凝结芽孢杆菌的优势特点与功能功效及应用领域！ 什么是凝结芽孢杆菌？ 凝结芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌，呈短杆状，具有产芽孢的能力。其芽孢是一种耐热的生物结构，使得凝结芽孢杆菌具有良好的存活力和抵抗环境变化的能力。 凝结芽孢杆菌的特点 1、芽孢形成能力：凝结芽孢杆菌能够形成耐久的芽孢结构，在恶劣的环境条件下存活，从而有助于在各种应用领域中具备稳定性和长期存储的能力。 2、产气能力：凝结芽孢杆菌能够产生丰富的气体，如氢气和二氧化碳，在一些发酵过程中发挥重要作用。 3、强韧的细胞膜：凝结芽孢杆菌具有坚韧而稳定的细胞膜，使其能够在广泛的环境条件下存活和繁殖。 4、多样的代谢途径：凝结芽孢杆菌拥有多样化的代谢途径，能够在不同条件下利用不同的营养物质进行能量和物质转化。 凝结芽孢杆菌的应用 凝结芽孢杆菌具有广泛的应用领域，包括但不限于以下几个方面： 1、食品工业：凝结芽孢杆菌在食品工业中被用作发酵剂，发酵产生的乳酸和丁酸可以提高食品的保鲜性、口感和营养价值。 2、动物养殖：凝结芽孢杆菌作为一种益生菌，被广泛应用于动物养殖中，有助于改善动物的肠道微生态平衡、促进消化吸收和增强免疫功能。 3、动物饲料：凝结芽孢杆菌在畜牧业和养殖业中的应用也相当广泛。它可以用作动物饲料添加剂，以改善动物的肠道健康和消化系统功能。这有助于提高动物的饲料利用率和生长性能。 4、益生菌产品：凝结芽孢杆菌常被用作益生菌添加剂，被加入到食品和饮料中，如酸奶、乳制品、饮料、膳食纤维补充剂等。它能够改善肠道健康，促进消化和营养吸收，维持肠道菌群平衡。 5、膳食补充剂：凝结芽孢杆菌也被制成膳食补充剂，供人们作为保健品或补充日常饮食。它可以用于促进免疫系统功能、改善肠道健康和增强消化系统功能。 凝结芽孢杆菌的好处 凝结芽孢杆菌的应用在人类健康中也有着积极的影响： 1、调节肠道菌群平衡：凝结芽孢杆菌可以调节肠道菌群结构，抑制有害菌的生长，增加有益菌的数量，有助于维持良好的肠道微生态平衡。 2、改善消化功能：凝结芽孢杆菌能够产生有益的酶和机制，促进食物消化，增加营养物质的吸收和利用。 3、提升免疫力：凝结芽孢杆菌通过调节免疫细胞的功能，增强抗病能力，促进免疫反应的平衡，提高机体的整体免疫力。 凝结芽孢杆菌作为一种重要的微生物资源具有许多独特的特点和广泛的应用领域。它在食品工业、动物养殖、饲料添加剂和医药领域等的应用，还在人类健康中发挥着重要的作用。然而，凝结芽孢杆菌的应用仍需进一步研究和开发，以发挥其最大的优势和潜力，并确保安全性和可持续性的同时获得最佳效果。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                SV40 MES 13小鼠肾小球系膜细胞的培养与处理！ 一、产品信息平台编号：Bio-73411 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：SV40 MES 13 细胞名称：小鼠肾小球系膜细胞用途：(种属鉴定正确) 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍 该细胞系来源于转染SV40的转基因小鼠的肾脏。 三、细胞特性1）来源：肾小球，小鼠2）形态：成纤维细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。 四、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 五、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。 六、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM/F12 培养基,优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 食品生产车间常见霉菌与污染来源及防治措施！ 食品加工过程中，“微污染源”有很多，如何防止食品被污染是一项重要课题。霉菌作为微污染源中的一种，如果不加以控制，势必会影响到食品保质期的长短。 那么，应该如何控制霉菌污染食品呢？ 控制霉菌污染，首先要了解霉菌的生长环境、污染食品的条件。在此基础上，方可以提出合理的防控措施，提高食品卫生质量。 一、常见的霉菌有哪些呢？ 1、曲霉 在自然界中分布广泛, 它以土壤或空气为媒介, 可引起食物、谷物和果蔬的霉腐变质，有的可产生致癌性的黄曲霉毒素。该霉在原料贮藏期间几乎不会死亡。因其对干燥抗性强, 故常在一些干燥食品中被分离出来, 而糖类和壳类处理工厂，也常被此类霉菌污染。烘焙产品中也常因原料，如糖、花生、油、大米等原料带入曲霉污染。 2、青霉 与曲霉一样在自然界中广泛分布, 而且具同样的生态, 但曲霉生长于中温至高温, 而青霉以中温性为主, 代表种是灰绿青霉，从土壤或空气中很易分离。青霉的孢子耐热性较强，菌体繁殖温度较低，酒石酸、苹果酸、柠檬酸等烘焙产品常用的酸味剂又是它喜爱的碳源，因而常常引起这些制品的霉变，是干燥性壳物产品处理工厂的主要霉菌。其有害性是造成水果、蔬菜、肉食及衣履腐败和产生霉菌毒素以及诱发过敏。 3、毛霉 毛霉菌又叫黑霉、长毛霉。毛霉在土壤、粪便、禾草及空气等环境中存在。在高温、高湿度以及通风不良的条件下生长良好。在工厂湿度高的环境、通风不良的环境与气温差异显著的地方(如湿的地板和天花板) , 常有此霉菌存在。  4、根霉 黑根霉也称匐枝根霉，分布广泛，常出现于生霉的食品上，瓜果蔬菜等在运输和贮藏中的腐烂及甘薯的软腐都与其有关。黑根霉是目前发酵工业上常使用的微生物菌种，能糖化淀粉、转化蔗糖 ，产生乳酸、反丁烯二酸及微量酒精。黑根霉的最适生长温度约为2~8℃，超过32℃不再生长。 5、交链孢霉 交链孢霉属中温性和好湿性霉菌，易造成腐朽、腐败和过敏。在高湿度的工厂环境(如糕点、鱼肉、水产加工与肉食加工环境) 的天花板、墙与地板、配水管的黑色霉菌, 几乎为该菌或枝孢霉。 6、镰刀菌 镰刀菌是一类世界性分布的真菌，它不仅可以在土壤中越冬越夏，还可侵染多种植物(粮食作物、 经济作物、药用植物及观赏植物)，引起植物的根腐、茎腐、茎基腐、花腐和穗腐等多种病害，寄主植物达100余种。本可产生镰刀菌毒素，食用霉变的粮食可导致人患病和死亡，某些菌种可诱发人皮肤和角膜溃疡，恶性肿瘤的发生可能与有的菌种有关。 二、霉菌一般需要怎样的繁殖条件呢？ 与霉菌的生长繁殖关系密切的有水分、温度、基质、通风等条件，为此，只有充分的了解霉菌的生长习性，才能为下一步控制霉菌提供理论依据。 (1)水分 霉菌生长繁殖首要条件是必须保持一定的水分，大部分霉菌于相对湿度90 %以上, 水含量18 %的高湿度环境下以上容易生长。当食品中的水分活度为0.98时，霉菌最易生长繁殖，当水分活度在0.7以下时，霉菌的繁殖才受到真正的抑制，阻止产毒。所以，水分越高的产品，虽口感会更好，但伴随着长霉的风险也会更高。 (2)温度 温度对霉菌的繁殖及产毒均有重要的影响，不同种类的霉菌其最适温度是不一样的，大多数霉菌繁殖最适宜的温度为25～30℃，在0℃以下或30℃以上，不能产毒或产毒力减弱。就如黄曲霉的最低繁殖温度范围是6-8℃，最高繁殖温度是44～46℃，最适生长温度37℃左右，但产毒温度则不一样，略低于生长最适温度，其最适产毒温度为28-32℃。 (3)营养基质 与其它微生物生长繁殖的条件一样，不同的食品基质霉菌生长的情况是不同的，一般而言，营养丰富的食品（如以碳水化合物为主要成分的植物性食品原料）其霉菌生长的可能性就大，天然基质比人工培养基产毒为好。 (4)氧   霉菌为绝对好气性微生物, 于通气良好环境下生长较好, 故厌氧下其生长可被抑制。   三、霉菌污染的来源 不同的食品厂由于加工产品不同, 故污染的霉菌种类也有所差异，但面包、糕点加工厂的霉菌污染源一般来自水、通风良否、操作人员、机械设备、食品原料和包材等。 (1)面包、糕点加工过程中常产生大量水汽，易造成墙壁潮湿及冷凝水形成的情况 ， 容易滋生霉菌。 (2)一些水槽、水桶、水管、自来水的水龙头、自来水管、地板与底板等水环境，由于长期贮水，所以污染情形特别常见。如，车间地面、明沟、气帽有积水潮湿；冷凝水的管路、墙壁、天花板、空调口等；生产过程产生的液体废弃物未及时清理出车间；离墙离地近的设备表面、潮湿墙面、冷风机容易产生冷凝水滋生霉菌。 (3)空气中浮游霉菌的二次污染，如空气中滋生的霉菌、人员走动时地面扬尘中含有的细菌、空调或新风管道中吹出的霉菌等。 (4)操作人员自身的二次污染，如手部消毒不彻底、不洁净衣物手套接触食品，违反卫生管理制度及不良的卫生习惯，如随意串岗、不按规定佩戴口罩遮住鼻子、包装间没按规定穿连体衣、对着产品说话、打喷嚏、经常抓耳挠腮等等。 (5)设备、容器的交叉感染，如设备、容器清洗消毒不彻底、不按规定流程定期清洗等、消毒液选用不当或使用剂量不够等。 (6)原料带入的二次污染，可能由于本身质量不过关或者在储存条件不当受到霉菌污染。 (7)通过包材的污染，如包装材料密封性不好，外包装或包装袋表面不清洁，附着有微生物，若杀菌不彻底，则其残留的霉菌素则会直接污染食品。 四、霉菌污染的防治措施 1、控制车间温湿度 对生产车间霉菌有效控制，首先必须控制车间的温度和湿度，常开抽湿机及空调，尤其是潮湿天气，建议车间温度在24度以下，湿度控制在55%以下，确保车间干爽，因为过高的温湿度会促进霉菌的生长。同时应设有效的换气设施，保证车间抽湿机的正常运转，保证车间内部空气能够达到要求指标，空调的换气程度好坏直接影响到霉菌的产生。如果车间能保证及时将含有大量水份的空气排出车间，以防止室内温度过高、蒸汽凝结或异味等发生，大大缩小了可能存在霉菌的可能性。 2、对车间进行空气消毒 一个细菌及霉菌在24小时内会繁殖成百上千甚至上百万，包装间可配上臭氧消毒机、紫外灯（装在包装机上方）等。晚上工人下班后，每日车间的空气杀菌可采用臭氧消毒机和紫外线等同时进行，防止空气中滋生的微生物累加到白天造成对产品不利，当然，要记得下班后打开， 第二天上班前关闭，消毒期间人员必须撤离哦。在潮湿天气，建议包装间每隔2周用甲醛进行彻底的熏蒸消毒。（具体做法可咨询广州拜晴技术部） 3、班前、班后工器具注意消毒 酒精喷雾消毒是制造食品时防止霉菌与细菌污染常用的方法， 每天班前、班后对车间内部墙壁、风机、下水道、案面、手部、围裙套袖、预冷库和库门、速冻库门、包装室、工器具消毒间使用75%的酒精喷洒消毒，班中每2小时对风机、墙壁、下水道实施75%的酒精喷洒，杀灭霉菌。 4、控制车间内卫生，避免死角位 首先要保持生产车间的内部工具的清洁和卫生，注意对一些卫生死角进行严格的卫生清理和保持。每天下班后清洗干净工器具、设备等，每半月实施一次深度清洁。即管理者与操作人员应具有卫生观念, 随时注意操作的卫生与减少 污染的可能性 , 必须从加强员工卫生教育着手。比如，操作案面的背面，天花板、墙壁、空调、制冷风机、抽湿机、干手机等的卫生清理，清理完卫生后所有的墙壁、天棚、设备、器具、案面表面要用酒精擦两遍以上。请特别注意清理制冷风机的散热片和冷气的出风口以及内部电机叶片，这是一个很容易忽视的角落。 5、保证操作人员的清洁卫生 人员的工作服、更衣室等，必须保持卫生清洁，定期清洗和进行紫外线或臭氧杀菌30分钟以上，防止人为造成霉菌的交叉污染(不可在有人情况下杀菌)。工人每次进入车间前（尤其是冷却包装间），先用洗手液洗手，然后换工作服、戴袖套、围裙、帽子、口罩，然后双手泡入消毒液（二氧化氯溶液或在超市买家庭用的消毒液稀释）中5秒，然后直接甩干或用干手机烘干。注意：在消毒液中泡后就不要用布擦干。 6、杜绝车间的污染源，设置洁净室 在食品工厂内的加热后放冷至包装阶段，为最需防止外部浮游菌侵入和落菌的污染，有条件者可以设置洁净室，利用空气导入设施，将可达到空气洁净化, 减少污染的目的。同时，请注意以下细节：对于制造环境的天花板、壁面与地板等, 为防止霉菌污染，车间的一切用具包括装修所用的材料尽量使用塑料、不锈钢等易清洗、防腐蚀、抗霉菌与防止结露的材料，尽量避免使用木头、铁等材料，因为木头遇水湿润后易长霉点，铁材质易生锈脱落影响产品质量。