流式细胞仪定量原理

流式细胞仪在生命科学领域尤其医学中应用非常广泛，是一种能够对细胞进行相关处理的仪器，并且能够对细胞进行必要的分析。小编为大家介绍一下流式细胞仪的概念、发展历史、特点、分类、基本原理以及应用。　　流式细胞术与流式细胞仪的概念　　流式细胞术(flow cytometry , FCM)：是一种定量分析技术，是指利用流式细胞仪检测细胞特异性标记荧光信号而测定细胞的多种生物物理性质的方法，同时也是一项可以把具有某相同荧光信号特性的某些细胞亚群从多细胞群体中分离和富集出来的细胞分析技术。点击查看更多细胞流式仪　　流式细胞仪(flow cytometer)：是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术和抗原抗体检测技术为一体的新型高科技仪器 是以激光为光源、检测生物学颗粒理化性质的仪器。　　流式细胞仪的发展历史　　1、1934年，Moldavan使悬浮的红细胞从一个毛细玻璃管中流过，每个通过的细胞可被一个光电装置记录下来。这就是流式细胞仪的雏形。　　2、1965年，Kamentsky用紫外吸收和可见光散射两个参数同时测量未染色细胞，给出细胞中核酸的含量和细胞大小。奠定了多参数流式细胞测量的基础。　　3、1967年，Van Dilla和Los Alamos采用了层流流动室和氩激光器，开发出了液流束、照明光轴、检测系统三者相互垂直的流式细胞仪。这成为目前各种流式细胞仪的基础。　　4、1969年，Fulwyler利用静电墨水喷射液滴偏转技术，建立了流式细胞分选术。Ehrlich和Wheeless利用飞点扫描技术和缝扫描技术使零分辨率的流式细胞仪变成了低分辨率的流式细胞仪。　　5、20世纪70年代，随着Kohler和Milstein成功提出了单克隆抗体技术和荧光标记技术，为特异研究和分析细胞奠定了良好的基础。　　6、1973年，美国BD公司和美国斯坦福大学合作，研制开发并生产了世界上第一台商用流式细胞仪FACS I。　　7、20世纪80年代，流式细胞仪的数据采集、存储、显示、分析日趋完善，随着样品制备方法的增加，新的荧光染料和细胞标记物的出现，使流式细胞仪的应用范围逐渐扩大。　　8、20世纪90年代，与之配套的标本制备仪和自动进样器的问世，以及适合临床应用的单克隆抗体的增加，使流式细胞仪逐渐从科研单位进入医院的中心实验室和检验科，成为现代化的临床检验仪器的一部分。　　流式细胞仪的特点　　1、高速度：每秒可检测1 000-5 000个细胞。　　2、高灵敏度：每个细胞只要带有1 000-3 000个荧光分子就能检出，两个细胞之间有5%的差别就可区分出来，光散射的灵敏度为0.3um。　　3、高精度：在细胞悬液中测量细胞，比其他分析技术的变异系数更小，分辨率高。　　4、高纯度：分选细胞的纯度可大于99%以上。　　5、多参数：可同时定量检测单个细胞的DNA等多个参数。　　流式细胞仪的分类　　1、根据功能不同，可分为临床型和综合型(科研型)。　　2、根据有无细胞分选功能，可分为流式细胞分析分选仪和流式细胞分析仪。　　3、根据结构不同，可分为一般流式细胞仪(零分辨率流式细胞仪)和狭缝扫描流式细胞仪(高分辨率流式细胞仪)。前者的激光光斑为椭圆形，光斑直径大于被检细胞体积。后者激光光束为一条线状扁平光斑，直径在3-5um。　　流式细胞仪的基本原理　　1、将悬浮分散的单细胞悬液，经特异性荧光染料染色后，放入样品管。　　2、在气体压力的作用下，悬浮在样品管中的单细胞悬液形成样品流垂直进入流式细胞仪的流动室，流动室充满鞘液，在鞘液的约束下，细胞排列成单列由流动室的喷嘴喷出，成为细胞液柱。　　3、液柱与水平方向的入射激光束垂直相交，相交点称为测量区。通过测量区的细胞受激光照射后发出荧光，同时产生光散射。这些信号分别被成90℃角方向放置的光电倍增荧光检测器和前向角放置的光电二极管检测器接收，经过转换器转换为电子信号。　　4、电子信号经模/数转换输入计算机。计算机通过相应的软件储存、计算、分析，就可以得到细胞的大小和活性、核酸含量等理化指标。　　流式细胞仪的应用　　1、DNA倍体分析　　DNA分析是流式细胞仪最初且是现在应用最广检测项目。由于恶性细胞DNA含量通常与正常细胞不同，存在异倍体细胞，所以现有很研究评价异倍体细胞与肿瘤恶性度及其预后的关系。DNA含量检测还可提供细胞周期方面的信息，这在细胞生物学中运用很广泛。特别地，它可表示出细胞毒性药物对细胞作用过程。