吸光度

吸光度测量使用设备简单、操作便捷。大部分无机物和有机物都可以直接地或间接地用吸光光度法测量。吸光度测量主要用于液体或气体的定量分析，广泛应用于环境监测、化学分析、检验检测等领域。吸光度定义用单色光照射某一吸光物质或溶液，测量单色光照射前的强度（即入射光强度I0）以及透过吸光物质后的强度（即透射光强度I），定义透光度（transmittance）T 为定义吸光度（absorbance）A为光的吸收定律朗伯-比尔（Lambert-Bear）定律，也称光的吸收定律，是吸光度定量分析的基本关系式。其数学表达式为： ε. 为摩尔吸光系数，与溶液的性质、温度和入射光波长有关 为溶液光程长度，即为比色皿的尺寸，单位为cm 为溶液浓度，单位为mol/L。公式表明当溶液入射光波长和光程长度固定不变时，吸光度与溶液浓度成正比关系。在测试未知样品的浓度的实验中，可以测量数组已知确定样品浓度和吸光度的数据，构建吸光度与样品浓度的正比关系式，通过测量未知样品的吸光度来求解未知样品的浓度。吸光度测量整套仪器搭建方案整套仪器由微型光纤光谱仪（含软件）、光源、比色皿支架和光纤跳线组成，见下图。具体配置清单：产品名称数量微型光纤光谱仪（含免费配套软件）1光源1比色皿支架1光纤跳线2仪器介绍微型光谱仪RGB-ER-CL微型光谱仪 采用交叉非对称C-T光路结构，配置先进的CMOS探测器，是一款结构紧凑、携带方便的通用型微型光纤光谱仪，适用于科研及工业生产的光谱测量应用，具有高灵敏度、高分辨率、高量子效率和高动态范围的特点。RGB-ER-CL微型光谱仪响应范围为200～1000nm，狭缝为25μm，分辨率为1.5nm。RGB-VIS-NIR-CL的波长范围为400～1100nm，狭缝为25μm，分辨率为1.0nm。用户也可以选择不同的光栅配置，得到不同的光学分辨率和光谱响应范围，以满足不同的应用需求。另外针对其它波段如200～900nm/200～1000nm/300～1100nm/700～1100nm等可以提供定制。该款微型光谱仪免费提供配套光谱测量软件KewSpec。软件包含查看、保存、读取光谱图和数据，以及积分时间、Boxcar平滑和信号平均等信号处理等基本功能，还包含光谱测量、吸光度、透过率、反射率等应用测量模式。操作界面简洁明了，易于上手。光源吸光度测量常见于紫外-可见波段，根据待测样品的特征波长范围选择合适的光源。HLS-1卤钨灯光源 波长范围360~2500nm，可直接出光或也可由SMA905端口连接光纤耦合输出。输出光强度可调，光源前端设有支架，可根据需要安装滤光片或衰减片。DLS-1氘-卤钨灯 是一款可提供190~2500nm的紫外-可见-近红外波段连续输出光谱的一体化复合光源。采用SMA905端口连接光纤输出，输出光功率稳定。氘灯和卤钨灯可分别开启，卤钨灯输出光功率可调，用以搭配氘灯输出光强。光源前端设有支架，可根据需要安装滤光片或衰减片。比色皿支架CH-4四向比色皿支架 是常用的光谱测量附件，光程长度1cm，支架的四面均连接一个CL-UV准直透镜。用于吸光度测量时，光纤接在两个相对的准直透镜。光纤跳线KEWLAB提供各种波长范围、光纤芯径和长度的光纤跳线，广泛应用于光谱分析领域。该光纤跳线具有坚实耐用、稳定性高、传输损耗小等特点。连接光源、微型光谱仪，起到传输光谱信号的作用。根据客户的实际应用需求，可选择不同型号的光纤跳线。光纤跳线覆盖光谱范围：190-2200nm光纤芯径可选范围：200、400、600、1000μm等标准长度：0.5m、1m、2m，其它长度可定制外壳材料：金属或塑料实测案例以HLS-1卤钨灯为光源，使用RGB-VIS-NIR-CL微型光谱仪（400-1100nm）搭配整套设备测试不同浓度胭脂红色素的吸光度光谱曲线。

p　strong　1、技术简介/strong/pp　　根据比尔-朗伯定律一束单色光照射于吸收介质表面，在通过一定厚度的介质后，由于介质吸收了一部分光能，透射光的强度就会发生减弱。吸光度是指光通过溶液或某一物质前的入射光强度与该光通过溶液或物质后的透射光强度比值并以10为底的对数。吸光度分光光度法可识别不同物质经单色光照射后的特异性，或定量测量透明溶液中有色物质(发色基团)的浓度，利用探测器对样本进行吸光度检测与对照组进行比较。/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="1.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/d2328b20-29b6-4efb-9d57-47522bac4416.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图2.1 光与物质作用原理图/strong/pp style="TEXT-ALIGN: center"(里面包含了吸收，透过，散射的示意)/pp　strong　2 、应用说明/strong/pp　　光谱仪测量吸光度的方法是将某一波长的平行光通过一块平面平行物体，然后对透过物体的光束进行检测。