小编是一名工程师，专门负责解决pH测量过程中的各种“疑难杂症”。平时工作中，听到pH测量相关最多的问题是：“pH的重现性不好”“稳定时间太长了”“波动太大”“电极寿命太短”……那您知道为什么会出现这些问题吗？我们该如何解决呢？小编今天就给大家说道说道……pH测量通常有指示剂法和pH计电极法两种。指示剂法由于诸如准确度低以及样品颜色受限等因素，已经逐渐被pH计电极法取代。 指示剂法pH计电极法1什么是pH计电极法？pH计电极法主要是由对氢离子敏感的玻璃膜作为指示电极，以及对氢离子无响应，但可提供稳定参比电位的参比电极组成。待测液体在两根电极之间会有一定的电位差，基于能斯特方程，可将测得电位差换算为溶液的pH。因此，pH测量是由两个独立的电极组成，如上图中的pH指示电极和参比电极。2什么是复合电极？如今，凭借更便捷的操作，主流应用已经将两个独立的电极合并为一支复合电极。在复合电极中，pH敏感玻璃电极位于中间，外围被充满了参比电解液的参比电极所包围。由于pH与温度关系密切，所以很多电极还加入了温度探头，便于测量过程中进行温度补偿，这种电极被称为3合1电极。3电极结构解析那电极是否都长得一模一样？一根pH电极是否可以测量所有样品呢？我们还得从电极的结构说起……▲▲从上图可以看出，一根电极需要包含多个部分。以下为列举的几个关键部分，只有正确组合，才能使电极完美地适用于特定应用。液络部参比系统与电解液玻璃膜类型与形状电极杆材料通过以上的介绍，大家现在应该比较清楚：正确的电极是获得准确可靠结果的关键!小编今天又给大家送福利了，帮你解决两类困难样品的pH测量问题。如何索取点击阅读原文提交信息即可获取《pH测量应用指南》《pH测量应用指南-含蛋白质的样品》

可能大家对徕卡（Leica）的了解大多都停留在相机上吧，种类繁多的相机让美景留在眼前。我们这次向大家介绍一下徕卡的另一个系列的产品——显微镜。在生命科学的研究过程中，显微镜是必不可少的工具之一，它让我们了解到微观世界的奇妙。Leica显微镜有很多种类，其中正置显微镜为大家最为熟悉的，物镜在载物台上方，光源从载物台下方照射至样品，然后通过物镜和目镜被肉眼观察。（Note：下图为Leica DM4 P以及通过此显微镜观察的三种矿石晶体的干涉图，通过观察研究材料光学属性。）细胞培养过程中，由于培育细胞的容器高度影响显微镜观察，倒置显微镜的发明克服了这一问题。将样品直接放在载物台上，物镜从样品下端进行观察，这样物镜与样品间的工作距离可以得到极大缩小（仅为盛样品容器的厚度），可以更方便的进行观察。并且倒置显微镜载物台与明场光源之间的距离很远，操作空间更加灵活。（Note：下图为Leica DMi8以及通过此显微镜观察的活细胞。）■ ■■■■当我们看到昆虫、花朵等细节的照片时，可能没想到这也是用显微镜观察得到的吧。这些都是由体式显微镜观察的，从外观来说，体式显微镜与平常接触的显微镜差别很大，并且体式显微镜调节放大倍数不是通过更换物镜的方式，而是通过改变中间镜组之间的距离完成。观察较大物体时体式显微镜就是最佳的工具了。（Note：下图为Leica S6系列体式显微镜以及通过此显微镜观察的花朵、鱼胚胎和昆虫。）今天就给大家简单介绍一下Leica三种类型的显微镜，下次再跟大家分享各类的详细信息吧。

      作为LAUDA产品经理的我将要和大家介绍一下LAUDA这个产品作为百搭款仪器在实验室充分贯彻的合作共赢精神以及它在各个行业领域为科学事业做出的贡献  。       如果你的实验室需要用到精确的温度控制，那Lauda一定是最佳的选择，不论您是哪个行业，哪个领域。目前Lauda的产品在食品，药品，汽车零配件，石油石化，航空航天，半导体领域，大学实验室，研究所等各种高端实验室都可以见到。这得益于Lauda全系列完美的温度控制技术以及Lauda在全球范围内品牌的影响力。Lauda的各种配套1、反应釜配套 ECO系列配合小型的反应釜（温度在－50至200℃具有极高稳定性）XT系列高级型工艺恒温控制器和大型反应釜配合（满足动态温度控制，极宽的温度变化范围）RP 4090C配合AG！定制型反应釜（大旋）（高性能制冷恒温器，温度范围-90至200℃）2、晶体生长控制配套RM6 S/H配套AIXTRON的MOCVD气相外延生长，物理法控制晶型（高精度的温度控制±0.05K，有效控制晶体生长）Proline Kryomats配套结晶器对晶体生长做精确控制,物理法和化学法结合。（从实验室型结晶器到大型中试结晶器，温度－90至200℃，精确度±0.05K）3、旋转蒸发配套MC350可以最多同时供应2台2到3liter的旋蒸同时使用。将风冷却进行分路调节，并节约实验室用水。超高性价比的RA8和IKA旋转蒸发配合冷凝。4、粘度流变配套RE 1050S 配套博勒飞的高端流变仪(温度范围－50至200℃，温度稳定性±0.02K)5、其他相关配套RA8和显微熔点仪Loop配套旋光仪折光仪分光光度计进行温度控制（超高性价比，4至80℃温度控制，精确稳定安静）Lauda还配套应用在:   发酵罐的温度控制   膜蛋白结晶   医疗血清水浴控温   啤酒保质期测试   应力测试   冻干实验   激光分选   凯氏定氮   各类光谱仪   电焊设备   注塑机   中央冷却水供应   数字打印   激光切割   盾构机   温度校验……Lauda可以提供全系列完美的温度控制，选型的时候一般考虑的是科技工作者的配套设备，使用温度范围，使用环境等相关需求。配套就是合作，合作才能peace and love.我发现hip-hop的精神和lauda的吻合程度完全可以相提并论。这也是我在这个领域里找到和我算是比较搭的地方。Lauda 在各领域中的应用研究和开发实验室在研发领域，温度控制对于样品前处理和质量控制都极为重要。作为样品制备的一部分，在很多应用中都需要提前进行温度处理。许多的质控过程需要样品在已定义的温度点或者一个特定时间内温度变化的条件下进行。典型应用       ? 样品制备       ? 质量控制       ? 研究实验室汽车领域汽车行业对于温度控制的要求一般在测试台架和材料测试环节。所有汽车的零部件都会在极高的温度波动条件下使用。在特殊的台架上测试零部件尤为重要。无论是低温还是高温，对于材料使用的环境条件进行模拟也非常重要。      典型应用      ? 测试台架应用      ? 材料测试生物科技在生物科技中，温度的控制决定了研发和生产成果的质量。生物反应器的恒温控制对于成功的生产起到至关重要的作用。作为样品制备的组成部分，有很多的生产步骤需要可靠的温度控制。      典型应用       ? 样品制备       ? 生物反应器化学领域在化学领域的诸多工艺过程中，温度在工艺工程、反应釜温度控制方面都扮演了非常重要的角色。化学反应、合成、药物基本组分的生产、聚合和结晶都是在有温度控制的反应釜中进行的。      典型应用      ? 反应釜温度控制      ? 工艺工程制药工业在制药领域，温度控制过程遍布于研究到生产放大的各环节。为了得到高质量的反应产品，温度控制系统需要对外部的反应釜进行稳定可靠的工艺过程温度控制。      典型应用      ? 反应釜温度控制      ? 工艺工程半导体工业领域在半导体生产和电子器件的测试中，需要精确温度控制的过程比比皆是。这其中包括，例如，金属有机化合物化学气相淀积(MOCVD)在生产LED晶片的镀膜过程中的应用。其它半导体行业的典型应用比如功能应力测试和负载测试、环境条件模拟和在线集成电路性能测试等。      典型应用       ? 过程冷却       ? 元件测试航空领域温度模拟和材料的温度测试是航空航天领域非常重要的组成部分。循环温度变化应力测试确保了所使用的零部件没有任何的故障，即使在太空中极端的外部条件波动下。典型应用      ? 材料测试? 温度模拟 医疗技术领域       在医疗技术领域， 温度控制主要应用在实验室的样品制备；以及制药和医疗实验室中的医疗设备如成像设备、医疗激光器或设备中。      典型应用      ? 医疗实验室      ? 医疗设备只要您需要温度控制，那lauda绝对会有适合您的款。不是因为我们是均码，而是我们从1956年成立至今，62年的经验积累和专业技术、独创性决不妥协的产品质量，让我们能够在各行各业提供专业的解决方案。

     细胞划痕实验还在用手动吗？划痕实验（Wound Healing)是一种操作简便的研究肿瘤迁移/损伤愈合的体外试验方法。使用枪头垂直对准96孔板的下端中央部位，向上轻推即可形成划痕。然而，看似简单的划痕操作，却让很多实验人员倍感头疼：重复劳动量太大，累到手抖划痕结果均一性很差，重复性低     BioTek最新推出的全自动划痕器—AutoScratch™，让您从容面对划痕实验。● 自动产生划痕，确保优异的均一性● 兼容24和96孔板● 全自动清洁程序● 划痕针更换便捷快速● 操作便捷无需额外培训AutoScratch™工作视频展示： http://t.cn/EUkVbz0?m=4318511683484770&u=3178376470http://t.cn/EUkV6S2?m=4318511818595546&u=3178376470配合BioTek旗下的Cytation™/Lionheart™全自动活细胞成像系统和Gen5软件，可自动化给出细胞生长变化图像、视频、数据及动态曲线。Gen5软件自动拍照并识别划痕边缘Gen5软件自动计算出划痕宽度变化曲线配合产品推荐

