抗爆值

[font=宋体]目前有多种方法可用于开发单克隆抗体。杂交瘤技术是经典的抗体开发技术，但效率相对较低，而且容易丢失抗体的多样性。噬菌体展示技术广泛用于单抗开发，但容易丢失抗体的天然配对信息。[/font][font=宋体][font=宋体]一般认为，在抗体开发中，保留[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的天然[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]配对是十分重要的。近年来兴起的单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术保留了轻重链可变区的天然配对，具有简单快捷、所需细胞数量较少、效率高等优势。该技术通过直接扩增单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]编码基因，是一种从人和免疫动物中制备单克隆抗体的有力技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选平台，义翘神州可向全球客户提供单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体制备服务，整个过程涉及单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分离、测序、克隆和单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体筛选等步骤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体发现的工作流程[/font][/b][/font][font=宋体] [font=Calibri]1[/font][font=宋体]）单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的分离[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]从外周血或淋巴组织中分离单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞，有随机分离和抗原特异性分离两种方式。随机[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分离，可通过显微操作、激光捕获显微切割和荧光激活细胞分选（[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]）等进行细胞挑选。抗原特异性分离可通过抗原包被磁珠、多参数[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]的荧光素标记抗原、溶血斑块实验和荧光焦点法等方法进行抗原特异性[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的筛选。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]技术，可以根据特定细胞表面标志物的表达模式，明确区分待分选[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的发育和分化阶段，几乎任何阶段的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞都可以分选。为了有效获得特异性抗体，必须评估供体的免疫应答，例如，在单细胞分离之前，使用酶联免疫斑点技术（[/font][font=Calibri]ELISPOT[/font][font=宋体]）测定外周血中抗体特异性细胞（[/font][font=Calibri]ASC[/font][font=宋体]）的丰度，从而选择含抗原特异性抗体浓度较高的血样进行后续抗体制备。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=Calibri]2[/font][font=宋体]）单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体的测序和克隆[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通常在[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔板上进行单细胞的[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]合成。全长[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]基因转录产物通过巢式或半巢式[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]进行扩增。通常情况下，对抗体重链轻链可变区不同前导序列设计前向引物的混合物，反向引物特异性互补于抗体恒定区。某些情况下，如果分离和扩增不同同种型的抗体，反向引物则是特异性互补于各种同种型抗体恒定区的混合物。表达载体可直接转染至哺乳动物细胞中，用于单克隆抗体的体外表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=Calibri]3[/font][font=宋体]）抗体的表达和筛选[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]鉴定抗体或片段的抗原特异性和生物活性之前，需将携带有抗体基因的表达载体在相应系统中表达。最简单和最常见表达系统是原核系统（例如大肠杆菌），而哺乳动物细胞系统（例如[/font][font=Calibri]HEK 293[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞）更有利于抗体的翻译后修饰，主要是瞬时表达或稳定表达。在[/font][font=Calibri]E. coli[/font][font=宋体]中，通常抗体基因表达为抗原结合片段（[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]）的形式，而在哺乳动物细胞中，以完整的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]形式表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]单个[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]细胞抗体服务[/b][/url]，包含：流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞服务和基于[/font][font=Calibri]Beacon[/font][font=宋体]平台的单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体开发，更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]文章来源：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]细胞抗体技术[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology[/font][/font][font=Calibri] [/font]

国际学术期刊Cell Research于4月24日在线发表了中科院上海生命科学研究院生化与细胞所刘默芳组关于Onconase抑制恶性间皮瘤细胞microRNA（miRNA）表达的最新研究成果。该工作与上海南方模式生物研究中心王庆诚教授合作完成。 Onconase是从北方豹蛙卵或胚胎中提取的一种核糖核酸酶，是RNase A超家族中最小的成员，目前已被欧盟、澳大利亚和美国FDA批准作为罕见病药物（Orphan drug）用于恶性间皮瘤临床治疗使用。因接触石棉是其主要诱因，恶性间皮瘤也俗称为石棉癌，该恶性肿瘤预后极差，至今尚无有效的治疗措施。Onconase特异性地诱导癌细胞凋亡，而对正常细胞的毒性较低，对非小细胞肺癌、乳腺癌等的临床试验目前也正在进行中。然而，作为一种很有前景的抗肿瘤药物，Onconase的细胞毒性机理尚不完全清楚。 miRNA在肿瘤发生发展中有重要作用。刘默芳研究组研究生乔萌和祖立东等发现，Onconase对恶性间皮瘤细胞的miRNA表达具有普遍下调作用，而对细胞中一些oncomiR（如miR-155和miR-21）的下游靶基因，如socs1、pten、pdcd4等肿瘤抑制基因有明显上调作用。有趣的是，该工作发现Onconase降解miRNA前体，而对miRNA成熟链无明显作用；与之一致的是，Onconase抑制Dicer对miRNA前体的加工、降低Dicer生产成熟miRNA。进一步的研究发现，Onconase对miRNA前体的切割位点偏好于U-G和U-U。 该工作揭示了Onconase抗癌活性的一种新机制，完善了Onconase的抗癌作用机理，为与Onconase有关的更加合理、有效、安全的用药提供了科学依据。 该项研究工作得到了科技部、国家自然科学基金委、中国科学院及上海市科委的资助。