麦角菌的分布区域与传播方式及形态特征与药用价值！ 一、菌种简介麦角菌（Clavieps purpurea (Fr.)Tul．）属于真菌界、子囊菌门、核菌纲、肉座菌目、麦角菌科、麦角菌属。此菌寄生在黑麦、小麦、大麦、燕麦、鹅冠草等禾本科植物的子房内，将子房变为菌核，形状如同麦粒，故称之为麦角。 二、基本信息中文学名：麦角菌拉丁学名：Clavieps purpurea (Fr.)Tul．界：真菌界门：子囊菌门纲：核菌纲目：肉座菌目科：麦角菌科属：麦角菌属分布区域：贵州、黑龙江，浙江等13省 三、分布区域麦角菌在中国分布很广，全国约有13个省发现过麦角菌存在。南至贵州，北达黑龙江，东自浙江，西抵青海都有麦角菌的分布。 四、传播方式麦角菌的主要寄主是黑麦。当黑麦开花期，麦角菌线状、单细胞的子囊孢子借风力传播到寄主的穗花上，立刻萌发出芽管，由雌蕊的柱头侵入子房。菌丝滋长蔓延，发育成白色、棉絮状的菌丝体并充满子房。毁坏子房内部组织后逐渐突破子房壁，生出成对短小的分生孢子梗，其顶端产生大量白色、卵形、透明的分生孢子。同时菌丝体分泌出一种具甜味的粘性物质，引诱苍蝇、蚂蚁等昆虫把分生孢子传至其它健康的花穗上，麦角病随之重复传播。当黑麦快成熟时，受害子房不再产生分生孢子，子房内部的菌丝体逐渐收缩成一团，进而变成黑色坚硬的菌丝组织体称为菌核（麦角）。 五、形态特征麦角近圆柱形，两端角状，长1～2cm，内部白色。麦角掉落土中越冬或混入种子中，再随种子播入土中。翌年春天每个麦角萌发，生出10～ 20个子实体。子实体蘑菇状，头部膨大呈圆球形，称子座，其直径1～2mm，灰白色或紫红色，下有一长而弯曲的细柄。子座表层下埋生一层子囊壳，子囊壳瓶状，孔口稍突出于子座的表面，因此在成熟子座的表面上可以看到许多小突起。每个子囊壳内产生数个长圆筒形子囊，每个子囊内产生8个线状的单细胞的子囊孢子。子囊孢子成熟后从子囊壳中放射出来，借助气流传播。 六、药用价值麦角为名贵中药材，据分析其所含的生物碱多达12种，分为麦角胺、麦角毒碱、麦角新碱3大类。主要功能是引起肌肉痉挛收缩，故常用作妇产科药物，用作治疗产后出血的止血剂和促进子宫复原的收敛剂。 七、产生危害麦角是麦类和禾本科牧草的重要病害，危害的禾本科植物约有16属，22种之多。不但使麦类大幅度减产而且含有剧毒，牲畜误食带麦角的饲草可中毒死亡，人药用剂量不当可造成流产，重者发生死亡现象。麦角菌用深层培养法除可产生麦角碱外，尚能利用其吲哚产生L-色氨酸。麦角菌曾在中世纪欧洲引起过所谓的“传染病”，有上千万人死亡，许多妇女流产。麦角菌病的后果极为可怕，全身肌肉剥落，疼痛不止，最后极其悲惨的死去。后来查出是麦角菌干的好事。后来面粉制造工艺更精良了，再也没有出现过因食用含有麦角菌的面粉而中毒的案例了。 八、历史背景在中世纪的欧洲，麦角病肆虐了几个世纪，在当时造成极大的恐慌。许多人也因此遭殃，成为无知的牺牲品。其中最惨烈的莫过于“塞勒姆审巫案”。 这场由麦角病引发的审巫风潮将19个人送上了绞刑架，4人死于监狱中，还有200多人被逮捕监禁。麦角菌还会引起昏睡，有时还会使人产生幻觉。在墨西哥的一个偏僻村庄里，每当祭神节来临的时候，村里的阿兹蒂克人就会聚集在一间神秘的茅屋里举行神秘的仪式。一位名叫萨古那的传教士无意中发现了其中的秘密。一天晚上，他听到茅屋里传来了一阵鼾声，在好奇心的驱使下，他推开了茅屋的门，却看到了惊人的一幕：村民们横七竖八的倒在屋里，正呼呼大睡。屋子中央的桌上，还残留有村民吃剩的淡紫色牛角状食物。萨古那尝了一口，觉得又苦又涩，便将它放下了。回到家中之后，萨古那眼前浮现出一些奇怪的景象：张牙舞爪的美洲豹、青铜色的火鸡、各种妖魔鬼怪的乱舞……疑惑不解的萨古那将这个奇怪的现象留在了日记里，未等到他解开谜底就离开了人世。后来，一对美国夫妇约翰和沃森无意中看到了他日记里这段奇怪的经历，对人种学和人类发展史颇有兴趣的约翰、沃森夫妇决定前往墨西哥一探究竟。为了赢得村民的信任，他们为当地村民治病，救治了不少危重病人，终于被村民接纳。于是，在祭神节到来的时候，约翰、沃森夫妇被邀请参加。在仪式的现场，他们看到一位担任祭主的老妇人一口气吞下了20个“牛角”，然后将剩下的分发给村民，大约10分钟后，村民们又唱又跳，陷入一种疯狂状态。约翰夫妇也吃了几个，不久便也昏昏沉沉。第二天，约翰夫妇在昏睡中醒来之后，发现村民们仍在酣睡，他们取了几只“牛角”跑回住所，将它寄给了美国生物学家海姆博士。据他们后来回忆，他们昏昏沉沉中，眼前好像出现了火鸡、远古时代的武士……经海姆博士鉴定，这种牛角中含有一种会使人产生幻觉的真菌，这种真菌就是麦角菌。吃了带有这种麦角菌的食物，人们会产生各种奇怪的幻觉，眼前会出现各种奇怪的事物，有时候还会感觉自己的身体像是被劈成了两半。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   解藻酸弧菌的形态特征与培养方法及操作流程！ 解藻酸弧菌是Vibrio属的微生物，原产地为中国香港。具有潜在的抗污损活性。主要用途为研究，具体用途为potential antifouling 潜在的抗污损活性。 一、菌种简介平台编号：Bio-00172提供形式：冻干物拉丁属名：Vibrio Alginolyticus中文译名：解藻酸弧菌拉丁学名：Vibrio alginolyticus原始编号：90菌株来源：←美国University of California Davis保藏人：Baumann直接来源国家：美国保藏时间：6/1/1982其他保藏编号：=ATCC 33787生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：琥珀酸丰富培养温度：30℃培养基：0223    用途：琥珀酸丰富注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌种的概念 原意是指孢子(相当于植物的种子) ,但在实际中,常将经过人工培养的纯菌丝体连同培养基质一同叫做菌种。 三、菌种的类型 在中根据菌种的来源,繁殖代数及目的,把菌种分为母种,原种和栽培种.分别叫一级种,二级种,三级种。母种：将纯菌丝体或孢子在试管培养基中繁殖而成。可以繁殖原种,也适宜菌种保藏。原种：母种菌丝在固体培养基上繁殖而成。这一过程增强菌丝对培养环境的适应性,又起到扩繁的作用，原种可以直接出菇。 四、培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、操作流程菌株复苏:(按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏)1) 所有菌株,显色培养基分4区,每区一株,标明菌株号、菌种名常用缩写如下:cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 热带念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隐球菌,其他菌种标记全名2) 隐球菌除传显色培养基以外,另传1/2块血平皿上述菌株统一37oC孵育48h菌种鉴定:(48h后观察结果) 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      甲基营养型芽孢杆菌在农业上的作用与应用研究！ 甲基营养型芽孢杆菌作为芽孢杆菌属生防菌的新成员，具有抗逆性强、抗菌谱广、环境友好且不易产生耐药性等特点，在倡导绿色生态农业的时代背景下，甲基营养型芽孢杆菌及其制剂将具有非常广阔的发展前景。本文主要从甲基营养型芽孢杆菌的代谢产物、作用机理及在农业上的应用论述其研究进展。 农作物病害防治一直是困扰世界农业生产的难题，一直以来化学农药的大量使用给农作物病害防治带来了极大的便利且取得了显著效果，但随之而来的负面效应如病原菌耐药性的增强、环境污染、大量农产品农药残留超标，也让人越来越难以接受，因此，绿色、无残留、无公害的生物防治方法应运而生。生防菌作为农作物病害防治的有益菌，由于其能够代谢产生多种抗菌物质抑制作物病原菌的生长并竞生为优势菌群，同时还能改善土壤环境，且不会产生耐药性的特点，近年来受到越来越多的关注。 目前，细菌、真菌、放线菌作为生防菌在生物防治中均有应用。其中，芽孢杆菌属作为生防菌中的佼佼者，已有多种芽孢杆菌被研究应用于农作物病害防治，穆常青等发现枯草芽孢杆菌B-332菌株对稻瘟病具有良好的防治效果，纪兆林等研究地衣芽孢杆菌对苹果轮纹病菌和炭疽病菌具有较强的防治效果，陆燕等研究解淀粉芽孢杆菌41B-1对花生白绢病具有良好的防治效果;甲基营养型芽孢杆菌 （Bacillus methylotrophicus） 是Munusamy Madhaiyan等人2010年報道的新种，作为芽孢杆菌属的一员，甲基营养型芽孢杆菌作为生防菌的研究越来越多，其在农作物病害生物防治领域正扮演着越来越重要的角色。本文主要从甲基营养型芽孢杆菌的抑菌代谢产物、作用机理及其在农业上的应用进行综述。 一、抑菌代谢产物 生防菌之所以能起到防治农作物病害的作用，主要归功于其自身生长繁殖所产生的一种或多种抑菌代谢产物，这些抑菌代谢产物起到了类似抗生素的作用，往往具有广谱抗菌性。张龙来等研究解淀粉芽孢杆菌HN011对多种病害的病原真菌具有明显的拮抗作用，如香蕉枯萎病、番茄茎腐根腐病、菜心炭疽病、水稻稻瘟病、水稻纹枯病，经大量理化分析证明其发酵液的代谢产物主要是一些环二肽;孙启利等研究地衣芽孢杆菌W10对油菜菌核病具有较强的防治效果，经分析其抑菌代谢产物为W10抗菌蛋白。 甲基营养型芽孢杆菌代谢产物多样，经研究具有抑菌能力的代谢产物主要有抗菌蛋白、抗菌肽、蛋白酶、纤维素酶、β-1，3-葡聚糖酶、嗜铁素等，目前被报道的一些甲基营养型芽孢杆菌抗菌试验中，这些代谢产物中的几种通常能够被同时检测出来，说明甲基营养型芽孢杆菌可以从不同的途径对相应病原菌进行抑制。采俊香等对抱茎苦荬菜内生甲基营养型芽孢杆菌G-5抗菌蛋白抗真菌特性进行研究，其对番茄早疫病病菌、梨黑斑病病菌和番茄灰霉病病菌均具有较好抑菌效果，抑菌率分别为88.3%、90.5%和95.4%;王洪梅等从土壤中筛选出一株对番茄青枯病病原菌具有较强抑制效果的菌株N5，经鉴定为甲基营养型芽孢杆菌，通过大量理化分析实验，证明其起到抑菌效果的代谢产物为铁载体、β-1，3-葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶及多种脂肽类物质。吕倩等从南海深海海泥中采集的88个细菌样品中分离出一株具有较强抗真菌活性的细菌SHB114，鉴定为甲基营养型芽孢杆菌，其对黄瓜炭疽病菌、立枯丝核菌、黄瓜枯萎病菌等植物病原真菌具有较强的抑制活性。对其抗真菌活性物质跟踪检测，分离纯化得到3个脂肽类化合物，经鉴定均为bacillomycin Lc类脂肽。 二、作用机理 1、竞争作用 甲基营养型芽孢杆菌作为芽孢杆菌属生防菌，其主要竞争作用为营养竞争和位点竞争。营养竞争如在产生嗜铁素的甲基营养型芽孢杆菌中，其代谢产生的嗜铁素可与病原菌竞争土壤中的Fe3+，由于铁元素是微生物生长必不可少的微量元素，因而能起到抑制病原菌生长的作用;位点竞争是指其通过在植物根际、体表或体内的定殖和繁衍占据有利靶位，来降低病原微生物侵染的机会。 2、拮抗作用 拮抗作用主要是甲基营养型芽孢杆菌通过产生各种抑菌代谢产物，来抑制植物病原菌生长或直接将其杀死，目前以抗菌肽、蛋白酶和纤维素酶的拮抗机制研究最为常见。 （1）抗菌肽 抗菌肽是一种广泛存在于细菌、真菌、无脊椎动物、脊椎动物、植物乃至人类中的天然小分子抗菌物质，由于其具有广谱抗菌活性且不易产生耐药性的特点，近年来在植物病害生防领域受到越来越多的研究。抗菌肽通常带有一定量的电荷，具有两亲性，按其结构一般可以分为以下几种：α-螺旋、β -片层、环状结构、无规卷曲、复合结构。根据目前的研究，一般认为其抑制或杀死病原菌的作用机理主要有2种，通过自身特殊的分子结构作用于细胞膜，通过破坏胞膜的完整性并形成离子通道，造成细胞内容物外溢、胞外水分大量内流使细胞不能维持正常的渗透压而死亡，这一过程目前发现的有4种作用类型，分别是桶板模型、毯式模型、环孔模型和凝聚模型;作用于病原菌胞内靶点，如抑制核苷酸、蛋白质的合成等。 （2）蛋白酶、纤维素酶和β-1，3-葡聚糖酶 植物病原真菌细胞壁一般是由几丁质、β-1，3-葡聚糖、纤维素和少量的蛋白质组成，因此部分甲基营养型芽孢杆菌产生的蛋白酶、纤维素酶和β-1，3-葡聚糖酶可以作用于病原真菌细胞壁，造成其细胞壁的溶解而死亡。 3、诱导抗性 植物在受到外源物质诱导后，会产生诱导抗性，体内会发生一系列信号传导和物质代谢变化，如自身防御酶水平和活性显著增高，抗病机制得到增强。李桐在甲基营养型芽孢杆菌NJ13对人参锈腐病的生防作用研究中发现，经过NJ13菌株诱导的人参苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶3种防御酶基因，在接种后不同时间点表达量均较无菌水对照组有不同程度的提高。 三、应用 甲基营养型芽孢杆菌自2010年被首次发现并报道以来，国内外研究人员对其生物特性进行了大量的研究和开发，目前，其在农业、工业、养殖业、食品加工、环境保护、医药等方面的应用研究均有报道。作为生防菌芽孢杆菌属的新成员，其在农业生物防治领域已然成为一颗冉冉升起的新星。 由灰葡萄孢菌 （灰霉菌） Botrytis cinerea 引起的灰霉病是世界范围内危害最为严重的真菌性病害，能够侵染包括番茄 Solanum lycopersicum、黄瓜 Cucumis sativus Linn、葡萄 Vitis spp.