针对实体瘤肿瘤免疫疗法受限主要来源于两点：1、免疫细胞进入实体瘤微环境受限；2、肿瘤免疫抑制的微环境。此次整理分享的文章发现了免疫抑制细胞MDSC（起免疫抑制作用）进入结肠癌肿瘤微环境的机制，具体内容如下：先造模，作者想研究KRAS突变（G12D）对肿瘤免疫的影响，设立了两组：iAP组-未突变结肠癌，iKAP组-Dox诱导KRAS突变的结肠癌（GFP是诱导突变时导入的报告分子）。镜检和组织切片反映两类肿瘤细胞在小鼠体内生长进度相当，iKAP组由于用Dox诱导了突变所以IHC结果会有GFP（报告分子）及p-ERK（MRAS下游）阳性分别取两组小鼠肿瘤，分析免疫细胞组成，发现iKAP组（KRAS突变）免疫细胞总体浸润高于iAP组，T细胞浸润较少，而MDSC浸润显著高于iAP组，暗示KRAS突变和MDSC、T细胞浸润存在相关性撤去Dox一周后，KRAS突变消失（IHC图上GFP不再表达），T细胞浸润增加，MDSC浸润减少，再次暗示KRAS突变会抑制T细胞浸润、促进MDSC浸润（流式、IHC两种方法确认）T细胞中Treg和MDSC一样发挥免疫抑制的作用，KARS突变后进一步分析Treg发现Treg浸润也减少，突变消失后Treg浸润恢复。在TCGA数据库里挖掘数据发现，在人结肠癌上KRAS突变后Treg浸润也会减少，暗示KRAS突变肿瘤中MDSC是发挥免疫抑制作用的细胞MDSC高表达免疫抑制性分子ARG1和iNOS，会抑制T细胞增殖、分泌IFN-γ正着看完MDSC可以抑制T细胞后又反着看：抗体敲除MDSC后T细胞浸润增加上面的数据充分说明KRAS突变会引起MDSC浸润增加，进而抑制T细胞浸润、增殖、发挥效应，那KRAS突变通过什么对MDSC产生的影响呢？作者选用ingenuity pathway analysis (IPA) of RNA sequencing (RNA-seq) profiles这种基因组学大数据方法比对KRAS突变后肿瘤细胞自身信号通路的变化：发现KRAS未突变组iAP IFN-γ及IFN-α通路高于iKAP组iKAP组撤去Dox后对RNA测序结果进行IPA分析（由于撤去了Dox，KRAS突变消失，会有一些通路发生上调），发现IFN-γ及IFN-α通路在KRAS突变消失后上调明显qPCR结果也说明撤去Dox，突变消失后IFN通路出现上调，暗示KRAS突变和IFN通路存在关联再进一步，作者想筛出KRAS突变后所抑制IFN通路的核心基因，将三类变化的基因(i) IFN-α and IFN-γ signature genes (n = 223); (ii) differentially expressed, invasive versus non-invasive (n = 5,727); (iii) mutually exclusive with KRAS mutation (n = 56)进行了交叉比对，找到了IRF2对TCGA数据库中肿瘤细胞基因变化进行了筛选，也发现伴随KRAS突变IRF2出现deletion基因层面筛出KRAS突变会使IRF2下调，在组织蛋白层面进行验证发现：KRAS突变后IRF2表达下调，撤去Dox解除突变IRF2恢复表达，暗示KRAS突变会抑制IRF2相当于找到了KRAS突变的“下游”IRF2，那IRF2的下游呢？作者让细胞过表达了IRF2，看哪些基因表达出现上调，上调的基因包括IFN signaling molecules (STAT1, STAT2, IRF9, IRF7), host defense-related regulation of immunity (RTP4, IFITM1, IFIH1, IFI44, PARP14, NMI, SAMD9L), antigen presentation (PSMB9, PSMB10, B2M), cell death (CASP7, CASP1)，此外ChIP-seq发现很多IRF2结合的位点和IFN通路对应，暗示IRF2是KRAS突变影响IFN通路的主要调节者做了这么多实验发现KRAS突变会使MDSC浸润增加，KRAS突变抑制IRF2，那IRF2和MDSC浸润是否相关呢，做新的实验：在体外，撤去Dox后MDSC迁移减少，让细胞表达IRF2后MDSC迁移也减少，初步说明IRF2和MDSC迁移存在相关性刚刚正着看到IRF2抑制MDSC迁移，开始反着看，沉默IRF2后，体外MDSC迁移能力提升，体内也观察到MDSC浸润增加，暗示IRF2对MDSC浸润存在调节作用是什么将肿瘤细胞内部的IRF2和MDSC细胞联系起来的呢？细胞因子、趋化因子对于免疫细胞召集起重要作用，文章作者将突变后RNA-seq发现的表达发生上调的细胞因子、趋化因子和IRF2 ChIP-seq发现的IRF2结合的细胞因子、趋化因子基因交叉比对，发现CXCL3启动子上有IRF2的结合位点（E），过表达IRF2后结合的CXCL3增加（F）。进一步验证实验发现撤去Dox，KRAS突变消失后CXCL3表达下调，在肿瘤细胞上表达IRF2也会使CXCL3表达下调– KRAS突变抑制IRF2，IRF2抑制CXCL3，KRAS突变促进CXCL3的表达有一系列趋化因子可召集MDSC，但KRAS突变后只有CXCL3上调最为明显，暗示CXCL3发挥召集MDSC的作用沉默肿瘤细胞的CXCL3后MDSC向肿瘤细胞条件培养基迁移显著减少，向培养基中加入重组的CXCL3后MDSC的迁移显著增加，再次暗示CXCL3对MDSC迁移存在调节作用CXCL3的受体是CXCR2，免疫荧光检测发现MDSC的确表达CXCR2，用抗体或小分子阻断CXCR2后MDSC的迁移显著减少体内实验发现用小分子SX-682阻断CXCR2后MDSC浸润减少，T细胞浸润增加，同时还使肿瘤细胞减少至此初步理出了一条线路KRAS突变会抑制IRF2，IRF2通过抑制CXCL3分泌抑制MDSC通过CXCR2的浸润，作者开始把这条线路中的角色摘出来一个一个的验证，首先是IRF2，选取MC38细胞系（KRAS通路正常，IRF2表达正常）、MC38K为KRAS突变细胞（可见ERK磷酸化的上调，IRF2表达受抑制）、MC38KI（KRAS突变同时强制表达IRF2，三种细胞中IRF2水平最高），可见KRAS突变后（MC38K组）IFN通路受抑制、CXCL3表达增加、MDSC浸润增加，突变KARS细胞强制表达IRF2后（MC38KI组）IFN通路回调、CXCL3表达下调、MDSC浸润减少强制表达IRF2除可减缓MC38K肿瘤的生长速度、延长小鼠存活时间外，还可以提高MC38K肿瘤对PD-1疗法的敏感度看IRF2之外另一关键节点CXCR2，可见用小分子SX-682阻断CXCR2对肿瘤免疫、肿瘤生长抑制、小鼠存活存在积极作用综上，作者理出了这样的机制：KRAS突变抑制IRF2后，CXCL3的抑制被解除，表达上调，召集MDSC抑制杀伤性T细胞，这一结论是由小鼠模型推导得来，为放大研究的意义，在人的样品、数据库中又挖掘了一番 - KARS突变肿瘤IRF2表达低、对PD-1疗法的响应与IRF2表达正相关以往我们只关注肿瘤细胞本身，挖掘肿瘤细胞相较正常细胞到底哪出了问题，如：哪个蛋白突变了、哪条通路过度激活了、哪条通路受抑制了，找到肿瘤身上的问题之后试图直接在肿瘤细胞上进行纠正。肿瘤免疫疗法是一种新的视角，在和肿瘤细胞这台戏里我们又引入了新的角色-免疫细胞，这篇文章从这个视角出发去挖掘肿瘤细胞本身发生的“变化”对新角色免疫细胞产生的影响，工具、方法、模型其实就那么多，掌握这些只是必要的开始，更重要的还是讲故事的人的思维、视野。Wenting Liao, Michael J. Overman, Adam T. Boutin, et al. KRAS-IRF2 Axis Drives Immune Suppression and Immune Therapy Resistance in Colorectal Cancer [J].Cancer Cell, 2019.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568

大家好今天小编给大家介绍一下SYSTEC的灭菌锅，可是此锅非彼锅。提到锅作为厨房达人的你是不是以为是这个锅作为游戏达人的你是不是以为是这个锅作为每天溜娃的辣妈奶爸的你是不是以为是这个锅NO~NO~今天给大家介绍的是有颜值又有内涵可以使得实验室灭菌器更安全、更简单、更精确、同时更经济的SYSTEC的高压蒸汽灭菌锅。她的身份证号码是这样她很调皮有时喜欢躺着，躺着的她是这样的有时她喜欢站着，苗条的她“吃”的可不少，看心情可以从40L到150L不等。﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏﹏有时她喜欢坐着，她坐着可以“吃”掉很多的东西，可以从65L到1580L做16个阶段呢。她做的时候还可以左右开弓，既是灭菌锅也是传递窗，保障实验室的洁净。她还有一个完美的变身，既可以进行灭菌还可以给您铺平板、分装试管呢。本期就先给大家介绍一下咱们SYSTEC小姐姐的外貌，后面我会具体介绍她的脾气、性格、本领等等，喜欢的小哥哥小姐姐们持续关注哦。

亲爱的小伙伴们，您是否还在使用手工滴定？您是否有因为样品颜色太深，无法判断终点而困惑？您又是否因为新国标已更新电位滴定方法，但却因为预算有限还在犹豫不决？现在梅特勒-托利多公司有一款性价比极高的电位滴定仪来打消您的顾虑首先是颜值一眼望去，就像一个刚踏入社会的小鲜肉；穿着虽然简单，但是本质是白白净净看着着实令人舒服       然后是内涵中文界面一目瞭解，无需专业知识即可很快上手sdfd各种滴定类型满足日常分析，傻瓜式操作让您的滴定实验一键搞定。再来是类型 最后是用户评价用户A，某食品企业QC主任：新国标5009系列更新后，在酸价、酸度、过氧化值这些标准上部分产品检测强制使用电位滴定仪，像糕点、面包、饼干等样品检测酸价必须使用电位滴定，原先都是送检，现在样品量多了，因为预算问题想选择一台性价比高的滴定仪，购买了ET-18后，滴定确实方便了许多，而且也满足了国标要求，更重要的是节省了成本，我非常喜欢。用户B，某化工企业车间主任：之前我们车间操作都是用手工滴定方法，非常麻烦，所以考虑用电位滴定方法来取代。但是我们车间很多操作人员的学历只有中专，太复杂的仪器不会用，买了ET—18后，操作上手非常方便，而且真的很简单。后来样品多了之后我们还追加了几台。用户C，某大学本科学生：之前我们的滴定实验都是以是手工滴定为主的，后来老师买了EasyPlus电位滴定仪之后，让我们和手工滴定进行对比实验，让我更加深刻地了解到了电化学的原理，丰富了我们的知识。用户D，某中药厂操作员：2015年药典规定半夏一定要用电位滴定仪检测，因为成本原因之前买过一台国产的滴定仪，做半夏特别麻烦。后来用了ET—18后，实验操作非常方便，而且在再也不用手工进行计算了。

