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利用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统及 Agilent ZORBAX RRHD 二苯基亚 2 μm 色谱柱分析 IgG1 中的二硫键 (PDF)
2022/11/14 09:40
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方案摘要：
产品配置单：
二手翻新安捷伦1260液相色谱仪
型号： 1260
产地： 美国
品牌： 安捷伦
¥20万
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方案详情：
虽然近年来重组 mAb 疗法取得了很大的 发展，但是关于它们的二硫键模式，人 们所掌握的信息很少。研究 IgG1 抗体中 完整的二硫键分布极具挑战性，这是由于 它们的分子量很大，并且二硫键的数目很 多。对于治疗性单克隆抗体 (mAb)，二 硫键是保持免疫球蛋白 (IgG) 三级和四级 结构的关键因素。在 mAb 生产过程中， 链间和链内的二硫键均在表达宿主细胞内 形成，然后进行分泌和纯化。之前的报 道指出，对于 IgG2 及二硫化介导的 IgG4 臂交换，二硫键会发生重排，反映出这 些 IgG 类型的一种固有行为1, 2。但是， 已有报道观察到 IgG1 中的二硫键数目呈 现出不规则的显著降低3，这对于治疗性 mAb 的生产而言是一个很重要的问题。本 应用简报证实了 1260 生物惰性四元泵液相 色谱系统适用于 IgG1 中二硫键的分离和分 析，该系统采用反相 HPLC 方法和ZORBAX RRHD 300 二苯基，2.1 × 100 mm，1.8 µm 粒径色谱柱。采用亚 2 µm 粒径色谱柱的 超高效液相色谱 (UHPLC) 分离，可改善每 次分析的分离度和灵敏度，缩短分析时间， 并且可用于分析 IgG1、还原态 IgG1，以 及 IgG1 消化产生的肽段。
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