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[color=#333333]用岛津的凝胶渗透色谱(色谱柱 TSK-gel GW PWXL2500)和软件,算酶解寡糖分子的分子量, 结果相差很大,用其他方法算, 大约1000-2000Da(数均),而用凝胶色谱法大约只有200-300。几乎就是差一个数量级。 但是,多个样品之间的变化规律,两种方法测是一致的,( 哪个大,哪个小,大多少,算出来都一样)。怀疑是软件计算出了什么问题,但是我找不出来。[/color][color=#333333]我用的是右旋糖酐做分子量标准,是个比较通用的标准了, 使用的方法,是测别的糖的方法,和文献里优化的方法不同,但是感觉应该还能用,最主要的几个峰还是有的。[/color][color=#333333]在此请问大家出的是什么问题,谢谢大家了。 [/color][color=#333333][img=,580,305]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905081545541636_4140_1849104_3.jpg!w580x305.jpg[/img][img=,580,148]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905081545545297_131_1849104_3.jpg!w580x148.jpg[/img][img=,580,148]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905081545548297_2890_1849104_3.jpg!w580x148.jpg[/img][/color]
凝胶色谱法GPC[b]分析原理:[/b]样品通过凝胶柱时,按分子的流体力学体积不同进行分离,大分子先流出[b]谱图的表示方法:[/b]柱后流出物浓度随保留值的变化[b]提供的信息:[/b]高聚物的平均分子量及其分布根据所用凝胶的性质,可以分为使用水溶液的凝胶过滤色谱法(GFC)和使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法(GPC)。
凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术,是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术,由于设备简单、操作方便,不需要[url=http://baike.baidu.com/view/435064.htm]有机溶剂[/url],对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称[url=http://baike.baidu.com/view/1395520.htm]分子排阻色谱法[/url]。凝胶色谱法主要用于[url=http://baike.baidu.com/view/328669.htm]高聚物[/url]的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物,又可分为凝胶过滤色谱(GFC)和[url=http://baike.baidu.com/view/1966792.htm]凝胶渗透色谱[/url](GPC)。 GFC一般用于分离水溶性的大分子,如[url=http://baike.baidu.com/view/728282.htm]多糖类[/url]化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列,洗脱溶剂主要是水。凝胶渗透色谱法主要用于有 机溶剂中可溶的高聚物 ([url=http://baike.baidu.com/view/237319.htm]聚苯乙烯[/url]、聚氯已烯、[url=http://baike.baidu.com/view/11277.htm]聚乙烯[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/591731.htm]聚甲基丙烯酸甲酯[/url]等)相对分子质量分布分析及分离,常用的[url=http://baike.baidu.com/view/65842.htm]凝胶[/url]为交联聚苯乙烯凝胶,洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布,同时根据所用凝胶填料不同,可分离油溶性和水溶 性物质,分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。近年来,凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。化学结构不同但相对分子质量相近的物质,不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对勿子质量分布测试。目前已经被[url=http://baike.baidu.com/view/24503.htm]生物化学[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/2461.htm]分子生物学[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/264316.htm]生物工程学[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/2011973.htm]分子免疫学[/url]以及[url=http://baike.baidu.com/view/7490.htm]医学[/url]等有关领域广泛采用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。