由于一部分能量被样品中的分子吸收，检测的入射光的强度要高于透过样品的光强。吸光度被广泛运用于液体和气体的光谱测量技术中。吸光度光谱可以对物质进行定量鉴别或者对物质进行指纹认证，也可以对溶液中的分子进行浓度定量分析。吸光度检测的样品不再局限于使用比色皿作为载体，流动池、浸入式探头、微量进样器、气体存储皿、微量比色皿等等都可以作为采样装置。影响比尔-朗伯定律效力的因素很多，可通过检测一系列标准品的吸光度来确认某一发色基团的线性，以消除实验、设备和试剂批次造成的误差 当平行光照射到物体表面时光的反射与吸光都会降低光强，通过将空白样品或对照样品的光进行定量分析，可以消除这些因素的影响。/pp　　食品安全：橄榄油纯度分析，酒发酵特性分析 /pp　　自然环境：钻石真伪分析，珍珠真伪分析，汽车尾气分析，大气污染等 /pp　　加工工艺：材料特性分析，半导体稳定性分析 /pp　　基础研究：微流控领域分析 /pp　　医学诊断：葡萄糖测定，DNA分析等。/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="2.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/cf719052-ada2-4dce-8f28-f03a768836bb.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图2 太阳眼镜吸光/strong/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="3.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/06e3e5c3-d152-485e-a776-6590bef2e34c.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图3 汽车尾气排放检测/strong/ppstrong　　3、典型产品和配置/strong/pp　　吸光度检测配置：/pp　　3.1. 光谱仪/pp　　3.2 光源/pp　　3.3.采样附件(光纤，探头，流动池)/pp　　3.4.吸光度测定标准参考/pp　　3.5 光谱仪控制软件/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="4.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/e03709e6-5141-4b36-8744-e7ddfe9e5aeb.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图4 吸光度检测基本配置/strong/pp style="TEXT-ALIGN: center"典型产品：高灵敏度光谱仪，光源，探头，流动池/pp　strong　4 、应用/strong/pp　　4.1 基于超小体积的紫外光谱仪的DNA的吸光度检测/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="5.1.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/f8a2a66d-58d7-4c8f-8c4f-e48a0c80e5e9.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="5.2.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/ba436475-de7f-44b9-883f-80a3f8636311.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="5.3.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/f21baef6-da02-4ddf-9b39-7a9ecd6f1906.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="5.4.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/b5c32046-fb47-45eb-8825-57382cf0d535.