、草莓 Fragaria ananassa Duch 等蔬菜在内的200多种植物。魏新艳、黄媛媛等从464株海洋细菌中分离出一株具有较强拮抗灰霉菌作用的甲基营养型芽孢杆菌BH21，其具有产生多种抗菌脂肽的能力，发酵液脂肽粗提物对葡萄灰霉病菌具有较强的拮抗作用，在葡萄灰霉病生物防治中具有潜在应用价值。 我国是世界上几个最大的棉花主产地之一，但每年由大丽轮枝菌 （Verticillium dahliae Kleb.） 引起的黄萎病对棉花生产造成了大量的损失，严重时可减产20%～60%。陈丽华等[16]从棉花植株上分离筛选出一株对大丽轮枝菌具有较强拮抗作用的甲基营养型芽孢杆菌LH-L3，经过室内盆栽实验证明，菌株LH-L3具有较好的促生长和棉花黄萎病防治的效果，具有进一步开发应用潜力。 西瓜枯萎病是由西瓜枯萎尖孢鐮刀菌引起的一种顽固性土传病害，发病率高，造成西瓜秧苗萎蔫坏死，严重影响西瓜产量和质量。殷晓敏等从西瓜枯萎病重病园区中长势良好的西瓜根际分离获得一株甲基营养型芽孢杆菌XG-1，其对西瓜枯萎病菌菌丝生长、孢子萌发具有良好抑制效果;田间小区实验证明，经XG-1菌液灌根处理的瓜苗植株发病率显著降低。 王全等采用对峙法筛选得到一株对白菜黑斑病菌 Alternaria brassicae 具有强烈拮抗作用的甲基营养型芽孢杆菌LBC-2，田间防治试验表明，LBC-2菌剂的病指防效达到79.08%，对白菜黑斑病具有一定的防治作用。 谢学文等从连作多年的黄瓜根际土样中筛选得到一株对黄瓜炭疽病菌 Colletotrichum orbiculare 具有较强拮抗作用的菌株WF-3，2a的田间试验表明菌株WF-3培养物对黄瓜炭疽病具有良好的防治效果，防效分别达到68.14%和73.7%。 胡江春等从辽宁渤海海域的海泥样品中筛选出一株甲基营养型芽孢杆菌BAC-9912，其产生的脂肽类化合物等代谢产物对灰霉菌病原菌 Botrytis cinerea 具有很强的抑菌活性，且安全无公害。多年的田间试验证明BAC-9912对黄瓜、番茄的灰霉、晚疫病，棉花黄枯萎病及苹果树腐烂病均具有显著防效，是一种绿色、新型、高效的生物杀菌剂。2015年12月31日，农业部药检所公示华北制药集团爱诺有限公司甲基营养型芽孢杆菌9912母药和可湿性粉剂在我国首获登记。母药含量为40亿芽孢/g，毒性微毒;制剂含量为30亿芽孢/g，剂型为可湿性粉剂，毒性微毒，喷雾用于防治黄瓜灰霉病，制剂用药量937.5～1，500g/hm2。 四、问题与展望 目前，国内外对于甲基营养型芽孢杆菌在农业上的生防应用研究主要还停留在“室内”开发、试验阶段，考虑到生防菌在大田植物根际、体内或体表的定殖和繁衍是其防控植物病害的基础，因此在选育优良抗病菌株的基础上，要根据菌株自身生长特性，并结合田间环境因素，通过适当的物理、化学、生物等技术手段对其进行改良，增强其田间定殖能力。甲基营养型芽孢杆菌能够产生丰富的代谢产物，但拮抗菌株发挥抗菌作用的具体代谢产物种类及其作用机制还有待进一步研究。 由于传统的化学农业在给人们带来便利和高效的同时也造成了严重的水土污染、农药残留超标、耐药性等问题，因此，具有绿色生态、无公害、不易产生耐药性等多项优点的生物防治产业受到了世界各国研究机构的广泛关注，拥有潜力巨大的市场应用价值。而甲基营养型芽孢杆菌作为近年来新开发的生防菌，具有抗逆性强、代谢产物丰富、抑菌谱广等多种优良特性，在农业植物病害生物防治领域具有广阔的发展前景。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞的背景与应用及培养步骤！ 一、背景 大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞也称为AR42J。，该细胞源自大鼠胰外分泌性腺肿瘤，由N.W.Jessop于1980年建系。大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞在肾上腺皮质激素刺激下可诱导出外分泌活性，并伴有广泛的内质网重构。 二、大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞的培养 1、大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞培养基及培养冻存条件准备： 1）准备F-12K培养基；优质胎牛血清，20%；双抗，1%。 2）大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3）大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 三、应用 大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞可以用于miR-15b-5p对大鼠的胰腺外分泌细胞AR42J凋亡的影响： 急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)是一种伴有胰脏腺泡细胞损伤凋亡、胰脏炎症及强烈的全身炎症反应的胃肠疾病。细胞凋亡的调节在整个生物体生长发育及疾病发展方面起着重要作用。mi R-15b-5p在多种疾病中有着调控细胞凋亡继而影响疾病发展的作用。而mi R-15b-5p在急性胰腺炎细胞凋亡中的作用尚未被研究,因此本文旨在探究mi R-15b-5p是否参与对急性胰腺炎细胞凋亡的调控。 方法：在体外将AR42J细胞培养至对数生长期,加入浓度100n M的雨蛙素进行AP造模,造模完成后提取mi RNA进行采用q RT-PCR检测mi R-15b-5p相对表达量。随后利用转染试剂将mi R-15b-5p mimics、mi R-15b-5p mimics NC、mi R-15b-5p inhibitor、mi R-15b-5p inhibitor NC转染进AR42J细胞中,转染24小时后提取mi RNA采用q RT-PCR检测mi R-15b-5p的相对表达量。 接着将处于对数生长期的细胞种于六孔板中,按照上述分组对细胞进行转染,24小时后,每孔细胞中加入雨蛙素处理24小时构建体外急性胰腺炎模型,采用q RT-PCR检测mi R-15b-5p的相对表达量,同时采用q RT-PCR检测Caspase-3及Caspase-9的m RNA相对表达水平,提取细胞蛋白采用Western blot测定Caspase-3及Caspase-9蛋白相对表达水平,采用流式细胞术来测定各组细胞的凋亡状况。 结果： (1)在AP模型中,q RT-PCR结果显示AP组mi R-15b-5p相对表达量较空白对照组增加(P (2)转染后mi R-15b-5p在mi R-15b-5p mimics组相对表达水平增高(P (3)使用mi R-15b-5p inhibitor后,细胞凋亡有关基因Caspase-3和Caspase-9的m RNA相对表达水平下降(P (4)Western blot测定表明使用mi R-15b-5p inhibitor后,细胞凋亡有关基因Caspase-3和Caspase-9的蛋白质相对表达水平下降(P (5)流式细胞术测定提示使用mi R-15b-5p inhibitor后,细胞凋发生率下降(P 结论：发生胰腺炎时,mi R-15b-5p表达量相对增高,mi R-15b-5p inhibitor能够减少由雨蛙素所诱发的胰腺外分泌细胞凋亡,而在使用mi R-15b-5p mimics以后,增加了细胞凋亡。mi R-15b-5p可能通过活化Caspase-9激活下游Caspase-3,诱发细胞凋亡。故mi R-15b-5p可能是防治急性胰腺炎有效的潜在靶点。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

         革兰氏染色的原理与步骤及结果准确性的关键因素有哪些？ 革兰氏染色的原理： 细菌细胞通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 革兰氏染色的步骤： 涂片、晾干、固定、染色、水洗、媒染、脱色、复染。此处不加赘述。 影响革兰氏染色结果准确性的关键因素： 1、试剂影响 这是我们首先应该确保的，我们使用的试剂必须是有效的。实验室应当建立有效的试剂管理程序，从试剂的验收到存放、使用、过期后的废弃处理都应有严格规定，确保我们使用的试剂是有效的。工欲善其事必先利其器，这也是我们试验成功最基础的一环。 2、染色菌的选择 菌龄对革兰氏染色结果的影响是十分大的。我们染色过程中选择的菌应该是处于活跃生长期，这样的细菌活性强，生理特征明显，所以染色的结果准确度高，一般情况下不会出现误差。培养时间较长的革兰氏阳性菌，由于细胞老化，甚至有部分菌在染色之前就已经死亡或者自行溶解了，造成细胞壁通透性增加，就会呈现出假阴性。以金黄色葡萄球菌为例，金葡是典型的革兰氏阳性菌，有人曾经统计过培养至不同时间的金葡的革兰氏染色结果，结果表明，在金葡活跃期的22h-26h之间，染色结果的准确率基本可以达到100%，而超过26h之后，准确率就开始下降，培养至36h时，准确率大概会下降30%左右。所以我们在染色时，一定要选择处于活跃期、活性较强的菌落，在检测过程中一定要严格的在国标要求的时间段内进行染色试验，不能提前或者延后。 3、涂菌的状态 在染色最初的涂布中，在挑取菌体后应该在无菌水上涂成薄薄的菌膜。而在涂布过程中，若是菌体堆积，也会极大影响染色结果的准确性。菌落堆积过多，往往菌体之间变得毫无缝隙，而其细胞壁的成分影响造成了脱色的情况不佳，容易产生假阳性的结果。同时，在初染、媒染及复染的过程中，应将染液覆盖整个菌膜，避免一部分菌染色而另一部分菌没有染色。因此在涂片过程一定要将菌膜涂得少而均匀，这样才能达到最佳效果。 4、媒染时间 媒染时间对革兰氏阴性菌的染色结果有很大影响。由于媒染时间过长，结晶紫在碘液长时间作用下过分牢固结合在菌体细胞壁上，影响了酒精的脱色效果，从而会导致这种假阳性的效果。以典型的革兰氏阴性菌大肠埃希氏菌为例，有人做过统计，媒染时间严格控制在40s-60s之内，染色结果准确率基本可达到100%，而超过60s准确率会有一定的降低，若媒染超过100s，准确率甚至可降低接近20%左右。因此在媒染过程中一定要注意媒染时间，控制在50-60s为宜。 5、酒精脱色 酒精脱色也是一个对结果影响较大的操作过程。革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌最主要的差异是细胞壁肽聚糖层厚度和结构，革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层很薄，脂多糖含量高因此在酒精脱色时，细菌细胞壁的多糖成分会被酒精溶解，增大了细胞壁的通透性，结晶紫及碘复合物就很快被酒精洗脱，之后就会被沙黄复染呈红色；而阳性菌肽聚糖层厚，脂多糖少，酒精只能起到脱水效果而无法进入，这样结晶紫和复合物就无法洗脱出来使细胞呈紫色。因此，酒精脱色时间短，脱色效果不佳，会导致阴性菌菌体内的结晶紫和复合物不能有效的全部洗脱出来，就会出现明显的误差，使阴性菌出现假阳性。而洗脱时间过长，也会导致阳性菌的细胞壁被酒精破坏，导致细胞内的紫色被洗脱，呈现假阴性。因此洗脱时间也是革兰氏染色的关键环节。洗脱时间应当严格控制在20s-30s之间，同时保证洗脱效果。 总结一下，在整个革兰氏染色过程中，在保证试剂有效的前提下，需要严格控制的几个方面：染色菌必须是在其活跃期内，涂布状态不可太厚，媒染时间严格控制在50s-60s之间，脱色时间严格控制在20s-30s。把握以上的关键控制点，革兰氏染色基本就不会出现问题啦！ 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