将免疫细胞改造用于肿瘤治疗目前已初见成效，这次整理分享一篇将免疫细胞改造用于肿瘤诊断的文章，具体内容如下：设计：肿瘤微环境内免疫细胞会有独特的代谢模式，将报告基因放到特定蛋白启动子下游改造免疫细胞，而后注射给荷瘤小鼠，改造的细胞到肿瘤部位后因环境的变化表达特定蛋白后，其启动子下游的报告基因也会一起表达产生诊断信号 选取哪种免疫细胞进行改造呢？作者分析了iPRECOG数据库内5782肿瘤，发现M2亚型巨噬细胞在各种实体瘤浸润免疫细胞占比都很高，暗示其对各种实体瘤都有较强的浸润能力，因此选取巨噬细胞作为改造对象肿瘤微环境内IL-4、IL-13含量较高，用IL-4或IL-13刺激两种巨噬细胞（BMDM、RAW264.7）后一些基因（Ym1、Fizz1、Hif1a、Mrc1、Arg1）表达上调，这些基因是放报告基因的备选基因从备选基因里筛特异性强的基因：用肿瘤条件培养基分别培养两种巨噬细胞（BMDM、RAW264.7），发现条件培养基培养后Arg1的表达增加了600倍，暗示其特异性最强又做了一个巨噬细胞响应肿瘤微环境内高含量细胞因子（IL-4、IL-13）或条件培养基表达Arg1的“量效”，确证Arg1对的响应性，对不同量的不同响应直接影响此种诊断方法的动态范围前面是体外实验初步判断出巨噬细胞响应肿瘤微环境Arg1的表达特异性很强，开始体内的验证：文章作者用VT-680标记巨噬细胞后分别移植给健康小鼠和荷瘤小鼠，检测肝、肺、脾、肿瘤部位巨噬细胞的基因表达，发现相较其他基因，Arg1在肿瘤部位特异性高表达，至此找到了要导入报告基因的位点Arg1作者又开始验证巨噬细胞对肿瘤部位的迁移能力，得确证巨噬细胞能到达肿瘤部位才行，首先是体外验证：tanswell小室，上层放巨噬细胞，下层放肿瘤细胞条件培养基，检测巨噬细胞迁移到下层的能力，发现下层条件培养基浓度越高，迁移到下层的巨噬细胞越多，初步说明巨噬细胞可迁移到肿瘤部位体内实验也发现巨噬细胞可迁移到肿瘤部位与肿瘤细胞共定位巨噬细胞迁移到肿瘤部位的分子基础是什么呢？检测后发现，肿瘤部位的巨噬细胞高表达一系列受体（CSF1R、CCR2、CCR5）上图是正着看肿瘤浸润巨噬细胞高表达一系列受体，开始反着看，用抗体阻断上调受体对应的配体后，巨噬细胞定位到肿瘤部位减少，暗示巨噬细胞依赖CSF1R和CCR2迁移到肿瘤部位找到了位点，证明了巨噬细胞对肿瘤部位的迁移能力之后开始改造巨噬细胞，将报告基因Gluc放到Arg1的启动子下游，体外用肿条件培养基和肿瘤部分含量较高的IL-4、IL-13刺激改造后的巨噬细胞发现能诱导产生报告信号体内验证检测能力：静脉注射4T1，检测血浆中Gluc，发现可100%检测转移的肿瘤（Metastatic组是静脉注射4T1 14天后，肿瘤除定位肺部开始转移是检测血浆中Gluc，Localized组是静脉注射4T1 7天后，肿瘤只定位于肺部检测血浆中Gluc），对localized组未发生转移情况下血浆中无法检出Gluc作者的解释是因为肺部高氧的肿瘤微环境小动物活体成像结果也说明改造的巨噬细胞可准确识别肺部及从肺部转移到别处的肿瘤细胞（为啥Tumor-Macs-组图上还有信号？因为每组小鼠都注射了腔肠素coelenterazine-荧光素酶的底物，应该是这个底物聚集到肝脏，肝代谢后发出了光信号）确定体内有效后，作者开始看自己方法的灵敏度，看最小可识别多大的肿瘤，这次是皮下注射CT26肿瘤细胞，发现最小可识别25立方毫米的肿前面实验改造的都是现成的巨噬细胞系，作者在原代细胞上又做了实验：Bone marrow-derived cells用M-CSF刺激使其表达巨噬marker F4/80，而后导入报告基因，体内体外实验验证均发现原代细胞也可用于制备肿瘤诊断巨噬细胞炎症和肿瘤密切相关，巨噬细胞也会参与炎症反应，那么单纯的炎症反应是否会引起肿瘤诊断巨噬细胞产生假阳性反应呢？作者先在体外进行了验证，单一炎症因子刺激巨噬细胞不会引起Arg1表达显著上调，IFNγ和LPS双重刺激会使RAW264.7上调Arg1的表达体内看炎症对肿瘤诊断巨噬细胞的影响，首先是后腿炎症模型：HE切片现实创伤后头三天中性粒细胞（绿色箭头指示）会出现在肌肉损伤部位，第7天巨噬细胞会出现在肌肉损伤部位（黄色箭头）；检测报告基因信号，发现在创伤复原期肿瘤诊断巨噬细胞会产生“阳性”信号换了个LPS诱导的肺部炎症模型：和后腿炎症模型类似，巨噬细胞会在恢复期出现在炎症部位，产生“阳性”信号在炎症反应中有假阳性，得往回“找补”，作者在炎症小鼠上又种了个瘤，发现虽然验炎症反应会造成假阳性，但炎症并不会影响肿瘤诊断巨噬细胞对肿瘤细胞的检出改造巨噬细胞诊断肿瘤这个方法比之于现有方法如何呢，和临床上使用的方法比一下：小鼠皮下种瘤（结肠癌LS174T），比较早期诊断结肠癌肿瘤标志物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）和巨噬细胞法的灵敏度，发现第一天时巨噬细胞法就可检出肿瘤，而CEA法无法检出和另一个方法比：cfDNA法只有在肿瘤尺寸大于1500立方毫米时才能检出，而巨噬细胞法可检出25立方毫米以上的肿瘤，作者再次说明自己方法的优越性从某种意义上说，学术论文是通过实验数据阐明一种理论可能性，而数据是通过一定的实验模型获取的，模型其实不是死的，只要遵循科研方法学的基本原则我们是可以自己设计、改造模型的，当现有模型无法支撑自己的“故事”，我们是可以换个“方式”讲故事的……就比如这篇，也许当初作者是想找靶向肿瘤能力强的免疫细胞，而后对其改造进行细胞治疗呢？再比如文章作者发现自己的方法在炎症反应中有假阳性，他在炎症模型上又种了瘤，说炎症不影响自己方法对肿瘤的检测。关键还是在于你从哪个角度看问题，怎么讲故事。Amin Aalipour, Hui-Yen Chuang, Surya Murty, Aloma L. D’Souza, et al. Engineered immune cells as highly sensitive cancer diagnostics [J]. Natrebiotechnology, 2019.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568

Biotage Selekt快速制备液相色谱         全新升级，为高效代言！  Why Selekt Biotage 快速制备液相色谱？因为快啊，高效啊，难分的也能分，还能够自动检测。一天的过柱子实验可能我一上午就搞定了，下午可以准备别的事情啊！ l TLC点板信息输入仪器，可以自动生成样品梯度方法（好神奇）l 双通道系统可以保证两种分离随时准备，可在正反相之间自由切换（强调一下是自由切换）l 支持流速最大可达300ml/min，保证更快速更有效更大量的分离（就是快啊）l 四种溶剂通道，可以在纯化的过程种增加改性剂等（可以适应多溶剂体系）l Selekt在收集样品进行试管切换的一瞬间，系统会自动暂停，避免样品损失（真的没有损失，谁用谁知道）。 l 使柱平衡时间只需要2个CV，为您节省溶剂，减少时间消耗（省钱省时间）l 15寸超大控制屏幕一体机（和IPAD差不多，不过长在机器上）l 全新中文操作系统，所有功能结合于同一界面（新版本真是优化了好多） 很多做有机的同学，每天的工作大部分都是过玻璃柱，工作重复，时间长，一次实验要是没有分开，就需要重新再过。Biotage快速制备液相色谱，就是代替人工过玻璃柱的自动过柱机。biotage快速制备液相色谱/自动过柱机，详情请咨询北京德泉兴业商贸有限公司。同样如果你有问题也可以联系我，聊聊实验。 15652392220

师兄师兄，能再给我一瓶Vero细胞吗？前天不是给你了一瓶吗？师兄，那、那一瓶被我给养坏了。没关系，今天就给你介绍一下Vero细胞怎么养。首先你要知道Vero细胞是什么。Vero细胞全名叫非洲绿猴肾细胞，是从健康的成年非洲绿猴肾组织分离培养得到的。一说起Vero细胞，肯定就是要和病毒以及疫苗联系起来。因为病毒疫苗的基础是细胞培养、收获足够量的病毒，那么Vero细胞就是在培养病毒时所需的一种细胞基质。正因为如此，Vero细胞是目前疫苗生产使用最多的一种传代细胞，目前已经广泛用于乙脑疫苗、流感疫苗、脊灰疫苗、轮状病毒疫苗、黄热病毒疫苗、甲肝疫苗、人用狂犬病疫苗等疫苗的生产。对于这个研究大方向的童鞋们来说，养好Vero细胞就应该是必备的技术基础了。那么，如何养Vero细胞，我认为培养基的配方就是养好Vero细胞的第一准则。培养Vero细胞的培养基配方是：85%MEM+10%胎牛血清+2%碳酸氢钠+2%谷氨酸+1%的双抗。当然有些实验室建议如果是用胎牛血清的话，可以不用10%这么高的浓度，但是，凭经验看，确实养得好的细胞都是通过好的培养基“金贵”出来的，如果细胞状态足够好，后面是可以将血清浓度降下来，这个对于细胞影响不是太大。如果有纯的MEM，就尽量用这个，不要轻易尝试一些比如MEM-ALPHA什么的培养基，原因就两个字“麻烦”。如果本身细胞状态就不够好，你又通过更换培养基浓度或是种类来折腾细胞，那就得不偿失了。那么养好Vero细胞的第二准则是什么呢？是消化。我们知道对于贴壁细胞而言，消化是非常重要的一个步骤。我们用胰酶消化Vero细胞的时候有两个小tips。其一用PBS洗细胞三次以后，将胰酶加入培养瓶，10秒左右去掉胰酶，放入37℃培养箱消化，每隔10秒左右轻轻晃动培养瓶，直到观察到有流沙状细胞滑动。其二是用PBS洗细胞三次以后，将胰酶加入培养瓶，一分钟以后倒置，将有细胞的面朝上，然后轻轻拍打，使细胞脱落。这两个小tips都很适用的，因为相对于拍打和37℃消化而言，胰酶消化的时间过长，后者引起的细胞伤害更严重。当然除此之外，养Vero细胞和普通细胞一样：要注意无菌操作、不要看细胞太勤、注意轻拿轻放、传一瓶拿一瓶、让细胞尽可能多的享受自己最适的生活环境。做到这些，你的细胞养不好都难。哇！师兄，听你这么一讲，我豁然开朗！对呀，每一个实验室往往都有一套做这个东西最适用的方法~ 另外，说起制备疫苗还要介绍一下我们用到的设备之一——高压均质机。高压均质机有什么用途呢？刚刚说到Vero细胞是目前疫苗生产使用最多的一种传代细胞，在生产乙脑疫苗、流感疫苗、脊灰疫苗等的一个中间环节就是细胞破碎，释放出抗原。咳咳咳，敲黑板啦！我们的ATS均质机就是做vero细胞、大肠杆菌、酵母菌等细胞破碎的机器~ATS均质机细胞破碎率在95%上，对于相关参数可以直接放大用于中试和生产。那高压均质机的破碎原理是什么？在电机的驱动下，均质机上一个或数个柱塞做往复运动，物料在柱塞的作用下进入压力大小可调节的阀组中，在高压的作用下，物料经过特定宽度的限流缝隙（工作区）后，瞬间失压的物料以极高的流速（1000-1500米/秒）喷出，碰撞在均质阀组件之一的冲击环上，产生三种效应： 空穴效应、撞击效应、剪切效应，经过这三种效应处理过后，物料粒径可达100nm以下，从而达到破碎细胞的作用。那其实这三种效应起到主要作用的就是空穴效应啦？对的，所以高压对均质机的性能是一个考验，而咱们的ATS均质机工作压力加到1800bar都是妥妥滴。想了解更多关于ATS均质机可以咨询德泉的产品经理钱畅：15933969067！

众所周知，水是生命之源，人类的生产和生活都离不开它。水与我们的日常工作也是息息相关在诸如制药、半导体、发电厂和生命科学等行业的日常实验室和生产过程中就需要测量纯水的pH值。这是因为在纯水的生产和使用过程中， pH值可以作为监控过程污染的重要指标。因为当空气或者二氧化碳侵入纯水生产或者分发系统时，将导致水样pH值发生改变。春风十里不如你如何准确测量纯水的PH值很多小伙伴会说，这有何难，1.校准，2.读数，3.记录呗......但事实是这样的……纯水被定义为电导率小于100μS/cm的水样，这些水样中氢离子和导电离子的含量都很低，在pH电极测量系统中1较低的离子浓度会导致参比电解液与样品离子浓度差异较大，使得pH测量系统中的液接电位不稳定，从而需要较长的响应时间2常规电极具有高阻抗的玻璃膜，其对氢离子缺乏敏感性，不能准确测得样品的真实值3测量过程中，由于空气或者二氧化碳的溶解，极易引入误差因此，测量纯水的pH值时，获得高重复性和准确性的结果是极具挑战的!!!文章来源：梅特勒托利多公众号

这个系列的密度计特点鲜明，设计新颖：1：确保高度可靠性与最高精度，准确度可达6位小数。可快速准确地测量密度、比重和多种相关值，例如：酒 精 度与白 利 糖 度。2：直观的 One Click 一键操作用户界面的超大彩色触摸屏可最大限度减少培训工作量和操作人员的影响。3：可自动粘度校正与集成温度控制装置，可确保为所有样品提供快速准确的结果。4：无缝模块化的设计，可以将密度与折光率紧凑的拼接起来，从而达到测量密度与折光两种参数。同时还可升级为集密度、 折光率、 pH、 色度、 滴定等于一身的多参数自动测量系统， 可防止在单次分析之间样品发生变化， 提高处理量和自动完成工作流程， 同时确保每次以相同方式执行所有步骤。超越系列密度计设计简约，性能出众，三款产品，满足您不同的需求！欢迎咨询购买~

