Agilent 1290 Infinity II 制备型液相色谱

Pentaerythritol tetrakis(3-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) propionate) is a highly effective sterically hindered primary phenolic additive which protects polymers against thermo-oxidative degradation.

With the Agilent 1260 Infinity automated LC/MS purifi cation system, the purification process has reached a new level of automation. A tailored-gradient profile for each target compound was generated to increase the resolution, increase columnload, and reduce the cycle runtime. The Agilent automated purifi cation software automatically generated the different tailored-gradient profi les. This Technical Overview describes an automated purifi cation process of a compound mixture, and shows cross-platform compatibility between different analytical LC systems and the Agilent 1260 Infi nity automated LC/MS purifi cation system. A standard mix was analyzed using four different analytical (U)HPLC systems, using different gradient profi les and different column dimensions. The four analytical result fi les were used to calculate gradient profi les, and purify target compounds. Through the use of this intelligent software algorithm, we obtained automated tailored-gradient profi les for all four samples using the purifi cation process. We purified 100 mg of a sample mix containing 24 mg of the target compound. We obtained 90 % recovery and 99 % purity of the target compound after purifi cation.

The Agilent 1290 Infinity II Preparative Open-Bed Fraction Collector sets new benchmarks in efficient and flexible fraction collection. The fraction bed can be equipped individually with six containers holding fraction tubes in eight different sizes. Three drawers provide easy access to collected fractions even during a run. Peak- and time-based fraction modes have been extended to eight combined modes, enabling the collection of volume or time slices, and including two recovery collection modes. Trigger combinations of ultraviolet (UV) with mass-selective detection (MSD) signals now include an AND/OR logic that gives extra flexibility for challenging purifications. This Technical Overview provides a deeper insight and typical application examples of the fraction modes, including collection results.

The Agilent 1290 Infinity II Preparative Open-Bed Fraction Collector was developed and optimized to enable efficient fraction collection with extended capacity and flexibility while providing the highest recovery and purity of the collected fractions. This Technical Overview demonstrates the performance of the 1290 Infinity II Preparative Open-Bed Fraction Collector when peak-based fraction collection is used. Using only the ultraviolet (UV) detection signal or a combination of UV and mass-selective detection (MSD) signals as a fraction trigger, purity and recovery of collected fractions are determined. Furthermore, the peak-based, collecting time slices fraction mode is discussed from a quantitative point of view.

药物杂质是活性药物成分 (API) 或药品制剂中不希望存在的化学成分。原料药中的杂质可能源于合成过程或原料、中间体、试剂、溶剂、催化剂以及反应副产物等其他来源。在药品开发过程中，杂质可能： • 由于原料药固有的不稳定性而形成 • 由于与加入的辅料不相容而产生，或 • 与包装材料和容器密封系统 (CCS) 相互作用而产生 原料药中各种杂质的含量决定了最终成品药物的安全性。因此，杂质的鉴定、定量、定性和控制已成为药物开发过程的关键组成部分。 很多监管机构都在关注杂质的控制： • 国际协调会议 (ICH) • 美国食品药品监督管理局 (USFDA) • 欧洲药品管理局 (EMA) • 加拿大药品与健康管理局 • 日本药物和医疗器械管理局 (PMDA) • 澳大利亚卫生和老龄治疗商品管理局 此外，很多官方药典（如英国药典 (BP)、美国药典 (USP)、日本药典 (JP)、欧洲药典 (EP) 和中华人民共和国药典 (ChP)）也越来越多地加入了对 API 和药品制剂中杂质限量水平的规定。这些法规以暴露限值为依据，因此必须对施用时最终剂型中的污染物浓度进行控制。在实践中，这意味着药物制造商必须进行风险评估，考虑到制造后（如包装、运输和 CCS）的污染源以及来自原料和生产过程的污染。

Legal regulations demand that organic impurities in pharmaceuticals must be identified and characterized. The isolation of impurities from a pharmaceutical product can be done by preparative-scale liquid chromatography (LC). This Application Note demonstrates the purification of acetaminophen and six known impurities using an Agilent 1290 Infinity II Preparative LC/MSD System. For high throughput and sample load, a column of 50 mm inside diameter (id) is operated at a solvent flow of 118 mL/min. Mass-based fraction collection is combined with UV detection for highest selectivity. The performance of the fraction collection is assessed by determining the purity of collected fractions and the recovery of the active pharmaceutical ingredient (API).