这些DNA检测还可与细胞表面标志物标记同时进行，这样在细胞混合培养中，可通常追踪表达特异标志物的细胞显示其生长周期情况。所有方法都是基于染料能与核酸起特异的化学反应并发射出荧光，常用的染料为PI，DAPI。　　在该领域Partec公司的 CyFlow PA是一枝独秀。　　2、细胞生存能力实验　　使用Heochest 33342染料与DNA特异性结合，后因细胞活力不同染料的结合程度也各异，故可评估细胞的活性度。　　3、计数外周血中检测网织红细胞　　使用TO染料能够特异性地与RNA结合，结合系数高达3000，故具有很好的性价比。　　4、外周血、骨髓采集物中CD34阳性干细胞计数，临床上用于骨髓移植前干细胞数理的测定。使用标准ISHAG方案，需要DNA或其他核染料占用FITC通道，PE标记CD34抗体，PE-CY5标记CD45抗体。　　5、交叉淋巴细胞、粒细胞毒实验　　检测识别供体血清中免疫球蛋白与受体粒细胞之间是否存在反应有着重要临床意义，因为这种反应会导致移植后发热、移植后肺损伤及免疫性粒细胞缺乏症。流式细胞仪可检测全血样本与血清孵育后粒细胞上结合的人免疫球蛋白。FITC标记人免疫球蛋白抗体、PE标记粒细胞表面标志物、PE-CY5标记HLA抗体。　　6、血小板自身抗体检测　　血小板自身抗体识别人血小板抗原，会引起各种临床相关症状，如新生儿自免性血小板减少症、输血后紫癜、难治性血小板减少。流式细胞可快速准确地检测血小板自身抗体。FITC标记抗人免疫球蛋白抗体、PE标记识别血小板抗体。　　7、移植交叉配型　　原细胞毒实验，主要用于避免移植物超急性排拆反应。流式细胞仪用于监测T或B细胞是否受到受体血清中免疫球蛋白攻击，作为HLA配型前的预实验。流式细胞仪因其高精确性已成为该领域内的金标准。FITC标记抗人免疫球蛋白抗体、PE标记识别T细胞CD3或B细胞CD29抗体。　　8、检测细胞经抗原或细胞有丝分裂刺激后活化效应淋巴细胞早期活化指标CD69可用来检测免疫治疗效果。流式细胞使用三色分析可监测淋巴细胞各亚群活化情况：FITC标记的CD3抗体、PE标记的CD8抗体、PE-CY5标记的CD69抗体。　　9、细胞增殖状态检测　　核增殖抗PCNA、Ki67、BrdUrd用于衡量细胞增殖分裂状况，在评估肿瘤预后有重要意义。为些标志物的检测一般同细胞表面标志物同时检测。FITC标记PCNA或Ki67或BrdUrd，PE或(并)PE-CY5标记细胞表面标志物。　　10、染色体分析　　流式细胞仪染色分析运用两种特异性染料：Hoechest33258与核苷酸AT结合 Chromomycin A3与GC相结合。从而在双参数坐标上根据染色体ATCG含量的不同识别各种染色体。平时进行的染色体分析耗时且需要操作者极具经验，而用流式细胞仪时可快速地识别出异常染色体，如加配分选系统可将这些异常染色体分选出来作进一步分析。　　以上，就是小编为您介绍的流式细胞仪的概念、发展历史、特点、分类、基本原理以及应用。如今医疗的进步离不开医疗设备的发展与进步，流式细胞仪就是集中于测量发育异常的细胞遗传物质的数量变化，该设备的鉴定对种质资源、物种进化、物种分类、生态学研究、倍体育种等方面具有重要意义。

一、项目基本情况项目编号：440001-2022-38768项目名称：广东医科大学购置分选型流式细胞仪与实时荧光定量PCR仪项目采购方式：公开招标预算金额：3,850,000.00元采购需求：合同包1(广东医科大学购置分选型流式细胞仪与实时荧光定量PCR仪项目):合同包预算金额：3,850,000.00元品目号品目名称采购标的数量（单位）技术规格、参数及要求品目预算(元)最高限价(元)1-1其他专用仪器仪表分选型流式细胞仪1(台)详见采购文件3,250,000.00-1-2其他专用仪器仪表实时荧光定量PCR仪1(台)详见采购文件600,000.00-本合同包不接受联合体投标合同履行期限：自合同签订之日起90日内完成供货、安装调试和验收合格。二、申请人的资格要求：1.投标供应商应具备《政府采购法》第二十二条规定的条件，提供下列材料：1）具有独立承担民事责任的能力：在中华人民共和国境内注册的法人或其他组织或自然人，投标（响应）时提交有效的营业执照（或事业法人登记证或身份证等相关证明）复印件。分支机构投标的，须提供总公司和分公司营业执照复印件，总公司出具给分支机构的授权书。2）有依法缴纳税收和社会保障资金的良好记录：提供投标截止日前12个月内任意1个月依法缴纳税收和社会保障资金的相关材料。如依法免税或不需要缴纳社会保障资金的，提供相应证明材料。