引言普遍认为荧光染料dUTPs标记DNA优于间接两步标记法。结合切口平移DNA标记系统2.0，荧光dUTPs的使用为FISH应用荧光标签提供了一种简单而有效的方法。切口平移DNA标记系统2.0适用于多种荧光标记、生物素标记和地高辛标记核苷酸，是包括荧光原位杂交(FISH)在内的应用中标记大于1kb的双链DNA的推荐方法。FISH是一种记录良好的技术，可以用来标记染色体中的DNA序列，用于科学研究和临床应用。适当的荧光原位杂交需要相对湿润的环境条件;然而，目前FISH反应的最佳湿度还未可知。本研究的主要目的是利用Boekel Scientific RapidFISH Slide原位杂交箱演示切口平移DNA标记系统2.0在不同湿度条件下对FISH反应的影响。“实验材料/器材1.切口平移DNA标记系统2.0 (Enzo Life Sciences, ENZ-GEN111)2.绿色496 dUTP (Enzo Life Sciences，ez -42831)3.原癌基因的Bacmid DNA4.Nanodrop ND-1000 (Thermo Fisher)5.QIAquick®PCR纯化试剂盒(Qiagen, 28104, 28106)6.Cot-1 DNA (Thermo Fisher, 15279011)7.VECTASHIELD®防褪色封固剂含DAPI(Vector Laboratories，H-1200)8.RapidFISH Slide原位杂交箱(Boekel Scientific, 240200)9.CGH Metaphase Target Slides(Abbot Molecular, 06J96-001)10.荧光显微镜(Olympus, BX51)11.温湿度数据记录仪(Madgetech, RHTemp101A)”通过切口平移进行荧光标记DNA按如下表1、2所示步骤用绿色496 dUTP标记。尽量降低移液误差的影响,熟练混合3ug bacmid DNA,试剂在切口平移DNA标记系统2.0试剂盒中,和5.2μL绿色496荧光标记dUTP(浓度为0.3mM)。纯化标记为bacmid DNA的荧光染料必须在杂交前进行纯化。DNA探针采用QIAquick®PCR纯化试剂盒进行纯化。样本加入275μL PB Buffer轻轻混合(试剂盒),放置管中，室温16100 x g离心1分钟。弃掉上清，加入750μLPE Buffer(试剂盒)复溶后再次离心。加入10μL EB Buffer(试剂盒)将DNA洗脱,持续混匀一分钟,随后再16100 x g离心一分钟。测定DNA荧光染料摄入率用Thermo Fisher Nanodrop®ND-1000 UV-VIS分光光度计在微阵列测量模式下测定每个制备批次中绿色496 dUTP的摄入率。杂交和观测用雅培(产品，货号 06J96-001)将人类男性分裂中期切片加热到室温,准备杂交。每个样本均添加纯化后的绿色496标记的探针和3μg(1μg /μL) Cot-1 DNA。每个原位杂交箱的托盘中添加不同量的无核酸酶水。将所有样品分别放入Boekel RapidFISH Slide杂交箱中，37℃孵育过夜。杂交箱内无核酸酶水分别在0 mL、5 mL、10 mL、15 mL、20 mL、25 mL、30 mL进行检测。采用温湿度数据记录仪(Madgetech)对30秒采样率下的工作温度和相对湿度进行测量。孵化后,每个样品都仔细清洗和染色使用8μL VECTASHIELD®h - 1200防褪色封固剂含DAPI(1.5μg /毫升)处理，保证样本不变色。杂交后的样品在杂交冲洗后用奥林巴斯BX51荧光显微镜和60X物镜立即扫描。所有图像均采用1秒曝光，同时使用DAPI和FITC荧光滤光片，以最好地评估湿度对FISH杂交的影响，同时尽量减少光褪色。小结利用切口平移DNA标记系统2.0将绿色496荧光dUTP充分整合到bacmid DNA中。使用Boekel Scientific RapidFISH Slide杂交箱进行FISH杂交，只需添加5 mL水分即可获得明亮的实验结果。当水分含量超过20mL时，反应效果不再变化。Figure 1. 绿色496 dUTP探针(44.245 ng /μL)标记人类染色体8在37°C 25毫升nuclease-free水条件下进行FISH杂交后的成像效果。可视化前使用蓝色DAPI复染剂复染。注意绿色荧光的清晰度和强度。荧光原位杂交(FISH)条件: 25 mL of 水分, 44.25 ng/μL of 探针Figure 2. 在杂交过程中，使用Madgetech RHTemp101A数据记录仪以30秒的采样速率连续采集温度和相对湿度条件。Boekel RapidFISH杂交箱具有升温快、杂交过程温度稳定的特点。杂交孵育的湿度条件Figure 3. 培养过程中收集0- 30ml的相对湿度，采样速率为30 s。每次增加水分(5 mL-30 mL)，平行两组实验所得的数据。相对湿度较低的红线，没有增加水分，表明杂交条件较差。结论我们进行两组对不同湿度下的使用绿色496荧光标记bacmid DNA探针的FISH杂交实验，以确定最佳条件，为FISH实验提供样例。Boekel RapidFISH原位杂交箱与切口平移DNA标记系统2.0一起被证明是快速、可预测和结果可重复的值得信赖的平台。Boekel RapidFISH载玻片杂交箱凭借特有的自锁托盘机构，在所有实验过程中，只要在载玻片杂交托盘中添加水分，该原位杂交箱始终保持恒温和湿度条件。只有当杂交托盘中不添加水分时，反映环境的相对湿度较低，且在孵育过程中波动较大。当使用Boekel RapidFISH Slide原位杂交箱时，我们建议添加不少于20毫升的无核酸酶水，以确保信号明亮。附录 A: 其他FISH结果图作者：Andrew Lithen, Shay Karkashon Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY USA

此次整理分享的文章有意思，没有讲自己是怎么筛出的目标蛋白YTHDF1，上来就把小鼠这个蛋白敲了，看对肿瘤生长的影响，背后肯定是大量的工作，通过大量的工作锁定的这个目标。作者发现敲除TFHDF1小鼠的肿瘤生长速度低于野生型小鼠检测肿瘤浸润淋巴细胞发现：敲除YTHDF1后浸润到肿瘤部位的CD8 T和NK增加，MDSC减少，Treg不变CD8 T和NK两种细胞浸润增加，那两者对抑制肿瘤生长的贡献如何呢？用抗体敲掉看看：敲掉CD8 T后YTHDF1缺陷引起的肿瘤生长减缓现象消失，而敲NK对肿瘤生长减缓无显著影响（此外敲掉YTHDF1不影响NK细胞的脱粒），暗示CD8 T在YTHDF1缺陷小鼠肿瘤免疫反应中发挥重要作用 详细分析CD8 T：前面用的是表达OVA的B16肿瘤细胞，发现敲除YTHDF1后OVA特异CD8 T比例升高YTHDF1缺陷荷瘤小鼠的免疫细胞体外对肿瘤再刺激更加敏感，可分泌更多IFNγ 特异性敲掉T细胞上YTHDF1不影响T细胞的抑瘤作用，而前面又发现抗原特异T占比甚高，暗示YTHDF1通过其他细胞影响T细胞  YTHDF1缺陷小鼠的CD8 T对肿瘤的特异性提高，CD8 T受抗原提成细胞调控，而DC细胞是提呈抗原、“启动”CD8 T的主要细胞，开始看DC：敲掉YTHDF1的DC“启动”T细胞，分泌IFNγ的能力增强 挖到了YTHDF1影响DC，开始详细分析敲除YTHDF1后DC细胞的变化：共刺激分子CD80/86表达、DC细胞亚群并未因YTHDF1缺失产生变化 敲除YTHDF1后DC细胞响应LPS分泌细胞因子的能力也未受影响YTHDF1缺陷对DC激活、分化没有产生影响，检测DC吞噬发现吞噬功能也没受到影响，可提呈到细胞表面的抗原肽增加了，暗示YTHDF1缺陷后DC细胞抗原提呈能力增强 挖啊挖，挖出了YTHDF1引起DC的变化，那是DC这一变化改善的肿瘤免疫功能吗？特异性的敲除DC细胞上的YTHDF1后发现移植T细胞抑制肿瘤生长作用增强，暗示YTHDF1通过抑制抗原提呈影响肿瘤免疫，结合前面数据：YTHDF1缺陷后，DC细胞抗原提呈增加，促进了CD8 T发挥肿瘤免疫功能 YTHDF1是如何抑制DC的抗原提呈的呢？开始研究这个蛋白：YTHDF1是个结合到mRNA甲基化位点的蛋白，先用RIP-seq找YTHDF1结合的位点。进行了两次，重复性不错，YTHDF1主要结合到mRNA的两端YTHDF1结合mRNA后会调控mRNA的翻译，所以进行了核糖体印迹，发现YTHDF1敲除DC细胞的YTHDF1结合基因翻译明显减少（a, b），但YTHDF1敲除不影响mRNA的甲基化（c） 从测序数据中挖掘YTHDF1调控的通路，发现YTHDF1主要调控溶酶体和自噬体通路（DC细胞中这些通路负责抗原的降解），敲除YTHDF1后组织蛋白酶的翻译受到抑制，暗示溶酶体组织蛋白酶是YTHDF1调控的主要靶点，YTHDF1以此影响抗原提呈测序数据看到东西之后，实际验证发现YTHDF1缺陷小鼠DC细胞各型组织蛋白酶表达确实低于野生型测序结合体内验证的数据暗示YTHDF1通过组织蛋白酶降解抗原，表达OVA的肿瘤细胞分别和野生型DC或YTHDF1缺陷型DC共培养后检测DC细胞内OVA，发现YTHDF1缺陷DC细胞内抗原含量更高，说明YTHDF1通过组织蛋白酶调节胞内抗原，影响DC抗原提呈功能 各种组织蛋白酶抑制剂处理的DC细胞诱导T细胞增殖、分泌IFNγ的能力增强 荷瘤小鼠给予组织蛋白酶抑制剂后肿瘤生长放缓，再结合上面数据：YTHDF1缺陷后组织蛋白酶含量下降，DC胞内抗原降解减少，诱导T细胞作用增强，抑制肿瘤生长 有个问题，YTHDF1缺陷后肿瘤PD-L1表达上调，但敲掉YTHDF1能显著增强PD-L1抗体的抑瘤作用关于YTHDF1的作用都是在小鼠模型上发现的，在人的样品上看看，发现肿瘤部位YTHDF1的表达CD8 T的浸润量负相关 - 研究价值一下被放大上次分享的关于NR4A的文章，作者是靠组学技术筛出来的，笔者很好奇的是这篇文章作者是如何把视线直接放到YTHDF1上的，做别的实验的偶然发现？对文献极强的挖掘能力+肿瘤免疫这种热点的敏感？Dali Han, Jun Liu, Chuanyuan Chen, Lihui Dong, Yi Liu, et al. Anti-tumour immunity controlled through mRNA m6A methylation and YTHDF1 in dendritic cells [J]. Natre, 2019. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568

