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大极性组分的制备救星—亲水作用色谱HILIC

2021/01/04 13:40

阅读:251

分享:
应用领域:
制药/生物制药
发布时间:
2021/01/04
检测样品:
原料药
检测项目:
含量测定
浏览次数:
251
下载次数:
参考标准:
分离纯化

方案摘要:

目前对大极性化合物的研究在医药、天然产物、生化、食品安全等方面的应用逐渐提升,对大极性化合物的纯化需求也越来越多。然而在色谱纯化中,最常用的反相模式对大极性组分的纯化有自己的短板——保留太弱,而亲水作用色谱(HILIC)则弥补了反相色谱的缺点,它可提高对极性物质的保留从而获得满意的纯化效果。

产品配置单:

分析仪器

SepaBean machine T快速液相制备色谱

型号: SepaBean machine T-经济型

产地: 江苏

品牌: 三泰

¥10万 - 20万

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SepaBean machine U200快速制备液相色谱

型号: SepaBean machine U200-普及型

产地: 江苏

品牌: 三泰

¥10万 - 20万

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设备配件

键合相系列 SepaFlash快速液相制备色谱柱

型号:

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品牌: 三泰

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方案详情:

目前对大极性化合物的研究在医药、天然产物、生化、食品安全等方面的应用逐渐提升,对大极性化合物的纯化需求也越来越多。然而在色谱纯化中,最常用的反相模式对大极性组分的纯化有自己的短板——保留太弱,而亲水作用色谱(HILIC)则弥补了反相色谱的缺点,它可提高对极性物质的保留从而获得满意的纯化效果。

HILIC的应用模式与正相色谱很相似,其保留强度与溶质极性成正比,与流动相极性成反比。其保留机制是液-液分配、吸附作用、离子交换等多种作用组合,从而使HILIC与反相相比有独特的选择性。HILIC固定相是极性组分,可吸附极性溶剂和水相使固定相表面形成极性亲水层,基于相似相容的原理,则极性样品会与固定相相互作用,从而增加保留,所以流动相至少要含有3%的极性溶剂,这样才能在固定相表面形成亲水层。

HILIC条件下,常用的流动相体系是乙腈和水,水作为强溶剂,乙腈作为弱溶剂,某些情况下如果水相洗脱能量太强,可用极性有机溶剂代替部分水相可增加保留时间,但不可用甲醇、乙醇等极性醇类完全替换乙腈,否则会导致保留时间不充分。常用的固定相有未衍生化硅胶或杂化颗粒、酰胺基、氨基、二醇、两性离子等,其中未衍生化的硅胶应用比较广泛,尤其是应用于药物分析和纯化方面。

实验部分

 样品信息

待纯化样品来源于某制药公司样品极性很大同时要求在色谱柱中有合适的保留时间,制备量在50mg左右

 制备参数

50mg粗品溶于溶剂中,超声直至澄清状态,用注射器将溶解后的样品打进色谱柱中,具体实验参数如表1所示:

1. 样品的制备参数设置

仪器

SepaBean  machine T 

分离柱

键合相系列快速分离柱,40g球形C4键合硅胶20-45μm100

(订货号:SW-5422-40-SP)

键合相系列快速分离柱,25g

超纯无定形NH2键合硅胶40-63μm60

(订货号:SW-5501-25-IR)

流动相

A      B乙腈

A乙腈      B

进样量

50mg样品溶于1ml

50mg样品溶于1ml乙腈

流速

30ml/min

20ml/min

波长

 254nm220nm

梯度

时间/min

溶剂B%

时间/min

溶剂B%

0

0

0

0

18

0

10

20

25

10

15

20

 案例小结

根据图1和图2可以看出,样品组分在C4反相柱上不保留,在氨基柱上应用HILIC模式时不仅保留时间增加,三个组分ABC都达到了基线分离

图片2.png

 案例小结

根据图1和图2可以看出,样品组分在C4反相柱上不保留,在氨基柱上应用HILIC模式时不仅保留时间增加,三个组分ABC都达到了基线分离

图片2-1.png

结果与讨论

图片2-2.png

3. 氨基柱固定相表明键合功能基团示意图

氨基柱是由极性基团氨丙硅烷基键合在硅胶上制成的极性键合相色谱柱(参见图3),一般用于分离极性较大的组分。氨基柱一般可以正相使用,也可反相使用,但是氨基柱稳定性较差,反相模式下含水量也不能太高否则键合相易水解,当有机相比例大于70%后就是在HILIC模式下应用,此时固定相对样品的保留值与选择性都与反相模式大不相同。氨丙基固定相带正电,阴离子物质在低到中pH的条件下可通过离子交换或分配作用而加强保留。研究人员在应用氨基柱在HILIC模式下纯化样品时,可以参考上述经验。

关于SepaFlash® NH2分离柱系列产品

三泰科技推出的SepaFlash® NH2分离柱系列产品具有多种规格(参见表2)。

2. SepaFlash® NH2分离柱参数

(填料:Ultrapure irregular NH2, 40 – 63 μm, 60 Å

Item Number

Column Size

Sample Size

Max.Pressure

(psi/bar)

SW-5501-004-IR

5.9 g

5.9 mg  118 mg

400/27.5

SW-5501-012-IR

23 g

23 mg  0.46 g

400/27.5

SW-5501-025-IR

38 g

38 mg  0.76 g

400/27.5

SW-5501-040-IR

55 g

55 mg  1.1 g

400/27.5

SW-5501-080-IR

122 g

122 mg  2.5 g

350/24.0

SW-5501-120-IR

180 g

180 mg  3.6 g

300/20.7

SW-5501-220-IR

340 g

340 mg  6.8 g

300/20.7

SW-5501-330-IR

475 g

475 mg  9.5 g

250/17.2

如需进一步了解SepaBean® machine的详细规格信息,或配套使用的Flash纯化柱订购信息,请访问ChemBeanGo在线商店:https://store.chembeango.com/

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型号:SepaBean machine U200-普及型

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