【飞诺美色谱】猪肉和牛肉中五氯酚钠残留量的测定

摘要：本实验根据 GB 23200.92-2016，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱的方法，在多

反应监测(MRM)模式下建立了动物源性食品中五氯酚钠残留量的测定方法。样品中的五氯

酚钠经异丙醇提取，Cleanert PAX 固相萃取柱净化，Venusil MP C18 色谱柱（3.0 × 50 mm，

3 µm，100 Å）分离，5 mmol/L 乙酸铵水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，外标法进行定

量。结果表明，五氯酚钠添加量为 2.5 µg/kg 条件下，猪肉基质回收率高于 80%，牛肉基质

回收率高于 70%，能够满足检测要求。

关键词：五氯酚；GB 23200.92-2016；Cleanert PAX；

样品信息

表 1. 五氯酚钠信息

实验部分

仪器、试剂与材料

试剂材料

色谱纯甲醇；分析纯氢氧化钠、分析纯异丙醇；色谱纯乙酸铵；色谱纯甲酸

固相萃取小柱：Cleanert PAX (60 mg/3 mL)

样品制备

溶液配制5%氨水溶液：量取 200 ml 浓氨水（25%），转移入 1000 mL 容量瓶，用水

定容至刻度，混合均匀。

4%甲酸甲醇溶液：量取 10 ml 甲酸，转移入 250 mL 容量瓶，用甲醇定容至

刻度，混合均匀。

2%甲酸甲醇水溶液：取一定量 4%甲酸甲醇溶液与水等体积混合均匀。

样品提取

称取 2 g 均质好的样品置于 50 mL 离心管中，加入 2 mL 纯净水，涡旋混合 ；

加入 400 µL 10 mmol/L NaOH，涡旋混合；加入 4 玻璃珠粒均质子及 5 mL 异丙

醇剧烈震荡 2 min，再次加入 5 mL 异丙醇剧烈震荡 2 min 后再次加入 5 mL 异丙

醇剧并烈震荡 2 min；并于 8000 rpm 条件下离心 5 min，取上清液备用。

样品净化

先将 Cleanert PAX (60 mg/3 mL)小柱分别用 5 mL 甲醇、 5 mL 水活化平衡

后，将上清液过柱，弃去流出液。依次用 5 mL 5%氨水、5 mL 甲醇、5 mL 2%

甲酸的甲醇水溶液淋洗，淋洗液完全通过小柱后，弃去流出液，用真空泵抽干固

相萃取柱 5 min 以上。以 5 mL 4%甲酸的甲醇溶液洗脱，洗脱液在 40℃条件下氮

吹干，用 1 mL 甲醇复溶，溶液以 0.22 µm PTFE-Q 滤膜过滤上样。

基质混合标准工作溶液配制

取高浓度五氯酚钠标准溶液，用空白样品基质溶液稀释成 5 ng/mL 的基质混

合标准工作溶液。

色谱条件

流动相：A 相：5 mmol/L 乙酸铵水溶液；B 相：甲醇；

流速：0.4 mL/min；

柱温：30.0℃；

进样量：20 µL。

梯度洗脱：见表2

表 2. 液相色谱梯度洗脱条件

质谱条件

离子源：电喷雾离子源

扫描方式：负离子扫描

电喷雾电压：-4500 V

雾化气压力：35 psi

气帘气压力：20 psi

辅助气压力：60 psi

离子源温度：550℃

采集方式：多反应监测(MRM)

Q1、Q3均为单位分辨率

质谱参数(见表3)

表 3. 五氯酚的质谱参数

实验结果

表 4. 猪肉基质五氯酚钠加标回收实验结果

表 5. 牛肉基质五氯酚钠加标回收实验结果

图 1. 5 ng/ml 五氯酚钠标准溶液色谱图

图 2. 猪肉基质空白色谱图

图 3. 2.5 µg/kg 猪肉基质加标色谱图

图 4. 5 ng/mL 猪肉基质标准溶液色谱图

图 5. 牛肉基质空白色谱图

图 6. 2.5 µg/kg 牛肉基质加标色谱图

图 7. 5 ng/mL 牛肉基质标准溶液色谱图

结果与讨论

均质后的组织存在遇到提取溶剂紧缩的情况，这给提取造成了难度，因此本

实验先将均质后样本吸水后再加入均质子，剧烈震荡后分步添加提取溶剂，避免

了提取不充分的情况。如果操作者希望能够缩短实验中异丙醇过柱时间，可以尝

试进行减压浓缩后过柱。由于时间的原因本实验未进行减压浓缩过柱测试。

使用有刻度的氮吹管时可参照国标的氮吹定容方式，但请注意校准氮吹管容

积。该方式能够显著缩短干燥周期，而且对回收率的提高可能会有所帮助。

结论

本实验根据 GB 23200.92-2016 建立了动物源食品中五氯酚残留量的

LC-MS/MS 检测方法。五氯酚存在与蛋白高比例结合的问题，本实验通过改变提

取溶剂与 pH 调节剂对于加标量为 2.5 µg/kg 的猪肉样品进行了检测，回收率高于

In te n s ity , c p s80%；加标量为 2.5 µg/kg 的牛肉样品进行了检测，回收率高于 70%；符合检测

标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动

物源性食品中的五氯酚残留量。

附：相关产品