推荐厂家
暂无
暂无
[size=5]GB 8821—1988 食品添加剂 β-胡萝卜素[/size]
[align=center][b]食品中胡萝卜素的测定方法验证报告[/b][/align][align=center][b]GB 5009.83-2016[/b][/align][align=center][b]张霞[/b][/align][align=left]一、方法概述[/align]1.范围 本标准规定了食品中胡萝卜素的测定方法。本标准色谱条件一适用于食品中α-胡萝卜素、β-胡萝卜素及总胡萝卜素的测定,色谱条件二适用于食品中β-胡萝卜素的测定。2.原理 试样经皂化使胡萝卜素释放为游离态,用石油醚萃取二氯甲烷定容,采用反相色谱法分离,外标法定量。二、仪器与试剂1. 仪器1.1高效液相色谱仪:配有紫外检测器。1.2 匀浆机。1.3高速粉碎机。1.4恒温振荡水浴箱:控温精度±1℃。1.5旋转蒸发器。1.6氮吹仪。1.7紫外-可见光分光光度计。以上仪器符合国标要求。2. 试剂及其配制 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。2.1α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。2.2木瓜蛋白酶:酶活力≥5U/mg。2.3 氢氧化钾(KOH)。2.4无水硫酸钠(Na[sub]2[/sub]SO[sub]4[/sub])。2.5 抗坏血酸(C[sub]6[/sub]H[sub]8[/sub]O[sub]6[/sub])。2.6石油醚:沸程30℃~60℃。2.7甲醇(CH[sub]4[/sub]O):色谱纯。2.8三氯甲烷(CHCl[sub]3[/sub]):色谱纯。2.9甲基叔丁基醚[CH[sub]3[/sub]OC(CH[sub]3[/sub])[sub]3[/sub]]:色谱纯。2.10二氯甲烷(CH[sub]2[/sub]Cl[sub]2[/sub]):色谱纯。2.11无水乙醇(C[sub]2[/sub]H[sub]6[/sub]O):优级纯。2.12正己烷(C[sub]6[/sub]H[sub]14[/sub]):色谱纯。2.13 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(C[sub]15[/sub]H[sub]24[/sub]O,BHT)。2.14氢氧化钾溶液:称固体氢氧化钾500g,加入500mL水溶解。临用前配制。2.15β-胡萝卜素标准品 来源:上海安谱 货号:CDAA-281456三、试样的制备 谷物、豆类、坚果等试样需粉碎、研磨、过筛(筛板孔径0.3mm~0.5mm);蔬菜、水果、蛋、藻类等试样用均质器混匀;固体粉末状试样和液体试样用前振摇或搅拌混匀。4℃冰箱可保存1周。四、分析步骤1、标准曲线绘制1.1 标准储备液(500.0μg/mL):称取0.0500g(准确至0.0001g)β-胡萝卜素标准品于100mL容量瓶中,加入0.25gBHT,用二氯甲烷溶解,并定容至刻度。1.2标准工作液的配制: 分别吸取适量β-胡萝卜素标准溶液,用二氯甲烷定容至100mL容量瓶中,配制成浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL系列工作液。2、样品的处理2.1普通食品试样2.1.1预处理:蔬菜、水果、菌藻类、谷物、豆类、蛋类等普通食品试样准确称取混合均匀的试样1g~5g(精确至0.001g),油类准确称取0.2g~2g(精确至0.001g),转至250mL锥形瓶中,加入1g抗坏血酸、75mL无水乙醇,于60℃±1℃水浴振荡30min。 如果试样中蛋白质、淀粉含量较高(>10%),先加入1g抗坏血酸、15mL45℃~50℃温水、0.5g木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶,盖上瓶塞混匀后,置55℃±1℃恒温水浴箱内振荡或超声处理30min后,再加入75mL无水乙醇,于60℃±1℃水浴振荡30min。2.1.2皂化:加入25mL氢氧化钾溶液,盖上瓶塞。置于已预热至53℃±2℃恒温振荡水浴箱中,皂化30min。取出,静置,冷却到室温。2.2添加β-胡萝卜素的食品试样2.2.1预处理:固体试样,准确称取1g~5g(精确至0.001g),置于250mL锥形瓶中,加入1g抗坏血酸,加50mL45℃~50℃温水混匀。加入0.5g木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶(无淀粉试样可以不加α-淀粉酶),盖上瓶塞,置55℃±1℃恒温水浴箱内振荡或超声处理30min。液体试样,准确称取5g~10g(精确至0.001g),置于250mL锥形瓶中,加入1g抗坏血酸。2.2.2皂化:取预处理后样品,加入75mL无水乙醇,摇匀,再加入25mL氢氧化钾溶液,盖上瓶塞。置于已预热至53℃±2℃恒温振荡水浴箱中,皂化30min。取出,静置,冷却到室温。2.3试样萃取:将2.1.2或2.2.2中皂化液转入500mL分液漏斗中,加入100mL石油醚,轻轻摇动,排气,盖好瓶塞,室温下振荡10min后静置分层,将水相转入另一分液漏斗中按上述方法惊醒第二次提取。合并有机相,用水洗至近中性。弃水相,有机相通过无水硫酸钠过滤脱水。滤液收入500mL蒸发瓶中,于旋转蒸发器上40℃±2℃减压浓缩,近干。用氮气吹干,用移液管准确加入5.0mL二氯甲烷,盖上瓶塞,充分溶解提取物。经0.45μm膜过滤后,弃去初始约1mL滤液后收集至进样瓶中,备用。3.仪器测定条件3.1色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm或等效柱。3.2流速:2.0mL/min。3.3柱温:35℃±1℃。3.4检测波长:450nm。3.5进样量:20μL。3.6流动相:三氯甲烷:乙腈:甲醇=3:12:85,含抗坏血酸0.4g/L,经0.45μm膜过滤后备用。五、结果处理试样β-胡萝卜素含量按下式进行计算:[table][tr][td=1,2][align=center]X(μg/100g)=[/align][/td][td]C×[i]V[/i]×100[/td][/tr][tr][td] m[/td][/tr][/table]式中:X-试样中β-胡萝卜素含量,单位为微克每百克(μg/100g) C-由标准曲线得到的待测液中β-胡萝卜素的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL) m-试样质量,单位为克(g) V-试样液定容体积,单位为毫升(mL)。100—换算系数。计算结果保留三位有效数字。六、验证结果1.线性结果将标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。同时做空白实验。β-胡萝卜素[u]Y=8481.49*X+34.6455 R^2=0.9999677[/u][align=center][img=,575,363]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807242041240508_1182_2904018_3.png!w575x363.jpg[/img][/align]以上结果表明β-胡萝卜素在0.5μg/mL~10μg/mL范围内,R[sup]^2[/sup]=0.9999677,β-胡萝卜素浓度和峰面积呈线性关系,线性良好,符合要求。2.检出限结果将1.00μg/mL标准溶液逐级稀释至S/N=3±1,得出β-胡萝卜素的方法检出限为0.5μg/100g,此检出限结果等于国标GB 5009.83-2016的方法检出限0.5μg/100g,故此方法满足条件。