您好,欢迎访问仪器信息网
注册
北京百欧博伟生物技术有限公司

关注

已关注

银牌5年 银牌

已认证

粉丝量 0

400-860-5168转4717

仪器信息网认证电话,请放心拨打

当前位置: 仪器信息网 > 百欧博伟生物 > 人肺腺癌细胞的主要应用与培养操作及相关研究!

人肺腺癌细胞的主要应用与培养操作及相关研究!

百欧博伟生物

2024/01/03 16:42

阅读:28

分享:

                 人肺腺癌细胞的主要应用与培养操作及相关研究!

 


一、背景

 

人肺腺癌细胞源自一位男性肺腺癌患者。人肺腺癌细胞SPC-A-1细胞是一株常用的肺癌细胞系,也被用于肺癌发病机理和抗肿瘤药物的体外研究试验研究;人肺腺癌细胞SPC-A-1细胞具有典型的上皮细胞状形态结构。

 

二、人肺腺癌细胞培养操作

 

1)复苏人肺腺癌细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

 

2)人肺腺癌细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

 

1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

 

2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

 

3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

 

4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

 

3)人肺腺癌细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

 

下面T25瓶为类;

 

1、细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

 

2、4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。

 

3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

 

三、应用

 

人肺腺癌细胞可以用于蛇葡萄素钠体内、外协同卡铂抗SPC-A-1人肺腺癌细胞的作用及其机理研究:

 

研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)单用及与卡铂(CBP)合用在体内、外对SPC-A-1人肺腺癌细胞的抗肿瘤作用及作用机制。

 

方法:建立人肺腺癌SPC-A-1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,评价AMP-Na单用及与CBP合用对荷瘤裸鼠在体的抑瘤作用;采用MTT比色法测定AMP-Na单用及与CBP合用对SPC-A-1细胞的体外细胞毒活性;用流式细胞仪分析AMP-Na单用及与卡铂联用后对SPC-A-1细胞调亡、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。

 

结果:

 

1、体内实验表明,AMP-Na 125~260mg/kg各剂量单用对人肺腺癌SPC-A-1细胞裸鼠皮下移植瘤生长无明显影响。与CBP合用,可显著增加CBP对SPC-A-1细胞裸鼠移植瘤的抗肿瘤活性,具有协同抑制作用,以AMP-Na 200mg/kgⅠ和260mg/kg作用最强,与溶媒对照比,差别有极显著性(P<0.01);与卡铂单用比,差别有显著性(P<0.05)。

 

2、体外细胞毒实验结果表明,AMP-Na 6.25~200μg/ml对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖的抑制作用具有明显的量效关系,与CBP联用后有协同效应,可显著增加CBP对SPC-A-1细胞的抑制作用,卡铂单用的IC50为35.69μg/ml±6.56μg/ml,联用后依次降为33.98±6.3、30.96±3.8、28.34±6.3、19.13±6.9和<6.25μg/ml。

 

3、FCM分析显示,AMP-Na 12.5~100μg/ml各剂量单用对人肺腺癌SPC-A-1细胞具有明显的诱导凋亡作用,与阴性对照比,差别有显著性(P<0.05);和CBP联用后凋亡率较卡铂单用明显上升,有协同抑制作用。

 

4、FCM分析显示,AMP-Na单用及与CBP联合作用后可显著提高SPC-A-1细胞Bcl-2与Bax的平均荧光强度,降低Bcl-2/Bax的比率,增加Caspase-3的表达。

 

结论:

 

1、AMP-Na单用对人肺腺癌SPC-A-1细胞裸鼠皮下移植瘤生长无明显影响;AMP-Na与卡铂合用,可以增强卡铂对裸鼠移植瘤的抗肿瘤活性,有协同抑制作用。

 

2、AMP-Na单用能够显著抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞的增殖,且有浓度依赖性;AMP-Na与卡铂合用可以增强卡铂的活性,协同抑制SPC-A-1细胞的增殖。

 

3、AMP-Na可能是通过激活细胞内的Caspase-3介导的信号转导通路,降低凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的比率,诱导凋亡而发挥其抗肿瘤作用。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!


北京百欧博伟生物技术有限公司

查看电话

沟通底价

提交后,商家将派代表为您专人服务

获取验证码

{{maxedution}}s后重新发送

获取多家报价,选型效率提升30%
立即咨询
点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》 且同意关注厂商展位
联系我们:

企业名称: 北京百欧博伟生物技术有限公司

企业地址: 北京市顺义区信中北街16号院3号楼4层432 联系人: 李果 邮编: 100100 联系电话: 400-860-5168转4717

仪器信息网APP

展位手机站