另外，冷却包装间内不得存放纸皮、木头、脏毛巾、窗帘扫把、拖把等容易藏污纳垢的物品，原料外包装物应拆除后再传送进冷却间，以避免污染产品。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   阴沟肠杆菌阴沟亚种的培养方法与实验内容！ 阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)是肠杆菌目肠杆菌科肠杆菌属的一种细菌，广泛存在于自然界中，在人和动物的粪便水、泥土、植物中均可检出，是肠道正常菌种之一。 一、菌种简介平台编号：Bio-78376 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Enterobacter Cloacae Subsp. Cloacae 菌株名称：阴沟肠杆菌阴沟亚种用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Enterobacter cloacae subsp. cloacae菌株拉丁名(Jordan) Hormaeche and Edwards, subsp. nov.(ATCC® 700258™)菌株编号Deposited As Enterobacter cloacae (Jordan) Hormaeche and EdwardsStrain Designations 菌株别名SLD1a-1Application Reduces selenic acid selenate Reduces sodium selenite seleniteIsolation分离源  Seleniferous agricultural drainage water, San Joaquin Valley, CABiosafety Level生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format提供形式 freeze-driedPreceptrol® noType Strain模式菌株 noMedium培养基 ATCC® Medium 18: Trypticase Soy Agar/BrothGrowth Conditions生长条件Temperature培养温度: 26.0℃Atmosphere需氧情况: Aerobic Name of Depositor M LosiIsolation 分离源Seleniferous agricultural drainage water, San Joaquin Valley, CAReferences参考文献  Losi ME, Frankenberger WT Jr.. Reduction of selenium oxyanions by Enterobacter cloacae SLD1a-1: Isolation and growth of the bacterium and its expulsion of selenium particles. Appl. Environ. Microbiol. 63: 3079-3084, 1997. .Validation of publication of new names and new combinations previously effectively published outside the IJSEM. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 55: 1395-1397, 2005. PubMed: 16014455 .Reassignment of Enterobacter dissolvens to Enterobacter cloacae as E. cloacae subspecies dissolvens comb. nov. and emended description of Enterobacter asburiae and Enterobacter kobei . Syst. Appl. Microbiol. 28: 196-205, 2005. PubMed: 15900966 三、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSA）*LB 培养基（以上三种任选一种即可） 四、培养方法1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.2m 左右培养液或无菌水溶解，接种在 2 个斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   腐败希瓦菌PCR试剂盒的知识与应用及操作步骤！ 一、背景 腐败希瓦菌PCR试剂盒是一种用于检测腐败希瓦菌的生物试剂盒。腐败希瓦菌是一种常见的食品腐败菌，可引起食品腐败变质，对人体健康产生危害。使用PCR试剂盒可以快速、准确地检测出腐败希瓦菌，对于食品检测和质量控制具有重要意义。 腐败希瓦菌PCR试剂盒通常由一对特异性引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs等成分组成。通过PCR反应，可以特异性地扩增腐败希瓦菌的DNA片段，从而对其进行快速检测。使用这种试剂盒的操作过程相对简单，只需将样品DNA加入到PCR反应液中，经过一系列温度变化和反应后，即可得到检测结果。 腐败希瓦菌PCR试剂盒具有高灵敏度、特异性强、操作简便等优点，适用于食品检测、环境监测等领域。然而，需要注意的是，PCR技术虽然具有高灵敏度和特异性，但也可能受到其他因素的干扰，如DNA提取效率、引物设计等。因此，在使用PCR试剂盒时，需要严格按照操作说明进行，并对结果进行仔细的分析和解释。 二、腐败希瓦菌PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在腐败希瓦菌的感染。 三、应用 腐败希瓦菌PCR试剂盒可以用于重金属Cd2+高耐受和富集细菌的筛选与分析： 从重金属污染的环境中采用Cd2+浓度梯度递增法、极限培养基培养和紫外诱变等方法筛选重金属Cd2+高耐受和富集的菌株,采用腐败希瓦菌PCR试剂盒PCR和16SrDNA序列分析对细菌进行初步鉴定和分析,然后通过重金属Cd2+添加处理实验,测定其对重金属的耐受和富集能力,最后对筛选所得的细菌进行培养条件(温度、pH等)的优化,以期为Cd2+修复工程菌的制备和环境重金属Cd2+的修复建立基础。 实验方法主要是应用不同的筛选和优化方法得到重金属Cd2+高耐受和富集的菌株,通过腐败希瓦菌PCR试剂盒PCR扩增对菌株进行16S rDNA序列分析,将测定的序列提交GeneBank数据库,与数据库中已有的DNA序列进行blastn相似性比对,从而对其进行初步鉴定。在此基础上测定和分析获得的重金属Cd2+高耐受和富集细菌对Cd2+的吸收和耐受能力。 实验结果显示：经过前述三种方法筛选得到三株菌株,其耐受重金属Cd2+浓度在固体培养基上达到150mmol/L,液体培养基里面达到40mmol/L。经腐败希瓦菌PCR试剂盒16S rDNA序列分析初步确定其中两株细菌为同一种细菌(腐败希瓦菌Shewanella putrefaciens),另外一株为假单胞菌(Pseudomonas sp.)。对细菌作高耐受和富集测定及与对照大肠杆菌pop6510比较分析得出,两种菌对重金属的耐受和富集浓度均远高于大肠杆菌pop6510,富集倍数分别达到15倍和6倍。在不同温度、pH和Cd2+浓度下对这两种细菌优化培养条件测定确定,其最适宜生长的温度为30℃,最适pH为7.2,重金属半数致死浓度为40mmol/L。 通过以上工作,初步获得以下结论:通过Cd2+浓度梯度递增方法对细菌的筛选是行之有效的方法,可缩短筛选的进程。紫外诱变得到一株细菌,在诱变实验中存活率低,但在耐受和富集测定实验中长势良好。通过16S rDNA序列分析鉴定细菌的种类是一种简便快捷的方法。通过腐败希瓦菌PCR试剂盒PCR扩增和测定细菌的16S rDNA的序列,直接与GeneBank中已知序列进行比对即可初步鉴定菌种。GeneBank丰富的细菌数据库资源为环境细菌的分析和鉴定开辟了一条重要和简便的有效途径。初步鉴定本实验所筛选得到的细菌为腐败希瓦菌(Shewanella putrefaciens)和假单胞菌(Pseudomonas sp.)。通过细菌的重金属耐受和富集测定,获得的两种细菌在LB固体培养基上耐受重金属Cd2+浓度达到150mmol/L,液体培养基达到40mmol/L。与大肠杆菌pop6510相比,其耐受重金属Cd2+浓度高于大肠杆菌pop6510,其重金属吸收值显著高于对照菌株。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   用于抗菌防腐剂的含量测定的：日勾维肠杆菌 日勾维肠杆菌是Enterobacter属的微生物，原产地为越南。主要用途为研究；教学，具体用途为检测生产。 一、菌种简介平台编号：Bio-53100 规格：冻干物拉丁属名：Enterobacter Gergoviae 菌株名称：日勾维肠杆菌其它编码号：ATCC33028培养基编号：2培养温度：37需氧类型：需氧分离基物：尿采集地：法国保存方法： 冷冻干燥管保藏用途：模式菌株。抗菌防腐剂的含量测定注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、基本概念(1)菌群：由多种细菌混合组成的相对稳定的细菌群体，具有某些共同性状。如大肠菌群包括大肠杆菌、产气肠细菌及他们之间的过渡类型。(2)菌属：菌种的上一级分类，通常性状相近、亲缘关系密切的若干菌种组成一个菌属，如芽孢杆菌属、葡萄球菌属、乳杆菌属等。(3)是细菌最基本的分类单位，通常指表型特征相似、亲缘关系接近的一类细菌群体，与同属内其他种有着明显差异；当涉及到细菌保存时，菌种是指细菌的种子（用来长期保存）资源。(4)菌型：同一菌种的不同细菌，在某些方面存在较小差异的为同一菌型，通常一个菌种内的细菌可以分为多种不同的菌型。(5)菌株：由一个独立分离的单细胞系培养而成的纯遗传型群体及其一切后代，一种微生物的每一个不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌株。 三、形态特征菌落白色、环状、表面光滑半透明、边缘整齐，革兰氏阴性菌、细胞呈短杆状、运动。媒介酶试验弱阳性；氧化酶试验阴性；发酵型、利用葡萄糖产气；明胶液化试验阴性；硝酸盐还原试验阴性；吲哚试验阴性；V-P试验阴性；ONPG测定阳性；TSI：底部、中部产酸变黄、产气，不产硫化氢；糖醇类发酵：能发酵蔗糖、甘露糖、鼠李糖、D-半乳糖、阿拉伯糖，不能发酵山梨醇；笨丙氨酸脱氨酶试验阴性；精氨酸双水解酶试验阳性；柠檬酸盐利用阳性；不能利用尿素；MR试验阳性。 四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   胶质芽孢杆菌的环境应用和生态影响及发展意义！ 胶质芽孢杆菌是一种重要的厌氧革兰阳性细菌，具有多方面的生物学特性和潜在应用。 一、胶质芽孢杆菌的生物学特性 胶质芽孢杆菌是一种革兰氏阳性细菌，可以在缺氧或微氧环境中生存和繁殖。其产孢能力强，孢子具有较高的耐热和耐寒能力，使得这种细菌在恶劣环境中也具有一定的生存优势。这些特性使得胶质芽孢杆菌在食品、饲料和环境领域的应用具有潜力。 二、胶质芽孢杆菌的潜在应用 1、食品工业：胶质芽孢杆菌可利用其发酵能力在食品生产中发挥作用。其发酵产物丁酸的应用可以改善食品口感，延长保质期，并增加食品的营养价值。此外，该细菌还可以促进一些食品原料的降解和改良，为食品加工提供新思路。 2、饲料行业：胶质芽孢杆菌也被应用于饲料行业，有助于提高畜禽的消化吸收能力，改善饲料的利用率，促进畜禽健康成长。 3、环境应用：胶质芽孢杆菌的一些菌株对有机废弃物的降解具有潜在能力，可在污水处理、厨余处理等环节中发挥作用。 三、胶质芽孢杆菌的可持续发展意义 1、资源利用：胶质芽孢杆菌在食品、医药和环境等领域的应用，可以促进资源的高效利用，推动工业生产过程的绿色化和可持续发展。 