药典中的羊血浆法测定肝素效价。生色底物法最大的优点是它在效价测定中的高度专一性，能够识别出此前药典中血浆法不能识别的肝素相似性潜在药物，并且酶标仪的使用使常规测定自动化和标准化。 生色底物法的原理是通过微量显色法比较肝素钠标准品 S 与供试品T抗 IIa 因子和 Xa 因子的活性，以测定供试品的效价。效价是某种药物达到一定效应时所需的剂量，产生相同效应药物的剂量比较时，所需剂量越小，药物的效价就越高，反之效价就低。在人或动物体内，发生凝血作用的主要是凝血酶，低分子肝素在人体内与抗凝血酶形成络合物，然后抑制凝血酶 ( IIa 因子或 Xa 因子 ) 的活性，达到抗凝血的作用，剩余未被抑制的 IIa 因子或 Xa 因子与生色底物作用显色，使用酶标仪在 405nm 波长处读取吸光度，终溶液的吸光度值与低分子肝素的效价成反比。以吸光度为纵坐标，标准品系列溶液 ( 或供试品系列溶液 ) 浓度的对数值为横坐标分别作线性回归，按生物检定统计法 ( 通则 1431 ) 中的量反应平行线原理 4.4 法实验设计，计算效价及实验误差，药典要求可信限率(FL%) 不得大于 10 %。

【应用文章下载】如何利用远红外荧光对细胞内活性氧进行检测Molecular Devices

活性氧 (Reactive oxygen species，ROS) 是 一类由细胞有氧代谢产生的具有化学反应 活性的一类含氧分子，参与细胞信号转 导、免疫防御以及维持体内动态平衡等各 项生理活动。然而当细胞处于环境压力 时，胞内的 ROS 含量水平就会急剧上升造 成核酸、蛋白和脂类物质的氧化损伤[1]， 从而引起许多生理、病理变化，诸如男性 不育、癌症的发生等等[2]。胞内 ROS 含量水平通常采用荧光探针，尤 其绿色荧光探针来检测。然而由于绿色荧 光检测和成像易受细胞自发荧光的影响[3]， 因此远/近红外染料常被用来检测 ROS 含 量从而避免细胞自发荧光的干扰。

【应用文章下载】利用MolecularDevices微孔板读板机对细胞内氧化自由基吸收能力(ORAC)进行分析

活性氧簇 (Reactive oxygen species， ROS) 是由细胞内正常代谢反应，环境压力 以及紫外辐射产生的一类物质，包括过氧 自由基、羟基自由基、超氧离子和单线态 氧。氧化自由基吸收能力 (oxygen radical absorbance capacity，ORAC) 分析是一 种用来评估生理液、食品、饮料以及天然 产物抗氧化能力的标准方法，它可以定量 检测样品清除自由基的能力。通常自由基 能够与细胞内组分发生反应，破坏正常组 织，引起基因突变，破坏细胞周期正常运 转，导致癌症和其他疾病。这里我们展示的是如何利用 Molecular Devices 荧光微孔板读板机 Gemini™ XPS 及SoftMax Pro 软件联合 Cell Biolabs 的 OxiSelect™ ORAC Assay 来检测不同果汁 的抗氧化能力，并突出了该方法简单易行 的特点。

【应用文章下载】利用SwordELISABoosters在皮克水平下检测炎性细胞因子MolecularDevices

传统的 ELISA ( 酶联免疫吸附实验 ) 方法使用辣根过氧化物酶 (HRP) 底物3, 3’, 5, 5’-四甲基联苯胺 (TMB) 通常无法检测低丰度分析物， 例如炎性细胞因子。S w o r d Diagnostics 公司开发出新一代 ELISA 检 测技术-Sword ELISA Booster，可直接替代作为金标准的传统 ELISA 检测试剂，将灵敏度提升 30 倍。

利用荧光偏振检测功能的新抗体检测方法—Molecular Devices

在不同的研究人员中，以抗体为基础的治 疗药物的细胞系开发过程可能有很大不同。 最终目标是找到可以稳定产生大量单克隆 抗体的细胞克隆。 IgG 产物检测在开发和生产单克隆抗体的 多个阶段都是非常重要的一步 ( 图 1 )。通 常 IgG 定量的方法都需要专门的仪器和技 术人员，例如 HPLC 和表面干涉测量，或 是要花费大量时间的 ELISA 检测 ( 酶联免 疫吸附实验 )。尽管 ELISA 是蛋白定量的 成熟方法，但它也是一种冗长的、多个步 骤的实验过程 ( 表 1 )。这里，我们向大家 介绍使用 Valitacell 公司的 Valita®TITER 实验来检测抗体开发和生产过程中 IgG 的 方法。

【酶标仪应用】酶标仪在植物研究领域中的应用实例MolecularDevices

在基于哺乳动物细胞的研究中，酶标仪主要应用于: (1) 常规分子检测，如核酸、蛋白浓度及酶活性分析等；(2) 信号转导研究， 如一些细胞信号事件如 ROS，修饰的检测；(3) 整体细胞水平的分析，如细胞的活力、凋亡和杀伤等。然而在植物领域中，酶标 仪的应用则偏向前两个方向，此外，植物领域的酶标仪应用普遍度也不及动物，但这并不限制酶标仪在该领域的应用前景。在此， 我们结合常见的应用案例介绍酶标仪在植物领域中的应用，提升酶标仪在植物研究中的应用价值，并进一步协助植物的科研发展。

【应用文章下载】细胞活力和毒性分析Molecular Devices

靶向细胞的科研研究和药物研发避免不了细胞活力的分析和追踪。但依据实验的最终目的和关注参数的不同，细胞活力的体 现，检测方法也会不一样。例如细胞增殖检测适用于比较不同细胞株增殖能力，而细胞毒性分析则可以用于探究候选药物是否有 细胞毒性等。从分析仪器上来说，现阶段主流的检测平台，如显微镜，流式细胞仪和实时荧光定量pcr仪等都可用于细胞活力的分 析，但不同的平台所关注的指标，灵敏度和通量会有所差异，因此需要依据所回答的生物学问题和指标选择合适的检测平台。在 上述平台中，酶标仪提供了96、384孔板的高通量细胞活力检测方法，灵敏度上能和经典的[3H]胸腺嘧啶掺入法(Thymidine Incorporation Assay)相媲美，因此成为了主流的科研和工业研发中细胞活力和毒性分析平台。相应的，细胞活力分析也成为了酶 标仪的基础应用之一，也是Molecular Devices (MD)关注的主要应用。

【应用文章下载】利用 SpectraMax iD3 微孔板读板机检测内源色氨酸荧光Molecular Devices

SpectraMax® iD3多功能微孔板读板机兼具 内源色氨酸荧光检测所需的高灵敏度和波 长扫描能力。另外，SoftMax® Pro 软件可 以通过Spectral Optimization Wizard自动 识别最最佳的激发和发射波长，同时自动 计算发射峰值的偏移，并用于后续分析。