碳酸饮料成品会进行Brix 测量，以确定含糖量。我们以XX可乐两种样品进行测试。· 样品：1#：XX可乐，红纸，配料：水，果葡糖浆，白砂糖，食品添加剂（二氧化碳、焦糖色、磷酸、咖啡因），食用香精2#：XX零度可乐，黑纸，配料：水，食品添加剂（二氧化碳、焦糖色、磷酸、苯甲酸钠、阿斯巴甜（含苯丙氨酸）、安赛蜜、柠檬酸钠、咖啡因、蔗糖素），食用香精· 测试仪器：上海仪迈IR180全自动折光仪· 仪器温控开启恒温至20℃测量，样品重复装样三次，每次测量6组数据：·XX零度可乐Brix糖度测量值为0，那为什么口感还是甜的呢？从配料表中可以看出，是因为添加了甜味剂。甜味剂很小的用量可以达到蔗糖相应的糖度口感。· 用上海仪迈IR180折光仪对碳酸饮料进行测试，操作方便，而且重复性良好结论：上海仪迈IR180 折光仪适用于碳酸饮料成品中Brix 的测量。

一、原理高压蒸汽灭菌是生物实验常用的灭菌方法，即在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加，可杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。高压灭菌锅广泛应用于各大专院校、医疗卫生、食品化工、生物科研等单位对器械、敷料、器皿、药液、培养基等物品的灭菌处理。今天，我们带着大家一起来学习雅玛拓灭菌锅，不太愿意学习的筒子们也可以假装已经学习过了。这是好好学习天天向上的时代，这也是是自由任性不学（回头补上）也会的时代。二、Yamato灭菌锅优势1. 更快冷却：标准装备有冷却风叶，大幅缩短冷却时间。2.降低腐蚀 ：内腔采用3mm镜面不锈钢，减少液滴附着可能，降低腐蚀性物质对腔体的侵蚀。3.持久耐用：设计使用寿命20年。3. 操作方便：1.）压力仪表和安全阀快速可拆卸式，方便校检；2.）通常的灭菌，以及培养基、液体的灭菌和培养基的溶解，都能通过简单的设定进行操作；3.）除了各灭菌程序的设定，可以设定任意工程，进行重复运行；最高温度 135℃，也可用于蛋白改质。4.）操作面板及显示器都装在上盖的前面，方便观看和操作。4. 证件齐全：工厂取得了“医疗器械生产许可证”，SM系列产品取得了“医疗器械注册证书”，出厂时已经配备压力容器证明。5. 符合规范：适应国家食品药品监督管理局发布的新标准YY1007-2010，温度显示、控制精度均为0.1℃。6. 性能安全：设有多重压力盖开启保护锁，各种安全保护措施充分。三、Yamato高压灭菌器机型分布更多产品咨询，欢迎致电北京德泉，叨叨热线-010-83834948、63836985。雅玛拓也参加了2019慕尼黑上海电子生产设备展（2019年3月20-22日，上海），欢迎到现场参观指导。

IQ 700X带来的全新体验：智能化人机交互系统、全新E-POD、Q-POD取水手臂、全新水箱设计、无汞紫外灯环保设计、更优水质保证、更多纯水超纯水解决方案，只为给您带来更好、更优、更纯粹的水纯化体验。1）智能高效智能化人机交互界面清晰展示状态、提醒警报及影响信息：方便更换耗材及维护向导更简单、快捷的无纸化环境：定制报告：取水、自义时段质量监测数据； USB接口、取水报告二维码快速下载和分享2）卓越水质我们将多种独有、高级和可持续发展的技术在不同的纯化阶段集成入一系统，从自来水制备品质优异的一级和二级纯水。崭新纯水解决方案：全新预处理纯化柱、卓越的反渗透技术、Elix EDI模块、智能储水方案致优超纯水：ech2o无汞紫外灯、ech2o A10 TOC检测器、专利技术混合离子精纯化柱，提供完美的超纯水水质保障3）简单直观取水手臂：8档流速、磁力吸附，给您最好的取水体验五寸智能彩色触摸屏：完美的人机交互界面，可视化取水体验

 在之前的文章里，分享了“菌落计数”国家标准的制定和演变。要严谨地实现计数操作，需要按照规范的步骤来进行。今天，我们就来了解菌落计数的具体步骤吧。固体和半固体样品    称取25 g置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1min～2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。液体样品以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。    上步完成后，用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。Photos for everyone移液过程使用的器具，都应避免微生物污染。使用耐高压移液枪，核查洗耳球无菌程度，避免移液枪触及均质袋或试管内壁……样品匀液完成后，可按相同操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。    根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。之后，及时将15 mL～20 mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。培养和计数待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2h。水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3 h。    如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基 （约4mL），凝固后翻转平板，按相同条件进行培养。培养完成后，就要进行菌落计数了，计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units, CFU）表示。    选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。结果与报告    为了生成结果和报告，需要根据计数结果和公式计算出菌落总数。需要注意的是，对于菌落数量不同的培养皿，计数原则有所不同。     若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。    称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。    自此，菌落计数的步骤就这样完成了。正确的技术结果要求严谨地操作过程，相信大家已经充分了解了。除了计数操作，质量控制也是微生物环境安全管理的重要一环。菌落计数知多少，想要了解有关质量控制的相关内容，就请关注我们的后续推送吧。

Western blotting是研究蛋白表达最常用的经典技术，常用于检测靶蛋白的丰度、检测蛋白的修饰、蛋白相互作用研究中。常用化学荧光、化学发光和荧光三种方式对结果进行成像和定量分析。1）化学荧光：化学荧光采用ECL Plus底物代替化学发光检测底物ECL检测Western blotting信号，具有灵敏度高、线性范围宽的特点。ECL Plus试剂与HRP标记的二抗反应，反应产物在488nm激光激发下能够产生发射光，发射光通过Cy2滤光片由检测器接受，并转化为电信号。化学荧光可由激光共聚焦成像仪Amersham Typhoon检测，超大检测面积，可同时检测20张10×8cm印迹膜，2） 近红外双通道荧光用近红外荧光标记的二抗取代HRP标记的二抗进行Western blotting检测，在抗体孵育结束后，即可直接利用激光共聚焦成像仪Amersham Typhoon进行成像，不需要添加ECL底物，不需要在暗室进行X光片曝光，减少了实验步骤，节省时间，也节约了实验成本。印迹膜在近红外波段具有较低的自发荧光，使得在成像时容易获得极低的背景，保证检测的高灵敏度。同时，近红外荧光具有宽的线性范围，使得定量更准确。通过双近红外荧光标记的二抗，不需要stripping和reprobing即可在同一张膜上同时检测目的蛋白和内参蛋白，实现同一泳道内参蛋白归一化，使定量更准确。同时，双通道检测更便于研究蛋白磷酸化水平。3）三通道荧光使用双色荧光标记二抗和一个荧光直接标记的一抗，可以在一张膜上同时检测三个蛋白，如内参蛋白、目的蛋白和磷酸化蛋白。在磷酸化水平的检测中，引入内参蛋白归一化校正不同泳道间的上样量差异，使得实验设计更严谨，所得结果更准确。4）总蛋白归一化，定量更准确利用上样的总蛋白含量进行泳道间归一化，避免了内参蛋白选择烦恼。总蛋白归一化可基于荧光染料的蛋白质预标记技术，即在上样前，通过Cy5染料将蛋白标记上红色荧光。电泳结束后直接获得SDS-PAGE电泳图像，无需染色；也可在转印结束后根据膜上Cy5信号强度，判断转印情况；总蛋白信号代替内参蛋白用于归一化处理，结果更准确。总蛋白归一化与内参蛋白归一化相比具有：更宽的检测范围，更强的蛋白信号，含量不受处理条件影响的特点。小编在这里偷偷的告诉大家，这款产品是有样机可以申请使用的哦，有需要的小伙伴赶紧联系小编吧！小编的联系方式：13021014014有需要的小伙伴抓紧时间申请啊。

UV5Nano用于生命科学领域的超越系列紫外可见分光光度计。1：精确的超微量测量2：在很宽浓度范围快速测量3：强大的紧凑式结构4：生命科学直接测量和专用方法FastTrack™技术可靠的超微量测量避免出错，确保准确? 巧妙的臂内镜面光转向设计可以直接在集成光电池上测量样品? 光程可在0.1或1mm之间准确调节并能再现? 牢固耐用的专利设计消除了光程漂移 - 不需要昂贵的停工再校准? 在选定的光程测量时安全锁定测量臂? 测量时样品不会失去水分，提高了重现性? 90度开口的测量臂可以方便的滴加样品

A choice each must make for themselves, something no hero will ever defeat！--《神奇女侠》确实，要在众多IKA的优秀产品里去选择one然后力荐给大家，首先不仅要颜值突出，更要亮点明显，还要极具务实型的与众不同，有没有很难为到小编我呢？呃…还好啦，IKA永远都能紧跟客户需求，刷新独一无二的网红style！那么今天借着 “3-8”女神节，小编邀你一起来新品回顾--IKA [scale] 首创的支架天平。Look，先看看颜值，IKA首创的智能支架天平IKA [scale],美到否？ 新 ? 老 Well,不仅颜值够逼格，我们更是实力担当，类似： 反应后需进行称重，样品不好或不能移动，非常不便Or记录的数值因某种原因不准确，进一步影响后续反应的精确性… IKA [scale]统统给解决，旨在为您提供更高的舒适度和安全性！敲黑板了啊，具有以下特征的IKA [scale] 是一款集成天平和数据接口的支架，专利保护，是市场上独一无二的创新解决方案！称重重量可达6公斤智能支架天平的称重范围可达 6 kg，分辨率为 1 克。因此特别适用于在搅拌的同时直接控制添加样品材料。清晰的显示使用清晰的 LCD 显示屏，非常方便用户使用。所有信息，无论是测量值，校准步骤还是状态信息，都清楚地显示出来。稳定的安装底板坚固的压铸锌外壳提供了稳定性和坚固性。蓝牙连接测量的样品重量可以直接转移到您的仪器上(例如 IKA Ministar /Microstar 系列)，并显示在其显示屏上。IKA [scale] 的诞生，进一步体现了IKA在实验室仪器领域互通互联，智慧化的领先地位！通过将IKA [sale]和顶置搅拌器IKA MICROSTAR / MINISTAR control蓝牙配对，称重数值可以显示在顶置搅拌器的屏幕。1

王小五什么是UHT?李小男UHT就是Ultra Harmonic Technology的首字母,也就是超离样品保护软着陆技术.一般这个技术只有超速离心机才有王小五为什么要把UHT的技术放在台离上呢?李小男这种独特的升、降速程序在离心的关键步骤中降低了样品的共振，实现了样品回收效率的最大化，同时也节约了时间.我们做了相关的实验对比,参数不错哦!与Allegra系列相比，离心过后Avanti 系列处理的样品上清更加清澈。李小男电转化感受态细胞制备过程比较王小五嗯,确实不错哦!对于样品纯化过程，样品保护和回收效率最大化确实都是最重要的。纯化后的样品量和纯度直接影响着实验进程的推进情况以及实验效率的高低，进而主导着一个实验室科研成果的产出效率。李小男德泉代理的贝克曼这个品牌一如既往在研发以及设计上不断创新,提高用户的离心体验!小编会实时跟踪报道!下次见!