2、健康和环境：胶质芽孢杆菌在促进肠道健康的同时，也有望应用于环境保护和废弃物处理，为人类健康和生态环境的可持续发展提供有益支持。 四、展望与挑战 胶质芽孢杆菌的潜在应用领域广泛，但其在抗生素耐药性、病原性等方面的潜在风险也不容忽视。未来需要加强其安全性研究，规范其在食品和医药生产中的应用，以及加强在环境中的监测与管理，更好地发挥其应用潜力并减少潜在影响。 五、环境应用和生态影响 胶质芽孢杆菌在环境领域具有重要意义，其一些菌株能够降解有机废物，包括污水、厨余垃圾等。通过利用胶质芽孢杆菌来处理这些有机废物，可以减少对环境的负面影响，推动城市生活垃圾资源化和减量化管理，从而促进生态环境的可持续发展。 胶质芽孢杆菌作为一种重要的微生物资源，将在食品工业、饲料行业以及环境改善中扮演重要角色。未来，随着科学技术的进步和人们对健康、环保意识的提高，相信胶质芽孢杆菌的应用领域将会更加广泛，同时也会为人类社会的发展做出更多积极贡献。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                      ATCC 33536美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的培养方法！ 一、菌种简介平台编号：Bio-087512 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Photobacterium Damselae Subsp. Damselae 菌株名称：美人鱼发光杆菌美人鱼亚种用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Photobacterium damselae subsp. damselae (Love et al.) Smith et al. emend. Kimura et al. 拉丁名(ATCC? 33536?) 统一编号Deposited As Vibrio damsela Love et al.Strain Designations 别名 CDC 23-81Application 用途 CharacterizationIsolation 分离基物 Seawater, FloridaBiosafety Level 生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌种 noMedium 培养基 ATCC? Medium 2: Marine agar 2216 or marine broth 2216Growth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 26.0°CName of Depositor 寄存者 CDCChain of Custody 来源国家 ATCC Isolation 分离基物 Seawater, FloridaReferences 参考文献 Science 214: 1139-1140, 1981. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                EFM-19人乳腺管癌细胞的性质与用途及生产工艺！ 一、背景 EFM-19人乳腺管癌细胞是一种人乳腺管癌细胞系。该细胞系在研究中常被用于了解乳腺管癌的发病机制、药物筛选和治疗效果评估等方面。 乳腺管癌是一种常见的恶性肿瘤，其发生和发展涉及到多种基因和环境的因素。通过研究EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞，科学家们可以深入了解乳腺管癌的生物学特性、细胞生长和增殖的机制，以及不同治疗方法的疗效和副作用。 为了保持细胞的活力和纯度，EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞需要在特定的培养条件下进行培养。这些条件包括适当的温度、湿度、pH值和营养物质等。同时，为了防止污染，需要在整个实验过程中采取严格的预防措施，如使用一次性耗材、定期更换培养液等。 EFM-19人乳腺管癌细胞是一种重要的研究工具，有助于深入了解乳腺管癌的发病机制和治疗方法。但同时也需要严格的实验操作和管理，以保证实验结果的准确性和可靠性。 二、EFM-19人乳腺管癌细胞培养操作 1)复苏EFM-19人乳腺管癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)EFM-19人乳腺管癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)EFM-19人乳腺管癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 EFM-19人乳腺管癌细胞可以用于DNA启动子甲基化在脾酪氨酸激酶Syk肺癌表达中的影响： 探讨人低转移肺大细胞癌(NL9980),人高转移肺大细胞癌(L9981),人肺腺癌(A549),人肺鳞癌(YTMLC-9),人肺小细胞癌(NCI-H446)5种肺癌细胞株中是否存在Syk基因启动子甲基化,探讨基因启动子甲基化对Syk的表达是否具有影响作用。 方法：体外培养人低转移肺大细胞癌细胞株(NL9980),人高转移肺大细胞癌细胞株(L9981),人肺腺癌细胞株(A549),人肺鳞癌细胞株(YTMLC-9),人肺小细胞癌细胞株(NCI-H446)5种肺癌细胞株以及Syk基因表达阳性对照EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞、Syk基因表达阴性对照人乳腺管癌细胞株(MDA-MB-435S);同时选取16例肺癌病人的肿瘤组织和相应的正常肺组织,提取其RNA,逆转录为cDNA,选取Syk基因特异性引物进行扩增,Real-time PCR观察其表达情况。甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测人低转移肺大细胞癌细胞株(NL9980),人高转移肺大细胞癌细胞株(L9981),人肺腺癌细胞株(A549),人肺鳞癌细胞株(YTMLC-9),人肺小细胞癌细胞株(NCI-H446)5种肺癌细胞株Syk基因启动子甲基化是否存在,以Syk基因启动子甲基化阳性的人乳腺管癌细胞株(MDA-MB-435S)、Syk基因启动子甲基化阴性的EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞为对照。以甲基化转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-CdR)处理后,检测处理前后Syk基因的表达变化。 结果：以Syk表达阳性对照EFM-19人乳腺管癌细胞和阴性对照乳腺管癌细胞株(MDA-MB-435S)为参考,所培养的5种肺癌细胞株Syk基因表达缺失(P＜0.05)。16例肺癌病人肿瘤组织与相应的正常肺组织相比Syk基因表达明显减低,具有统计学差异(P＜0.05)。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 变形杆菌属通用PCR试剂盒的知识与应用及相关研究！ 一、背景 变形杆菌属通用PCR试剂盒是一种用于检测变形杆菌属细菌的体外诊断试剂。它利用聚合酶链式反应（PCR）技术，能够快速、准确地检测出变形杆菌属细菌的特定基因片段。 变形杆菌属通用PCR试剂盒通常包含预混合的PCR反应液、引物和其他必要的试剂。使用时，只需将样品加入反应液中，然后在PCR仪中完成扩增和检测。由于PCR技术的高灵敏度和特异性，该试剂盒可以检测出极低浓度的变形杆菌属细菌，从而提高了诊断的准确性。 变形杆菌属细菌是一类常见的肠道细菌，但在某些情况下，它们也可能引起食物中毒、尿路感染等疾病。因此，对于变形杆菌属细菌的检测在临床诊断和治疗中具有重要意义。 需要注意的是，使用变形杆菌属通用PCR试剂盒需要具备一定的分子生物学知识和实验技能。同时，试剂盒的质量和可靠性对于实验结果至关重要，因此在使用前应进行质量检查和确认。此外，试剂盒的储存和使用应遵循说明书上的指示，以保证其有效性和安全性。 二、变形杆菌属通用PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据变形杆菌属通用PCR试剂盒的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在变形杆菌属的感染。 三、应用 变形杆菌属通用PCR试剂盒可以用于食源性变形杆菌属PCR检测方法的研究： 针对食源性变形杆菌属食物中毒事件逐年上升的趋势,研究建立新型快速灵敏的变形杆菌属检测鉴定方法。通过变形杆菌属通用PCR试剂盒建立3种常规PCR方法和1种荧光PCR方法,对66株变形杆菌属鉴定,与传统分离培养法和全自动微生物分析系统检测法进行比较研究,结果如下:根据1961-2007年发表的218篇关于264起变形杆菌属食物中毒案例分析,变形杆菌属食物中毒自二十世纪的80年代到90年代到目前的21世纪,呈现上升趋势,广东省和山东省为变形杆菌属食物中毒多发省份,绝大多数中毒事件都发生在夏秋季节,以城市中的饮食服务单位居多,中毒食品多为动物性食品,尤其是熟食制品,中毒菌种主要是奇异变形杆菌和普通变形杆菌。在187起变形杆菌属食物中毒的检测方法中,94.65%采用传统分离培养法,其余5.35%采用全自动微生物分析系统法,没有任何采用PCR及其它分子生物学检测方法的报道。 传统分离培养法和全自动微生物分析系统检测法对66株样本分离菌株的鉴定结果全部为阳性,鉴定结果与中山大学附属第三医院和暨南大学附属第一医院菌种鉴定保存的结果一致,符合率100%,验证了变形杆菌属菌种的真实性。选取atpD基因和tuf基因作为靶序列,设计了3对特异性引物,分别建立了3种相应的检测变形杆菌属的变形杆菌属通用PCR试剂盒常规PCR法,对3株变形杆菌属标准菌株、66株样品分离株及13株非变形杆菌属菌株进行扩增实验,结果显示,3种变形杆菌属通用PCR试剂盒常规PCR法对3株标准菌株和66株样品分离株的检测结果均为阳性,13株非变形杆菌属菌株检测结果均为阴性。 变形杆菌属通用PCR试剂盒鉴定结果与传统分离培养法和全自动微生物分析系统检测法结果完全一致,但检测时间仅为6-8 h,其检测速度、灵敏度和特异性表现出独特的优势。基于atpD基因设计1对特异性引物,建立了1种SYBR GreenⅠ荧光PCR法,用于检测变形杆菌属,其鉴定结果与常规变形杆菌属通用PCR试剂盒PCR方法完全一致,但本方法所耗时间仅为1-2 h,表现出更优的特异性、重现性和灵敏度,并且操作更为简便。对8条变形杆菌属菌株atpD基因测序,其结果与Genbank中变形杆菌属atpD基因序列不同,本文所测基因序列是截至目前为止尚未公开的新的变形杆菌属atpD基因序列。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   枯草芽孢杆菌的主要作用与优劣判别及注意事项！ 枯草芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌在自然界中广泛存在，不仅活跃于土壤、植物根际、体表等外界环境中，同时还是植物体内常见的内生细菌，对人畜无害，不污染环境，具有显著的抗菌活性和极强的抗逆能力。 枯草芽孢杆菌生长快、营养简单，能产生耐热、抗逆的芽孢，可以制成各种剂型；与化学农药混用而不失活，而且批量生产工艺简单，成本也较低，施用方便，储存期长。 芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌主要用于调节土壤、喷雾，也可灌根、拌种及种子包衣等。喷雾时要注意以下几点： （1）由于使用量少，为减少浪费，务必采用二次稀释法配置。枯草芽孢杆菌用量少，为减少浪费，使用时应用小容器将所需用量粉剂充分溶解后再倒入喷雾器中，加水至喷雾器水平线进行喷雾； （2）早上10点前或下午4点后施用，避免阳光直射，杀死芽孢。尤其是4点后使用，夜间潮湿的环境更有利于芽孢萌发。 （3）不能与铜制剂、链霉素等杀菌剂及碱性农药混用。 