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图5 DNA吸光度光谱/strong/pp　　4.2 用固态光学光谱传感器鉴别橄榄油纯度及真伪 /pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="6.1.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/320d06e5-e149-48d4-a629-5086597e842d.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="6.2.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/9c3cfb38-6866-4a1d-bda0-d43da7c9ef2f.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图6 不同食用油样吸收光谱图/strong/pp　　4.3 吸光度检测在微流控领域的应用/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="7.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/7946fabd-1c8f-49aa-acd6-cd8d3cafbe08.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图7 样品组分检测应用/strong/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="8.jpg" style="HEIGHT: 232px WIDTH: 350px" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/f6f4c159-3bbe-4e6e-9c3c-30cd95d2c92f.jpg" width="350" height="232"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图8 微流控技术在细胞分离中的应用/strong/pp　　4.4 测试聚合物半导体材料的稳定性 /pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="9.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/f0f4b098-82a9-4753-9fed-0c74e791c3fa.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图9 分别在UV/VIS测量中使用的降解反应室和光路和探测射束/strong/pp　　4.5 基于光谱学的酒发酵特性分析。/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="10.1.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/f1700b3a-04a2-4798-9ff0-ee8657678ab9.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图10-1 14种酿酒酵母的LWUV-VIS吸收谱相关图，图(b) 给出筛选出的28种的吸收谱的重现性分析/strong/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="10.2.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/b075e26a-11c6-4e47-bc2c-15035dc5ffb2.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图10-2 28种酿酒酵母VIS-SWNIR波段PLS-R校准/strong/pp　　4.6 汽车尾气分析/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="11.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/15acb085-4e6a-4733-9e60-f3e3c3906aaf.