3）具有良好的商业信誉和健全的财务会计制度：供应商必须具有良好的商业信誉和健全的财务会计制度（提供财务状况报表[报告]或基本开户行出具的资信证明）。4）履行合同所必需的设备和专业技术能力：按投标（响应）文件格式填报设备及专业技术能力情况。5）参加采购活动前3年内，在经营活动中没有重大违法记录：参照投标函相关承诺格式内容。重大违法记录是指供应商因违法经营受到刑事处罚或者责令停产停业、吊销许可证或者执照、较大数额罚款等行政处罚。（根据财库〔2022〕3号文，“较大数额罚款”认定为200万元以上的罚款，法律、行政法规以及国务院有关部门明确规定相关领域“较大数额罚款”标准高于200万元的，从其规定）2.落实政府采购政策需满足的资格要求： 无。3.本项目的特定资格要求：合同包1(广东医科大学购置分选型流式细胞仪与实时荧光定量PCR仪项目)特定资格要求如下:(1)供应商未被列入“信用中国”网站(www.creditchina.gov.cn)“记录失信被执行人或重大税收违法案件当事人名单或政府采购严重违法失信行为”记录名单；不处于中国政府采购网(www.ccgp.gov.cn)“政府采购严重违法失信行为信息记录”中的禁止参加政府采购活动期间。（以资格审查人员于投标（响应）截止时间当天在“信用中国”网站（www.creditchina.gov.cn）及中国政府采购网（http://www.ccgp.gov.cn/）查询结果为准，如相关失信记录已失效，供应商需提供相关证明资料）。(2)单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商，不得同时参加本采购项目（或采购包）投标（响应）。为本项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的供应商，不得再参与本项目投标（响应）。投标函相关承诺要求内容。三、获取招标文件时间： 2022年09月06日 至 2022年09月14日 ，每天上午 09:00:00 至 12:00:00 ，下午 14:30:00 至 17:30:00 （北京时间,法定节假日除外）地点：广东省政府采购网https://gdgpo.czt.gd.gov.cn/方式：在线获取售价： 免费获取四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点2022年09月28日 09时30分00秒 （北京时间）递交文件地点：东莞市南城区元美路2号财富广场B座13A层06室开标室开标地点：东莞市南城区元美路2号财富广场B座13A层06室开标室五、公告期限自本公告发布之日起5个工作日。六、其他补充事宜1.本项目采用电子系统进行招投标，请在投标前详细阅读供应商操作手册，手册获取网址：https://gdgpo.czt.gd.gov.cn/help/transaction/download.html。投标供应商在使用过程中遇到涉及系统使用的问题，可通过400-1832-999进行咨询或通过广东政府采购智慧云平台运维服务说明中提供的其他服务方式获取帮助。2.供应商参加本项目投标，需要提前办理CA和电子签章，办理方式和注意事项详见供应商操作手册与CA办理指南，指南获取地址：https://gdgpo.czt.gd.gov.cn/help/problem/。3.如需缴纳保证金，供应商可通过"广东政府采购智慧云平台金融服务中心"(http://gdgpo.czt.gd.gov.cn/zcdservice/zcd/guangdong/)，申请办理投标（响应）担保函、保险（保证）保函。4.供应商应从广东省政府采购网（https://gdgpo.czt.gd.gov.cn/）上广东政府采购智慧云平台（以下简称“云平台”）的政府采购供应商入口进行免费注册后，登录进入项目采购系统完成项目登记并在线获取招标（采购）文件；未按上述方式获取招标（采购）文件的供应商，其投标（响应）资格将被视为无效。5.本项目需网上提交电子版投标（响应）文件，参与本项目的供应商可以选择提前将投标文件纸质版（一正二副）通过快递邮寄至采购代理机构地址“东莞市南城区元美路2号财富广场B座13A层08室，温小姐，0769-23328188”，并将快递单号、项目名称、供应商名称等信息发送至(3478473573@qq.com),以便工作人员及时查收。6.开标（开启）方式为远程电子开标。