枯草芽孢杆菌对植物的作用主要体现在以下几个方面： 1、营养和空间位点的竞争 枯草芽孢杆菌的竞争作用主要包括营养竞争和空间位点竞争。可以在植物根际、 体表或体内及土壤中快速、大量繁衍和定殖，有效地排斥、阻止和干扰植物病原微生物在植物上的定殖与侵染，从而达到抑菌的效果。 竞争作用的意义：拌种或灌根后，枯草芽孢杆菌能够通过植物导管传导到地上部分而在作物根表、根内、茎部、叶部等部位定殖和繁殖，保护作物根部不受有害菌侵染、抑制作物体内有害原菌扩散，从而达到防病作用。 2、产生抑菌物质 枯草芽孢杆菌在生长过程中能产生多种具有抑菌、溶菌作用的物质，如枯草菌素、有机酸、抗菌蛋白等等，这些物质可以抑制病原菌的生长和繁殖，甚至破坏细菌结构。因此，枯草芽孢杆菌对于重茬病、根腐病、灰霉病等防治效果好。 杀菌作用：枯草芽孢杆菌在作物根表、根内、茎部、叶部等部位定殖和繁殖过程中，能产生脂肽类和蛋白类等杀菌物质，从而杀死作物病原菌，达到防病效果。 3、增强免疫、促进生长 枯草芽孢杆菌可以分泌活性物质，激活植物防御系统，增强作物的免疫力与抗病性，减轻或消除病原菌对植株的危害。 还可促进多种植物种子、幼苗和根系的生长发育，增强了植物的抗病性， 从而间接地减少病害发生。如增加吲哚乙酸等生长素的形成，刺激作物根系发育，增强光合作用。同时将土壤中难吸收的物质转化为易于作物吸收的物质，促进作物对营养物质的吸收利用，提高肥料利用率。 促生作用：枯草芽孢杆菌具有解磷作用，可以将土壤中无效磷转化为能被作物吸收的有效磷，促进作物根系及植株生长，提高了作物的抗性。 4、诱导植物产生抗性 枯草芽孢杆菌但能直接抑制植物原菌，而且能通过诱发植物自身的抗病潜能从而增强植物的抗性。如水稻纹枯病生防菌枯草芽孢杆菌，能诱导水稻叶鞘细胞抗病相关的酶（POD、PPO和SOD）活性增强，达到效果。 5、改善土壤结构 枯草芽孢杆菌在土壤中形成益生菌环境，促进团粒结构形成，提高土壤保肥保水能力，增加土壤疏松度，促进根系生长。具体表现在，加速养料矿质化，将养分由无效态和缓效态变为有效态和速效态。同时，加速养料腐殖化，分泌植酸酶，降解土壤中大部分的植酸盐；产生生长素，刺激作物生长，提高种子的成活率和出苗率。 使用注意事项 枯草芽孢杆菌的优劣判别 优质的枯草芽孢杆菌我们就不多做讨论了，来看看这些假冒伪劣的通常都是些什么套路。 ①价位便宜，一般用一些激素或肥料冒充，即完全当成肥料来卖。 ②效果非常快，打上当天见效。 ③用后易引起作物早衰，因为激素的作用品质产量反而降低。 总之，真正的枯草芽孢杆菌是一种生物制剂，对作物、对土壤都有很好的生长调节作用，基本是多功能的，不可能只针对一点起作用，重要的是它的使用效果是累加的，是单纯的肥料或激素达不到的。 微生物肥料，之所以比有机肥贵，是因为添加了生物活性菌！所以菌种的作用对于微生物肥料来说是重要的。目前市场上的微生物肥料菌种添加主要都以枯草芽孢杆菌为主，所以了解枯草芽孢杆菌的作用非常重要，今天我们就一起来看看！ 枯草芽孢杆菌的作用 1、抗生作用 抗生作用是指拈抗微生物通过产生代谢产物在低浓度下就能够对病原微生物的生长和 代谢产生抑制作用，从而来影响病原微生物的生存和活动。近半个世纪以来，人们从枯草芽孢杆菌不同菌株的代谢产物中分离纯化了多种有效的抗菌物质。 2、溶菌作用 枯草芽孢杆菌的溶菌作用主要表现在是通过吸附在病原菌的菌丝上，并随着菌丝生长 而生长，而后产生溶菌物质造成原生质泄露使得菌丝体断裂；或者是产生抗菌物质通过溶解病原菌孢子的细胞壁或细胞膜，致使细胞壁穿孔、畸形等现象从而抑制孢子萌发。 3、诱导植物产生抗性及促进植物生长 诱导植物产生抗性作用是指枯草芽孢杆菌不但能够抑制植物病原菌，而且还能够诱 发植物自身抗病机制从而增强植物的抗病性能的作用。什么是PGPR国际上把土壤中能促进植物生长的根际自生细菌通称为植物促生根圈细菌 (Plant growth promoting rhizobaceria)，简称为PGPR。 其中以枯草芽孢杆菌的抗逆性强、功能多、适应性广、效果稳定。枯草芽孢杆菌能够产生类似细胞分裂素、植物生长激素的物质，促进植物的生长使植物抵抗病原菌的侵害。 4、保护环境 枯草芽孢杆菌大量应用于生物肥料。当作用于作物或土壤时，能够在作物根际或体内定殖，并起到特定肥料效应。目前，微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化和修复土壤，降低农作物病害发生，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用。提高农作物产品品质和食品安全等方面表现出了不可替代的作用。 5、枯草芽孢杆菌对土壤中的菲与苯并芘的吸附及生物降解功能 土壤与其相连的水环境称为土壤-水环境系统，其中存在着大量的土壤固有微生物，并在表面存在生物膜，因为生物膜形成了隔离层，有机污染物在接触到支撑生物膜的固体基底之前，必须首先到达并且穿过这个隔离层，这样就强烈地改变矿物颗粒或基底的吸附行为，对吸附作用有重要的影响。 6、枯草芽孢杆菌对土壤微生物的呼吸强度的影响 土壤呼吸强度作为土壤生物活性指标之一，能够在一定程度上反应土壤营养物的转化和供应能力，其呼吸速率变化及变化方向也反应了生态系统对胁迫的敏感程度和响应模式，是环境安全评价的一项重要指标，当土壤受到外来污染物污染时，微生物为了维持生存可能需要更多的能量，而使土壤微生物的代谢活性发生不同程度的响应。研究表明各质量分数处理的枯草芽孢杆菌均表现为对土壤呼吸作用的刺激效应，并且土壤中枯草芽孢杆菌质量分数越大，对土壤呼吸强度的刺激作用越大，即刺激强度和施药质量分数呈正相关。 7、枯草芽孢杆菌对土壤脲酶活性的影响 应用土壤酶作为监测指标，评价农药的生态毒理效应已成为环境科学领域的研究热点之一。而脲酶属于土壤中研究得比较深入的一种水解酶类，是惟一对尿素在土壤中转化及尿素利用率有重大影响的酶。 尿素施人土壤后，在脲酶的催化作用下，迅速分解成二氧化碳和氨，所以土壤脲酶活性的降低，不仅可使尿素水解减缓，令其水解产物更多地被土壤吸附而有效减少尿素水解产物氨的挥发损失，也可能相应减少水解产物NH硝化作用潜势。 研究表明所有处理用枯草芽孢杆菌处理过的土壤对土壤脲酶均表现出刺激效应。其中高质量分数处理(3200mg/kg干土)在第28天脲酶活性上升到高点。枯草芽孢杆菌对脲酶刺激的机理，可能是由于微生物农药的加人为微生物的生长提供了碳源和营养，从而使产生该种酶的微生物数量增长，活性增强，因而土壤中脲酶的活性也相应增强。 8、枯草芽孢杆菌对盐碱地的改良 土壤内盐分积累的危害 土壤结构黏滞，通气性差，容重高，土温上升，好气性微生物活动差，养分释放慢，渗透系数低，毛细作用强等，导致表层土壤盐渍化进一步加剧，造成土壤冷、硬、板现象。一般说来，当土壤表层或亚表层中的水溶性盐类累积累超过0.1％，或土壤碱化层的碱化度超过5％，就属于盐渍土。 9、引起植物的生理干旱 过多的可溶性盐类，可提高土壤溶液的渗透压，引起植物的干旱。 10、危害植物组织 干旱季节，表土层盐分过量积聚易伤下胚轴。在高pH值下，还会导致OH 一对植物的直接毒害。植物组织内盐分过量积聚，会使原生质受害，蛋白质合成受阻，含氮的中间代谢产物积累，造成细胞中毒。 11、影响植物正常营养吸收 由于交换性Na+的竞争，使植物对钾、磷和其他营养元素的吸收减少，磷的转移也会受到抑制，从而影响植物的营养状况。 12、影响植物的气孔开闭 在高浓度盐类作用下， 气孔保卫细胞内的淀粉形成受到阻碍，使细胞不能关闭，植物容易干旱枯萎。选择耐盐的巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌优势菌株，生产出生物有机肥，用于植物生产，在投入成本相同的情况下，植物生长发育良好，产量增加，而且盐碱地土壤理化性状得到改善，土壤微生物数量增多。此外由于枯草芽孢杆菌无致病性，并可以分泌多种酶和抗生素， 而且还具有良好的发酵 基础，所以用途十分广泛。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  氧化微杆菌的培养方法与实验内容及使用范围！ 氧化微杆菌来源于广东省微生物研究所，黄色菌落，表面光滑半透明，边缘整齐，对光看有光泽。革兰氏阳性杆状菌。主要用于分类；研究；生产。 一、菌种简介平台编号：Bio-81958 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Microbacterium Oxydans 菌株名称：氧化微杆菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Microbacterium oxydans (Chatelain and Second 1966) Schumann et al. 拉丁名(ATCC? 55728?) 编号 Strain Designations 菌种别名 31D-4 [RB 001]Application 用途 Produces cephalosporin haloperoxidase Isolation 分离源 Gut of marine worm, Notomastus lobatus Biosafety Level 生物安全等级 1 Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-dried Storage Conditions 保藏条件 Frozen 冷冻物 : -80°C or colder Freeze-Dried 冻干物 : 2°C to 8°C Live Culture 活菌 : See Propagation Section Disclosure This material is cited in a US or other Patent and may not be used to infringe the claims. Depending on the wishes of the Depositor, ATCC may be required to inform the Patent Depositor of the party to which the material was furnished. This material may not have been produced or characterized by ATCC. Preceptrol? no Type Strain 模式菌株 no Medium 培养基 ATCC? Medium 18: Trypticase Soy Agar/Broth Growth Conditions 生长条件 Temperature 培养温度 : 26°C Atmosphere 需氧情况 : Aerobic Name of Depositor 寄存人 BL Wong, Biopure Corp. U.S. Patent Number 5,589,354 Disclosure This material is cited in a US or other Patent and may not be used to infringe the claims. Depending on the wishes of the Depositor, ATCC may be required to inform the Patent Depositor of the party to which the material was furnished. This material may not have been produced or characterized by ATCC. Isolation 分离源 Gut of marine worm, Notomastus lobatus References 参考文献 Wong BL, et al. Halogenation of cephalexin with haloperoxidase from Rathayibacter biopuresis. US Patent 5,589,354 dated Dec 31 1996 三、特征特性黄色菌落，表面光滑半透明，边缘整齐，对光看有光泽。革兰氏阳性杆状菌。