实体瘤CART疗效不佳的一大原因是肿瘤免疫抑制的微环境造成T细胞疲劳，此次整理分享的文章是关于T细胞疲劳调节的，文章作者筛出来一个调节T细胞疲劳的转录因子NR4A，具体内容如下：作者要研究实体瘤CART，得造实体瘤的模，偷了个懒，让肿瘤细胞表达CD19，这样就能用CD19 CART做实验了：各种肿瘤细胞系可稳定表达CD19，且表达CD19不影响肿瘤细胞在小鼠上从成瘤设计针对CD19的CART并验证CART功能在两个模型上（荷瘤小鼠移植CART和OT-1抗原特异性T细胞）研究浸润到肿瘤部位的T细胞：浸润到肿瘤部位的CD8+T细胞由CART、OT-1特异T细胞、内源性T细胞组成，这三种细胞的疲劳marker表达情况相似 - 大部分处于“疲劳”状态将肿瘤浸润T细胞（TIL）分离出来研究其功能，发现浸润的T细胞响应刺激分泌细胞因子的能力很弱 - 功能角度也说明TIL处于“疲劳”状态按疲劳marker表达情况将TIL分离出来进行RNA测序：基因表达情况受疲劳marker表达影响，疲劳marker表达水平相当的内源T和CART基因表达相似，受相同“变量”影响RNA测序反应基因的表达情况，基因表达受染色质开放性影响，所以对不同的TIL又进行了染色质开放性测序（ATAC-seq），发现PD-1高表达的TIL染色体开放性类似，NR4A（NUR77）、NFAT、NFκB、bZIP、IRF：bZIP位点开放性高ATAC-seq发现一些位点开放，那这些位点对应的蛋白表达量如何呢，作者发现PD-1高表达的细胞NR4A表达量也高（与ATAC-seq数据一致，至于测没测NFAT、NFκB、bZIP、IRF：bZIP这些开放性也升高的位点对应蛋白作者没提，估计是测了，但得到的数据不那么好讲“故事”）由染色质开放性挖到转录因子NR4A蛋白水平高表达，且与PD-1蛋白水平相关，那两者在基因表达水平上的关联呢？RNA-seq结果表明NR4A的表达水平和TIM3（HAVCR2）、PD-1（PDCD1）的表达水平正相关 - 至此的数据暗示转录因子NR4A参与调节T细胞的疲劳转录因子NR4A参与调节T细胞的疲劳这个初步的结论是在小鼠模型数据基础上得到的，在人的模型上又进行了ATAC-seq，发现PD-1高表达的细胞NR4A（NUR77）位点的开放性也很高 - NR4A更具研究价值，参与T细胞疲劳调节分子层面的的数据说明NR4A和T细胞疲劳存在相关性，开始从功能角度验证：敲掉NR4A的T细胞一会肿瘤生长、延长小鼠存活时间的作用增强，说明NR4A对于肿瘤免疫起负调节作用换了个T细胞移植时间，继续看敲掉NR4A的影响：疲劳marker表达降低、响应刺激分泌细胞因子的能力增强，再次说明NR4A对肿瘤免疫有负调节作用敲掉NR4A发现促进肿瘤免疫，作者又让细胞额外表达各个NR4A亚型看对免疫细胞的影响，发现额外表达NR4A后T细胞表面抑制性分子表达升高、响应刺激分泌细胞因子的能力减弱对分别额外表达各个NR4A亚型的细胞进行RNA-seq和ATAC-seq，发现各个NR4A亚型对基因表达的调控作用相似前面从功能角度可能敲掉NR4A对肿瘤免疫的影响，NR4A是个转录因子，测序是必须的，敲掉NR4A后进行RNA测序，发现敲掉NR4A的细胞效应蛋白（IL-2Rα, TNF and granzymes）相关基因表达上调、naive或memory T相关基因（Sell, Ccr7）表达下调、抑制性分子（(Pdcd1, Havcr2, Cd244, Tigit and Cd38）相关基因表达下调RNA测序发现敲掉NR4A后细胞上调的基因有500多个，为了找到NR4A直接调控的基因，作者又在细胞上过表达了NR4A，发现过表达后，上调的基因有Pdcd1, Havcr2, Cd244, Tox, Tigit, Cd38（抑制分子基因），下调的基因有Tnf and Il21（效应分子基因）染色质开放性测序发现：敲掉NR4A的细胞bZIP、Rel/NFκB开放性增强，利于T细胞效应相关基因表达ATAC-seq发现NR4A敲除细胞bZIP、Rel/NFκB开放性增强，ChIP-qPCR也确证了这点，与前面RNA测序结果一致 - IL21、TNF染色质开放性增强、表达增加（从转录层面说清了敲除NR4A后T细胞响应刺激分泌细胞因子能力增强）再从转录层面说清NR4A对PD-1表达的调控：PD-1高表达的疲劳T细胞Pdcd1（PD-1基因上NR4A结合位点开放性高，初始T、效应T、记忆T的Pdcd1上NR4A结合位点开放性则低，强制表达NR4A各亚型后Pdcd1上NR4A结合位点开放性由低转高造模、测序筛了半天，缕出的关系大概这样：NR4A促进T细胞抑制性分子表达、抑制T细胞发挥免疫功能测序这种大数据技术辅助文章作者筛出了NR4A，是技术、工具本身牛？还是使用技术、工具的人牛？人可以将测序大数据归类、降维，可以利用“已知”指导数据的进一步挖掘，可以选择其他技术路线对由数据产生的推论进行验证，等等...... Joyce Chen, Isaac F. López-Moyado, Hyungseok Seo, Chan-Wang J. Lio, et al. NR4A transcription factors limit CAR T cell function in solid tumours [J].Nature, 2019. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568

非甾体抗炎药(non -steroid anti- drugs, NSAIDs)是药物性肝损伤最常见的原因。特别是双氯芬酸（Diclofenac）类药物，常用于治疗慢性疼痛和炎症性疾病，2009年FDA就其潜在的肝毒性效应发出警告。进行肝毒性研究，体内模型实验既昂贵又耗时，而使用原代肝细胞的体外筛选成本更低，且易于进行高通量检测。一项典型的毒性研究在数天内反复给培养的肝细胞加药，以评估累积效应。然而，2D培养条件下的肝细胞很难形成细胞-细胞和细胞-基质通信网络，且2D培养条件将导致原代肝细胞快速去分化和代谢能力降低。这些缺陷限制了目前肝毒性研究的范围，并妨碍对药物在体内累积和长期影响的真正理解。在本文介绍的研究中，基于BioTek的Cytation高通量细胞成像平台，对比了2D和3D培养条件下Diclofenac对肝细胞的毒性，并证实了Diclofenac肝细胞毒性的作用机制。3D肝脏微组织的Diclofenac细胞毒性研究结果如图1所示，在Diclofenac给药剂量范围内，3D肝脏微组织细胞总数相对稳定，而死亡细胞数量在给药期间随着Diclofenac浓度的增大而增加。 图1. 3D培养条件下，Diclofenac肝毒性实验结果。X轴-给药时间，左Y轴-总细胞数和死亡细胞数，右Y轴-细胞死亡率3D肝脏微组织的成像结果（图2）直接证实了这一点。这表明，在检测化合物的潜在细胞毒性时（尤其是在长期给药评估期间）3D微组织是一个可行的选择。 图2. 3D肝脏微组织细胞毒性成像结果。Diclofenac治疗10天后3D肝微组织的代表性图像，Hoechst 33342（蓝色）标记所有细胞，CellTox Green（绿色）标记死亡细胞，分别使用Cytation的DAPI和GFP成像通道自动捕获。此外从图1结果可以发现，使用300μM Diclofenac直到第三天才出现明显的细胞毒性。而此前公布的数据显示，200 - 450μM Diclofenac 24小时内即可观察到明显的细胞毒性。这种对比差异强调了使用3D细胞模型进行细胞毒性研究的必要性。2D肝细胞的Diclofenac细胞毒性研究结果如图3所示，与对照组相比，Diclofenac浓度最高时的总细胞数和死亡细胞数均降低，细胞死亡率保持不变或低于对照组，这与预期相反。 图3. 2D培养条件下，Diclofenac肝毒性实验结果。X轴-给药时间，左Y轴-总细胞数和死亡细胞数，右Y轴-细胞死亡率图4成像结果证实，随着Diclofenac浓度增大，越来越多的细胞死亡，并且已经从板底脱落，因此检测到的总细胞数和死亡细胞数均降低。这种现象使得2D细胞培养下的分析变得复杂，进一步支持将3D细胞培养模型纳入长期细胞毒性评估。 图4. 2D培养条件下，肝细胞毒性成像结果。Diclofenac治疗10天后肝细胞的代表性图像，Hoechst 33342（蓝色）标记所有细胞，CellTox Green（绿色）标记死亡细胞，分别使用Cytation的DAPI和GFP成像通道自动捕获。证实Diclofenac细胞毒性作用机制在细胞毒性评估的同时，监测线粒体氧化应激和线粒体渗透性转换（Mitochondrial permeability transition，MPT）孔开放情况，以证实Diclofenac肝细胞毒性的作用机制。如图5所示，随Diclofenac浓度增大，红色荧光信号显著增强，表明超氧化物水平升高。这与之前发表的数据一致，显示Diclofenac的细胞毒性是ROS形成的结果。 图5. Diclofenac给药3天后，线粒体氧化应激评估结果。Hoechst 33342(蓝色)标记所有细胞，MitoSOX Red(红色)标记线粒体超氧化物，分别使用Cytation的DAPI和RFP成像通道自动捕获。如图6所示，随着Diclofenac浓度增加，绿色荧光信号的显著减弱，表明线粒体氧化应激的增加也导致了MPT孔开放。 图6. Diclofenac给药7天后MPT诱导评估结果。Hoechst 33342(蓝色)标记所有细胞，MitoTracker Red(红色)标记活细胞线粒体，Calcein(绿色)标记细胞内钙离子，分别使用Cytation的DAPI、RFP和GFP成像通道自动捕获。本研究结果表明：在2D培养条件下，由于肝细胞从微孔板的底部脱落，使细胞计数变得复杂。与传统的2D培养相比，3D微组织对毒素的反应较弱，这表明3D培养的细胞-细胞和细胞-基质通信创造了一个更适合长期监测的细胞培养系统。结合3D细胞培养模型和BioTek的Cytation高通量成像平台，可以快速获取准确可靠的可重复结果。本文内容涉及的检测仪器：BioTek Cytation系列（长按二维码获取更多详细介绍）   

