【应用笔记】-Vero细胞的培养和破碎 

师兄师兄，能再给我一瓶Vero细胞吗？

前天不是给你了一瓶吗？

师兄，那、那一瓶被我给养坏了。

没关系，今天就给你介绍一下Vero细胞怎么养。

首先你要知道Vero细胞是什么。

Vero细胞全名叫非洲绿猴肾细胞，是从健康的成年非洲绿猴肾组织分离培养得到的。一说起Vero细胞，肯定就是要和病毒以及疫苗联系起来。因为病毒疫苗的基础是细胞培养、收获足够量的病毒，那么Vero细胞就是在培养病毒时所需的一种细胞基质。

正因为如此，Vero细胞是目前疫苗生产使用最多的一种传代细胞，目前已经广泛用于乙脑疫苗、流感疫苗、脊灰疫苗、轮状病毒疫苗、黄热病毒疫苗、甲肝疫苗、人用狂犬病疫苗等疫苗的生产。对于这个研究大方向的童鞋们来说，养好Vero细胞就应该是必备的技术基础了。

那么，如何养Vero细胞，我认为培养基的配方就是养好Vero细胞的第一准则。

培养Vero细胞的培养基配方是：85%MEM+10%胎牛血清+2%碳酸氢钠+2%谷氨酸+1%的双抗。当然有些实验室建议如果是用胎牛血清的话，可以不用10%这么高的浓度，但是，凭经验看，确实养得好的细胞都是通过好的培养基“金贵”出来的，如果细胞状态足够好，后面是可以将血清浓度降下来，这个对于细胞影响不是太大。

如果有纯的MEM，就尽量用这个，不要轻易尝试一些比如MEM-ALPHA什么的培养基，原因就两个字“麻烦”。如果本身细胞状态就不够好，你又通过更换培养基浓度或是种类来折腾细胞，那就得不偿失了。那么养好Vero细胞的第二准则是什么呢？是消化。

我们知道对于贴壁细胞而言，消化是非常重要的一个步骤。我们用胰酶消化Vero细胞的时候有两个小tips。

其一用PBS洗细胞三次以后，将胰酶加入培养瓶，10秒左右去掉胰酶，放入37℃培养箱消化，每隔10秒左右轻轻晃动培养瓶，直到观察到有流沙状细胞滑动。

其二是用PBS洗细胞三次以后，将胰酶加入培养瓶，一分钟以后倒置，将有细胞的面朝上，然后轻轻拍打，使细胞脱落。这两个小tips都很适用的，因为相对于拍打和37℃消化而言，胰酶消化的时间过长，后者引起的细胞伤害更严重。

当然除此之外，养Vero细胞和普通细胞一样：要注意无菌操作、不要看细胞太勤、注意轻拿轻放、传一瓶拿一瓶、让细胞尽可能多的享受自己最适的生活环境。做到这些，你的细胞养不好都难。

哇！师兄，听你这么一讲，我豁然开朗！

对呀，每一个实验室往往都有一套做这个东西最适用的方法~ 另外，说起制备疫苗还要介绍一下我们用到的设备之一——高压均质机。

高压均质机有什么用途呢？

刚刚说到Vero细胞是目前疫苗生产使用最多的一种传代细胞，在生产乙脑疫苗、流感疫苗、脊灰疫苗等的一个中间环节就是细胞破碎，释放出抗原。咳咳咳，敲黑板啦！我们的ATS均质机就是做vero细胞、大肠杆菌、酵母菌等细胞破碎的机器~ATS均质机细胞破碎率在95%上，对于相关参数可以直接放大用于中试和生产。

那高压均质机的破碎原理是什么？

在电机的驱动下，均质机上一个或数个柱塞做往复运动，物料在柱塞的作用下进入压力大小可调节的阀组中，在高压的作用下，物料经过特定宽度的限流缝隙（工作区）后，瞬间失压的物料以极高的流速（1000-1500米/秒）喷出，碰撞在均质阀组件之一的冲击环上，产生三种效应： 空穴效应、撞击效应、剪切效应，经过这三种效应处理过后，物料粒径可达100nm以下，从而达到破碎细胞的作用。

那其实这三种效应起到主要作用的就是空穴效应啦？

对的，所以高压对均质机的性能是一个考验，而咱们的ATS均质机工作压力加到1800bar都是妥妥滴。想了解更多关于ATS均质机可以咨询德泉的产品经理钱畅：15933969067！