不能在厌氧条件下生长；媒介酶试验阳性，氧化酶试验阴性；淀粉水解试验阴性，V-P试验阴性，明胶液化试验阴性，硝酸盐还原试验阳性；糖醇类发酵试验：D-葡萄糖阴性、D-甘露醇阴性、甘露糖阳性、乳糖阴性、蔗糖阳性、阿拉伯糖阴性、山梨醇阴性、鼠李糖阴性；赖氨酸脱羧酶试验阴性，脲酶试验阴性。 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 七、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                SG231人胆管上皮癌细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133424 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：SG231 细胞名称：SG231人胆管上皮癌细胞产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 三、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 四、注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。3、静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。4、悬浮细胞：将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内，1000 转/分钟离心5min，培养基上清可备用，管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养；若密度未超过80%，细胞悬液移至原瓶继续培养，待达到80%时再正常传代。备注：聚团生长慢，有密度依赖，必须使用T25培养瓶竖立培养，3天一次半量换液一次，1-2周传代一次。贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。备注：细胞贴壁慢，传代后细胞放2天不动。5、细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。6、因为细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   植物类诺卡氏菌的培养与保藏方法及主要应用！ 植物类诺卡氏菌是Nocardioides属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-100621 规格：冻干物 拉丁属名：Nocardioides Plantarum 菌株名称：植物类诺卡氏菌收藏时间：2013/3/1原始编号：R8-5原产国：中国资源归类编码：15131514101模式菌株：非模式菌株主要用途：分类；研究；教学特征特性：该菌株为杆状，不形成芽孢，不能运动，以二分裂方式增殖。菌落形态为圆形，凸起，湿润，光滑，呈乳白色。最适生长温度25℃, 最适pH 为8.0。能微弱地水解淀粉，不能水解七叶灵。能利用龙胆二糖，葡萄糖酸酯等做为唯一碳源进行生长。寄主名称：无致病对象：无致病名称：无传播途径：无分离基物：土壤采集地：北极培养基编号：848培养温度：20℃注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征该菌株为杆状，不形成芽孢，不能运动，以二分裂方式增殖。菌落形态为圆形，凸起，湿润，光滑，呈乳白色。最适生长温度25℃, 最适pH 为8.0。能微弱地水解淀粉，不能水解七叶灵。能利用龙胆二糖，葡萄糖酸酯等做为唯一碳源进行生长。 三、主要应用本菌主要分布于土壤。现已报道100余种，能产生30多种抗生素。如可产生对结核分枝杆菌和麻风分枝菌有特效的利福霉素；对引起植物白叶枯病的细菌，以及原虫、病毒有作用的间型霉素；对革兰氏阳性细菌有作用的瑞斯托菌素等。另外，有此诺卡氏菌用于石油脱蜡、烃类发酵以及污水处理中分解腈类化合物。该菌种施入土壤中后可有效预防多种土传病害，有效抑制根线虫的卵块孵化，驱避成虫，且对根线虫病有很好的防效，是未来有机绿色种植的理想菌剂。 四、综合微生物的培养方法，包括以下步骤：（1）前期准备：（A）灭菌处理；（B）制备Biolite水；（C）检查设备和材料；（2）按比例配制培养材料；（3）导入曝气，进行繁殖培养；（4）取液观察；（a）取液；（b）稀释菌液；（c）平板培养；（5）分离并检测；（6）取液储存；通过该综合微生物培养方法简单可操作性强，培养的综合微生物均在3代以内，菌类稳定不发生突变，且繁殖快速。 五、仪器设备与器具1、恒温培养箱：36±1℃。2、1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。3、接种针。4、显微镜。5、超净工作台。6、玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。7、天平：感量0.01g。8、灭菌釜。9、培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。10、试管夹、酒精灯、秒表、载玻片。 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               ATCC BAA-1851纹带棒杆菌的特点与优势及培养！  一、菌种简介平台编号：Bio-08792 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Corynebacterium Striatum 菌株名称：纹带棒杆菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Corynebacterium striatum (Chester) Eberson 拉丁名(ATCC? BAA-1851?) 统一编号Strain Designations 别名 FS1Isolation 分离基物 HumanBiosafety Level 生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌种 noAntibiotic ResistanceMulti-drug resistantMedium 培养基 ATCC? Medium 260: Trypticase soy agar/broth with defibrinated sheep bloodGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37°CAtmosphere 需氧情况: aerobicName of Depositor 寄存者 S StefaniIsolation 分离基物 HumanReferences 参考文献 Campanile F, et al. Clonal Multidrug-Resistant Corynebacterium striatum Strains, Italy. Emerg. Infect. Dis. 15: 75-78, 2009. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                    人结直肠癌细胞DiFi的培养步骤与注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-129775 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：DiFi 细胞名称：人结直肠癌细胞DiFi产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研3类培养体系：DMEM高糖（HYCLONE SH30022.01）+10%FBS+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%细胞用途：仅供科研使用。               简介：人结直肠癌细胞DiFi取自白人女性，贴壁培养。用途：细胞系 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、DiFi人结直肠癌细胞特性1）来源：DiFi人结直肠癌细胞2）含量：>1x106 个/mL3）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5）培养基：DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS6）生长特性：贴壁生长 三、细胞的运输和保存使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。 四、DiFi人结直肠癌细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备基础培养基( GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠 0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）DiFi人结直肠癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 五、DiFi人结直肠癌细胞注意事项1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2.先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。3.静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。4. 悬浮细胞：将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内，1000 转/分钟离心5min，培养基上清可备用，管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养；若密度未超过80%，细胞悬液移至原瓶继续培养，待达到80%时再正常传代。备注：聚团生长慢，有密度依赖，必须使用T25培养瓶竖立培养，3天一次半量换液一次，1-2周传代一次。贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。备注：细胞贴壁慢，传代后细胞放2天不动。5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。6.因为DiFi人结直肠癌细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 六、复苏细胞收货注意事项收到细胞后，静置 3 小时，然后当天更换新鲜培养基！原瓶培养基不能继续使用！该细胞订单用户订购前，需核实确认。培养基货号 DMEM(HYCLONE SH30022.01 或 GIBCO C11965500BT）胎牛血清（GIBCO 10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产生售后问题，不予支持补发。培养基正常 pH 值为 7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需要尽快更换完全培养基。 七、冻存细胞收货注意事项收到细胞后，当天存入-80℃冰箱或者-196℃的液氮罐中保存！该细胞订单用户订购前，需核实确认（冻存细胞以收到细胞后起 14 天之内为售后保障期 ，不是保存多日开始复苏后的 14 天之内 ）培养基货号 DMEM(HYCLONE SH30022.01 或 GIBCO C11965500BT）胎牛血清（GIBCO 10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产生售后问题，不予支持补发。