制备液相色谱是目前药物开发中纯化化合物所选择的方法。大量粗品用通用方法得到纯化，采用短和快速梯度在约10分钟之内完成。虽然大部分化合物可以通过这些方法得到分离，但分离和纯化立体异构体或非对映异构体需要更长的运行时间，采用等度条件或非常平缓的梯度。在本应用报告中，我们报道了如何在一次运行中多次进样以提高样品产量，节省了宝贵的时间和流动相。

蛋白质的产率和纯度是衡量纯化是否成功的重要指标。除有效的色谱分离外，配置良好、可靠的仪器也能影响纯化的成功。制备型反相(RP)液相色谱由于具有高分离能力，经常被用做多肽和小分子亲水蛋白纯化流程的最后一步。虽然大家都知道反相液相色谱所用的溶剂条件会使蛋白结构变性，但也能通过调节适当的条件再使其复性，特别是小分子蛋白。Agilent 1100系列纯化系统是设计良好、合适的反相色谱的系统。

这是一个用Agilent 1100系列纯化系统AS和PS对红三叶中刺芒柄花素和其它植物性雌激素进行分析型和制备型分离的例子。分析型放大方法可用于在Agilent 1100系列纯化系统AS上分离复杂植物粗提物中的化合物。在这个方法的基础上，进行了按色谱峰收集馏分的制备型分离。 • 为了获得更多的植物雌激素物质，使用了Agilent 1100系列纯化系统的馏分合并功能 • 通过对馏分的再分析测定了所得化合物的纯度 • 根据分析结果将方法放大 • 为了在一次运行中得到更大量的目标化合物，在Agilent 1100系列纯化系统PS上用两种不同的色谱柱重复了纯化方法 制备规模的结果与在分析型系统上得到的结果相当。

化合物库含有需要筛查生物活性的一系列结构类似的化合物。虽然，组合化学和常规合成化学相比，简化了合成过程，但仍然需要从其杂质和反应副产物中对化合物进行纯化。

Agilent 1290 Infinity II 制备型 Open-Bed 馏分收集器为高效灵活地进行馏分收集树立了新标杆。馏分床可单独配备 6 个容器，容纳 8 种不同尺寸的馏分管。三个抽屉让您即使在运行期间也能轻松获取已收集的馏分。基于峰和时间的馏分模式已扩展至八种组合模式，能对体积或时间片段进行收集，且包括两种回收收集模式。紫外 (UV) 和质量选择检测 (MSD) 信号的触发组合现包含一个 AND/OR 逻辑算符，为挑战性纯化提供了额外的灵活性。本技术概述将提供馏分模式（包括收集结果）更深层次的介绍以及典型应用示例。

本应用简报介绍了一种 UHPLC/Q-TOF/MS 方法，用于筛查复杂食品基质中的 240 种农药及农药代谢物。该方法获益于使用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 系统获得的更高的色谱分离度以及安捷伦喷射流离子源带来的改进的电离能力。更重要的是，分析物的成功筛查通过 Agilent 6545 Q-TOF LC/MS 系统固有的灵敏度改进和离子传输调谐实现，从而促进易碎裂的有机小分子实现最佳的离子传输。采用靶向 MS/MS 采集进行分析物定量分析和确证。选择红茶基质代表复杂基质，并选择鳄梨基质代表脂类含量高的食品。结果表明 6545 Q-TOF LC/MS 系统可改善对有机小分子的检测，能够对大多数目标农药进行筛查和定量分析，且定量限低于欧盟委员会法规规定的最大残留限量 (MRL)。

鉴定新药候选药物代谢产物是药物开发过程中的一项基本工作。在早期药物发现与优化中发挥着重要作用，由此找到具有更好药代动力学和累积特性的候选药物。药物开发后期，鉴定实验动物和再后来鉴定人体的药物代谢产物，是法规要求的安全性实验。人体实际代谢的研究通常要在临床研究中定量服用放射性标记药物。志愿者服用候选新药后，收集人体代谢初步数据，是 I 期临床研究的内容。这时候需要将代谢产物从大体积的生物基质中分离出来，这个例子中的基质是人尿，然后用核磁共振（NMR）波谱学等技术进行结构鉴定。

鉴定新药候选药物代谢产物是药物开发过程的一项基本工作。在早期药物研究与优化中发挥着重要作用，由此找到具有更好药代动力学和预计特性的候选药物。药物开发后期，鉴定实验动物和再后来鉴定人体的药物代谢产物，是法规要求的安全性实验。在药物开发中，药物代谢研究通常是用放射性标记的候选药物完成的，所以很容易用放射化学检测鉴定相关代谢产物。代谢物通常是以低浓度存在于非常复杂的基质中，如尿、胆汁、血浆，要用核磁共振(NMR)波谱等技术对代谢物进行准确鉴定，就必须先对其进行分离纯化。