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图11 汽车尾气检测装置/strong/pp　　4.7 基于紫外可见吸收法检测钻石 /pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="12.1.jpg" style="HEIGHT: 200px WIDTH: 200px" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/c007dbd0-c555-4821-ac8f-787c54ba9deb.jpg" width="200" height="200"/img title="12.2.jpg" style="HEIGHT: 199px WIDTH: 400px" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/3091e6c2-0132-49f8-833b-22014a71e362.jpg" width="400" height="199"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图12 钻石样品光谱/strong/pp　　4.8 紫外可见吸收法检测黄珍珠/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="13.1.jpg" style="HEIGHT: 150px WIDTH: 200px" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/7078af63-84b8-473a-ad1d-a39f0b6d938d.jpg" width="200" height="150"/img title="13.2.jpg" style="HEIGHT: 179px WIDTH: 400px" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/0a7d9706-500c-45d5-9add-ee1df9ae71f8.jpg" width="400" height="179"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图13 天然黄珍珠光谱/strong/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="14.jpg" style="HEIGHT: 221px WIDTH: 500px" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/54300efd-d8c6-45f2-a5de-cf9cfa770b99.jpg" width="500" height="221"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图14 染色黄珍珠光谱/strong/pp　　4.9 新型有机电致变色彩色电子纸/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="15.jpg" style="HEIGHT: 350px WIDTH: 350px" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/3a82a198-3d55-4e4b-b7a6-ade1ea0b1770.jpg" width="350" height="350"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图15 彩色电子纸光谱/strong/pp　　4.10 DNA杂交与DNA蛋白质相互作用的光纤SPR传感/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="16.1.jpg" style="HEIGHT: 241px WIDTH: 200px" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/b6470c80-cb28-4e1e-8328-0ea933d88f35.jpg" width="200" height="241"/img title="16.2.jpg" style="HEIGHT: 313px WIDTH: 400px" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/b4d15136-fd47-4f0f-ad76-fea795a624b7.jpg" width="400" height="313"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图16 光纤传感设备图和检测光谱/strong/pp　　4.11 多孔硅纳米材料检测低浓度葡萄糖/pp style="TEXT-ALIGN: center"img title="17.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201612/insimg/b6dd821b-738d-40b8-87ba-b6aa0047ba7f.jpg"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong图17 不同浓度葡萄糖光谱/strong/pp style="TEXT-ALIGN: right"（来源：海洋光学）/p