培养基正常 pH 值为 7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需要尽快更换完全培养基。 八、常见问题1、运输途中，细胞会因为晃动造成细胞脱落，此现象为正常现象，观察后，静置 3 小时。2、传代后细胞漂浮原因：传代前密度过大导致细胞挤出凋亡；消化过度；移液枪吹打力道过大。3、细胞复苏后贴壁性不好，尝试换液并血清提至 15%，待观察，若效果还不佳，需要联系销售及技术老师。4、本产品有添加支原体抗污染剂及三抗（青霉素，链霉素，两性霉素 B），若收到细胞后 2 天内，发现细胞污染，请立即联系对应销售进行补发；3-14 天之内的污染，需要联系对应销售沟通并且核实详情后，进行下一步售后处理。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   高地芽胞杆菌：主要用于白酒酿造和产溶菌酶 高地芽孢杆菌是Bacillus属的微生物，原产地为中国。杆状，多聚排列，G+，有芽孢，异养，好氧，不需光照。主要用途为分类；研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-090979 规格：冻干物 拉丁属名：Bacillus Altitudinis 中文名称：高地芽胞杆菌拉丁名称：Bacillus altitudinis来源历史：←北京工商大学收藏时间：2018/1/22原始编号：B9原产国：中国资源归类编码：15131311101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色；菌体杆状，单个、成对或V字排列，细胞大小0.7～0.8×2～3μm，无荚膜，周生鞭毛，能运动，革兰氏阳性。芽胞0.6～0.9×1.0～1.5μm，椭圆到柱状，中生或近端生，孢囊不膨大。具体用途：白酒酿造。产溶菌酶。生物危害程度：四类培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：37℃需氧类型：好氧分离基物：黄曲采集地：北京保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：白酒酿造。产溶菌酶。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                B27M1小鼠杂交瘤细胞复苏与传代及冻存操作说明！ 细胞简介平台编号：Bio-129609 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：B27M1 细胞名称：小鼠杂交瘤细胞B27M1产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研3类培养体系：DMEM高糖（HYCLONE SH30022.01)+10%FBS+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：小鼠杂交瘤细胞B27M1悬浮培养注释：Monoclonal antibody isotype:IgG2a.用途：细胞系 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀 。3、操作离心 ， 调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  细胞培养过程中血清使用方面的常见问题有哪些？ 百欧博伟生物：细胞培养是指在人工创造的与体内生长环境相似，如无菌条件、适宜的温度、pH、CO2环境和适宜营养条件下，使细胞生长、繁殖并维持主要结构和功能的技术。 细胞培养是细胞生物学研究方法中最常用也是最重要的技术之一，在现代医学、生物科学、农业科学等领域被广泛应用以提供研究模型和实验材料。在细胞培养过程中，完全培养基对细胞生长状态起到关键作用，决定实验成功与否。而血清是完全培养基中的关键成分之一，除为细胞生长提供基本营养物质、结合蛋白、一些参与解毒代谢的微量元素和可起到中和保护的酶类之外，还可以保护细胞免受机械损伤，因此被业内认为是细胞增殖过程中最重要的试剂。在生命科学领域的细胞培养技术中，动物血清的应用十分广泛，特别是牛来源血清。而牛源血清又分为胎牛血清、新生牛血清和小牛血清，它们的区别方式主要由于牛龄和采血方式不同，其中胎牛血清因其抗体水平含量低对后续实验结果影响小、生长因子含量水平高利于细胞增殖而应用最广。因此关注胎牛血清的品级、质量以及使用过程的一些注意事项，会对实验结果起到直接影响作用，并可以确保科研人员在实验操作过程中的安全性。 今天我们就来看看在细胞培养过程中血清使用方面常见的问题，如：血清储存条件、如何程序解冻、细胞污染与血清之间的关系、传说中的“黑胶虫”是什么以及血清热灭活是否有必要等等，“工欲善其事，必先利其器”，通过今天的解析与学习可以让我们在做细胞培养相关实验时事半功倍！那我们就开始吧！ Q1：血清长期储存的条件和方法是什么？ A1：血清如需长期保存，则必须储存于-10℃或更低温冰箱中，建议存放于-20℃的冰箱中。研究表明储存在-80℃条件下的血清在性能方面变化不大，但由于解冻时温差过大，会导致析出更多沉淀，使得背景杂乱，因此血清长期保存不建议处于-80℃条件下。如果近期会频繁使用血清，我们建议不要在4℃条件下存放超过1个月，若一次无法用完整瓶建议分装后保存，且要避免反复冻融。另外，血清冰冻后体积会增加约10%，因此血清分装时请留意预留一定的体积空间。 Q2：如何进行血清的程序性解冻？血清才不会使产品质量受损？ A2：程序性解冻血清可以确保血清制品质量的稳定性，且不会因为温差过大而析出过多蛋白等沉淀。程序性解冻方法是于实验开始之前将冷冻的血清置于4℃冰箱中融解，并且在解冻过程中每隔1小时摇匀一次，使温度与成分均一，减少沉淀析出，直至全部解冻，然后再移入室温条件下使用。 Q3：血清解冻后发现絮状沉淀该如何处理？ A3：造成血清发生絮状沉淀的原因主要是血清解冻过程中温差带来了脂蛋白变性和纤维蛋白析出，沉淀本身不会影响血清质量，也不会对实验结果造成影响。但如必须处理沉淀，则可通过离心方式去除，如500-1000×g离心5-10 min。 Q4：血清沉淀是什么？ A4：用于细胞培养的胎牛血清及其他血类制品中均存在各种类型的沉淀，如纤维蛋白和磷酸钙等。一些絮状沉淀主要就是纤维蛋白，通常我们肉眼可见，大小在1-2mm之间；而磷酸钙在显微镜下观察呈现布朗运动的小黑点，通常被误认为是微生物污染。血清沉淀往往比较难以预测和控制，但幸运的是这些沉淀不会影响血清品质。 Q5：血清中的小黑点是“黑胶虫”么？ A5：血清解冻过程温差过大、经反复冻融或通过热灭活处理后更容易产生沉淀，这些沉淀物在镜下观察时有一些会呈现以布朗运动的小黑点，业内流行一种“黑胶虫”污染的说法，但“黑胶虫”一直以来都是极为神秘的存在，至今科学家们也没有完整的实验结果可以证实它究竟是一种生物还是非生物，更有人认为“黑胶虫”是血清的原虫，或误以为是细菌或真菌污染。但科学家通过进一步的研究发现它们更可能是血清中的蛋白结晶。这种结晶可能为蛋白析出，如纤维蛋白原凝结成纤维蛋白；或是盐析出，如磷酸钙等；也有一些是胆固醇和脂肪酸。以下图片就证实了这一说法，如纤维蛋白和磷酸钙。 Q6：如何判断血清污染？ A6： （1）首先检查并判断外包装是否有破损，一般瓶身破损的血清发生污染的可能性极大； （2）将血清接种到血酯板上，培养后看是否有菌落形成； （3）可通过质量检测试剂盒检测结果判定，如支原体检测试剂盒等。血清污染主要包括细菌污染、真菌污染和支原体污染。在细胞培养时想要确定血清存在细菌污染，可尝试使用5-10倍浓度青链霉素双抗冲击培养24-48h；真菌污染的细胞无法抢救，应立即将细胞瓶进行高压灭菌处理，并彻底消毒培养箱；支原体污染可考虑更换早期代次细胞，或使用商品化支原体去除试剂。 Q7：细胞形态不正常、生长状态异常或增殖速率缓慢是否与血清有关？ A7：细胞形态异常需要综合关注细胞代次、传代操作、培养基和血清等诸多因素。如传代次数过多或传代时间过晚都有可能影响细胞的生长状态。有些细胞对血清具有一定适应性，更换新批次血清时可能出现所含因子水平的差异而导致的细胞生长状态受到影响的现象，可以通过血清梯度替换或者增加细胞适应时间来解决此类问题。与此同时也要关注基础培养基和传代操作等方面是否存在一定问题。 Q8：如何做血清的梯度替换？ A8：当细胞培养实验需更换血清品牌时，做程序性梯度替换方案尤为重要，因为不同品牌的血清所含成分有所差异，血清更换会使细胞发生不适，从而出现细胞增殖缓慢或细胞状态不佳等情况。建议的梯度替换方法为：完全培养基配置过程中先用25%新血清与75%原血清进行混合，培养传代1-2次；而后用50%新血清与50%原血清混合培养传代；再用75%新血清与25%原血清混合培养传代；最后完全使用新血清培养传代。 Q9：培养基中添加血清和抗生素后可长期保存吗? A9：新鲜培养基中添加血清和抗生素后，建议在2周内使用完。 Q10：血清的热灭活是必须的吗? A10：实验表明，经热灭活处理的血清对细胞生长可能仅有微小促进或完全没有任何作用，甚至通常因高温处理而损失掉血清中部分营养成分从而影响血清质量，造成细胞生长速率降低。热灭活过程中因局部温度过高、摇晃不均匀或灭活时间过长，都会造成血清品质下降，且经热灭活后的血清会增加发生蛋白沉淀概率。因此，若非必须血清不需要做热灭活，而少数对补体敏感的细胞实验，如某些免疫学实验或腺病毒包装等，可酌情对血清进行热灭活操作。 Q11：血清热灭活应如何操作？ A11： 1、热灭活前，必须先将解冻后的血清摇匀，并恢复至室温； 2、取部分摇匀血清置于50ml离心管中，并准备同规格对照管一个； 3、对照管内加入血清等体积水； 4、对照管内插入温度计进行温度预试，当温度达到 56℃时将恢复至室温的血清放入水浴锅30min； 5、灭活过程中需要每隔5min轻轻晃动摇匀，以保证温度均一。 Q12：血清为什么存在批间差？ A12：血清批间差是客观存在的，因为血清制品来源于天然活体，供体牛只的生理状况、健康状况均不同，且受饲养环境的地形、风貌、饮食、水源等影响，体内各类蛋白、生长因子和酶类的含量均有巨大差异，所以血清具有含量复杂且不固定的特性，批间差异在所难免，因此批间差异小的血清不仅可以保证血清质量，确保细胞培养效果，还能减少由于批间差异带来的使用前测试，且避免实验结果的不可重复性。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    驽巴贝斯虫PCR试剂盒的背景与应用及培养操作！ 一、背景 驽巴贝斯虫PCR试剂盒一种用于检测驽巴贝斯虫的生物试剂盒，采用PCR技术进行检测。该试剂盒可以在动植物体外对特定基因（DNA）片段进行快速酶促扩增，经过多个循环扩增，检测扩增产物中的特定基因，从而实现对驽巴贝斯虫的检测。 驽巴贝斯虫是一种寄生虫，可以感染人类和动物，引起疟疾、腹泻等症状。 驽巴贝斯虫PCR试剂盒包含PCR反应体系、引物、荧光探针等成分，可以扩增出驽巴贝斯虫的DNA片段，并通过荧光信号检测来确定是否存在驽巴贝斯虫感染。 使用驽巴贝斯虫PCR试剂盒时，需要从患者或动物样本中提取DNA，并将其加入到PCR反应体系中进行扩增。如果样本中存在驽巴贝斯虫的DNA，则PCR反应会产生荧光信号，从而可以确定是否存在感染。 二、使用驽巴贝斯虫PCR试剂盒的步骤如下 1、样本处理：将待检样本的核酸提取，可以使用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等。 2、准备试剂：按照试剂盒说明书中的指示，准备所需的试剂和材料，例如PCR反应液、引物、DNA模板等。 3、配置反应体系：根据试剂盒说明书中的指示，配置PCR反应体系，包括PCR反应液、引物、DNA模板等。 4、设定PCR程序：根据试剂盒说明书中的指示，设定PCR程序，包括变性、退火、延伸等温度和时间。 5、运行PCR程序：将配置好的PCR反应体系放入PCR仪中，运行设定的PCR程序。 6、结果分析：在PCR程序运行结束后，对扩增产物进行电泳或其他方法检测，以判断是否扩增出特定基因片段，从而实现对驽巴贝斯虫的检测。 