肿瘤免疫疗法前景乐观，科学家们一直在寻找能够调高肿瘤免疫的靶点，此次整理分享的是一个RNA酶ADAR1，敲掉ADAR1对肿瘤免疫有正向作用，具体内容如下：作者构建了一个基于CRISPR Cas9的筛选平台：让肿瘤细胞表达Cas9，分别导入不同的sgRNA后移植到小鼠上，比较免疫压力下（GVAX或anti PD-1）表达哪些sgRNA的细胞会被“删掉”，删掉则说明缺失这个sgRNA对应的基因后肿瘤对免疫疗法的敏感度可能提高。筛出了ADAR1 开始从功能角度验证筛出来的ADAR1，首先敲掉ADAR1并不影响肿瘤细胞生长 ADAR1缺失后，肿瘤免疫作用增强，小鼠肿瘤生长受抑制、存活时间延长 比较ADAR1缺失后肿瘤微环境的变化，发现CD8 T细胞浸润增加 用流式再看肿瘤微环境，发现对肿瘤免疫正向作用的细胞浸润增加，而负向作用的免疫细胞浸润则减少 免疫组化、流式做完还不过瘾，有对肿瘤微环境内几千个CD45+细胞进行了单细胞测序，也发现敲掉ADAR1后，对肿瘤免疫正向作用的细胞浸润增加，而负向作用的免疫细胞浸润则减少 序测都测了，进一步挖掘数据分析免疫相关基因表达情况，发现ADAR1缺失后免疫反应正向基因表达上升、负向基因表达下调 还发现，ADAR1缺失后，干扰素通路相关基因表达较之前增加 又发现，ADAR1缺失后肿瘤微环境内两型干扰素含量也有所升高。至此综合起来作者发现肿瘤细胞ADAR1缺失后肿瘤微环境发生了一系列利于肿瘤免疫反应的变化 开始往深挖机制，体外将T细胞和肿瘤细胞共培养，发现ADAR1缺失的肿瘤细胞更容易被T细胞杀死，肿瘤细胞因为缺失ADAR1变“怂”了？ ADAR1缺失的肿瘤细胞对IFN更敏感：IFNβ、γ可抑制ADAR1缺失肿瘤细胞生长，诱导其凋亡 ADAR1缺失的肿瘤细胞对IFN更敏感了：相关通路基因表达上调 ADAR1缺失的肿瘤细胞对IFN更敏感了：IFNβ、γ刺激后分泌的IFNβ增加 ADAR1缺失肿瘤细胞再表达ADAR1后，IFNβ分泌增加、生长受抑制的现象消失，再次说明ADAR1和IFN之间的相关性 ADAR1和肿瘤免疫相关，ADAR1和IFN相关，那ADAR1、IFN、肿瘤免疫三者的关系如何？敲掉看看，发现敲掉ADAR1的同时再敲掉ifnar2、ifngr1因ADAR1缺失引起的肿瘤免疫上调消失，暗示IFN是ADAR1缺失引起的肿瘤免疫上调所必须的 ADAR1通过IFN发挥作用，缺失后能提高肿瘤细胞对IFN的敏感度，放射疗法能诱导IFN生成，那么ADAR1缺失细胞应该对放疗敏感，一验证果然如此，从侧面再次说明ADAR1和IFN的相关性，但ADAR1和IFN是怎么联系到一起的呢？ 开始摸ADAR1和IFN是如何关联的：ADAR1是个RNA酶，IFN可引起RNA species上调，作者推测ADAR1缺失后没人再来酶解RNA species，这些RNA可激活RNA sensor引起下游信号。首先发现IFNβ刺激后SINE（small interspersed nuclear elements）指数和Hyperediting指数升高，但ADAR1缺失后IFN刺激引起的SINE指数、Hyperediting指数升高现象消失 接着往下缕，发现INF刺激可引起ADAR1和一些RNA sensor表达上调 前面找到sensor了，那这些sensor和IFN引起的ADAR1缺失肿瘤细胞IFN分泌增加、生长受抑制是否存在关联呢？敲掉看看，发现Eifak2（PKR）、Mavs、Ifih1（MDA5）是IFNβ分泌必须的，Eifak2（PKR）是生长抑制必须的 In vivo测试in vitro筛出来的RNA sensor Eifak2（PKR）、Ifih1（MDA5），发现PKR和MDA5只要一个sensor就足以支撑ADAR1缺失引起的提升PD-1单抗疗效的作用，但当两个sensor都被敲掉提高PD-1单抗疗效的作用消失，暗示RNA sensor对ADAR1缺失促进肿瘤免疫反应的必要性        看RNA sensor对免疫细胞浸润的作用，发现单独敲掉Eifak2（PKR）不影响免疫细胞的浸润，单独敲掉Ifih1（MDA5）后ADAR1缺失引起的MDSC（肿瘤免疫负向细胞）浸润减少现象消失，暗示MDA5对免疫细胞浸润调节的重要性看RNA sensor对细胞因子生成的作用，发现单独敲掉Ifih1（MDA5）后ADAR1缺失引起的细胞因子分泌增加现象消失，暗示MDA5对细胞因子分泌调节的重要性  综合起来，用户归纳了一个模式图：IFN刺激肿瘤细胞后，RNAsensor表达上调、产生RNA species，ADAR1敲掉后，对RNA酶解减少，这些未被酶解的dsRNA激活RNA sensor，促进免疫细胞浸润、抑制肿瘤细胞生长 通路理清了，单独敲掉ADAR1并不是很行，得依附于PD-1单抗，但人家单抗已经上市，自己就挺好，得让上市的药带着自己玩，所以作者造了一个“耐药”的模型：把B2m敲掉，CD8 T就没法杀这样的肿瘤细胞了（PD-1单抗是依赖CD8 T起效 ）  In vivo：在PD-1单抗“不行”的肿瘤模型上，把ADAR1敲掉PD-1就“行”了，JAK突变模型上把ADAR1敲了也“不行”，更说明IFN对ADAR的重要性（IFN通过JAK-SATAT通路起效） 文章找到了一个提高肿瘤免疫敏感度的靶点ADAR1，怎么找到的？靠基于CRISPR Cas9的筛选平台！怎么放大自己的作用的？搭了一个“牛人”PD-1单抗都搞不定的台！所以说：平台很重要，找一个好的展示舞台也重要...... Jeffrey J. Ishizuka, Robert T. Manguso, Collins K. Cheruiyot, Kevin Bi, et al. Loss of ADAR1 in tumours overcomes resistance to immune checkpoint blockade [J]. Natyre, 2018. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568 

       如今这个时代，已经不再是靠大公司给你背书，你就可以成长很快、赚到很多钱了，现在越来越扁平，个体需要主动走出去，需要去链接更多的“资源”，需要去展现你的“才华能力”。于是，个体能连接多少“实验”，往往最终决定了你的价值。鸡汤味了这么许多，让我们直接进入正文，认识认识小产品如何帮忙实现大应用：真菌毒素检测案例黄曲霉毒素     黄曲霉毒素是到目前为止所发现的毒性比较大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全。     黄曲霉毒素主要有4种：即B1、B2、G1、G2，其中B1被认为是主要的有毒物质，有2种这些毒素的代谢产物M1和M2。其中黄曲霉毒素B1主要存在于农产品，动物饲料，中药等产品中；黄曲霉毒素M1是动物摄入黄曲霉毒素B1后在体内经羟基化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。黄曲霉毒素M1的毒性和致癌性与黄曲霉毒素B1的基本相似。由于牛乳及其制品是人类，特别是婴儿的主要食品，所以其危害性更大。黄曲霉毒素的测定      现有的检测真菌毒素的方法包括：薄层色谱法（TLC）、液相色谱法（LC）、气相色谱法（GC）、气质联用和液质联用等。      在检测前，需要对食品进行一系列前处理。黄曲霉毒素不同样品的前处理法霉毒素不同样品的前处理方法常见主要分析样品分析要求推荐型号玉米，茶叶，小麦，花生及其制品磨细（粒度小鱼2mm）均质器高速提取Tube millT25植物油脂，酱油，食醋均质器高速搅拌提取T25饲料磨细（过1mm筛网）均质器高速提取或振荡器提取Tube millT25KS260           现在，您是否对IKA产品有了更多了解呢？想要查看更多产品应用前沿内容，请关注我们的公众号，常有更新哦。 ? END ? 

小分子抑制剂通过和蛋白结合，抑制通路中节点蛋白，阻断通路信号传导，从而抑制肿瘤细胞生长。“堵”一个节点可以抑制肿瘤细胞，同时“堵”两个呢？研究者发现MEK抑制剂（Trametinib曲美替尼）和CDK4/6抑制剂（Palbociclib帕布昔利布）联用除阻断两个节点外，还引起肿瘤细胞发生其他的变化，触发了NK细胞，具体内容如下：MEK抑制剂（Trametinib曲美替尼）和各种CDK4/6抑制剂联用体外活性（细胞、分子）都更好在体内，Trametinib曲美替尼和Palbociclib帕布昔利布联用效果十分适宜药物联用体外抑制KP肺癌细胞的能力增强，在免疫功能正常的C57BL/6小鼠上，药物联用可显著延长荷瘤小鼠存活时间 在免疫缺陷NSG小鼠上，虽然药物联用抑制肿瘤生长作用增强，但无法显著延长存活时间，暗示免疫系统对药物疗效存在作用 开始看药物联用对免疫系统的影响，首先免疫细胞（CD45+）浸润增加 给药之后T细胞在浸润的免疫细胞中占比增加了，但T细胞的激活比例没有发生变化（+对应荷瘤小鼠，-对应无瘤小鼠） 看完比例看T细胞绝对数，联用并没引起T细胞绝 对数的变化，暗示药物联用并没有选择性的激活T细胞 看完T细胞，再看NK，发现药物联用使得荷瘤小鼠NK细胞的浸润、激活都增加了 对药物联用后NK的变化进行了深度分析，发现药物联用后，NK为激活、成熟表型 药物联用并不影响无瘤小鼠（-）的NK细胞，暗示药物联用引起的NK细胞变化是肿瘤依赖的正向的看到药物联用使得荷瘤小鼠存活时间延长，看到药物联用对NK浸润、激活的贡献，那两者存在关联吗？开始反向验证，用抗体敲掉NK之后，药物联用延长小鼠存活时间的能力显著下降，暗示药物联用延长小鼠存活时间是NK细胞依赖的 敲掉巨噬细胞或T细胞并不影响药物联用延长小鼠存活时间，佐证药物联用对NK细胞的选择性  前面发现药物联用对NK影响是肿瘤细胞依赖的（在无瘤小鼠上药物联用并不会促进NK的浸润和激活），说明是药物作用后，肿瘤细胞发生的某些变化选择性的把NK召集过来，所以开始观察药物作用后肿瘤细胞深层次的变化：CDK4/6通过促进RB磷酸化，解除RB的生长抑制作用，促进E2F调节的G1到S期转化，药物联用后RB磷酸化较单独使用Palbociclib显著降低，G1到S期转化受限，肿瘤细胞被阻滞在G1期 RB的磷酸化除了调节细胞周期，还可细胞衰老相关，而衰老又伴随引起免疫作用，因此作者测量了细胞衰老相关指标SA-β-gal，发现联合给药显著提高不同肿瘤细胞系衰老  单独给药组撤去药物后肿瘤细胞重新增殖，而联合给药组细胞不会重新增殖-细胞衰老停滞，这种联合给药引起的细胞衰老停滞是RB依赖的 分析药物干预后的肿瘤细胞基因表达发现，联合给药使细胞增殖相关基因表达降低、衰老相关基因表达提高 联合给药还使得肿瘤细胞一系列细胞因子表达升高，其中包括对NK细胞有召集作用的趋化因子CCl2、CCL4、CCl5、CXCL10等（作者进行了大量测序工作，见支撑文档，略） 联合给药后，粘附因子ICAM-1、NKG2D配体ULBP2/5/6、MICA在肿瘤细胞上表达显著提高，暗示NK对肿瘤细胞识别增多 联合给药使肿瘤细胞一系列NK可识别配体表达升高，暗示NK识别肿瘤细胞会增多，体外将NK和药物处理过的肿瘤细胞共培养发现，NK杀伤联合给药组肿瘤更多；阻断配体受体互作后对肿瘤细胞的杀伤显著减少在体内，敲除NK后，衰老的肿瘤细胞明显增多，肿瘤生长不再受联合给药抑制，暗示NK细胞对联合给药诱导产生的衰老肿瘤细胞存在清除作用 确定了联合给药引起肿瘤细胞衰老，衰老“招”了NK之后，开始找肿瘤细胞内部和衰老有关联的通路，用shRNA沉默NF-κB亚单位p65后，药物对肿瘤细胞生长的抑制作用还在，但衰老相关因子表达出现了下调尽管沉默NF-κB亚单位p65，抑制衰老，对药物直接抑制肿瘤生长的作用没有影响，但衰老受抑制后联合给药引起的NK对肿瘤细胞的杀伤显著降低（红色为NK，绿色为肿瘤细胞），暗示衰老相关因子对NK杀伤肿瘤细胞的必要性在体内，衰老受抑制的肿瘤细胞（沉默NF-κB亚单位p65）联合给药后NK细胞对肿瘤的浸润不受影响，但联合给药引起的NK激活增加作用消失，暗示衰老相关因子对NK激活的必要性 找NF-κB引起的衰老因子中调节NK细胞杀伤肿瘤细胞的细胞因子：只有阻断TNF-α联合给药引起的荷瘤小鼠存活时间延长作用才显著减弱，暗示TNF-α是调节NK的关键因子 果然，阻断TNF-α后联合给药引起的NK激活降低，杀伤肿瘤的能力降低 前面用的体内模型是异位移植瘤，在自发瘤让做一遍：联合给药显著抑制肿瘤生长、延长小鼠存活时间，这一作用是通过诱导肿瘤细胞衰老，促进其分泌TNF-α、表达ICAM1，介导NK激活发挥的 细胞内部的信号通路是一张大网，纵横交错，小分子靶向药像导弹一样精确打击，特异性破坏某一通路节点以阻断该通路从而抑制肿瘤细胞生长。这篇文章用两个分子同时卡住两个节点，除了靠自己打击肿瘤细胞外还招来了NK细胞“趁火打劫”，小分子抗肿瘤药直接向肿瘤细胞开炮，而肿瘤免疫是调动人体自身细胞向肿瘤发起进攻，这篇文章好，将两种策略建立了关联。Marcus Ruscetti, Josef Leibold, Matthew J. Bott, Myles Fennell, et al. NK cell–mediated cytotoxicity contributes to tumor control by a cytostatic drug combination [J]. Science, 2018.想了解更多CNS级期刊前沿内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