李昌厚(中国科学院上海营养与健康研究所 上海 200233)李菁菁（上海中医药大学公共健康学院 上海 201203）摘要：本文根据仪器学理论[3]并结合作者的实践，对紫外可见分光光度计的最佳吸光度范围（或最佳浓度范围）和最佳光谱带宽的选择方法进行了研究，并对有关问题进行了讨论。本文可供从事紫外可见分光光度计研发、制造、使用和维修的科技工作者参考。0、前言紫外可见分光光度计是目前国际上使用最多的常规分析仪器之一，但如何选择紫外可见分光光度计的最佳吸光度范围（最佳浓度范围）和光谱带宽，很多从事分析工作的科技工作者没有引起重视。对使用者来说，选择紫外可见分光光度计的最佳吸光度范围（或最佳浓度范围）和最佳光谱带宽，是用好紫外可见分光光度计最关键的问题之一，也是一门很深的学问。作者根据仪器学理论和自己的长期实践，对如何选择最佳吸光度范围（或最佳浓度范围）和选择最佳光谱带宽及有关问题进行了研究，提出了选择的方法，并对有关问题进行了讨论。1、吸光度范围（或试样浓度范围）的选择1．1、认真选择最佳吸光度（Absorbance－Abs）范围的重要性[1] 、[2]根据比耳定律[3]，吸光度（Abs）与试样的浓度（C）成正比。所以，不同的浓度范围内测量(即不同的吸光度范围内测量)，会引起不同的误差。这一点，所有使用紫外可见分光光度计的分析工作者，都必须高度重视。有时，很多科技工作者，在工作中往往忽视这个问题，例如：作者曾看到有一位分析人员，用一台光度噪声为0.005Abs的紫外可见分光光度计分析小于吸光度为0.005Abs的样品。她的工作做了很长时间，一是测试结果不稳定，二是结果比标准值小很多，总是得不到可靠的结果。于是，她开始怀疑所用的紫外可见分光光度计仪器有问题，后来，请制造厂的工程师来维修仪器，维修工程师一到现场，稍加检查，就立即指出仪器没有问题。但这位使用者仍坚持仪器有问题，制造厂的工程师经过反复检查，断定仪器肯定没有问题，并指出是样品太稀。后来，对样品稍加浓缩，很快就得到了令人满意的测试结果，所测得的数据，与标准值完全一致。还有一位科研工作者，他使用一台中档偏下的紫外可见分光光度计分析食品中的添加剂，他发现所测得的样品含量总是偏低。后来，也怀疑仪器有问题。结果，经维修工程师检修，认为仪器没有问题。最后，发现被分析的样品浓度太高，被测量样品的吸光度值达到2.5Abs。在把样品稀释到0.8Abs后，再反复多次测量，结果非常准确，与文献值完全一致。这两个例子，充分说明在使用紫外可见分光光度计时，对被分析样品的吸光度范围的选择非常重要。1、2、最佳吸光度范围（或最佳试样浓度）选择的原则1．2、1 吸光度范围不能太小（或试样浓度范围不能太稀）为什么吸光度范围不能太小？因为噪声是主要分析误差的来源之一[2] 、[3] ，它限制被分析试样吸光度值的下限。吸光度太小（或试样太稀）时，有用的信号会被仪器的噪声淹没；当光度噪声大到一定程度或样品吸光度小到一定程度时，吸光度就根本不与样品的浓度成正比。甚至会产生试样浓度变稀时，吸光度值反而增大（噪声所致）的现象，以致无法得到稳定的测量数据，产生很大的分析误差。例如：作者曾用某紫外可见分光光度计测试黄曲霉素，因为仪器的噪声太大，测试数据从0.4Abs就开始超过1％的相对误差。作者的实践表明，一般常规分析时，对大多数试样浓度取10µg/ml～100µg/ml（相当0.3～0,7Abs）左右为最佳。1．2．2、最佳吸光度值范围（或最佳试样浓度范围）不能太大为什么吸光度不能太大？因为杂散光是分析误差的主要来源之一[2]、[3]，它限制被分析试样吸光度值的上限，如果试样的吸光度太大，因为杂散光的原因，可能会使分析误差增大。因为杂散光会使分析测试结果严重偏离比耳定律（分析测试结果的数据可能偏小，也可能偏大；若杂散光被试样吸收则测量数据偏小，若杂散光不被试样吸收则测量数据偏大）。如果仪器的杂散光很大、被分析的试样吸光度值太大，吸光度就根本不与试样的浓度成正比，甚至会产生试样浓度增大时，吸光度值反而减小等反常现象。1．3、 试样浓度的选择原则1．3．1、试样不能太稀（理由如1．2、1所述）1．3．2、试样不能太浓（理由如1．2、2所述）1．3．3、在试样量允许时，试样的浓度应选择靠近最佳吸光度值（0.434Abs）。因为，从理论上讲，比耳定律在吸光度值为最佳值0.434Abs时，分析误差最小 。所以，如果被测试样太浓时，应向靠近0.434Ab的方向稀释。