             嗜热菌的检验程序与操作步骤及计算方法与结果报告！ 1、检验程序 婴幼儿配方奶粉中嗜热菌的检验程序见图1。   2、操作步骤 2.1 样品的稀释 2.1.1 称取25g样品置于盛有225mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。 2.1.2 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管或吸头反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。 2.1.3 按2.1.2操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。 2.1.4 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌培养皿内作空白对照。 2.1.5及时将15mL～20mL冷却至46℃～50℃的MPC培养基（可放置于48℃±2℃恒温装置中保温）倾注培养皿，并转动培养皿使其混合均匀。 2.2 培养 水平放置待琼脂凝固后，将平板翻转，55℃±1℃培养48h ± 2h，培养过程中注意防止平板干裂。 2.3 菌落计数 2.3.1 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony forming unit，CFU)表示。 2.3.2 选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计嗜热菌数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。 3、嗜热菌的计算方法 3.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g样品中嗜热菌结果。 3.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（1）计算：   式中: N ——样品中嗜落菌菌落数； ΣC——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和； n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数； n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数； d ——稀释因子(第一稀释度)。 3.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均嗜落菌菌落数乘以最高稀释倍数计算。 3.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均嗜落菌菌落数乘以稀释倍数计算。 3.5 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。 3.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 4、结果报告 4.1 菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 4.2 菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。 4.3 若空白对照上有菌落生长，则此次检验结果无效。 4.4 以CFU/g为单位报告。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

             培养基中的无机成分在微生物生长和发育过程中的主要功能！ 培养基中的无机成分主要指各种盐类和离子。微生物生长需要的主要无机元素为钠、钾、镁、钙、铁、锰、硫、磷、氯等。磷酸盐同时具有缓冲作用。无机成分的生产工艺和质量,也将严重影响培养基的质量。 无机成分在微生物生长和发育过程中的主要功能为： (1)构成菌体的成分； (2)作为酶的组成部分或促进酶反应； (3)维持酸碱平衡或细胞内的渗透压； (4)作为自养菌的能源。不同的无机成分作用不同，其主要功能如下: 1、磷：微生物细胞中磷的含量较多,磷在代谢活动中占有重要的地位，磷酸盐是重要的缓冲剂，而且磷酸盐可促进芽孢的发育。 2、硫：硫氢基(-SH)是许多酶类的必要基，也是某些自养菌的能源 3、铁：是许多酶的组成部分,例如,过氧化氢酶、细胞色素氧化酶等，一定浓度的铁离子,能促进微生物毒素产生。 4、镁：镁离子是许多酶的重要组成部分，能促进微生物的细胞生长发育。 5、锰：糖代谢中许多类的活性都需要锰, 锰对羧于化作用是必需的元素。 6、钙：变形杆菌需要钙以合成蛋白酶。 7、钾：钾离子与磷的传递作用有关。 8、氯化钠：主要是维护微生物细胞的渗透压。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              耐药性鲍曼不动杆菌的耐药情况与作用机制及研究动态！ 什么是耐药性鲍曼不动杆菌？ 鲍曼不动杆菌又称为鲍氏不动杆菌，属于革兰氏阴性菌，是一种严格需氧、非乳糖发酵的条件致病菌，不具鞭毛，移动性不高，但生命力极强，可广泛存在于大自然中。它是一种常见机会致病菌。 耐药性鲍曼不动杆菌具有强大的耐药能力，可对多种抗生素产生耐药性，包括头孢菌素、碳青霉烯类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类等。根据耐药程度的不同，可分为多重耐药（MDR）、广泛耐药（XDR）和全耐药（PDR）三种类型。 该细菌广泛分布于医院环境，特别在重症监护病房（ICU），极易造成危重患者的感染。它可以长期存活在医院环境中，并且易在住院患者皮肤、结膜、口腔、呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道等部位定植。主要引起呼吸道感染，也可引发菌血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎、手术部位感染、呼吸机相关性肺炎等。 鲍曼不动杆菌对常用抗生素的耐药情况 近年来随着多重耐药和广泛耐药菌的流行，鲍曼不动杆菌成为了重要的医院感染病原菌。在2017年WHO发布的急需研发抗菌药物的12种细菌列表种高居首位。在我国三甲医院中，它是从医院获得性肺炎患者中分离到的最常见的病原体。 研究发现，鲍曼不动杆菌占临床分离的不动杆菌的 70% 以上。它对第三代和第四代头孢菌素的耐药率已达 63.0%～90.0%。 对四种氨基糖苷类（阿米卡星、庆大mei素、奈替米星、妥布霉素）和环丙沙星的耐药率菌达 96.3%。它已经对喹诺酮类、氨基糖苷类抗生素普遍耐药，而且对碳青霉烯类抗生素耐药率也逐渐上升。 根据CHINET中国细菌耐药监测结果（2021年1-12月），鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率为71.5%，对美罗培南耐药率72.3%。26084株不动杆菌属对硫酸黏菌素的耐药率仅为1.6%，替加环素为2.5%。15166株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌对硫酸黏菌素的耐药率仅为0.9%，替加环素为3.6%。 鲍曼不动杆菌耐药性形成的机制 产生多种β-内酰胺酶：β-内酰胺酶是一种能够水解β-内酰胺类抗生素的酶，使其失去抗菌活性。鲍曼不动杆菌可以产生多种类型的β-内酰胺酶，如AmpC、OXA、METALLO等。 外膜主动外排系统的表达：外膜主动外排系统是一种能够将细胞内的药物或毒素泵出细胞的机制，降低药物在细胞内的浓度。鲍曼不动杆菌可以表达多种外膜主动外排系统，如AdeABC、AdeIJK、AdeFGH等。 外膜通透性下降：外膜通透性是指药物进入细胞的难易程度。由于鲍曼不动杆菌的外膜含有较少的孔道蛋白和较多的磷脂，使得其对许多抗生素具有天然耐药性。 拓扑异构酶基因突变：拓扑异构酶是一种能够调节DNA超级卷曲和断裂重联的酶，是喹诺酮类抗生素作用的靶点。当拓扑异构酶基因发生突变时，会导致喹诺酮类抗生素与其结合能力下降，从而产生耐药性。 产生氨基糖苷类钝化酶：氨基糖苷类钝化酶是一种能够修饰氨基糖苷类抗生素结构，使其失去活性或与靶点结合能力下降的酶。例如，N-乙烯基转移ase可以将乙烯基转移至氨基糖苷类抗生素上，使其无法与30S核糖体亚单位结合。 细菌生物膜形成：细菌生物膜是一种由细菌分泌物和环境中其他物质组成的粘稠层，在这层屏障下，细菌可以逃避免疫系统和抗生素攻击，并增加耐受高浓度药物或消毒剂等应激条件的能力。 质粒介导水平基因转移：质粒是一种可自我复制并在细菌间传播的小型DNA分子，在质粒上可能携带有各种耐药相关基因。当质粒通过转化、转导或共轭等方式从一个细菌传递到另一个细菌时，就会实现水平基因转移，并将耐药性迅速扩散到其他细菌中。 研发新型抗生素应对鲍曼不动杆菌耐药性 鲍曼不动杆菌是一种常见的医院感染病原菌，具有强大的耐药性，给临床治疗带来了巨大挑战。目前，针对鲍曼不动杆菌的新型抗生素研发还处于初级阶段，主要集中在以下几个方面： 疫苗开发：通过疫苗防治感染有望成为一种治疗手段，目前已经发现了一些良好的疫苗候选者，如OmpA、OMV、灭活的细菌、荚膜多糖等。 β-内酰胺类抑制剂：这类药物可以抑制鲍曼不动杆菌产生的β-内酰胺酶，从而增强β-内酰胺类抗生素的作用。目前已经有一些复合制剂上市或在临床试验中，如舒巴坦/头孢哌酮、舒巴坦/美罗培南等 碳青霉烯类抗生素：这类药物是目前治疗多重耐药或广泛耐药鲍曼不动杆菌感染的首选药物之一，但也存在耐药性问题。因此，需要优化给药方案或联合其他抗生素使用。 新型抗生素：这类药物包括抗菌肽和抗生酶技术，以及噬菌体治疗方案。这是未来抗耐药菌药物研发的一个重要方向，但是目前进展不是很顺利，目前为止，还没有同类药物获批上市。 人工智能辅助筛选：利用人工智能技术可以快速地从海量的化合物中筛选出具有潜在抗菌活性的候选分子。例如，美国麻省理工学院的科学家们就利用深度学习算法发现了一种名为halicin的新型抗生素分子，该分子可以有效地杀灭包括超级耐药的鲍氏不动杆菌在内的多种细菌。 总结 耐药性鲍曼不动杆菌是一种严重威胁公共卫生的“超级细菌”，其感染难以治疗，导致高死亡率和医疗成本。该菌的耐药机制复杂多样，包括产生β-内酰胺酶、外膜通透性下降、外排泵表达增强、拓扑异构酶突变、氨基糖苷类钝化酶等。目前，对于多重耐药和广泛耐药鲍曼不动杆菌感染，可选用的治疗药物有限，主要包括多黏菌素、替加环素、碳青霉烯类抗生素等。但这些药物的临床效果和安全性仍有待进一步评价。因此，加强对该菌的监测和防控，合理使用抗生素，开发新型抗菌药物和联合治疗方案是当前迫切需要解决的问题。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     大鼠乳腺上皮细胞的背景与应用及培养操作步骤！ 一、背景 大鼠乳腺上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。大鼠乳腺上皮细胞经Cytokeratin-18（CK18）或PCK(Pan Cytokeratin)免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，细胞活性良好，不含细菌、真菌、支原体、传染性病毒等。 二、大鼠乳腺上皮细胞培养方法 1、收到大鼠乳腺上皮细胞后，请按照以下方法进行操作： 取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。 2、大鼠乳腺上皮细胞传代： 1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养； 4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。 3、大鼠乳腺上皮细胞冻存： 1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9：1）重悬细胞，并放置于冻存管中； 4）先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 4、大鼠乳腺上皮细胞复苏： 1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养； 4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。 三、应用 大鼠乳腺上皮细胞可以用于当归芍药散加味对乳腺增生模型大鼠乳腺上皮细胞let-7、p-ERK表达的影响研究： 通过动物实验研究当归芍药散加味方对乳腺增生大鼠乳腺上皮细胞p-ERK、let-7基因表达的影响,并对大鼠乳腺组织进行病理学观察,探讨当归芍药散加味方对乳腺上皮细胞的转化、增值分化及凋亡的影响,为中医药从调理肝脾法治疗乳腺增生病及防治乳腺癌提供一定的科学依据。 方法：SD雌性未孕健康大鼠72只,体重180-200克,通过自由饮水进食、自然光照,适应环境1周后,如无异常表现,采用分层随机法,将72只大鼠随机分为空白对照组16只,实验组56只。除空白对照组外,其余各组大鼠采用雌、孕激素联合造模,一个月后,实验组大鼠再随机分为模型1组、模型2组、乳癖消组、当归芍药散加味组,每组14只。同时处死模型1组大鼠,并将其第2、3对乳房完整剥离做病理切片,置于高倍显微镜下观察其组织学变化,以确定大鼠乳腺增生病理模型是否成功。 造模成功后,治疗组予以当归芍药散加味生药提取液灌服,剂量10ml/kg/天,连续30天;治疗对照组以0.3g/kg乳癖消混悬液灌服,连续30天;空白组对照组和模型2组分别以生理盐水灌胃,剂量10ml/kg/天,连续30天。连续灌胃一个月后,观察各组大鼠一般情况,处死全部实验大鼠并留取大鼠乳腺组织标本,测量大鼠乳头直径及高度变化;免疫组化法测定各组实验动物乳腺上皮细胞let-7基因表达与p-ERK蛋白表达,比较其差异性;对各组实验动物乳腺病理组织学进行比较分析。 结果：模型组、乳癖消组、当归芍药散加味组的大鼠乳头直径、高度均大于空白组,差异非常显著,P0.05。模型组、乳癖消组、当归芍药散加味组的大鼠p-ERK基因表达量均大于空白组,差异非常显著,P 结论：当归芍药散加味方可减轻大鼠乳腺增生、肿大状态,改善局部乳腺组织水肿,达到减轻乳腺增生的作用,同时对乳腺增生上皮细胞有促进let-7基因表达、抑制p-ERK蛋白表达的作用,进而抑制细胞增殖、分化,促进细胞凋亡,改善乳腺组织增生状态。其机理可能是当归芍药散加味方具有养血疏肝,利湿健脾,活血散结之功效,可调节机体气血阴阳的动态平衡,从而达到治疗和改善乳腺增生病的目的。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  微生物培养箱的选购与管理及使用与维护！ 百欧博伟生物：微生物培养箱在微生物培养过程中至关重要，其数量、质量、性能、精度等是否满足培养的要求，关系到实验室能否正常运行。各类法规对微生物培养温度的要求都比较高，一般精度为±1℃，有的甚至更高为±0.5℃。同时，在微生物培养过程中容易出现被污染的现象，这就要求用户在采购培养箱时，要充分了解其质量、性能、精度等，才能选购到最合适的培养箱。 