三、应用 驽巴贝斯虫PCR试剂盒可以用于马驽巴贝斯虫二温式、荧光PCR检测方法的建立及其初步应用： 马驽巴贝斯虫病病原为驽巴贝斯虫,该病是一种经由媒介蜱虫传播的严重影响马属动物健康的血液原虫病,被世界卫生组织(OIE)列为法定报告检疫疫病,在我国该列为二类动物疫病。该病呈全球性发生,患马呈现发热、贫血、黄疸、血红蛋白尿,急性死亡,亚急性、慢性终身成为带虫宿主,造成本土马与引进马互相感染、反复发病,给马养殖业造成重大损失。目前尚无该病的有效治疗药物及疫苗,故研发新型检测技术是有效的防控途径,可及时检测、监控和综合防治,有利于马产业的健康发展。 使用驽巴贝斯虫PCR试剂盒并根据GenBank中的驽巴贝斯虫(Babesia caballi)Bc48基因序列设计了一对特异性引物,建立检测驽巴贝斯虫的二温式PCR方法。该方法能够特异地扩增155 bp的片段,与双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、马泰勒虫、瑟氏泰勒虫均无交叉反应,能检测到的最低DNA拷贝数为5.17×102 copies/μL。应用所建立的方法检测了采集于和静县焉耆马匹样品(N=82),结果显示,马驽巴贝斯虫感染率69.51%(57/82),与血液涂片检查结果37.8%(31/82)相比,其检出率更高。该驽巴贝斯虫PCR试剂盒二温式PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于马驽巴贝斯虫的早期诊断。 (Ⅱ)根据Bc48保守部分基因序列设计合成特异性引物和MGB荧光探针,建立了驽巴贝斯虫病的MGB FQ-PCR检测方法。对所建立的FQ-PCR检测方法进行特异性、灵敏性和重复性试验,并分别用FQ-PCR检测方法和普通PCR方法对临床样品进行检测对比。结果显示,该方法灵敏度高,最小检出量为5.17×101copies/μL的标准质粒,比常规PCR灵敏100倍;建立的FQ-PCR检测方法标准曲线的循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.9996,重复性好,组内与组间重复性试验的变异系数分别为0.7%和0.42%,均小于1%;该方法能特异性检测驽巴贝斯虫,而对马泰勒虫、双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫等病原检测结果均为阴性。用建立的MGB-FQ PCR和使用驽巴贝斯虫PCR试剂盒的常规PCR分别对90份临床样品进行检测,MGB-FQ PCR和常规PCR检出率分别为53%和30%。本次建立的驽巴贝斯虫病MGB-FQ PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于马驽巴贝斯虫病临床样品诊断、流行病学调查,将为蜱传马梨形虫病的检测提供新的方法。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  解淀粉芽孢杆菌在畜牧业中的应用与发展！ 解淀粉芽孢杆菌，属于芽孢杆菌属，革兰氏阳性菌，呈短杆状。由于它可以产生液化淀粉酶分解淀粉而被命名为解淀粉芽孢杆菌。这种菌株具有菌含量高、活性高、稳定性强等特点，施用后能显著提高作物的抗病能力并促进增产。其作为一种有益的微生物，不仅在农业中发挥着重要作用，也在畜牧业中展现出了潜力；不仅可以改善畜禽的健康状况，还有助于提高畜产品的质量。 1、促进畜禽健康 解淀粉芽孢杆菌可以促进畜禽健康。该菌株具有抑制一些致病菌生长的能力，通过在畜禽的肠道内形成有益菌群，有助于维持肠道微生态平衡，提高畜禽的消化吸收能力，并减少对抗生素的依赖。这有助于降低畜禽的发病率，提高生长发育水平，从而改善畜禽的健康状况。 2、预防和控制肠道疾病 解淀粉芽孢杆菌可以与畜禽肠道中的有害菌竞争营养物质和生存空间，减少有害菌的滋生和繁殖，从而降低畜禽患病的风险。特别是对于一些易感染肠道疾病的畜禽，解淀粉芽孢杆菌的应用可作为一种预防措施，提高畜禽的免疫力和抵抗力。 3、改善饲料利用率 解淀粉芽孢杆菌可以分解饲料中的纤维素、淀粉等复杂多糖物质，释放出有益的营养物质，提高饲料的利用率。这不仅减少了饲料资源的浪费，也降低了畜禽饲养成本，同时提高了畜禽的生长速度和肉质品质。 4、改善消化功能 解淀粉芽孢杆菌可以产生一些有益物质，如消化酶和维生素等，有助于促进畜禽的消化吸收功能。它能够提高肠道黏膜的健康状况，增强肠道屏障功能，减少营养物质的流失，提高饲料利用效果。 5、提高畜产品的质量与安全 解淀粉芽孢杆菌可以提高畜产品的质量与安全性。通过促进畜禽的健康生长，改善饲料的消化利用，该菌株有助于提高畜产品的营养成分含量，改善畜产品的口感和品质。同时，其在抑制有害菌繁殖方面的作用，也有助于降低畜产品中有害物质的含量，提高畜产品的安全性。 6、减少畜禽养殖过程中的环境污染 解淀粉芽孢杆菌有助于减少畜禽养殖过程中的环境污染。通过改善畜禽的消化系统，减少粪便中的氨气和硫化氢的排放，降低畜禽养殖对环境的负面影响，有助于推动畜牧业向着更加环保和可持续的方向发展。 解淀粉芽孢杆菌在畜牧业中的应用具有多个方面的益处，包括预防疾病、改善饲料利用、促进消化功能、减少抗生素使用和提升动物福利等。随着相关研究和实践的进一步深入，解淀粉芽孢杆菌将在畜牧业中发挥更大的作用，推动畜牧业实现可持续的发展。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                胞外多聚物鞘氨醇单胞菌的培养方法与实验内容！ 胞外多聚物鞘氨醇单胞菌是Sphingomonas属的微生物，原产地为中国。革兰氏阴性、无芽孢的直杆状。单极毛运动。接触酶阳性、菌落为黄色，但不是黄单胞菌素。专性需氧。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。  一、菌种简介平台编号：Bio-53126 规格：冻干物拉丁属名：Sphingomonas Sanxanigenens 菌株名称：胞外多聚物鞘氨醇单胞菌其他编号：DSM19645=AS1.6417 =CIP110406培养基编号：109培养温度：28培养时间：24-48 小时用途：模式菌株 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA） 三、保藏条件安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  WML2小鼠肺成纤维细胞系的应用及培养操作！ 一、背景 WML2小鼠肺成纤维细胞系是一种常用的实验细胞系，用于研究肺成纤维细胞的生理和病理过程。这种细胞系具有一些独特的特征，使其在科学研究中有广泛的应用。 首先，WML2小鼠肺成纤维细胞系具有高度的相似性，可以模拟肺成纤维细胞在体内的行为和功能。这种相似性使得研究人员可以通过使用这种细胞系来研究肺纤维化等疾病的发生和发展过程。 其次，WML2小鼠肺成纤维细胞系易于培养和操作。这种细胞系可以在实验室条件下进行培养和繁殖，使得研究人员可以方便地获得足够的细胞用于实验。此外，这种细胞系还易于进行基因修饰和药物筛选等实验操作。 此外，WML2小鼠肺成纤维细胞系还可以用于药物筛选和毒理学研究。研究人员可以使用这种细胞系来评估新药对肺成纤维细胞的作用，以及研究化学物质对肺部的毒性影响。这种细胞系的应用有助于加速药物研发和毒理学研究的进程。 二、WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞培养操作 1)复苏WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 WML2小鼠肺成纤维细胞系可以用于水飞蓟宾与姜黄素共载口服纳米粒的构建及体内外性质评价： 以生物表面活性剂槐糖脂(Sophorolipid,SLs)为仿生材料,结合聚合物和磷脂材料,设计口服纳米递药系统,存在克服肠道粘液层屏障,促进细胞摄取,从而提高SLB和CUR的口服生物利用度,增强抑制乳腺癌转移的效果。 方法：首先制备SLB和CUR共载纳米粒(SC-SLPNs),并进行单因素考察,确定较佳处方组成。通过荧光共振能量转移分析、透射电镜观察、X射线衍射分析和差式扫描量热分析,分别对纳米粒形成、形态以及在载体中的存在形式进行表征。考察SLPNs在模拟胃液和模拟肠液中的稳定性,利用透析袋法考察体外释药行为。采用多粒子追踪分析技术评价SLPNs在猪粘液中的扩散能力。通过激光共聚焦显微镜观察SLPNs在小鼠肠道粘液层中的分布情况。以体外Caco-2/HT29-MTX-E12共培养细胞模型考察SLPNs的细胞摄取。通过大鼠口服灌胃给药研究体内药代动力学。通过派伊尔结切片定性分析考察纳米粒的吸收情况。以高转移乳腺癌细胞4T1细胞为模型,考察SC-SLPNs对4T1细胞增殖的抑制作用。以4T1和WML2小鼠肺成纤维细胞系为细胞模型,考察SC-SLPNs抑制乳腺癌细胞迁移的作用。 结果：制备的SLPNs的平均粒径为111.67±3.68 nm,Zeta电位为-12.33±0.42 m V,SLB包封率为96.72±3.58%,载药量为7.16±0.22%;CUR包封率为96.33±5.71%,载药量为3.30±0.36%。SLPNs形态近球形,大小分布较均匀;XRD和DCS结果揭示SLPNs中SLB和CUR以无定形或分子状态存在;SLPNs在模拟胃液和模拟肠液中,24 h内的稳定性较好;对于SC-LPNs体外释放,SLB和CUR 8 h累积释放分别为93.09%和42.15%。多粒子追踪分析结果表明SLs促进纳米粒在粘液层中的穿越。4T1和WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞摄取结果表明SLs可促进Caco-2/HT29-MTX-E12对纳米粒的摄取,且细胞表面粘液层对SLPNs摄取阻碍作用较小;入胞动力学结果与细胞摄取一致。细胞水平药效结果表明SLs增强纳米粒对于4T1细胞的毒性作用和抑制4T1细胞迁移作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  节菱孢霉属通用PCR试剂盒的知识与特点及应用！ 一、背景 节菱孢霉属通用PCR试剂盒是一种用于检测节菱孢霉属的生物试剂，采用荧光定量PCR技术，可以快速、准确地检测节菱孢霉属。 节菱孢霉属通用PCR试剂盒适用于各种RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增，采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。 节菱孢霉属通用PCR试剂盒中配制的酶均为进口的酶，RT酶采用进口的M-MLV，因此cDNA更加稳定。同时，该试剂盒具有高灵敏度，可以检测到低拷贝数的目标基因。 二、节菱孢霉属通用PCR试剂盒的其他特点包括 灵敏度高：该试剂盒能够检测低拷贝数或多样性模板，这意味着即使目标基因的表达水平很低，也可以通过该试剂盒进行准确的检测。 特异性好：该试剂盒的引物是根据EB病毒专一区设计的，特异性高，可以确保只针对目标基因进行扩增，减少非特异性扩增的干扰。 闭管操作：该试剂盒采用一管式闭管操作，降低了交叉污染的风险，提高了实验的准确性。 重复性好：该试剂盒的扩增曲线重合度高，受干扰影响少，这意味着在不同的实验中，可以得到一致的、可重复的结果。 扩增效率高：该试剂盒的扩增曲线Ct值低，起峰快，效率高，这意味着可以在短时间内得到大量的目标基因扩增产物。 三、应用 节菱孢霉属通用PCR试剂盒可以用于小蓬竹（Drepanostachyum luodianense）内生真菌与根际真菌多样性的研究： 对小蓬竹不同组织中的内生真菌使用节菱孢霉属通用PCR试剂盒分离与鉴定。本实验用组织块分离法共计从180个供试组织块中共分离得到81株内生真菌,用组织液研磨提取法共计从120个培养基平板中分离得到22株内生真菌。统计发现,小蓬竹内生真菌总内生真菌的定殖率为47.2%,根、茎和叶定殖率分别为73.3%、35.0%和33.3%;总的分离率为45%,根、茎和叶分离率分别为91.7%、20.0%和23.3%,均为根最高,茎叶次之,呈现随着植物组织的成熟程度而增加的趋势。