假设被测试试样太浓，达到2Abs左右，这时，应稀释到1Abs以下，但要注意不能太稀。在不同的吸光度上测试，相对误差和绝对误差都不同；作者研究的结果如下：（设仪器给出的△T=0.3%T；目前，国际上的高档紫外可见分光光度计一般都给出△T=0.3%T）。2、最佳光谱带宽的选择[4]、[5]、 [6]2．1、认真选择光谱带宽（Spectrum Band width）的重要性光谱带宽是紫外可见分光光度计主要分析误差的来源。我国广大的分析测试工作者，对紫外可见分光光度计光谱带宽的重要性并没有引起重视。甚至，有的分析工作者，根本就没有认识到光谱带宽会影响分析误差，这是影响我国紫外可见分光光度计仪器和应用水平提高的重要原因之一。作者在长期的实践中深深体会到，光谱带宽是非常重要的技术指标，并对它进行了认真研究[2]、[4]。作者为了研究光谱带宽对分析误差的影响，曾对青霉素钠、青霉素钾进行过测试研究。我国药典规定对青霉素钠、青霉素钾的分析测试用1nm光谱带宽，但作者对同一种浓度的青霉素钠测试用2nm光谱带宽测试时，吸光度值为0.805Abs；用1nm光谱带宽测试时，吸光度值为0.825Abs；用0.3nm光谱带宽测试时， 吸光度值为0.865Abs；用0.2nm光谱带宽测试时，吸光度值为0.823Abs。实践证明，0.3nm光谱带宽测试时吸光度值最大，2nm光谱带宽测试的结果比0.3nm光谱带宽测试时吸光度值小0.060 Abs，1nm光谱带宽测试时，吸光度值比0.3nm光谱带宽测试时吸光度值小0.04Abs，说明0.3nm光谱带宽是最佳光谱带宽。2nm光谱带宽测试时的吸光度值和0.3nm光谱带宽测试时的吸光度值绝对误差△A为0.06Abs，相对误差为△A/A＝0.06/0.865=0.69(6.9%)；1nm光谱带宽测试时的吸光度值和0.3nm光谱带宽测试时的吸光度值绝对误差△A为0.040Abs，相对误差为△A/A＝0.046(4.6%)。由此可见，光谱带宽的重要性是不言而喻的。但是，在实际工作中，有许多科技工作者很不重视光谱带宽问题。例如：我国某地的某某制药厂，采用国外某公司的紫外可见分光光度计作为质检仪器，该仪器的光谱带宽为5nm，根本不符合我国和世界各国药典规定用于药品检验的紫外可见分光光度计，其光谱带宽应为2nm的要求。作者从理论上计算，5nm光谱带宽的紫外可见分光光度计，若要用于药品检验，其测试误差为3%，而很多药品检验时，药典规定要求其分析误差在1％以内。所以，使用者一定要高度重视紫外可见分光光度计的光谱带宽的选择。2．2、光谱带宽选择的原则[2]2．2．1、根据分析工作的误差要求选择光谱带宽因为不同的光谱带宽对同一种药品进行分析测试有不同的误差，所以，不同行业应对光谱带宽有不同的要求。使用者应根据分析工作的误差要求来选取不同的光谱带宽。特别是制药行业、科研工作或要求较高的使用者，更应如此。2．2．2、光谱带宽不能过大或过小的原因我们应根据被分析样品对误差的要求，选用不同的光谱带宽来进行分析测试。一般来讲，不同的试样要求用不同的光谱带宽来分析，并且，我们应该选择最佳光谱带宽或选择靠近最佳光谱带宽的光谱带宽来分析，才能得到最佳分析结果。有些科研工作者以为光谱带宽越小越好（分辨率高），也有科研工作者以为光谱带宽越大越好（能量大，灵敏度高）。其实不然，如前所述，作者对同一浓度的青霉素钠、青霉素钾的测试就很好的说明了问题。2．3、光谱带宽与分析误差的关系在理想状态下[7]、 [8]，光谱带宽与分析误差的关系如表2：表2 在理想条件下，A obs与SBW在吸收极大时的关系[4]RBWA obs/ARBWA obs/ARBWA obs/A0.01000.99950.06000.99830.20000.98190.02000.99950.07000.99770.30000.96040.03000.99950.08000.99700.40000.93210.04000.0.99920.09000.99620.50000.89870.05000.99880.10000.9954表2中：RBW 为相对带宽；RBW＝SBW/NBW；NBW为被测样品的吸收带半宽度，指样品的吸收值达到最高峰值之半的两点间的波长间隔；A obs为吸光度实际测量值；A为吸光度理论值。表2 可供分析工作者用来修正实验值，但只适用于吸光度实际测量值小于1.0时的情况。因为一般的常规分析中，被测样品的实际测量吸光度值基本上都小于1.0，所以，表2具有实际参考价值。有学者对光谱带宽与分析测试误差的关系进行过研究，如Owen[5] 研究后指出：当仪器的光谱带宽（SBW）与被测样品的自然带宽（NBW，即吸收带半宽度，一般为20nm）之比小于或等于1时（即SBW/NBW≦0.1时），该光谱仪器可满足99％的样品的分析测试工作，且分析测试的准确度在99.5%以上。这也是我国和世界各国药典规定用于药检的紫外可见分光光度计的光谱带宽要求≦2nm的原因。