一、微生物培养箱的结构、种类 微生物培养箱广泛应用于药品微生物、食品微生物、农业微生物、医学微生物等研究领域，已经成为上述领域实验室普遍使用的常规仪器之一，其原理是通过在培养箱箱体内模拟微生物在生物体内的生长环境来对微生物进行体外培养的一种装置。 1、微生物培养箱的结构 现代微生物培养箱大多为优质钢板制造的立式箱体，内门一般用钢化玻璃制成，内室放置用于承托培养物的不锈钢隔板，可方便移动，并可改变高度，工作室和玻璃门之间装有硅橡胶密封圈，箱体内部有冷、热气风道，箱内气体循环流畅、温度均匀，设有独立限温报警系统，超过限制温度即自动中断。霉菌培养箱一般由制冷系统、制热系统、紫外消毒系统、培养室、空气加湿器、控制电路和操作面板等部分组成，温度和湿度传感器用来维持培养室内温度和湿度的稳定。 2、微生物培养箱的分类 按加热方式可分为水套式和气套式。水套式是通过对外围包裹的液体层加热后再使内部受热，升温较慢，但能够在较长时间内维持内部的温度恒定。气套式是通过箱体气套层内的加热器对内箱体进行加热。 按控温方式可分为计算机智能控制式(程控式)和自动恒温调节式(机械式)，计算机智能控制式是培养箱的主流控温方式。计算机智能控制式大多采用微电脑PID控制器作为控制单元，热敏元件为温度计，数字显示设定值和测定值，这样构成一个完整的控制系统。自动恒温调节式温控装置多用“金属片式”，即用一种热膨胀系数较大的金属片做成螺旋状，金属片一端固定在箱室内壁，另一端装可活动的触头，常温下两触头闭合。接通电源后箱室内温度升高，固定在此的金属片受热膨胀，弯曲度改变，使另一端的触点离开，切断电路，停止加热。温度下降，降至一定程度，螺旋金属片恢复原状，两触点接触，接通电路，开始加热，这样电路时通时断，保持箱内恒温。 按培养环境可分为普通培养箱、二氧化碳培养箱、低氧培养箱和厌氧培养箱。 按培养目标物可以分为霉菌培养箱、恒温培养箱、恒温恒湿培养箱； 按温度采集的自动化程度分类可以分为全自动温度采集培养箱、半自动温度采集培养箱、人工采集温度培养箱。 二、生物培养的污染因素 1、风速与风向 一般培养箱在箱体内配备了风道和循环系统，合适的风速与风向利于培养箱温度的均一性，有利于培养物的正常生长。但是，当风速过大时，易造成培养基干裂，培养结果不准确。此外，药典要求培养皿倒置培养，经过多次空白培养皿验证发现，同样的风速，当培养箱运行时的风向与培养皿盖的朝向相对时，空气中的灰尘、杂菌等容易对培养物造成污染，因此，培养箱运行时的风向最好与培养皿盖的朝向一致。 2、培养皿的密闭性 培养皿由平面圆盘底和盖组成，材质主要为塑料和玻璃。微生物实验室内所用的培养皿，通常直径90 mm，采用顶盖封装，平皿的底和盖之间有一定空间，且两者并非完全密闭，能满足需氧型微生物对氧气的需求，但是也增加了污染的可能性。尤其是不同厂家的培养皿由于成型工艺和参数不同，平皿的底和盖之间的间隙也不同，经试验验证，在同样的培养条件下，间隙大的比间隙小的污染概率大，污染程度深。此外平皿的底和盖之间间隙不同还会使培养皿内培养基水分蒸发多少不一，造成培养结果数据的不一致。 3、培养箱内湿度 水分是微生物生存和繁殖的主要条件之一。 微生物细胞中含70％～85％的水分，而且必须在有水分的环境中生活。湿度对微生物生长的影响，是通过影响微生物细胞内水分活度(AW)进而影响新陈代谢来影响其生长状况。微生物生长有一个最适AW，当AW降低时微生物生长减慢，降低到某一水平微生物停止生长。微生物发育时的最低AW是变化的，各种霉腐微生物生长繁殖的最适湿度，因菌属不同而略有差异。一般来讲，细菌最敏感，其次是酵母和霉菌，即细菌生长所需的AW比酵母高，而酵母生长所需AW比霉菌高。一般情况下Aw＜0.90时，细菌不能生长，AW＜0.87时大多数酵母受到抑制，AW＜0.80时，大多数霉菌不能生长。降低湿度将使AW降低并减慢微生物的生长速度。培养箱内湿度太高或太低容易造成培养基与培养箱之间湿度的失衡，如培养箱内湿度太高容易在培养皿上形成水珠，滴入培养基中使细菌蔓延生长而影响试验结果；若培养箱内湿度太低则会造成培养基中水分散失，影响培养基上细菌生长。由此可见，适宜的温度、湿度，有利于细菌或霉菌酵母的生长。 培养箱内湿度来源有：一是源于培养基中水分的散失；二是源于人工或培养箱湿度自动控制系统对湿度的调控；三是源于培养箱放置环境，而培养箱放置环境一般为洁净干燥通风良好的自然环境。 4、培养物溢洒 培养物溢洒指包含生物危险物质的液体或者固态物质意外地与包装材料分离的过程，一旦在培养箱中发生有生物学危害的物品溢出时，由于溢出物会有微生物生长繁殖，应立即对培养箱进行清理，要使用有效的消毒剂对培养箱的内壁及所有接触溢出物品的材料进行消毒或高压灭菌。如果培养过霉菌或其他致病菌的培养物发生溢洒未及时处理，再用来培养其他微生物时，就会因残留的霉菌或致病菌造成培养箱污染，进而造成交叉污染，影响试验结果的准确性。因此，在日常试验中应尽量避免培养物溢洒，如果发生培养物溢洒，应立即由专人对培养箱进行清理并消毒。如果溢洒物中含有破碎的玻璃，不得直接用手取走或弃置，应用硬纸板和镊子处理，将处理物置于耐扎的废弃物容器中，然后用75％酒精擦拭仪器设备表面2遍，作用3min，最后对清洁工具进行消毒。 5、自然环境污染 培养箱应放置在洁净、干燥、通风良好的自然环境中。若环境中空气洁净度太差容易滋生细菌、真菌、病毒，通过平皿底和盖之间的间隙污染培养基，进而影响培养结果数据的准确性。 三、生物培养箱的选购与管理 微生物培养箱的选购选购培养箱时，首先要求培养箱对温湿度的控制精准，其次要求培养箱能够对培养箱内的微生物污染进行有效防范，最好能够定期消除污染。微生物培养箱的种类很多，在选购培养箱时可结合实际需要及实验室条件，考虑以下因素，选购适合的培养箱。 1、微生物培养箱加热方式 水套式加热的优点是当遇到断电的时候，系统可以较长时间保持培养箱内的温度准确性和稳定性，维持温度恒定的时间是气套式系统的3～4倍，有利于试验环境不太稳定并需要长时间保持稳定的培养条件。水套式加热需要对水箱进行加水、清空和清洗，并要经常监控水箱运作的情况。气套式加热具有加热快，温度恢复比水套式培养箱迅速的特点，有利于短期培养以及需要箱门频繁开关的培养。 2、微生物培养箱温控系统和温度均匀度 精确可靠的温控系统是培养箱不可或缺的重要部分，应选用有箱内温度控制、超温报警控制和环境温度监控相互独立的三重温度控制功能的培养箱。温控系统参数包括温度波动度、温度分辨率、温度均匀度等，培养箱温度均匀度与箱内气流循环方式有关，应选用箱体内配备了风扇以及风道的培养箱。 3、微生物培养箱控温范围 根据试验需要的温度，选择温度范围合适的产品。 生化培养箱控温范围有以下几种：室温5℃～60℃、0℃～60℃、4℃～60℃、5℃～50℃等。恒温培养箱分为两种，一种带低温培养箱即培养温度在0℃～35℃，这种培养箱内含制冷系统和加热系统，价格相对较高，一般这种培养箱设置温度在O℃～50℃之间恒定。另一种常温培养箱即培养温度大于室温，这种培养箱一般设置温度在室温到65℃之间恒定。低温培养箱的选择比较简单，即所需培养温度低于环境温度。 4、微生物培养箱相对湿度控制方面 尽量选择湿度蒸发面积大的培养箱，湿度蒸发面积越大，越容易达到相对饱和湿度，并且开关门后的湿度恢复时间越短。 5、微生物培养箱消毒灭菌系统 培养箱的消毒灭菌系统，一般有以下几种：紫外杀菌消毒、高温消毒、HEPA过滤器过滤培养箱内空气。紫外杀菌消毒能力与紫外灯距离目标物距离的二次方成反比，距离越远，消毒能力越差，所以紫外消毒方式有其局限性，难以达到彻底灭菌的要求；高温消毒分为两类，高温干热消毒和高温湿热灭菌，高温湿热由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，因此该法的灭菌效率比干热灭菌法高；HEPA过滤器能过滤培养箱内空气，过滤效率达99.97％，除去直径0.3μm以上的颗粒。 6、微生物培养箱容积大小的问题 培养箱容积小了不够用，大了占地方。培养箱的容积有50L以下的小型培养箱，适合培养量不大的实验室使用，有400L以上的适合大型实验室用，在这两者之间的是实验室常用的容量，需要根据实际情况来选择容量。在选购前对所需培养箱容积的范围最好有一个比较准确的了解，在此基础上预留一点空间，以保证不时之需。 7、微生物培养箱的材质 市面上现有的内胆材质一般有铁(镀锌材质)和不锈钢两种，铁质的比较轻一点便于运输，而不锈钢材料的耐用。304不锈钢内胆是目前的主流，不锈钢内胆比传统的冷轧钢板更耐腐蚀、更耐用。如果内胆是圆角结构，易清洗，不留死角。 8、微生物培养箱选购的价格因素 配置较高的培养箱如密码保护设置、高温自动调节和警报装置、自动校准系统、LCD显示系统／数据输出系统等便于适用，但集功能齐备、性能良好、方便适用于一身的培养箱价格较贵，可以根据自身的经济能力和主要培养用途进行选购，达到性价比最高。 四、微生物培养箱的使用、监控和维护 培养箱在搬运、维修、保养时，最大倾斜应度小于45°。培养箱要放置在阴凉、干燥、通风良好、远离热源和日晒的地方。培养箱外壳应可靠接地，放置平稳，以防震动发生噪音。培养箱距墙壁的距离应大于10cm，箱体侧面应有5 cm间隙，箱体顶部至少应有30cm的空间以确保制冷系统散热良好。使用设备前认真检查电源电压与仪器要求是否相符。培养箱若使用三角插头，插座应妥善接地，确保培养箱地线与电源的地线接触可靠。箱内培养物不应放置太挤，以保证培养物受温均匀。各层金属孔架上放置物品不应过重，以免将金属孔架压弯滑脱，打碎培养物。箱内不应放入过热或过冷之物。取放物品时，应随手关闭箱门以维持恒温。短时间内不要频繁开关机，避免压缩机连续启动。培养箱工作时，应避免频繁开门，以保持温度稳定，同时防止灰尘污物进入。停止使用，关闭总电源键及设备后部的电源开关。长期不使用该设备，应拔掉电源插头。培养箱制冷工作时，不宜使箱内温度与环境温度之差大于25℃。 仪器在连续工作期间，每日观察培养箱是否正常运行，每年应对仪器进行一次性能验证。培养箱清洁消毒后，在培养箱内放几个空白培养皿，部分加盖、部分不加盖，考察加盖对试验结果有无影响，不加盖的污染菌有多少。清洁培养箱时，用浸泡酒精的纱布擦拭箱体内壁进行消毒，然后用干纱布将酒精擦除干净。如果是霉菌培养箱则需要用能消灭霉菌的消毒剂消毒或定期进行紫外灭菌处理，减少霉菌污染。请勿用酸/碱或其他腐蚀性溶液来擦拭外表面。培养箱监控期间，若发现仪器加热或制冷异常、突然停止工作等异常情况应及时修理，同时做好维修记录。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  槭射脉革菌的特点与优势及培养方法与注意事项！ 槭射脉革菌是Phlebia属的微生物，原产地为中国。处理油菜秸秆饲料，提高反刍动物利用率。主要用途为研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-092125规格：斜面培养物拉丁属名：Phlebia Acerina中文译名：槭射脉革菌拉丁学名：Phlebia acerina原始编号：1647菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：张小青直接来源国家：中国保藏时间：8/8/2005生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：25℃培养基：0017    分离源：阔叶采集地点：海南黎母山采集国家：中国提供形式：斜面培养物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 生物安全柜和超净工作台能放在一个屋里吗？ 1、生物安全柜和超净工作台能放在一个屋里吗？ 参考答案： 生物安全柜和超净工作台不能一个屋 生物安全柜和超净工作台是有不同的安装要求的，使用模式也是不同的，所以对实验室环境的要求也不同。 生物安全柜是吸风的模式，房间是负压力； 超净工作台是吹风的模式，房间是正压力； 这种情况下没有实验室能又正压又负压，所以生物安全柜和超净工作台不会放在一个屋。要做有效的隔离。 2、现在公共卫生不需要资质认证了，报告签批人还必须是授权人么？ 参考答案： 资质认定2019年底发布的新的政策中规定的内容。公共卫生领域不需要申请资质认定。 报告的签批人可以不是CMA授权签字人。 如果实验室自己规定报告需要授权签字人批准。那么按照实验室自己的程序文件规定执行。 3、CNAS-CL01-G001要求不具备化学专业人员有10年相关工作经历，而CNAS-CL01-A002要求是5年，到底应该依据哪个？ 参考答案： 这个CNAS-CL01-G001是通用要求，CNAS-CL01-A002是专业领域要求 如果通用要求和专业领域的要求有冲突的时候，以专业领域的要求为准。 所以这个问题是需要满足CNAS-CL01-A002的要求。 提醒一点：保守做法，通用领域的要求和专业领域的要求都满足。 4、培训效果有效性评价，评价可以是定量的也可以是定性的，定量、定性怎么理解？ 参考答案： 培训的效果评价以定量的方式： 是指有分数的，通过率等等，有数据统计的方式进行评价。 培训的效果评价是定性的方式： 可以是文字类评价（ 非数据定量评价），例如是提问，实操等等。 在CNAS、CMA中没有规定培训的有效性到底是怎么评价的，有强制规定定量和定性的这样的说法。 培训效果的评价把握重要一点：达到培训的目的。 5、食品检测和环境检测有共用仪器和其他资源，怎么有效防止相互污染？ 参考答案： 如果又要保障效率，又要保障检测质量的话，建议把这两个实验区做一个物理隔断的。 