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当前位置: 三泰科技 > 解决方案 > 强极性多肽样品分离纯化

强极性多肽样品分离纯化

2020/09/25 15:09

阅读:271

分享:
应用领域:
生物产业
发布时间:
2020/09/25
检测样品:
其他
检测项目:
分离纯化
浏览次数:
271
下载次数:
参考标准:
多肽,分离纯化

方案摘要:

常见的组成多肽的氨基酸有20种,根据其极性和酸碱性可以分为以下几组:非极性(疏水)、极性(不带电荷)、酸性以及碱性(参见图1)。在一条多肽序列中,如果组成该多肽的氨基酸大多为极性氨基酸(图1中粉红色标出部分),如半胱氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等,那么该多肽可能具有较强的极性,易溶于水。在对该类强极性多肽样品的反相色谱制备纯化过程中,若采用普通的C18分离柱,将会发生疏水坍塌现象(具体请参见三泰科技之前发布的应用案例——《疏水坍塌与AQ反相色谱柱的应用》)。而改良后的C18AQ柱可以很好的适用于强极性或强亲水性样品的分离纯化,在本案例中,利用某强极性多肽作为样品,在C18AQ柱上进行了分离纯化,获得了可用于下一步研究的目标产物。

产品配置单:

分析仪器

SepaBean machine 2快速制备液相色谱

型号: SepaBean machine 2-专家型

产地: 江苏

品牌: 三泰

¥20万 - 30万

参考报价

联系电话

SepaBean machine快速液相制备色谱

型号: SepaBean machine

产地: 江苏

品牌: 三泰

¥20万 - 30万

参考报价

联系电话

方案详情:

实验部分

本文中所用样品为客户实验室提供的分子量1kD的合成多肽,其氨基酸序列中含有多个极性氨基酸残基,因此样品具有很强的极性,粗品纯度约为80%。取60mg白色粉末状粗品固体,溶于5 mL纯水中,超声使样品完全溶解为澄清透明溶液。利用注射器将样品溶液上样至Flash分离柱上,样品的Flash分离纯化实验参数如表1所示。

1. Flash制备纯化实验参数设置

仪器

SepaBeanTM machine 2

色谱柱

12 g SepaFlash® C18反相分离柱

(球形硅胶, 20 - 45 μm, 100 Å, 订货号:SW-5222-012-SP)

12 g SepaFlash® C18AQ反相分离柱

(球形硅胶, 20 - 45 μm, 100 Å, 订货号:SW-5222-012-SP(AQ))

检测波长

254 nm, 220 nm

214 nm

流动相

溶剂A:水;

溶剂B乙腈

流速

 15 mL/min

20 mL/min

进样量

30 mg

洗脱梯度

时间 (CV)

溶剂B (%)

时间 (min)

溶剂B (%)

0

0

0

4

1.0

0

1.0

4

10.0

6

7.5

18

12.5

6

13.0

18

16.5

10

14.0

22

19.0

41

15.5

22

21.0

41

18.0

38

/

/

20.0

38

22.0

87

29.0

87

结果与讨论

    为了比较普通C18分离柱与C18AQ柱对极性多肽样品的分离纯化效果,我们首先利用普通C18分离柱对样品进行了Flash制备纯化实验,分离图谱如图2所示。分析图2可知,由于高比例水相造成的固定相疏水坍塌,多肽样品在普通C18柱上基本没有保留,直接被流动相洗脱下来,因此没有得到有效的分离纯化。

图片1.jpg

2. 样品在普通C18分离柱上的Flash纯化色谱图。

   接下来我们利用C18AQ柱对样品进行了Flash制备纯化,分离图谱如图3所示。分析图3可知,多肽样品在C18AQ柱上获得了有效地保留,粗品中的杂质也得到了有效地分离。将收集组分进行冻干处理后,经HPLC分析,所得纯化产物的纯度约为98.2%,可以用于下一步的研究开发。

图片1.jpg

3. 样品在C18AQ分离柱上的Flash纯化色谱图。

此,对于强极性或亲水性很强的样品的分离纯化,SepaFlash® C18AQ反相分离柱配合SepaBean® machine快速液相制备色谱系统,为此类样品的快速分离纯化提供了快捷高效的解决方案。

关于SepaFlash® C18AQ反相分离柱系列产品

三泰科技推出的SepaFlash® C18AQ反相分离柱系列产品具有多种规格(参见表2)。

2. SepaFlash® C18AQ反相分离柱参数

(填料:High-efficiency spherical C8(AQ), 20 – 45 μm, 100 Å

Item Number

Column Size

Flow Rate

(mL/min)

Max.Pressure

(psi/bar)

SW-5222-004-SP(AQ)

5.4 g

5-15

400/27.5

SW-5222-012-SP(AQ)

20 g

10-25

400/27.5

SW-5222-025-SP(AQ)

33 g

10-25

400/27.5

SW-5222-040-SP(AQ)

48 g

15-30

400/27.5

SW-5222-080-SP(AQ)

105 g

25-50

350/24.0

SW-5222-120-SP(AQ)

155 g

30-60

300/20.7

SW-5222-220-SP(AQ)

300 g

40-80

300/20.7

SW-5222-330-SP(AQ)

420 g

40-80

250/17.2


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C18AQ柱在强极性多肽样品分离纯化方面的应用.docx
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