投标人的法定代表人或其授权代表应当按照本招标公告载明的时间和模式等要求参加开标。在投标截止时间前，应当登录云平台开标大厅进行签到，并且填写授权代表的姓名与手机号码。若因签到时填写的授权代表信息有误而导致的不良后果，由供应商自行承担。7.其他详见附件重要事项提示。七、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。1.采购人信息名 称：广东医科大学地 址：广东省东莞市松山湖科技产业园区新城大道1号联系方式：0769-228961332.采购代理机构信息名 称：广东洲际招标代理有限公司地 址：东莞市南城区元美路2号财富广场B座13A层13A08室联系方式：0769-233281883.项目联系方式项目联系人：钱嘉仪电 话：0769-23328188广东洲际招标代理有限公司2022年09月06日

p style="text-align: center "img width="412" height="232" title="image001.jpg" style="width: 412px height: 232px " alt="image001.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/ee2cfefc-b77f-4ad9-a46f-1d54621e9f04.jpg"//pp style="text-align: center "strong图片源自：GEN官网/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "流式细胞仪凭借其独特的检测原理和强大的荧光抗体技术在疾病的早期诊断中发挥不可替代的作用，对于这种熟悉的技术，流式细胞仪的应用仍存在许多惊喜。例如，流式细胞仪越来越接近临床医生、环境现场工作人员和食品安全检查员。流式细胞仪也在传统应用领域中找到了新的用途，例如研究型实验室和生物制药生产线。未来流式细胞仪将与组织学诊断、分子诊断等完整地结合在一起，为临床提供更准确、更完整的疾病诊断报告。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.instrument.com.cn/zt/liushixibaoyi" target="_blank"ispan style="text-decoration: underline "strong点击进入span style="color: rgb(255, 0, 0) text-decoration: underline "“进击的”流式细胞仪专题/span，解锁更多流式行业信息！/strong/span/i/a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "来自不同流式细胞仪供应商的三位技术专家分别就流式细胞术的广泛应用以及在非传统领域的应用作了分享，供广大仪器用户了解学习。三位技术专家分别为艾森生物流式细胞仪全球支持经理Garret Guenther，赛默飞世尔抗体、免疫分析、蛋白质和细胞分析副总裁兼总经理Dara Grantham Wright和伯乐实验室细胞生物学全球应用及协作经理Yasha Talaga。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong问题一：流式细胞仪作为研究工具不断发展。在实验室外，流式细胞仪在哪些方面做出了重要贡献？/strong/span /pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongGuenther：/strong流式细胞仪的临床应用包括验证移植前的造血干细胞和识别癌症及免疫缺陷病中存在的免疫细胞亚群异常。随着仪器变得越来越小并且更容易操作，流式细胞仪也开始用于疾病筛查诊断。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "此外，科学家正在将流式细胞仪应用于从生物制造和生物加工监测（包括水质测试和农业和食品安全认证）到兽医学、海洋学和生态学研究。 鉴于其在溶液中检测和定量分析的高通量能力，流式细胞仪系统将很快适应各种研究机构和工业部门。/pp style="text-align: center "img width="231" height="377" title="image002.jpg" style="width: 231px height: 377px " alt="image002.