          《知否》正在如火如荼的上演着，小编看得真是热火朝天，真心圈粉盛家主母王大娘子，做起实验来更加有劲了呢。言归正传，继上次给大家介绍了为什么要做内参后，这次咱们唠唠调内参那些事。      大家心目中的理想的内参是这样吧      但是刚入门的你是不是会遇到这样的内参      这样的结果宝宝是崩溃的：    这种问题的可能性有以下几个：1     可能你抽提蛋白后没有做好定量，导致蛋白的上样量不一样。在这种情况下，按照内参的灰度值来调整上样量就行。2      当你的内参特别深时：     这时候就要注意啦，其实这时候是没有意义的，WB的定量/半定量分析是有范围的，如果做标曲的话，应该是这样：     我们应该使上样量尽量在线性范围内，浓度不能太高，这时候就应该降低上样量。3     如果你尝试了很多次，在蛋白定量很OK的情况下，内参还是不齐那就很有可能是你选的内参表达量本身就不一致，需要考虑换内参啦，你是不是一直都选Actin或Tubulin之类的呀，其实应该根据我们的实验来进行选择内参，可以参考下表：           如果你跑出来的内参差异不大的话，接下来就可以进行归一化处理/灰度值分析喽     这样就皆大欢喜喽，就可以去分析我们的实验/处理效果啦啦     在此，小编要告诉大家一个好消息（此处应有掌声）     归一化/灰度值这一步操作有GE Amersham Imager™ 680软件帮我们代劳啦~我们只需要点击分析即可。   Amersham Imager™680系列产品是ImageQuant™LAS 4000和Amersham  Imager™600系列的升级，用于凝胶和膜中蛋白质与DNA样品的数字图像的检测与分析。检测范围包括：化学发光、荧光（紫外、红、率、蓝）和白光成像。该产品将继续搭载fujifilm®先进的光学系统用户界面直观，结合GE在蛋白免疫印迹应用方面的专业知识，提供卓越出众的图像质量。 而且还可以同时成像彩色marker耶      经过本次小编的讲解，你是否对调整内参的知识有了更多了解呢？如果还是对调内参有所疑惑，这里还有往期文章可以帮你解答相关问题哦。      戳这里查看往期文章 ↓      【应用指南】如何利用内参进行定量分析     当然，除了调内参的相关知识以外，我们还会跟大家分享更多实验猿的日常。想了解更多知识及产品资料，欢迎关注我们的微信公众号，扫描以下二维码，可以查看更多应用笔记文章。

Yamato 喷雾干燥机高效干燥，一步到way      筒子们，2018年就要结束了，我很怀念它。恩，有点假，其实我更期待早日迎来2019年元旦假期才是真的。毕竟，假期就可以出去（流）浪了。但假期前这几天紧锣密鼓而来的消息都是做2019年工作计划，比如我的计划中就包括Yamato的产品计划。千里之行始于足下，雅玛拓2019年计划就始于产品学习吧。敲敲敲黑板，划划划重点了，今日重点是Yamato喷雾干燥机。它可实现液态样本瞬间加热，与水分高效分离，一步到way。1原理    喷雾干燥是系统化技术应用于物料干燥的一种方法。于干燥室中将物料经雾化后，在与热空气的接触中，水分迅速汽化，即得到干燥产品。该法能直接使溶液、乳浊液干燥成粉状或颗粒状制品，可省去蒸发、粉碎等工序。2Yamato喷雾干燥机优势轻松安装    玻璃腔均采用下固定方式，并可升降，易于清洗和实现轻松安装。精确控制     入风口、出风口能分别切换控制，便于对热敏感性物体的精确控制。回收率高     采用窄扇面喷嘴（喷头角度17°以内），降低粘壁可能，回收率高。操作规范     采用竖形菜单，顺序操作，规范操作行为，提高实验重现性和稳定性。机型丰富     水溶剂、有机溶剂均可对应；可扩展流动层造粒；并可实现喷雾干燥非常难以获得的40～100微米左右的粒子。3Yamato喷雾干燥机机型分布         更多产品信息咨询，欢迎来电来函来人来微信来短信叨叨，叨叨热线-010-83834948、63836985、13810747635。

肥胖和许多疾病息息相关，如糖尿病、心血管疾病等，有文献报道肥胖和肿瘤的发生也存在相关性，此次整理分享的文章研究的是肥胖对NK细胞抗肿瘤功能的影响，深入阐释了肥胖影响NK分子层面的机理，具体内容如下：小鼠高脂饮食1周后，相较标准饮食组，NK细胞调节脂质代谢的基因表达上调（Fabp5、Fabp4）小鼠高脂饮食8周后，相较标准饮食组，NK细胞除调节脂质代谢的基因表达上调外，调节细胞毒性的基因（颗粒酶、穿孔素）表达出现了下调从通路角度看，高脂饮食使细胞毒性、mTOR通路信号降低，PPAR、甘油酯代谢通路信号增强上面在小鼠模型上发现了高脂饮食会影响NK的代谢及细胞毒性，对人的NK进行检测发现：胖子的NK细胞数低于瘦子的胖子的NK细胞杀肿瘤能力弱于瘦子的，细胞因子的分泌能力也弱胖子NK细胞CD36表达高于瘦子，暗示PPARα/δ激活（与前面小鼠模型上观察到的一致）小鼠模型上还检测到高脂饮食使NK细胞毒性相关基因表达下调，在人的NK上观察到了同样的结果：胖子的NK颗粒酶、穿孔素水平更低对胞内脂质进行检测，发现胖子NK细胞内脂质含量更高 前面观察到肥胖影响NK细胞功能、肥胖会使NK细胞内脂质含量升高，那胞内脂质含量和NK细胞功能之间是否存在关联呢？用脂质（棕榈酸酯palmitate、油酸酯oleate）和瘦子的NK细胞共培养，发现：瘦子的NK细胞会从培养基中摄取脂质、颗粒酶和穿孔素水平降低，暗示胞内脂质水平和细胞毒性存在相关性瘦子的NK细胞和脂质（棕榈酸酯palmitate、油酸酯oleate）共培养后杀伤肿瘤细胞能力降低、细胞因子IFN-γ分泌减少，说明NK细胞内脂质水平影响NK细胞毒性有文献报道，对于T细胞颗粒酶在mTORC1通路的下游，但mTORC1信号对NK细胞毒性的影响并不清楚，前面发现高脂会抑制mTOR信号，所以作者尝试用mTORC1抑制剂干预NK细胞：mTORC1受抑制后，NK细胞因子分泌能力、杀伤肿瘤细胞能力都减弱，暗示mTORC1影响NK细胞毒性细胞因子刺激NK后，穿孔素、mTORC1共定位，饥饿或使用mTORC1抑制剂Torin1后不再共定位，也说明mTORC1影响NK细胞毒性证明了mTORC1和NK细胞毒性存在关联，那脂质是否影响mTORC1对NK细胞毒性的调节呢？和脂质（棕榈酸酯palmitate、油酸酯oleate）共培养后，穿孔素和mTORC1不再共定位，暗示脂质参与调节mTORC1信号对mTORC1下游S6进行检测，发现脂质的确影响mTORC1信号的激活再次确认脂质影响mTORC1信号：NK遇到肿瘤细胞mTORC1会激活，可加入脂质后激活受到抑制上面做的是小鼠NK，人的NK：胖子的NK细胞mTORC1信号激活受限高脂饮食模型中除了发现mTOR通路受抑制，还发现一些代谢通路出现上调，开始关注肥胖对NK代谢的影响，首先是糖摄取：肥胖使细胞因子刺激的NK细胞摄糖减少脂质使NK细胞糖酵解、氧化磷酸化能力受损，分解糖能力降低因为脂质使糖酵解、氧化磷酸化受损，NK细胞ATP生成减少为确证脂质对NK糖分解的影响，从胖子和瘦子新鲜血液中分离出NK进行检测，发现胖子的NK（细胞因子激活后）糖酵解、氧化磷酸化低于瘦子的在小鼠上再看一遍肥胖对NK的影响：糖酵解、氧化磷酸化、细胞因子IFN-γ分泌、mTORC1受抑制 在小鼠高脂饮食模型中还发现PPAR通路激活，人的NK表达PPARα和PPARδ，用PPARα/δ激动剂刺激后NK细胞脂质摄取增加、穿孔素表达降低，暗示PPARα/δ通路对NK脂质代谢、细胞毒性的调节作用 NK和脂质（棕榈酸酯palmitate、油酸酯oleate）共培养体系中加入PPARα/δ抑制剂后，NK对脂质的摄取受到抑制、穿孔素表达出现回升，再次暗示PPARα/δ通路对NK脂质代谢、细胞毒性的调节作用 看PPARα/δ信号对mTORC1、细胞呼吸的影响，发现PPARα/δ信号可抑制mTORC1信号、细胞呼吸 小鼠NK上再做一遍，看PPARα/δ信号对NK的影响：PPARα/δ信号抑制NK细胞因子生成、抑制细胞呼吸、抑制mTORC1通路 这篇文章研究的很深，前面的数据已经明确说明肥胖抑制NK细胞毒性，作者由从免疫突触形成这一深层次机制研究肥胖是如何使NK细胞毒性降低的：（棕榈酸酯palmitate、油酸酯oleate）共培养并不影响NK细胞和肿瘤细胞免疫突触的形成（粘附蛋白CD2定位聚集到了突触形成位置）；影响了MTOC（microtubule-organizing center）的极化（Pericentrin定位聚集到突触位置减少），细胞毒性物质无法通过免疫突触处的微管进入肿瘤细胞 和极化相关的高尔基体外被蛋白1（COP1）也无法定位到免疫突触，暗示脂质抑制免疫突触的极化分别对胖子和瘦子NK检测也发现肥胖不影响免疫突触的形成，只影响突触的极化（细胞毒性分子从突触进入肿瘤细胞受限） 肥胖是会抑制NK细胞的mTORC1信号和糖酵解，那么直接抑制NK的mTORC1、糖酵解是否影响免疫突触呢？mTORC1抑制剂或糖酵解抑制剂作用后，免疫突触的形成不受影响，但极化受限脂质能够抑制NK，加入脂肪酸转运抑制剂etomoxir能restore NK的糖酵解、细胞毒性、突触极化 体外实验完成开始体内实验，脂质处理的NK IFN-γ分泌能力弱，移植到荷瘤小鼠上抑制肿瘤生长能力弱 换一个体内模型：高脂饮食（HFD）和标准饮食（SFD）小鼠接种肿瘤，高脂饮食小鼠肿瘤免疫能力弱 文章设计的实验变量很简单，只是肥胖一个指标，由这个指标出发选取了很好的模型，用高脂饮食、棕榈酸酯、油酸酯干预小鼠或NK细胞，发现脂质影响PPAR通路、mTORC1通路、细胞毒性，并不是简单罗列实验数据说肥胖会影响PPAR、mTORC1、细胞毒性、免疫突触极化，而是将三者之间的关联进行了研究讨论，结合严谨的实验设计，使得文章逻辑严密、层次感很强，方法没什么新奇，但读过之后很训练思维。 Michelet X , Dyck L , Hogan A , et al. Metabolic reprogramming of natural killer cells in obesity limits antitumor responses[J]. Nature Immunology, 2018.想了解更多CNS级期刊最前沿内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！