因为这两种检测有些项目是相互干扰的，比如食品的重金属含量低，环境检测的动金属含量高。两个不同领域的实验放在同一个区域会相互影响。 如果实验室没有条件做隔断，可以将不同领域的检测分时段做，不在物理上空间分开，那就把时间上分开。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 人肺腺癌细胞的主要应用与培养操作及相关研究！ 一、背景 人肺腺癌细胞源自一位男性肺腺癌患者。人肺腺癌细胞SPC-A-1细胞是一株常用的肺癌细胞系，也被用于肺癌发病机理和抗肿瘤药物的体外研究试验研究；人肺腺癌细胞SPC-A-1细胞具有典型的上皮细胞状形态结构。 二、人肺腺癌细胞培养操作 1）复苏人肺腺癌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）人肺腺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）人肺腺癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类； 1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2、4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 人肺腺癌细胞可以用于蛇葡萄素钠体内、外协同卡铂抗SPC-A-1人肺腺癌细胞的作用及其机理研究： 研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)单用及与卡铂(CBP)合用在体内、外对SPC-A-1人肺腺癌细胞的抗肿瘤作用及作用机制。 方法：建立人肺腺癌SPC-A-1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,评价AMP-Na单用及与CBP合用对荷瘤裸鼠在体的抑瘤作用;采用MTT比色法测定AMP-Na单用及与CBP合用对SPC-A-1细胞的体外细胞毒活性;用流式细胞仪分析AMP-Na单用及与卡铂联用后对SPC-A-1细胞调亡、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。 结果： 1、体内实验表明,AMP-Na 125～260mg/kg各剂量单用对人肺腺癌SPC-A-1细胞裸鼠皮下移植瘤生长无明显影响。与CBP合用,可显著增加CBP对SPC-A-1细胞裸鼠移植瘤的抗肿瘤活性,具有协同抑制作用,以AMP-Na 200mg/kgⅠ和260mg/kg作用最强,与溶媒对照比,差别有极显著性(P＜0.01);与卡铂单用比,差别有显著性(P＜0.05)。 2、体外细胞毒实验结果表明,AMP-Na 6.25～200μg/ml对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖的抑制作用具有明显的量效关系,与CBP联用后有协同效应,可显著增加CBP对SPC-A-1细胞的抑制作用,卡铂单用的IC50为35.69μg/ml±6.56μg/ml,联用后依次降为33.98±6.3、30.96±3.8、28.34±6.3、19.13±6.9和＜6.25μg/ml。 3、FCM分析显示,AMP-Na 12.5～100μg/ml各剂量单用对人肺腺癌SPC-A-1细胞具有明显的诱导凋亡作用,与阴性对照比,差别有显著性(P＜0.05);和CBP联用后凋亡率较卡铂单用明显上升,有协同抑制作用。 4、FCM分析显示,AMP-Na单用及与CBP联合作用后可显著提高SPC-A-1细胞Bcl-2与Bax的平均荧光强度,降低Bcl-2/Bax的比率,增加Caspase-3的表达。 结论： 1、AMP-Na单用对人肺腺癌SPC-A-1细胞裸鼠皮下移植瘤生长无明显影响;AMP-Na与卡铂合用,可以增强卡铂对裸鼠移植瘤的抗肿瘤活性,有协同抑制作用。 2、AMP-Na单用能够显著抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞的增殖,且有浓度依赖性;AMP-Na与卡铂合用可以增强卡铂的活性,协同抑制SPC-A-1细胞的增殖。 3、AMP-Na可能是通过激活细胞内的Caspase-3介导的信号转导通路,降低凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的比率,诱导凋亡而发挥其抗肿瘤作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     巴氏醋杆菌巴氏亚种的培养与使用及实验方法！ 巴氏醋杆菌巴氏亚种是Acetobacter属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为酿造食醋。 一、菌种简介平台编号：Bio-52490规格：冻干物拉丁属名：Acetobacter Pasteurianus Subsp. Pasteurianus De Ley Et Frateur菌株名称：巴氏醋杆菌巴氏亚种属：Acetobacter原产地：中国模式菌株：非模式菌株其他编号：T006培养基编号：57培养温度：30℃培养时间：24-48 小时用途：酿造食醋注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）保藏条件：安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。 二、形态特征巴氏醋杆菌巴氏亚种，G-，菌体椭圆、杆状，单个、成对或链状排列，不运动。菌落圆形，表面平滑，中间隆起，边缘整齐，浅白色，有光泽。发酵葡萄糖。接触酶阳性，超氧化试验阳性，从甘油不形成二羟基丙酮，不产生纤维素，不产生棕色素，乙醇上不生长，好氧。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 CAL-51人乳腺癌细胞收到后处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133118规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：CAL-51细胞名称：CAL-51人乳腺癌细胞产品类别：人源细胞系生长特性：悬浮生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）传代情况：2~3天换液 培养体系：温度：37℃ ；  气相：空气，95%；CO2，5% 细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 冻存条件：完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO，液氮 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 三、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 四、注意事项1、细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；2、细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；3、常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片）；4、干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染；5、细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力；6、细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                人肾上腺神经母细胞瘤复苏与传代及冻存操作说明！ 细胞简介平台编号：Bio-129567规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：SiMa细胞名称：人肾上腺神经母细胞瘤SiMa产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研3类培养体系：DMEM高糖（不含丙酮酸钠）+10%FBS+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：人肾上腺神经母细胞瘤SiMa取自男性供体用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀 。3、操作离心 ，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中。 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消 化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。 如果是悬浮生长的细胞 ，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              香茅醇假单胞菌的形态特征与培养方法及使用范围！ 香茅醇假单胞菌是Pseudomonas属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学；生产，具体用途为用于微生物采油和含油污水处理。 一、菌种简介平台编号：Bio-53093规格：冻干物拉丁属名：Pseudomonas Citronellolis中文名称：香茅醇假单胞菌属：Pseudomonas原产地：中国模式菌株：非模式菌株其他编号：DSM11735=CCUG54931培养基编号：104、109、121培养温度：28培养时间：24-48 小时用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）保藏条件：安瓿冻干和培养物菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存，甘油管请置于-80°C保存;请勿长期置于室温。 二、培养基*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA） 三、形态特征革兰氏阴性菌，较整齐的直短杆，0.4~0.5×1.1~1.5；菌落暗白色，中等大小、圆形、亮、粘，对光有黄色核心；氧化酶和硝酸盐还原为阴性，触酶和葡萄糖氧化产酸均为阳性；能利用多种糖和有机酸。16S rDNA序列与P. citronellolis相似性为98.8%。 四、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  五、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 六、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 七、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  大鼠三叉神经元细胞的传代操作流程及注意事项！ 一、产品信息平台编号：Bio-129667规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞菌株名称：大鼠三叉神经元细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述三叉神经为混合神经，是周围神经系统的组成之一，也是面部最粗大的神经，支配脸部、口腔、鼻腔的感觉和咀嚼肌的运动，并将头部的感觉讯息传送至大脑。神经元是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经元具有长突起，由细胞体和细胞突起构成。 三、细胞特性1）组织来源于实验动物的正常三叉神经组织。2）细胞鉴定：NSE免疫荧光染色为阳性。3）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、传代操作流程1、尽量吸干净T25瓶原培养基；2、加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3、T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4、将培养瓶放入37度培养箱消化；5、消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6、混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7、加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8、补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养。 七、注意事项1、不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间；2、消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  ATCC 43979温和气单胞菌的培养方法与操作流程！ 