七、方法精密度(重复性)对LBF180700283样品分别进行6次加标重复性的测定,测定结果如下:[table][tr][td][align=center]测定编号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]质量(g)[/align][/td][td][align=center]5.0074[/align][/td][td][align=center]5.0051[/align][/td][td][align=center]5.0368[/align][/td][td][align=center]5.0109[/align][/td][td][align=center]5.0421[/align][/td][td][align=center]5.0247[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]浓度(μg/mL)[/align][/td][td][align=center]1.576[/align][/td][td][align=center]1.575[/align][/td][td][align=center]1.578[/align][/td][td][align=center]1.575[/align][/td][td][align=center]1.577[/align][/td][td][align=center]1.575[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]含量(μg/100g) [/align][/td][td][align=center]157[/align][/td][td][align=center]157[/align][/td][td][align=center]157[/align][/td][td][align=center]157[/align][/td][td][align=center]156[/align][/td][td][align=center]157[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]平均值(μg/100g)[/align][/td][td=6,1][align=center]157[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]RSD%[/align][/td][td=6,1][align=center]0.26[/align][/td][/tr][/table]本方法的精密度为0.26%,符合GB 5009.83-2016中给出试样测试结果的精密度要求。因此,本次测定均符合要求。八、准确度验证(加标回收)对LBF180700283样品加标,取50.0μg/mL的标液0.075mL、0.12mL、0.22mL同样品同步处理后,结果见下表:[table][tr][td=2,1][align=center]测定编号[/align][/td][td=6,1][align=center]β-胡萝卜素[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]序号[/align][/td][td][align=center]m(g)[/align][/td][td][align=center]V(mL)[/align][/td][td][align=center]C(μg/mL)[/align][/td][td][align=center]β-胡萝卜素含量(μg/100g)[/align][/td][td][align=center]平均值 (μg/100g)[/align][/td][td][align=center]加标量[/align](μg/100g)[/td][td][align=center]回收率%[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1#[/align][/td][td][align=center]5.0429[/align][/td][td][align=center]5.0[/align][/td][td][align=center]0.835[/align][/td][td][align=center]82.79[/align][/td][td=1,2][align=center]82.9[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2#[/align][/td][td][align=center]5.0560[/align][/td][td][align=center]5.0[/align][/td][td][align=center]0.839[/align][/td][td][align=center]82.97[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标1#[/align][/td][td][align=center]5.0361[/align][/td][td][align=center]5.0[/align][/td][td][align=center]1.554[/align][/td][td][align=center]154[/align][/td][td][align=center]154[/align][/td][td][align=center]74.5[/align][/td][td][align=center]95.4[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标2#[/align][/td][td][align=center]5.0285[/align][/td][td][align=center]5.0[/align][/td][td][align=center]2.018[/align][/td][td][align=center]201[/align][/td][td][align=center]201[/align][/td][td][align=center]119[/align][/td][td][align=center]99.2[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标3#[/align][/td][td][align=center]5.0284[/align][/td][td][align=center]5.0[/align][/td][td][align=center]2.999[/align][/td][td][align=center]298[/align][/td][td][align=center]298[/align][/td][td][align=center]219[/align][/td][td][align=center]98.2[/align][/td][/tr][/table] 由上表可以看出β-胡萝卜素测定的加标回收范围在 80%-110% ,RSD值为2.02%符合规定要求。九、总结从检出限、线性范围、重复性、回收率测试结果可知,均符合方法要求,本实验方法符合GB 5009.83-2016的要求。
胡萝卜:建议选择个头中等偏小的好,挑选表皮颜色红亮,或橘黄色的品种。个头不要贪大,如果胡萝卜的形状比较匀称,没有过大的体积,又呈现圆柱形的外表,那么口感会比较鲜甜。 大家应该经常选用呀!