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目前血细胞分析仪检测原理包括电学和光学两种,电学包括电阻抗法和射频电导法,光法包括激光散射法和分光光度法。电阻抗法根据Coulter原理及血细胞非传导的性质,以电解质溶液中悬浮的血细胞在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础,进行血细胞计数和体积测定。当有细胞通过小孔时,由于电阻增加,于瞬间引起电压变化及通过脉冲。细胞体积越大,脉冲振幅越高,细胞数量越多,脉冲数量也越多。脉冲信号经过:放大、阈值调节、甄别、整形、计数而得出细胞技术结果。电阻抗法可准确量出细胞(或类似颗粒)的大小,是三分类血液分析仪的主要应用原理,并与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。激光散射法应用了流式细胞术检测原理及细胞通过激光束被照射时,产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。对经信号检测器接受的散射光信息进行综合分析,即可准确区分正常类型的细胞。激光散射法在区别体积相同而类型不同的细胞特征时,比电阻抗法分群更加准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。射频电导法是用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞的导电性,提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质、颗粒成分等特征信息。射频电流是每秒变化大于10000次的高频交流电磁波,能够通过细胞壁。分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测血红蛋白的原理,它利用血红蛋白与溶血剂在特定波长下比色,吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成比例。
全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗?库尔特原理库尔特原理指出:悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时,在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化,产生电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。这主要是根据血细胞与稀释剂相比,血细胞是不良导体的特性而提出的。起初,原始的库尔特计数器只能计算和测量红细胞。后来,随着技术的不断发展和设备的不断改进,临床医生还可以利用它来计算和测量白细胞。到20世纪70年代,技术的进一步发展使技术人员能够分离血小板。全自动细胞计数器的演进传统意义上的血细胞计数器是通过研究外周血涂片,使用血细胞仪和白细胞分类计数而手动完成的(也称为100个细胞涂片分类,手动白细胞分类计数或手动计数器)。根据库尔特原理导致了库尔特计数器的发明,随后又开发出了技术先进的全自动血液细胞分析仪。自此,仪器的技术水平得到不断提高。由于技术的进步,一台仪器可以分析越来越多的参数,从而大大提高了血液检测的效率,减少在多台仪器上分析一个样品的情况。现代的细胞分析仪能够测量白细胞(WBC)、白细胞分类(五分类)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、平均红细胞体积(MCV)、平均血小板体积,并且可以自动计算血细胞比容(HCT)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度,血小板比积和血小板分布宽度。自动分析仪的其他重要因素包括它们运行的速度和每批次可以处理的样本数量(大处理容量可以减少周转时间)。即时检验(POCT)即时检验([/
[align=center][font='Segoe UI', sans-serif] -[/font]基于阻抗方法实时、无标记、长期监测细胞表型[/align][align=center]([color=#333333]可用于[/color][b][font=宋体][color=#F76464]细胞增殖、肿瘤免疫、细胞毒性及活力检测、药物筛选、信号通路[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464](GPCR/CFTR)[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]、细胞间相互作用[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464] ([/color][/font][font=宋体][color=#F76464]屏障功能[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464])[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]、病毒学研究及细胞迁移[/color][/font][/b][color=#333333]等细胞表型研究。[/color])[/align][font=等线][size=16px]细胞表型是涉及基因和蛋白表达的多个细胞过程的集合体,这些过程导致细胞特定的形态和功能。细胞表型检测主要类型有:[b]细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭、活力、信号通路及屏障功能[/b]等。[/size][/font][font=等线][/font][align=left][b][font=宋体][color=#333333]基本原理:[/color][/font][/b][font='Segoe UI',sans-serif][color=black] [/color][/font][font=宋体][color=black]将细胞样本置于[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=black]CytoView-Z[/color][/font][font=宋体][color=black]阻抗板中(底部埋入电极的[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=black]96[/color][/font][font=宋体][color=black]孔培养板)进行培养,当细胞贴附于电极并伸展开后,将微小的电信号施加于电极上,细胞间形成的联接将阻挡这些电信号的通过,导致阻抗值的读数增加,而细胞结构形态上的细微改变(比如源于受体介导的信号传递或细胞形态学变化)也会影响阻抗值。也就是说,细胞的贴壁、黏附、增殖及形变等过程都会引起阻抗的变化,细胞的增殖数量与阻抗呈现一个正相关的关系。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black][img=,553,180]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/12/202112291044022777_5012_4146479_3.jpg!w553x180.jpg[/img][/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]阻抗检测会计算有多少电信号(上图中青色箭头所示)被电极-细胞的界面所阻挡。当电极未被覆盖时,电信号能轻松穿过,这时阻抗值比较低。当细胞盖住电极时,能够通过的电信号就变少了,相应的阻抗值就会增大。当细胞死亡或者脱离电极时,阻抗值就会恢复到基线水平。[/color][/font][/align][font=等线][/font][align=left][font=宋体][color=black]阻抗方法相比于传统的标记方法,具有[/color][/font][/align][align=left][b][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464]1.[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]灵敏度高[/color][/font][/b][/align][align=left][font=宋体][color=black]能够检测出成像技术难以捕捉的、微小的细胞形态、构象变化;[/color][/font][/align][align=left][b][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464]2.[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]长时间持续监测[/color][/font][/b][/align][align=left][font=宋体][color=black]不会错过药物反应时间框,在给药前可通过增殖曲线判断细胞状态;[/color][/font][/align][align=left][b][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464]3.[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]无标记、原位[/color][/font][/b][/align][align=left][font=宋体][color=black]测量过程完全不会影响细胞生物学特性,无需优化抗体用量、染料浓度;[/color][/font][/align][align=left][b][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464]4.[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]孵育时间等参数[/color][/font][/b][/align][align=left][font=宋体][color=black]自动采集数据,中间无需手动操作。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]目前阻抗平台可用于[/color][/font][b][font=宋体][color=#F76464]细胞增殖、肿瘤免疫、细胞毒性及活力检测、药物筛选、信号通路[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464](GPCR/CFTR)[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]、细胞间相互作用[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464] ([/color][/font][font=宋体][color=#F76464]屏障功能[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464])[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]、病毒学研究及细胞迁移[/color][/font][/b][font=宋体][color=black]等细胞表型研究。[/color][/font][/align]