温和气单胞菌，Aeromonas sobria，Aero-表示产生气体，monas是指单细胞的有机体， sobria的意思是温和的，不激烈的。Aeromonas的全部意思就是产生气体的单细胞有机体。 一、菌种简介平台编号：Bio-75006规格：Freeze-Dried拉丁属名：Aeromonas Sobria菌株名称：温和气单胞菌解释：产生气体的单细胞有机体分类地位：兼性厌氧细菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Aeromonas sobria Popoff and Veron菌株拉丁名(ATCC 43979)菌株编号Permits and Restrictions View PermitsStrain Designations 菌株别名 NCIB 12065 [CDC 9358-7b]Isolation 分离源 FishBiosafety Level生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format提供形式 freeze-driedStorage Conditions 保藏方法Frozen: -80℃ or colderFreeze-Dried 冻干物: 2℃ to 8℃Live Culture 活菌: See Propagation SectionPreceptrol noImages ATCC 43979 PhotomicrographType Strain模式菌株 yesMedium培养基 ATCC? Medium 18: Trypticase Soy Agar/BrothGrowth Conditions生长条件Temperature培养温度: 30℃Atmosphere需氧情况: AerobicName of Depositor NCIMBChain of Custody来源国家 ATCC Isolation分离源 FishReferences参考文献  Popoff M, Veron M. A taxonomic study of the Aeromonas hydrophila-Aeromonas punctata group. J. Gen. Microbiol. 94: 11-22, 1976. PubMed: 932684Validation list no. 6. Int. J. Syst. Bacteriol. 31: 215-218, 1981.Cross References Nucleotide (GenBank) : X74683 A.sobria (ATCC 43979T) gene for 16S ribosomal RNA. 三、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 四、操作流程菌株复苏:(按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏)1) 所有菌株,显色培养基分4区,每区一株,标明菌株号、菌种名常用缩写如下:cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 热带念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隐球菌,其他菌种标记全名2) 隐球菌除传显色培养基以外,另传1/2块血平皿上述菌株统一37oC孵育48h菌种鉴定:(48h后观察结果) 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  小鼠少突小胶质细胞的运输和保存及使用方法！ 一、产品信息平台编号：Bio-116534规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞细胞名称：小鼠少突小胶质细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述少突胶质细胞是中枢神经系统中胶质细胞的重要组成部分，其主要功能是包绕神经元的轴突形成髓鞘，协助神经电型号的跳跃式高效传递，维持和保护神经元的正常功能。此外，少突胶质细胞还具有合成和分泌多种细胞因子来促进神经元、神经胶质细胞的发育和存活等功能。 三、细胞特性1）组织来源于实验动物的正常脑组织。2）细胞鉴定：MBP免疫荧光染色为阳性。3）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：圆形或椭圆形细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  人体的‘小宇宙’——微生物群落与我们的健康！  百欧博伟生物：本文将带你领略人体中居住于口腔、鼻腔、皮肤、肺部、生殖器，以及心心念念的肠道中的“小宇宙”——微生物群落（Microbiome），更将敞开人体中无处不在的微生物联络网络的神秘面纱，提示我们，关注和照顾每一个微观的生物群落，都关乎我们的健康。 微生物们的聚集地：五花八门的人体“小宇宙” 我们的身体不仅容纳了自我，还养育了茫茫生物库。倘若从微观角度出发，我们就像一个星球，孕育着数以亿计的微生物——他们有的居住于口腔，在那里分解复杂的碳水化合物为简单糖，以便肠道更轻松地吸收。有的居住于鼻腔，帮助过滤和捕捉从我们呼吸的空气中的微粒。皮肤、肺部、生殖器也有它们特有的微生物群落，共同构筑了我们的“小宇宙”。 保护“小宇宙”：守住健康的防线 好的生活习惯是微生物群落保持稳定的保障。然而，由于环境暴露（如空气污染）、遗传、免疫系统问题等，常常导致微生物群落失衡。例如，口腔微生物失衡可能导致龋齿、牙龈疾病和感染。口腔卫生以及健康的饮食，可以确保有益的微生物占优势。鼻腔微生物群落失调，可能增加慢性鼻窦炎、鼻过敏以及呼吸道感染的风险。皮肤微生物失衡与痤疮、湿疹、牛皮癣、皮炎等疾病相联系。肺部微生物失衡可能让我们更易受到感染，增加患上哮喘、慢性阻塞性肺病以及肺炎的风险。生殖器的微生物失衡则可能导致多种尿路感染。而我们耳熟能详的肠道微生物群落，一旦失衡，可能与炎症性肠病、肥胖症、2型糖尿病、以及诸如抑郁和焦虑等的心理健康疾病相联系。 熙熙攘攘，相互连接：微生物群落的大游行 人体中的这些生物群落并非孤立存在，而是以复杂的方式相互作用。例如，口腔和鼻腔的微生物群落会影响我们呼吸系统的健康，肠道微生物群落的失衡可影响我们的免疫系统，进而影响其他生物群落。肌肤微生物群落可以与生殖器微生物群落，以及来自我们环境的微生物进行交互。敞开这个连绵不断、错综复杂的生物网格，科研人员逐渐认识到，我们的身体就像一个有机的整体，其中任何一个区域的失衡，都可能对整个微生物景观产生连锁反应。理解这些交互关系为改善人们的健康带来了新的可能性。 知识拓展 要想健康，和微生物群落和平相处并得到它们的帮助是非常重要的。保持良好的口腔卫生、避免污染环境、健康的饮食、规律的生活习惯等，都是维持微生物群落稳定的关键。科学家们甚至已经进行了“粪便移植”这样的实验，以期能将健康人体中的微生物移植至患者体内，以此调整和改善微生物群落，让身体重回健康状态。 合理治理和照亮我们体内的这些“小宇宙”，打造和谐稳定的微生物环境，关乎我们的身心健康，而这条探索和学习的路，还很长，让我们一起继续前行。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   瑞氏青霉的使用范围与培养方法及实验内容！ 一、菌种简介平台编号：Bio-65624提供形式：冻干物拉丁属名：Penicillium Raistrickii中文名称：瑞氏青霉属名：Penicillium种名加词：raistrickii其它中心编号：=ATCC 10490来源历史：←上海市工业微生物研究所(M300) ←美国ATCC收藏时间：2005.11.25资源归类编码：15151913115模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：15α羟化。特征特性：菌落：菌落圆形，扩展生长；表面平坦或有放射状沟纹或有环状轮纹；有的有较深的皱褶，有渗出液，菌丝有隔，分气生、基生；分生孢子球形、卵形或椭圆形，光滑或粗糙。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：麦芽膏 20g，葡萄糖 20g，蛋白胨 1g，琼脂 20g，蒸馏水 1.0L，自然pH值。啤酒厂取来浓麦芽汁10ml=1g麦芽膏。培养温度：28℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：40355用途：研究；生产；15α羟化。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 三、培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  牛棒状杆菌的形态特征与优势特点及培养方法！ 牛棒状杆菌是Corynebacterium属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，教学，检验，具体用途为研究，分析。 一、菌种简介平台编号：Bio-107279规格：冻干粉拉丁属名：Corynebacterium Bovis中文名称：牛棒状杆菌拉丁名称：Corynebacterium bovis分离基物：牛奶培养基编号：35原始编号：NIRD 61培养温度(℃)：37℃其他保藏中心编号：ATCC 7715=NCTC 3224=NIRD 61培养时间(天)：1-2天ATCC需氧类型：好氧生物安全级别：一级用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征革兰氏染色阳性杆菌,排列不规则，球杆状，成排或成簇排列，常呈栅栏状或V字状等-染色不均匀，两端有着色较深的异染颗粒。无芽胞，大多数菌株无动力，需氧或兼性厌氧。无溶血，可发酵葡萄糖，不发酵麦芽糖，蔗糖，脲酶阴性，不液化明胶，不水解七叶苷，硝酸盐还原阴性。 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 兔主动脉平滑肌细胞的概述与应用及相关研究！ 一、背景 兔主动脉平滑肌细胞分离自主动脉组织，是一种常用的细胞模型，用于研究动脉粥样硬化。它们通常在培养皿中培养，使用DMEM高糖培养基、10%胎牛血清和1%双抗。 兔主动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，兔主动脉平滑肌细胞分离自主动脉组织；主动脉是体循环的动脉主干。 其运行路径为：升主动脉起于左心室，至右侧第2胸肋关节高度移行为主动脉弓，弓行向左后至第4胸椎体下缘移行为降主动脉；在第12胸椎体高度穿膈的主动脉裂孔移行为腹主动脉，以上为胸主动脉，至第4腰椎体下缘分为左、右髂总动脉；髂总动脉在骶髂关节高度分为髂内、外动脉。主动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏； 细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。 主动脉平滑肌细胞在心血管疾病发生、发展中具有重要作用，以主动脉平滑肌细胞为实验研究对象，探讨心血管疾病相关发病机制是目前研究的热点；体外培养的主动脉平滑肌细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。 二、应用 兔主动脉平滑肌细胞可以用于钙感受器STIM1参与主动脉平滑肌细胞衰老的作用机制研究： 在氧化应激诱导的衰老VSMCs模型及自然衰老的动物模型中,观察STIM1是否参与主动脉平滑肌细胞衰老进程,及其相关作用机制。 方法：使用200μM过氧化氢溶液(H2O2)处理人主动脉平滑肌细胞(Human aorta vascular smooth muscle cells,HA-VSMCs)2h构建氧化应激衰老VSMCs模型;C57BL/6分别饲养至3月龄、12月龄、18月龄,建立自然衰老动物模型;Cre-lox P基因重组技术构建平滑肌特异性STIM1敲除小鼠(smc STIM1-/-)模型;采用衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测衰老VSMCs阳性率;Western blot检测细胞或组织中钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channel,SOC)相关蛋白STIM1、STIM2、ORAI1表达水平、衰老相关标记蛋白蛋白p53、p21、p16及自噬相关蛋白p62、LC3B等表达水平;激光共聚焦测钙技术检测单个细胞的SOCE的钙信号变化,微血管张力测定技术检测收缩剂诱导的及SOC介导的血管收缩功能;转录组高通量测序技术检测STIM1敲除对主动脉平滑肌转录水平的变化。透视电镜检测STIM1敲除对小鼠主动脉平滑肌超微结构的影响;m RFP-GFP-LC3串联荧光蛋白系统检测细胞自噬流变化;流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。 