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/8674e1fa-aac2-4ef4-a72c-ac01c12ed1b9.jpg"//pp style="text-align: center "strong style="text-indent: 0em "艾森生物流式细胞仪全球支持经理 Garret Guenther/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongWright：/strong流式细胞仪是一种非常强大的单细胞分析工具。 近年来，随着荧光标记物数量的增加，流式细胞仪的 “多路复用”能力也随着增加。 我们现在可以在单细胞分辨率下分析包括蛋白质和核酸在内的数十种“标记物”，同时得出有价值的种群统计数据。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "展望未来，流式细胞仪需要越来越简化。今天，它仍然被认为是一种高度复杂的技术。随着流式细胞仪越来越多地被应用于新的领域，特别是在非传统的免疫学工作流程中，该技术将通过更加智能的仪器和预配置试剂来实现简单化流程。/pp style="text-align: center "img width="241" height="339" title="image003.jpg" style="width: 241px height: 339px " alt="image003.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/b1aeafb1-4241-4b38-8a01-0179948fe5c5.jpg"//pp style="text-align: center "strong style="text-indent: 0em "赛默飞世尔抗体、免疫分析、蛋白质和细胞分析副总裁兼总经理Dara Grantham Wright/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongTalaga：/strong流式细胞仪在临床诊断中一直很重要。 最近，流式细胞术已被用于改进小颗粒的分析，例如循环外泌体，其有望用于液体活检。现如今，流式细胞仪正在进入单细胞分析领域。由于流式细胞仪能够从小样本中收集大量信息，我们预计在不久的将来，更多的科学家将对生物和临床样本中的单细胞进行分析。/pp style="text-align: center "img width="242" height="403" title="image004.jpg" style="width: 242px height: 403px " alt="image004.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/0876f9ca-c462-4444-82f4-82ab6849b6a3.jpg"//pp style="text-align: center text-indent: 0em "strongspan style="text-indent: 2em "伯乐实验室细胞生物学全球应用及协作经理 Yasha Talaga/span/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong问题二：短短几年的时间，CRISPR已成为风靡科研圈的基因编辑工具。这一被誉为“世纪发现”的魔剪革新了生物医学研究，并为基因疾病以及其它疾病的治疗带来了新的希望。流式细胞仪如何促成基因编辑术“CRISPR热潮”？/strong/span/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongGuenther：/strongCRISPR技术具有直接或间接治疗各种疾病的巨大潜力。 作为CRISPR工具，流式细胞术对于验证CRISPR执行正确靶向以及测量基因编辑功能效果非常重要。流式细胞术可用于鉴定CRISPR的功能靶标（特别是在免疫细胞中），以监测细胞因子的产生和表面标志物的变化。 此外，随着高通量自动采样功能的进步，流式细胞仪可以很容易地用作CRISPR的筛选平台。