曾有文献[6] 报道过光谱带宽对分析测试误差的影响，此不赘述。作者研究过光谱带宽对青霉素钠、青霉素钾定量分析的影响，发现青霉素钠定量分析的最佳光谱带宽与药典规定不一致（药典规定:取本品加水制成1ml含1.80mg的溶液，… … ，用1nm光谱带宽、在264nm处测试，吸光度应为0.80-0.88）。笔者在药典规定的条件下，将光谱带宽从1nm开始减小，一直减到0.3nm,其峰高一直在增高！但低于0.3nm时，峰高就开始下降。这说明青霉素钠的最佳光谱带宽是0.3nm，而不是1nm。为此，作者向当时国家药典委员会的专家张淑良先生（上海药检所）反映，他们接收了此意见。所以，今天的药典委员会已经去掉了每一种药品，一定要采用多大的光谱带宽检测了。笔者根据表2计算：当SBW为2nm以下时，由于SBW引起的分析测试的相对误差小于0.5%；但是，当SBW为5nm时，分析测试的相对误差将达到2.7%。可惜，我国有很多分析工作者不注重这个问题，有些药厂用SBW为5nm的UVS来作质量控制，其仪器本身的误差就远远超过我国药典规定的1％的要求，这必须要引起我国广大药检工作者重视。3、讨论3．1目前，国内外很多科技工作者经常将光谱带宽和狭缝宽度混为一谈,很多仪器制造商经常在自己的说明书中说：“狭缝宽度为XXXnm”，这是不对的。因为在光谱仪器中，狭缝宽度以mm计，而光谱带宽以nm计,二者相差一百万倍（106）。所以只能说“光谱带宽为XXXnm”，而不能说“狭缝宽度为XXXnm”。同时还必须注意，光谱仪器的狭缝宽度制造商一般是不会告诉使用者的，因为它涉及到仪器设计时所选用的准直镜焦距、光栅和物镜的焦距等指标。所以，我们对仪器的技术指标描述应该注意科学性、国际接轨和规范性。3．2 有许多紫外可见分光光度计使用者，很不注重对吸光度范围的选择,他们不了解不同浓度（或吸光度）分析时，有不同的分析误差。因此，往往在样品前处理上有时比较马虎,。他们此外，也不大注意或不懂得将样品稀释到最佳浓度范围,这是很多使用紫外可见分光光度计的分析工作者应该特别引起重视的问题。3．3目前，国外有些紫外可见分光光度计制造商,在自己的说明书中写某某最高级的紫外可见分光光度计，仪器的最大光谱带宽为8nm（特别是在招标时，作为仪器的“特点”提出)，这完全在误导使用者。因为，从文献[2]可以非常简单计算出，光谱带宽为8nm时，分析测试结果的相对误差达到了6.79%。而紫外吸收光谱分析是一种精密分析，有些样品（如药品）分析时，要求相对误差小于1%。例如：世界上许多国家的药典规定，用于药品检验的紫外仪器，要求的光谱带宽为2nm，此时的相对误差只有0.5%。所以，在高档（或最高级）的紫外可见光分光光度计中，写出光谱带宽为8nm是不合适的。4、主要参考文献[1]陈国珍主编，紫外可见光分光光度法，原子能出版社（北京），1983.[2]李昌厚著，紫外可见分光光度计，北京：化学工业出版社，2005[3]李昌厚著，仪器学理论与实践，北京：科学出版社，2008[4]李昌厚，光谱带宽对分析误差影响的研究，分析测试技术与仪器，，10(2)，65～67，2004[5]T. Owen, Fundamentals of UV-Visible Spectroscopy,© Copyright Hewlett-Packard Company, Printed in Germany 09/96，Hewlett-Packard publication number 12-5965-5123E[6]E.disbury, J. R. Practical Hints on Absorption Spectrometry,UV/Visible,NewYork, Plenum Press,1967作者简介李昌厚，中国科学院上海营养与健康研究所研究员、教授、博士生导师、国务院政府津贴终身享受者；原仪器分析室主任、生命科学仪器及其应用研究室主任；曾任华东理工大学等兼职教授、上海化工研究院院士专家工作站专家委员会成员、中国仪器仪表学会理事、中国仪器仪表学会分析仪器分会第五届和第六届副理事长、全国光谱仪器专业委员会副主任、全国高速分析专业委员会副主任、原国家认监委实验室计量认证/审查认可国家级常任评审员、《生命科学仪器》副主编、《光谱仪器与分析》副主编、国家科技部多项重大仪器及其应用专项的专家组组长等职。主要从事各类光谱和色谱仪器及其应用研究；在仪器学理论、分析仪器性能指标的测试方法、光电技术等方面有精深研究；以第一完成者身份，完成了15项科研成果，其中5项获得省部级以上科技奖励（含国家发明奖1项）；发表论文280篇（退休后97篇）、出版了：仪器学理论与实践、光谱仪器及其应用、色谱仪器及其应用等的专著5本。曾先后任北京普析、美国ISCO等国内外十多家高科技公司的专家组、顾问组组长、《仪器信息网》、等多个高科技学术团体的技术专家顾问或专家委员会成员等学术团体的领导职务。