结果： (1)在H2O2诱导的衰老VSMCs模型上,衰老相关蛋白p21、p16表达上调,衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率增加,伴STIM1及ORAI1蛋白表达下调,SOCE水平降低; (2)老龄小鼠(12月龄、18月龄)主动脉组织SOC相关蛋白STIM1和ORAI1表达下调,以及SOC通道介导的血管收缩反应下降； (3)smc STIM1-/-小鼠主动脉组织中STIM1水平下降,而STIM2及ORAI1蛋白表达无明显差异,SOC介导的收缩反应几乎消失,不同浓度的Phe诱导的血管收缩无明显差异,然而在硝苯地平预处理后,有或无细胞外钙条件下血管收缩几乎完全消失; (4)smc STIM1-/-小鼠主动脉衰老相关蛋白p53、p21及p16均上调,sh STIM1下调细胞STIM1表达,并伴随着衰老相关蛋白p53、p21及p16表达以及ROS水平的增加; (5)smc STIM1-/-小鼠主动脉组织转录组高通量测序显示下调基因富集在自噬与线粒体自噬中; (6)smc STIM1-/-小鼠主动脉组织,超微结构下线粒体肿胀、嵴消失,线粒体面积及长度显著增加,线粒体分裂相关蛋白FIS1显著下调,线粒体融合蛋白MFN2表达上调,自噬相关蛋白PINK1、Parkin表达下调,p62表达上调; (7)sh STIM1下调细胞STIM1表达后,自噬相关蛋白p62、LC3BII表达上调,进一步使用HCQ处理后,sh STIM1+HCQ组LC3BII表达量不高于sh NC+HCQ组。 (8)m RFP-GFP-LC3串联荧光蛋白系统检测,提示氧化应激衰老VSMCs模型自噬小体数量显著增多,而自噬溶酶体数量增加不变;在衰老VSMCs模型中过表达STIM1导致自噬溶酶体数量显著增多,并比自噬小体数量多,HCQ处理可逆转该过程。 (9)过表达STIM1能够减少衰老VSMCs p21、p16表达以及ROS水平上调,以及衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率增加,且HCQ处理后被逆转。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    大鼠胶质细胞的背景与应用及培养步骤！ 一、背景 OLN-93细胞系大鼠胶质细胞是一种大鼠胶质前体细胞系，来源于大鼠脑组织，OLN-93细胞系由原代大鼠脑胶质细胞培养中自发转化的细胞产生的。 二、OLN-93细胞系|大鼠胶质细胞培养步骤 1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）OLN-93细胞系|大鼠胶质细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）OLN-93细胞系|大鼠胶质细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、OLN-93细胞系|大鼠胶质细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 注：di一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 3）OLN-93细胞系|大鼠胶质细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 三、应用 OLN-93细胞系|大鼠胶质细胞可以用于莫诺苷对Oln-93细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究： 莫诺苷是从山茱萸中提取出来的天然活性小分子物质,已有研究表明它对神经元有抗氧化抗凋亡的保护效果,但是对神经胶质细胞的作用报道甚少,因此,本实验采用Oln-93细胞(大鼠少突胶质前体细胞)作为研究对象,探究莫诺苷对Oln-93细胞氧化应激损伤的保护作用和作用机制,希望为神经退行性疾病的预防和治疗提供新的实验依据和思路。 方法： 1、建立Oln-93细胞氧化应激模型及药物处理:Oln-93细胞被孵育不同浓度的过氧化氢(H2O2),用MTT方法确定细胞的最适损伤浓度和处理时间;不同浓度的莫诺苷(Morroniside)预孵育细胞24h,用合适浓度的H2O2损伤,MTT法确定最适的加药浓度。 2、使用倒置显微镜观察各组细胞的形态变化。 3、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒进行各组细胞毒性检测。 4、使用丙二醛(MDA)试剂盒检测各组细胞脂质氧化程度。 5、使用活性氧(ROS)检测试剂盒检测各组细胞内ROS释放量。 6、应用JC-1荧光探针和荧光显微镜检测各组细胞线粒体膜电位(MMP)变化,观察细胞凋亡情况。 7、使用TUNEL试剂盒检测各组细胞TUNEL表达情况。 8、使用Hoechst33342活性细胞染色剂对细胞核染色观察各组细胞胞核形态变化。 9、提取各组细胞蛋白,进行Western Blot方法检测氧化相关蛋白i NOS、SOD2和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、AKT、P-AKT、Caspase3的表达情况。 10、应用AKT通路抑制剂LY294002,检测以上氧化和凋亡指标,进一步探讨莫诺苷的作用机制。 结果： 1、MTT法检测细胞活性,结果显示莫诺苷对H2O2诱导的细胞活性下降有明显的改善作用。 2、细胞形态学结果显示莫诺苷能明显改善H2O2损伤Oln-93细胞造成的破碎、皱缩等形态变化。 3、LDH细胞毒性检测结果表明,H2O2损伤后细胞释放LDH明显增多,莫诺苷能明显降低细胞LDH的释放。 4、脂质氧化检测结果显示,莫诺苷抑制细胞内脂质发生过氧化,显著减少H2O2诱导的MDA产量。 5、ROS检测结果表明,莫诺苷能显著降低H2O2诱导的Oln-93细胞的ROS释放量。 6、线粒体膜电位检测结果发现,莫诺苷能明显抑制H2O2诱导的线粒体膜电位的降低。 7、TUNEL检测结果表明,莫诺苷能明显减少H2O2诱导的TUNEL表达,对细胞凋亡有显著的抑制作用。 8、Hoechst33342染色结果表明,H2O2处理使细胞核呈现皱缩、破碎和不规则的凋亡形态,莫诺苷能明显减少发生凋亡的细胞数量。 9、Western Blot检测结果表明莫诺苷能显著降低i NOS表达,提高抗氧化蛋白SOD表达,并且能降低促凋亡蛋白Bax、Caspase3表达,提高抗凋亡蛋白Bcl-2和P-AKT表达。 10、应用LY294002孵育Oln-93细胞后进行检测。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      嗜盐菌的适应机理与排盐作用及诊断治疗！ 一、菌株简介 嗜盐菌(Halophiles)又称作副溶血性弧菌是生活在高盐度环境中的一类古细菌。 二、基本信息 中文名称：嗜盐菌 外文名称：Halophiles 适应机理：Na+ 依存性 又称作：副溶血性弧菌 三、菌种分类 嗜盐古细菌分为一科(嗜盐菌科)六属:嗜盐杆菌属、嗜盐小盒菌属、嗜盐富饶菌属、嗜盐球菌属、嗜盐嗜碱杆菌属、嗜盐嗜碱球菌属。一般生活在10%～30%的盐液中。嗜盐菌中，有人还发现了一种呈四方形的古细菌。我们日常生活中经常食用盐腌的食品也是是它理想栖居之地。海鱼、海蛰、海蟹、海贝等海产品，以及不太咸的咸菜、咸蛋、腌鱼、腌肉之类一旦沾上嗜盐菌就会大量繁殖，速度十分惊人。实验表明，该菌最喜欢含盐量2%—4%的环境，在5%—6%的高盐浓度或营养丰富的低盐浓度都会孽生。尤其是温度适宜的夏季，10个嗜盐菌在3—4小时后就会育出数百万个后代。这是一个可怕的天文数字，但人的肉眼和其他感觉器官难以察觉。 四、适应机理 1、Na+ 依存性 嗜盐菌要在高盐环境下生存， Na+ 对维持细胞膜、细胞壁构造和功能有特别重要的作用。Na+ 与细胞膜成分发生特异作用而增强了膜的机械强度，有利于维持细胞膜的构造，对阻止嗜盐菌的溶菌起着重要作用。在细胞膜的功能方面，嗜盐菌中氨基酸和糖的能动运输系统内必需有Na+ 存在，而且Na+ 作为产能的呼吸反应中一个必需因子起着作用。实验证明，对于氨基酸的吸收是间接地通过光来驱动，一种氨基酸- Na+ 泵运输系统用于运载氨基酸。Na+ 被束缚在嗜盐菌细胞壁的外表面，起着维持细胞完整性的重要作用。嗜盐杆菌的细胞壁以糖蛋白替代传统的肽聚糖，这种糖蛋白含有高量酸性的氨基酸(如天门冬氨酸和谷氨酸)，形成负电荷区域，吸引带正电荷的Na+ ，维持细胞壁稳定性，防止细胞被裂解。“过量”的酸性氨基酸残基在蛋白表面形成负电屏蔽，促进蛋白在高盐环境中的稳定。 2、酶的盐适应特性 嗜盐酶只有在高盐浓度下才具有活性，盐去除后，嗜盐酶失活，嗜盐酶在低盐浓度下(1.0mol/L的NaCl和KCl条件下)大多数变性失活，将盐再缓慢加回，发现可恢复酶活性。根据嗜盐酶与盐的依存关系可分为三类:第1类为不加盐时，酶活性最高，加盐就受抑制。在这类嗜盐菌中可能存在某种保护机制，高浓度的K+可作为保护因子对盐抑制而起着作用。第2类为不加盐时有一定活性，加盐时酶活力进一步增强，最适盐浓度低于细胞内离子浓度，过高浓度的盐会使酶活性受抑制，第3类酶为不加盐时几乎不显示活性，由于盐的作用使酶强烈的活性化。 3、质膜/色素/质子泵作用 嗜盐菌具有异常的膜。嗜盐菌细胞膜外有一个亚基呈六角形排列的S单层，这个所谓的‘S单层’由磺化的糖蛋白组成，由于磺酸基团的存在使S层呈负电性，因此使组成亚基的糖蛋白得到屏蔽，在高盐环境中保持稳定。 限制通气，即低氧压或厌氧情况下光照培养，极端嗜盐菌产生红紫色菌体，这种菌体的细胞膜上，有紫膜膜片组织，约占全膜的50%，由25%的脂类和75%的蛋白质组成。现已发现四种不同功能的特殊的色素蛋白———视黄醛蛋白，即细胞视紫红质(bR)、氯视紫红质(hR)、感光视紫红质I(SRI)及感光视紫红II(SRII)，对盐生盐杆菌的bR研究最透彻，由三个bR分子构成的三聚体可在细胞膜上形成一个刚性的二维六边形的稳定特征结构，即紫膜。紫膜中含有的菌视紫素或称视紫红质，是由菌视蛋白与类胡萝卜素类的色素以1∶1结合组成的。嗜盐菌的菌视紫素可强烈吸收570nm处的绿色光谱区，菌视紫素的视觉色基(发色团)通常以一种全—反式结构存在于膜内侧，它可被激发并随着光吸收暂时转换成顺式状态，这种转型作用的结果使H+质子经转移到膜的外面，随着菌视紫素分子的松弛和黑暗时吸收细胞质中的质子，顺式状态又转换成更为稳定的全—反式异构体，再次的光吸收又被激发，转移H+，如此循环，形成质膜上的H+质子梯度差，即质子泵（H+泵），产生电化势，菌体利用这种电化势在ATP酶的催化下，进行ATP的合成，为菌体贮备生命活动所需要的能量。 五、排盐作用 嗜盐菌的生长虽然需要高钠的环境，细胞内的Na+ 浓度并不高，因为它们由光介导的H+质子泵具有Na+ /K+反向转运功能，即具有吸收和浓缩K+和向胞外排放Na+ 的能力。嗜盐菌是采用细胞内积累高浓度K+来对抗胞外的高渗环境。嗜盐甲烷菌是在胞内积累大量的小分子极性物质如甘油、单糖、氨基酸及它们的衍生物，这些小分子极性物质在嗜盐、耐盐菌的胞内构成渗透调节物质，帮助细胞从高盐环境中获取水分，而且这些物质在细胞内能够被迅速地合成和降解，这对环境的改变有较强的适应能力。 1、细胞内溶质浓度的调节 因为水往往是从高溶质浓度的地方流向较低溶质浓度的地方，所以悬浮在高盐溶液中的细胞将失去水分，并成为脱水细胞，除非它的细胞质内含有比其环境更高的盐(或一些其它溶质)。嗜盐微生物由于产生大量的内溶质或保留从外部取得的溶质而得以在高盐环境中生存。氨基酸在嗜盐细胞内溶质浓度调节中起着重要作用。随培养基食盐的增加，氨基酸浓度有规律的增加，其中主要是谷氨酸和脯氨酸，及甘氨酸，它们具有渗透保护作用，是溶质浓度调节的重要因子。研究表明，革兰氏阴性菌在高盐条件下，主要积累谷氨酸，以抵抗外界的高渗透压，同时积累K+以中和谷氨酸所带的负电荷；革兰氏阳性菌则主要积累脯氨酸和γ-氨基丁酸，K+变化不明显。嗜盐菌的细胞质蛋白特异地含有许多低分子量的亲水性氨基，这样，在高离子浓度的胞内环境中，细胞质可呈现溶液状态，而疏水性氨基酸过多则会趋向成簇，从而使细胞质失去活性。如嗜盐真核生物、嗜盐真细菌和嗜盐甲烷菌在胞内积累大量的小分子极性物质，如甘油、单糖，它们在胞内能够被迅速地合成和降解构成渗透调节物质，能够帮助细胞从高盐环境中获取水分。 2、特殊产能系统 它们可通过两条途径获取能量，一条是有氧存在下的氧化磷酸化途径，另一条是有光存在下的某种光合磷酸化途径。实验发现，在波长为550—600nm:的光照下.其ATP合成速率最高，而这一波长范围恰与细菌视紫红质的吸收光谱相一致。 六、中毒 吃了被嗜盐菌污染的食品,一般经6—20小时，短的1—3小时，长的80小时，便发生食物中毒——急性胃肠炎。患者先是腹痛腹泻，接着恶心呕吐；腹痛呈阵发性绞痛，泻下的大便为洗肉水样或血水样,带有脓液或粘液,会误认是痢疾。此外，还会出现发热、脱水、酸中毒、休克、神志不清等中毒症状。不过，病人经适当对症治疗，二三天即愈，无危险性和后遗症。 嗜盐菌食物中毒常有集体倾向。因为污染食品多是制作量较大的生拌菜、熟食品，又是价廉物美引人馋嘴的鲜货。如会餐时制作面籴虾蟹，外脆里嫩，嗜盐菌未杀灭，反而包裹其中提供优厚的环境条件，搁置过久，食后遭殃。另一种情况是，沿海居民爱吃生的小水产，如“醉蟹”、“炝虾”之类，有人嚼上一只蟹脚或吃下一只虾，也会发病；尤其是内地来的稀客，往往因尝新而上当。 嗜盐菌食物中毒重在预防，且预防并不困难。对这个细菌嗜盐嘛，来个反其道而行之，食用海产品或腌制食品时，先将它们在淡水中浸泡，并冲洗于净，特别是供生食的海蛰皮、海蛰头等再用冷开水过几回。