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一 抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素:1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1 分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种分析试验验证,如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域:抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。(2)样本的提取或处理过程:某些抗体要求样本经过某些特殊处理,例如:许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时,应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织,而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织,这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种 应选择物种相同或有交叉反应的抗体,抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高,如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中,并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过,应通过序列比对的方法来预测交叉反应,可应用Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。4 一抗宿主物种的选择一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测,尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。5 二抗的选择 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用, 二抗一般连接荧光素FITC 或发光团。6 双重染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一,二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。
[font='calibri'][size=13px]人源化抗体和全人源抗体区别[/size][/font][font='calibri'][size=13px]?[/size][/font][font='calibri'][size=13px]义翘[/size][/font][font='calibri'][size=13px]抗体人源化[/size][/font][font='calibri'][size=13px]服务内容[/size][/font][font='宋体']人源化抗体和全人源抗体区别:[/font][font='宋体']根据单克隆抗体的来源不同,可分为鼠源抗体、嵌合体抗体、人源化抗体和全人源抗体。[/font][font='宋体']所谓的全人源单抗,就是基因来源100%都是人源的。不过,事实上全人源单抗也是在小鼠身上产生的,通过把产生抗体相关的人类基因转移到小鼠,此后小鼠体内的抗体结构可以跟人类抗体结构一样。所以全人源抗体直接用人体[/font][font='宋体']细胞制作的抗体,只是抗体结构100%按照人类基因编码而成。[/font][font='宋体']人源化单抗则是大部分来源是人源,同时融合了鼠源成分。近年来,科学家通过基因工程特意将鼠抗的关键有利基因结构保留在人源框架上,起到特殊的作用,就像优化再加工(2l。例如,依奇珠单抗(人源化单抗)中保留了1.8%的鼠源成分,这部分整合了优势有利的基因,成就了依奇珠单抗的高亲和力,其起效速度快可能也和其亲和力高有关。[/font][font='宋体'] [/font][font='宋体'] [/font][font='宋体']义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化服务[/b][/url]:[/font][font='宋体']抗体人源化[/font][font='宋体']非人源性抗体进入人体内会引起严重的机体排异反应,进而影响抗体在临床应用时的安全性和治疗效果。抗体人源化通过基因改造,使鼠源抗体具有与人体内抗体类似的结构,从而逃避免疫系统的识别。抗体人源化经历了从嵌合抗体到CDR移植、SDR移植等技术演变,力求在保持高亲和力、高特异性结合能力的同时克服传统鼠源抗体的免疫原性,在肿瘤治疗等领域具有极为广泛的应用前景。[/font][font='宋体']义翘神州利用CDR置换技术及计算机辅助结构模拟设计可对鼠源单抗等进行人源化改造,保证人源化程度 95%,为客户提供优质的单克隆抗体人源化服务。[/font]
[font=宋体][font=宋体]目前,用细胞工程制备人单抗在技术上和伦理上都存在一些难题,治疗性抗体的开发就集中在具有治疗前景的鼠源单抗上。但是鼠源单抗对人体具有异源性反应,可诱发人抗鼠抗体效应[/font][font=Calibri](Humananti-mouseantibodies,HAMA[/font][font=宋体]反应[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体],使得单抗的治疗效果明显滞后。随着基因重组技术的发展和人们对抗体结构认识的深入,研究者们尝试对鼠源性抗体进行改造,致力于在保留与抗原结合的高亲和力的基础上,减少异源性抗体的免疫原性,推动抗体人源化研发的进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]人源化抗体主要指以用基因克隆及[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术对鼠源单克隆抗体改造,重新表达产生的抗体。其大部分氨基酸序列被人源序列取代,基本保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性,又降低了其异源性,有利应用于人体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据人源化程度不同,单抗又可分为[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody][b]嵌合抗体[/b][/url][/font][font=Calibri](60%-70%[/font][font=宋体]人源化氨基酸序列[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CDR(complementarity-determiningregion)[/font][font=宋体]移植抗体[/font][font=Calibri](90%-95%[/font][font=宋体]人源化氨基酸序列[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体:[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体[/font][font=Calibri](chimericantibody)[/font][font=宋体]:第一代人源化抗体。其是在基因水平上将鼠源单克隆抗体的[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区和人抗体的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区[/font][font=Calibri](variableregion,[/font][font=宋体]可变区[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]连接,在合适的宿主细胞内表达可得到人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体。