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongWright：/strong随着基因编辑技术日益成熟，细胞分析工具的需求也在增加。 在最简单的层面上，如果我们修改单元格的“编程”，我们会影响其功能，因此我们需要技术来帮助我们分析下游发生的情况。 我们是否破坏、诱导或改变了蛋白质的产生？ 目标细胞群体内修饰的效率如何？ 我们的“编辑”会影响细胞功能的其他方面吗？ 是否存在意外或脱靶效应？ 随着基因编辑领域的发展，流式细胞仪和功能细胞分选将成为帮助回答这些问题越来越重要的技术。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongTalaga：/strong在过去几年中，大量公司在CRISPR从确定转染率到分选细胞的过程中使用流式细胞仪。 我们已经确定，流式细胞术正在推动这些科研活动的开展。在伯乐，我们将流式细胞仪纳入了我们的CRISPR工作流程。 除了监测转染和富集细胞群外，我们还用流式细胞仪来确认“编辑”和进行下游分析。通过配对多种工具和技术，提高了我们的工作效率。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strongspan style="text-indent: 2em "问题三：现在流式细胞仪已应用于免疫学，是否会出现新的应用以推进免疫治疗？/span/strong/span/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongGuenther：/strong随着免疫治疗领域的不断扩大，流式细胞仪将在各种免疫疗法的开发中发挥重要作用。 我发现该方法主要涉及治疗期间和治疗后细胞验证过程的质量控制以及监测患者的治疗细胞。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "免疫细胞的许多细胞亚群和功能标记可以通过流式细胞术快速有效地分析，因此流式细胞术也可以用于预测脱靶效应。最后，一个新兴领域是将流式细胞仪整合到多组学中，可实现精确医学在免疫肿瘤学中的应用。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongWright：/strong传统免疫学的基础是免疫功能，既有先天性，也有后天性。免疫疗法也不例外，我们需要了解肿瘤对逃避免疫反应的作用，以及可以利用先天和适应性免疫系统的特点来完全消除或者避免肿瘤。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "科学家们正在利用流式细胞仪以及声学聚焦流式细胞仪等新技术对肿瘤微环境进行研究。这些技术在这一研究领域非常重要，因为它们可以处理组织样本，并且可以对稀有细胞群进行有效分析。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongTalaga：/strong慢性病毒感染和癌症一直试图逃避免疫系统。今天，我们认识到免疫系统不能被孤立进行研究。相反，必须认识到它与微生物组的关系，以及它对联合治疗的（潜在）脆弱性。 我们一直在学习跨越科学学科并交流知识和技术。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "这种跨学科工作和知识共享的结合反过来又形成了我们所谓的“新兴免疫疗法时代”。那些将流式细胞仪纳入更大工作流程（例如包括PCR检测）的科学家正在取得更大的成功。例如，PCR检测之后会进行电穿孔和流式细胞术应用，使研究者能够获得关于干细胞的新知识，并将其应用于临床工作中。/pp style="text-align: center "strong欢迎关注span style="color: rgb(0, 112, 192) "3i生仪社/span公众号，了解更多生命科学资讯!/strong/pp style="text-align: center "img title="qrcode_for_gh_91d290758d40_258.jpg" alt="qrcode_for_gh_91d290758d40_258.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/2bd3328f-5412-4beb-8819-75e26687ff84.jpg"//p