嗜盐菌还有怕热、怕酸的致命弱点,所以，在烹调鱼、肉等菜肴时,或生吃腌制品、拌凉莱时,放点葱、姜、蒜、醋等调味品;凉拌莱现做现吃，买来的熟食应蒸煮片刻，包括冰箱中取出的熟食也要加热吃。 七、诊断治疗 （1）诊断 1、有食用海产食物和盐腌食品史，特别是食用未煮熟鱼类，或使用的刀、板、擦皮、手指等被率菌污染，以及生吃鱼类、蔬菜等都可致病。 2、胃肠症状严重，恶心呕吐，腹痛，特别是肠糜烂、充血、水肿，并出现脓血水样便。甚者发生休克、溶血现象。 3、粪便分离出嗜盐菌。 （2）急救 1、及早给氯霉素1～2g.日，分4次口服。 2、速给5%～10%葡萄糖1000ml静脉点滴补液。 3、及时送医院抢救。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  拟茎点霉菌——具体用途为生产代谢产物  拟茎点霉菌是Phomopsis属的微生物，原产地为中国。有大小两种孢子，大孢子线形，小孢子卵圆形。具体用途为生产代谢产物。  一、菌种简介平台编号：Bio-26410规格：培养物拉丁属名：Phomopsis Sp.中文名称：拟茎点霉菌拉丁属名：Phomopsis种名加词：sp.收藏时间*：2008-9-19来源历史：北京林业大学转原产国：中国资源归类编码：15151914109模式菌株：非模式菌株主要用途：其他具体用途：生产代谢产物特征特性：有大小两种孢子，大孢子线形，小孢子卵圆形。生物危害程度：四类寄主中文名称：油松致病对象：植物致病名称：油松叶枯传播途径：空气分离基物：叶片采集地区：甘肃天水采集具体地点：麦积区培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：25资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：公益性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：生产代谢产物注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   树脂枝孢霉的形态特征与分布范围及保藏方法！ 树脂枝孢（学名：Cladosporium resinae （Lindau） de vries）是暗色菌科、枝饱属真菌。分生孢子梗细长，单生，直立，上端分枝，有明显的疣。 一、菌种简介平台编号：Bio-67994规格：冻干物拉丁属名：Hormoconis Resinae菌株名称：树脂枝孢霉其他编号：DSM 1203=NRRL 2778 =NBRC 100535培养基编号：14培养温度：25-28培养基信息培养基编号：14名称：Potato Dextrose Agar PDA (马铃薯、葡萄糖琼脂)可用于培养菌种：适用范围：酵米面假单胞菌（酵米面黄杆菌）、白色链霉菌、烬灰链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌。备注：[Note]: Potato extract: Slice potatoes thin. Add 1000ml of water, immediately to prevent Oxidtion of juice and boil until soft. (approximately 30min.). Filter through cotton-cloth. Autoclave at 115℃ for 20 minutes.（注：取去皮马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升，加葡萄糖20克，琼脂15克，溶化后分装，15磅灭菌30分钟。）用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征分生孢子梗细长，单生，直立，上端分枝，有明显的疣，1～5隔，135～186μm×2.4～3.3μm。枝孢棒形或柱形，一端有2～3个齿状突起，其上着生孢子，12～23μm×2.7～4.6μm。孢子单生或链生，椭圆形、卵形，橄褐色，光滑，0隔，4～10.8（5.5） μm×（2.9）2.7～4μm。  三、分布范围分布于中国，澳大利亚，法国，德国，英国，荷兰，南非，瑞典，美国。  四、培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  门多萨假单胞菌的鉴定方法与主要用途及应用领域！ 一、菌种简介 门多萨假单胞菌是一种细菌。利用门多萨假单胞菌NK-01发酵生产褐藻寡糖，并开发其在医药、食品、饲料、化工和化妆品等行业的应用，生产出大批量有重要价值的下游产品。 二、基本信息 中文学名：门多萨假单胞菌 英文名称：Pseudomonas Mendocina 界：细菌界 用途：医药、食品、饲料、化工 生产：褐藻寡糖 三、特征特性 菌落圆形凸起，透明，水滴状，表面光滑湿润，边缘整齐，菌体杆状0.5*1.0μm, 有荚膜,格兰氏阴性。具有自生固氮能力，降解芳香烃。 四、结构鉴定 研究发现门多萨假单胞菌NK-01 在菌体内积累中长链聚羟基脂肪酸酯(PHAMCL)的同时也能够合成褐藻寡糖分泌到发酵液中, 其产量与培养基的碳氮比有关, 高碳氮比有利于褐藻寡糖的合成。本研究利用紫外-可见分光光度法、傅立叶红外光谱分析、1H 和13C 核磁共振对褐藻寡糖的结构进行了分析鉴定, 发现褐藻寡糖的结构是由β-D-甘露糖醛酸、α-L-古洛糖醛酸通过β-(1→4)/ α-(1→4)键连接而成的无支化线性多糖, 并且在单体的2 位或3 位羟基上部分乙酰化。凝胶渗透色谱(GPC)对分子量的测定结果为2054。 褐藻寡糖是褐藻多糖的寡聚物, 是聚合度较小的褐藻多糖。褐藻多糖是由海藻和细菌合成的一种多糖, 海藻中褐藻多糖主要起骨架作用, 而细菌中褐藻多糖是细胞壁的一种成分, 抵制不良的环境，有些细菌则将合成的褐藻多糖分泌到细胞外。褐藻多糖是由β-D 甘露糖醛酸、α-L-古洛糖醛酸通过β-(1→4)/ α-(1→4)键连接而成的无支化线性多糖。其中β-D 甘露糖醛酸中的C5 被差向异构化即是α-L-古洛糖醛酸。褐藻多糖中有3 种类型的链段 (Blockstructure), 其一是完全由β-D 甘露糖醛酸按照β-(1→4)键结合的M-M 型; 二是完全由α-L-古洛糖醛酸按α-(1→4)键结合的G-G型; 三是由β-D 甘露糖醛酸和α-L-古洛糖醛酸混合交替结合的M-G 型。来自细菌的褐藻多糖和来自海藻的褐藻多糖具有相同的基本结构, 差别仅在于细菌褐藻多糖中C2 和/或C3 羟基常常不同程度地被乙酰化, 乙酰化程度因菌株及生长条件的不同而有明显的差异。褐藻多糖及其寡聚物已广泛应用于食品、制药、化工等多个领域, 具有广阔的开发前景, 如富含甘露糖醛酸的褐藻多糖和寡糖具有抗肿瘤和免疫调节等作用。 褐藻寡糖有多种合成方法。化学合成法主要缺点是需要多重基团保护和去保护步骤, 产量低, 因而没有实际的工业价值。用酶法制备褐藻寡糖, 多是先分离纯化得到褐藻寡糖裂解酶后再制备褐藻寡糖系列产物, 但酶的分离纯化比较繁琐, 且在这一过程中酶也容易失活, 酶法合成的价格也比较昂贵。本研究采用门多萨假单胞菌NK-01 合成褐藻寡糖属于液体发酵, 工艺简单, 发酵周期短, 适合大规模工业化生产。 研究发现Pseudomonas mendocina NK-01 在菌体内积累中长链聚羟基脂肪酸酯(PHAMCL)的同时,也能够合成褐藻寡糖分泌到发酵液中。本研究采用多种分析手段, 对褐藻寡糖的结构进行了鉴定。 五、主要用途 利用门多萨假单胞菌NK-01 合成褐藻寡糖。 六、应用领域 利用门多萨假单胞菌NK-01发酵生产褐藻寡糖，并开发其在医药、食品、饲料、化工和化妆品等行业的应用，生产出大批量有重要价值的下游产品。确立褐藻寡糖的发酵工艺流程和下游分离提取工艺流程，完成门多萨假单胞菌NK-01发酵生产褐藻寡糖的结构鉴定和分子量的表征。为以葡萄糖一步法发酵生产褐藻寡糖奠定基础。 从土壤中分离到1株能够合成中长链聚羟基脂肪酸酯(PHAMCL)的细菌, 经分类鉴定命名为Pseudomonas mendocina NK-01。对于该菌株在氮源限制的情况下, 利用葡萄糖合成的PHAMCL进行了结构分析。同时, 获得了该菌株PHA合成酶基因phaC1, 利用大肠杆菌表达载体pBluescript SK-构建了重组载体pBSphaC1, 并在E.coli JM109中成功表达。以所构建的工程菌株进行了发酵合成。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   研究发现：微生物有望成为抗癌利器！ 沙门氏菌通常会引起食物中毒，但2019年，71岁的加拿大人爱瑞特·巴尔布尔自愿喝下一瓶含有10亿个活性鼠伤寒沙门氏菌的液体，作为对抗胰腺癌的最后手段。当时，胰腺癌已经扩散到她体内其他器官，她只能活几个月。她喝下的沙门氏菌经过了基因改造，可攻击癌细胞，且对身体其他部位的毒性比普通沙门氏菌小。巴尔布尔是世界上第一个在接受化疗的同时尝试沙门氏菌疗法的人，结果显示，她的肿瘤缩小到了原来的10%。 英国《新科学家》杂志网站近日报道，新研究表明，一些栖息于肿瘤上的细菌和真菌可影响癌症的进展和治疗情况，有望成为抗击癌症武器库中的新利器。一些相关药物目前正在临床试验中，这些微生物可深入到化疗等现有疗法难以触及的地方，为攻击肿瘤提供替代方法。 肿瘤是细菌的“安乐窝” 细菌、真菌、病毒等微生物栖息于人们肠道内，以多种方式影响人体健康。2020年，以色列魏茨曼科学研究所的伊兰娜·利维娅坦及其同事在《科学》杂志上撰文指出，他们分析了1000多个人类肿瘤样本后发现，肿瘤内也充满了微生物。 通过基因测序，利维娅坦在人类的乳腺、大脑、肺、皮肤、骨骼、卵巢、胰腺和结肠8种肿瘤内鉴定出了细菌，且结肠和乳腺肿瘤通常会携带更多细菌，他们甚至还发现每种癌症中都存在着独特的细菌种群。 同一年，利维娅坦团队抛出一个爆炸性消息：他们在此前研究的8种肿瘤内也发现了真菌。美国纽约康奈尔大学的伊利扬·伊利耶夫领导的团队也在《细胞》杂志上刊发论文称，他们对胃肠道肿瘤、肺癌和乳腺癌进行研究后发现，这些肿瘤中往往含有念珠菌属、芽生菌属和马拉色菌属等真菌。 利用微生物对抗肿瘤 微生物被肿瘤吸引的原因多种多样，但科学家们越来越清楚的是，它们的存在会影响癌症的进展和治疗。 比如，伊利耶夫等人发现，胃肠道肿瘤细胞中较高水平的念珠菌与更高的促炎症基因活性、癌症转移率和更低的癌症生存率有关。此外，核梭杆菌可以促进癌症的发生，伴随其扩散到身体其他部位，并抑制其对化疗的反应。 几十年来，科学家们已知人乳头瘤病毒（HPV）和乙肝病毒（HBV）等病毒会触发癌症的形成，也有了HPV和HBV疫苗来帮助预防相关癌症的发生。加拿大不列颠哥伦比亚省癌症研究所的罗伯特·霍尔特说，人们或许可以“依葫芦画瓢”，开发出针对致瘤细菌的疫苗，利用其减缓肿瘤的进展，强化对化疗的反应，甚至从一开始就阻止肿瘤的形成。 霍尔特团队正在专门研制一种针对具核梭杆菌的疫苗。该疫苗含有信使核糖核酸（mRNA），能够指导身体制造在这种细菌内发现的某些蛋白质片段，训练免疫系统识别并杀死这种微生物。该疫苗目前仍在小鼠身上进行测试，霍尔特等人希望有一天能在对普通疗法失效的具核梭杆菌阳性结肠癌患者身上开展试验。 从肿瘤内取出“有害”微生物是攻击癌症的一种策略，引入“有益”微生物则是另一种策略。加拿大蒙特利尔犹太综合医院负责治疗巴尔布尔的肿瘤学家杰拉德·巴蒂斯特表示，经过基因改造的沙门氏菌会直接进入肿瘤，并携带可以激活免疫系统的白细胞介素-2，在肿瘤部位产生对抗肿瘤的免疫活性。 在巴尔布尔治疗效果的基础上，巴蒂斯特团队于2020年启动了一项Ⅱ期临床试验，20名患有4期转移性胰腺癌的患者接受了标准化疗，以及经过基因改造的沙门氏菌的治疗。今年1月公布的结果显示，参与者的平均寿命为24个月，而一般仅接受标准化疗的患者典型生存期为11个月，沙门氏菌也没有让这些志愿者生病。 新兴抗癌疗法前景广阔 巴蒂斯特指出，这种方法的一个主要优点是细菌的制造成本远低于其他癌症免疫疗法。美国食品药品监督管理局（FDA）最近给予沙门氏菌疗法快速通道，如果它通过未来的试验，将尽快上市。 瑞士一家名为“T3制药”的公司也在使用细菌来强化免疫系统以应对癌症。该公司首席科学官克里斯托弗·卡斯珀表示，他们试验的对象是一种名为小肠结肠炎耶尔森菌的细菌，这是一种猪肉污染物，会导致食物中毒，但基因改造可以“降低其毒性”。这种细菌的独特之处在于其表面有特殊的“纳米注射器”，细菌用这个“注射器”将蛋白质注射到细胞内。T3制药公司设计了一种小肠结肠炎耶尔森菌，可将蛋白质注射到肿瘤细胞内，释放信号分子，使免疫系统发挥作用，对抗肿瘤。 当经过基因编程的小肠结肠炎耶尔森菌被注射到患有黑色素瘤的小鼠的血液内后，它们选择性地附着在肿瘤上，导致多达2/3的肿瘤消失，且没有观察到严重的副作用。该公司刚刚启动了基因编程小肠结肠炎耶尔森菌治疗实体瘤患者的人体临床试验。 总部位于美国密苏里州的BioMed Valley Discoveries公司正在研究梭状芽孢杆菌攻击肿瘤的能力，他们将其与检查点抑制剂帕博利珠单抗联合使用。公司总裁布伦特·克莱德表示，试验原理是让细菌从内到外对抗肿瘤，而让帕博利珠单抗从外到内对抗肿瘤，以实现内外夹击。结果将在今年晚些时候公布。 克莱德指出，利用细菌对付肿瘤还是一个新兴的领域，仍有很多东西需要学习，但希望很大。巴蒂斯特说，多亏巴尔布尔尝试了这种不同寻常的疗法，科学的进步要归功于这些人的勇气。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！