嵌合抗体用于人体所产生的[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应比鼠源单抗明显减弱[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]另外,人源[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区[/font][font=Calibri](constantregion[/font][font=宋体],恒定区[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]可更有效地介导人体一些免疫反应,如[/font][font=Calibri]CDC(complement-dependentcytotoxicity,CDC,[/font][font=宋体]依赖补体的细胞毒性作用[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]ADCC(antibodydependentcellmediatedcytotoxicity,[/font][font=宋体]抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]嵌合抗体虽然可以部分解决异种蛋白的排斥问题,但由于其还含有鼠源[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区,依然有可能会诱发[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应,干扰抗体疗效,诱发超敏反应,在临床上其应用会受到一定限制。因此人们进一步研究鼠源可变区的改造,研发出了[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植的人源化抗体,即第二代人源化抗体也是现在普遍所说的人源化抗体[/font][font=Calibri](humanizedantibody)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植抗体是研究者们在嵌合抗体的基础上进一步用人源框架区[/font][font=Calibri](Frameworkregion,FR)[/font][font=宋体]替代鼠源框架区[/font][font=Calibri](FR)[/font][font=宋体],仅保留了[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个鼠源性[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体],其他全部为人源结构,人源性可达[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]以上。但对于特定的抗原分子,[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]并不能随意替换。多方面研究均证实,具有支持作用的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]不仅为[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的构象提供了环境,有时还参与抗体结合。因此简单的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植往往明显降低抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体结合的亲和力,甚至是丧失抗原抗体结合的能力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]针对这种状况,目前主要有四种策略:[/font][font=宋体][font=宋体]①同源替换,使用与鼠源对应部分具有较大同源性的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]进行替换[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]②表面重塑,对鼠源[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]表面氨基酸残基进行重塑,以使其类似于人抗体[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的轮廓或者[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]型式[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]③补偿变化,改编关键位置氨基酸残基,以补偿完全的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]④定位保守,人源化单抗以[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]保守序列为模板进行人源化,但保留鼠源单抗可变区的关键氨基酸残基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、全人源抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]为了彻底消除异源性抗体的不良影响,[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代以后,人们将噬菌体展示技术应用到抗体的表达和克隆上,产生了噬菌体抗体库技术。由此,抗体工程技术进入到了一个新的发展阶段,全人源化抗体的生产和应用也逐渐走向成熟。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]全人源化抗体是指将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术,将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中,使动物表达人类抗体,达到抗体全人源化的目的。目前已建立多种方法生产完全人源性抗体,主要有噬菌体展示技术、转基因小鼠技术、核糖体展示技术和[/font][font=Calibri]RNA-[/font][font=宋体]多肽技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]人源化抗体的应用[/b][/font][font=宋体]目前,人源化抗体在肿瘤,器官移植排斥反应,病毒感染,血液性疾病,自身免疫性疾病等方面的治疗和临床诊断中显示出越来越大的应用前景。[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、在肿瘤治疗中的应用[/font][/font][font=宋体]近年来,兴起的分子靶向治疗,是根本意义上的肿瘤特异性治疗手段,是以肿瘤抗原特异性结合的单抗为载体,连接放射性核素,化疗药物等对肿瘤有杀伤作用的负载而成的抗体导向疗法。其靶向性好,毒性小等特点,非常适合肿瘤的内放射治疗。采用该技术用于临床的人源性抗体有治疗转移性乳腺癌的赫赛汀,用于治疗结直肠癌的西妥昔单抗等。[/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、自身免疫性疾病治疗[/font][/font][font=宋体]自身免疫疾病多于自身抗体异常增多有关。很多临床研究发现,一些具有免疫疾病的病毒感染患者,体内病毒水平常伴随某些免疫分子水平的升高而升高,因此很多免疫分子的人源化抗体在此类病毒的治疗中显示出很好的效果。[/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、病毒感染中的应用[/font][/font][font=宋体]病毒感染几乎无特效药,现有的核苷酸类抗病毒药物效果并不理想,且毒副作用大,单抗治疗因其针对性强,和相对比较安全,已越来越多研究者将其应用于抗病毒的治疗中。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化服务[/b][/url],详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service[/font][/font]