对分离到的103株通过经典形态学和分子生物学方法对其进行鉴定,分属于1个亚门、5个纲、10个目、17个科、19个属、31个种(含2个可能的新种),在属的分类水平上,以节菱孢霉属(Arthrinium)、镰刀菌属(Fusarium)、木霉属(Trichoderma)、炭角菌属(Xylaria)为优势菌属,分别占菌株总数的12.62%、9.71%、6.80%。结果表明了小蓬竹内生真菌的丰富多样性。 通过使用节菱孢霉属通用PCR试剂盒将小蓬竹内生真菌多样性及组织分布特性。在小蓬竹内生真菌的数量和种类及分布上,不同组织中存在明显差异并表现出一定的组织特异性:根中内真菌的分离频率最高,达到61.17%,其中镰刀菌属与漆斑菌属的分离频率最高;茎中以拟茎点霉属、弯孢聚壳属等为优势菌属;叶片中节菱孢霉属为优势菌属。在多样性指数方面:小蓬竹内生真菌Shannon-Wiene和Simpson指数依次为2.800、0.932,不同组织在变化趋势上一致,均为根最高,茎其次,叶片最低;小蓬竹内生真菌均匀度指数E为0.604,茎为最高,根其次,叶片最低。此外,不同组织中内生真菌菌群的相似性比较发现根茎的相似性最低,茎叶的相似性最高。 通过使用节菱孢霉属通用PCR试剂盒将小蓬竹根部内生真菌与根际土壤真菌的比较,发现其共同存在的真菌类群为暗双孢属(Cordana)、节菱孢霉属(Arthrinium)、脉孢菌属(Neurospora)、木霉属(Trichoderma)、漆斑菌属(Myrothecium),表明两个类群之间存在密切的联系,可能存在互相交流和传播。另外研究发现,在根组织分离得到内生真菌中优势菌群为镰刀菌属与漆斑菌属,以寄生性较强菌群为主;而根际土壤真菌的优势菌群为青霉菌属、木霉属、曲霉属一类腐生性较强的菌群为主,说明两个类群之间亦存在明显差异,表明内生真菌可能具有其他来源。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                INS-1大鼠胰岛细胞瘤细胞的培养步骤与处理方法！ 一、产品信息平台编号：Bio-73309 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：INS-1 细胞名称：大鼠胰岛细胞瘤细胞用途：(种属鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍 该细胞源自X射线照射的移植胰岛瘤的大鼠，胰岛素阳性，可合成胰岛素原I和II，可用于beta细胞功能研究。  三、细胞特性 1）来源：大鼠 胰岛细胞瘤 2）形态：不规则，多角样 贴壁生长 3）含量：>1x106 细胞数 4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 5）用途：仅供科研使用。  四、细胞的运输和保存 干冰运输及复苏好存活细胞 （1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 （2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。  五、细胞接收后的处理1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。 3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。 4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。  六、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；0.05 mM β－巯基乙醇；丙酮酸钠 1%；双抗，1%。 2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。  3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。  下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml. 2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 注意事项 1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。 3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。 4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   利用纤维素水解液生产柠檬酸的：绿色木霉 绿色木霉是木霉菌的一种，在自然界分布广泛，常腐生于木材、种子及植物残体上。绿色木霉能产生多种具有生物活性的酶系，所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，绿色木霉又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有重要的作用。 一、菌种简介平台编号：Bio-57441 提供形式：冻干物拉丁属名：Trichoderma Viride 中文名称：绿色木霉属名：Trichoderma种名加词：viride其它中心编号：=ATCC 13234来源历史：←美国ATCC收藏时间：1979.00.00资源归类编码：15151913121模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：利用纤维素水解液生产柠檬酸。特征特性：产纤维素酶能力较强。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：20%马铃薯汁 500.0ml，20%胡萝卜汁 500.0ml，琼脂20.0g。[注] 20%马铃薯汁（20%胡萝卜汁）的制备：取去皮马铃薯（胡萝卜）200g，切成小块，加水1000mL，煮沸30min，滤去土豆（胡萝卜）块，滤液补足1000mL。培养温度：26℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：13038用途：研究；生产；利用纤维素水解液生产柠檬酸。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、绿色木霉菌的拮抗对象继Weinding(1932年)报道绿色木霉菌的拮抗特性后,许多研究者观察到藻类、半知菌、子囊菌和担子菌中有木霉的寄生物。绿色木霉菌能寄生的植物病原菌即拮抗对象包括丝核菌属、小核菌属、核盘菌属、长蠕孢属、镰刀菌属、毛盘孢属、轮枝孢属、黑星菌属、内座壳属、腐霉属、疫霉属、间座壳属和黑星孢属。2、绿色木霉菌拮抗机制主要为对生存空间和营养的竞争。绿色木霉菌生命力强、生长快,能迅速地空间,吸收营养。3、绿色木霉菌重寄生作用重寄生现象是指对病原菌的识别、接触、缠绕、穿透和寄生一系列连续步骤的复杂过程。在绿色木霉菌与病原菌互作的过程中,寄主菌丝分泌一些物质使绿色木霉菌趋向寄主真菌生长,一旦寄主被绿色木霉菌寄生物所识别,就会建立寄生关系。绿色木霉菌对寄主真菌识别后,绿色木霉菌丝沿寄主菌丝平行生长和螺旋状缠绕生长,并产生附着胞状分枝吸附于寄主菌丝上,通过分泌胞外酶溶解细胞壁,穿透寄主菌丝,吸取营养。4、抗生作用绿色木霉菌在代谢过程中可以产生拮抗性化学物质来毒害植物病原真菌,这些物质包括抗生素和一些酶类。5、诱导植物抗性作用关于绿色木霉菌生防机制的早期研究主要集中在微生物间的相互作用,忽视了寄主植物的参与。Dean等发现绿色木霉在以D-木糖、木聚糖或者天然植物细胞壁制备物为原始碳源的培养基中能够产生木聚糖酶;植物在木聚糖酶作用下,具有明显的防御反应, K+、H+、Ca2 +离子通道打开,合成乙烯以及积累PR蛋白等。6、水解酶启动植物的防御反应绿色木霉菌产生几丁质酶和β-1 ,3-葡聚糖酶被认为在抗植物病原真菌中发挥重要作用。Mauch等认为寄主感染时,这两类酶活性一起增高。β-1 ,3-葡聚糖酶使真菌细胞壁释放出β-1 ,3-葡聚糖来源的诱导物(elicitor) ,启动植物的防御反应,导致植物产生和积累与抗病性有关的酚类化合物和木质素等。绿色木霉菌产生的蛋白酶也起重要作用。Elad等认为蛋白酶能使消解植物细胞壁的病原菌降解,直接抑制病原菌萌发,使病原菌的酶钝化,阻止病原菌侵入植物细胞。　7、保护酶增强植物抗病性过氧化物酶(peroxidase , POD)、超氧化物歧化酶( surperoxide dismutase , SOD)与过氧化氢酶(catalase , CAT)等都是膜脂过氧化过程中的重要保护酶。它使O2、H2O2等转变为活性较低的物质,降低或消除它们对膜脂的攻击能力,使膜脂不被氧化而得到保护。8、毒性蛋白作用Lin等从一个绿色木霉菌株中分离到一种蛋白质tricholin ,是核糖体钝化蛋白,能抑制Rhizoctonia solani生长与繁殖。研究表明, tricholin可导致R1solani的氨基酸吸收与蛋白质合成障碍,减少多聚核糖体的形成,从而减弱菌丝的生长。9、协同拮抗作用绿色木霉菌的拮抗作用可能是两种或三种机制同时或顺序作用的综合。Baker研究表明,用绿色木霉菌处理菜豆种子后,绿色木霉菌菌对腐霉Pythium的作用包括产生抗生素及重寄生作用两种机制。木霉菌在产生抗菌素的同时,也产生各种降解细胞壁的胞外酶以抑制土传植物病原菌的菌丝生长和孢子萌发。 三、作用绿色木霉菌的拮抗作用可能是两种或三种机制同时或顺序作用的综合。Baker研究表明,用绿色木霉菌处理菜豆种子后,绿色木霉菌菌对腐霉Pythium的作用包括产生抗生素及重寄生作用两种机制。木霉菌在产生抗菌素的同时,也产生各种降解细胞壁的胞外酶以抑制土传植物病原菌的菌丝生长和孢子萌发。 四、防治对象立枯病、腐霉病、猝倒病、枯萎病等土传病害。 五、使用方法1、处理土壤 将绿色木霉菌粉剂和育苗基质以1：500的比例充份混合后直接播种或扦插。若直接处理苗床，可按1：10的比例与育苗基质混匀后，撒入苗床，每公斤处理苗床10—15平方。2、拌种或浸种 将绿色木霉菌剂稀释100倍，浸种2小时后播种，或者拌种后直播。3、根部处理 移栽前，以木霉菌剂500倍液浸根30分钟，然后定值；移栽后，可用500倍液灌根。4、喷雾 以绿色木霉菌剂600～800倍液进行喷雾，发病前或初期使用效果更佳。5、制作生物肥 将1公斤绿色木霉菌加入1000公斤有机肥中，作为生物肥料使用。 六、注意事项1、不要与杀菌剂混合使用。2、避免太阳光直射。3、置于阴凉干燥处保存。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌检验方法！ 荧光假单胞菌 1、细菌特性 革兰阴性杆菌，呈单个或成对排列，一端丛毛菌，运动活泼，偶见无鞭毛无动力的菌株。专性需氧，营养要求不高，在普通培养基上可生长，在麦康凯和SS平板上亦可生长，最适生长温度为25℃~30℃，大多数菌株在4℃生长，37℃或42℃不生长。约94%的菌株产生水溶性荧光素（青脓素），在紫外线（360nm）照射下呈黄绿色荧光，有些菌株产生蓝色色素，不扩散。氧化酶阳性，氧化葡萄糖、木糖产酸，对麦芽糖多不分解，水解精氨酸，多能液化明胶，卵磷酯酶阳性。本菌对卡那霉素敏感。 2、临床意义 荧光假单胞菌（P.fluorescens）存在于土壤和水等环境中，常与食物（鸡蛋、血、牛乳等）腐败有关，可作为咽部的正常菌群存在，是人类少见的条件致病菌，偶从泌尿道感染病人尿中分离出。由于具有嗜冷性，可在冰箱储存血液中繁殖，若输入含有此菌的血库血液，可导致病人不可逆性的休克而死亡。 3、微生物学检验 尿、分泌物等临床标本可直接接种在血平板上，血液标本可先于20℃~30℃进行增菌后再接种血平板分离。不能在35℃或37℃进行培养，以免发生假阴性。本菌鞭毛3根以上，42℃不能生长，不产生绿脓素，可以与铜绿假单胞菌相区别。本菌的最低鉴定特征有：单端鞭毛3根以上，动力阳性；氧化分解葡萄糖，不分解麦芽糖，氧化酶阳性，精氨酸水解阳性，明胶液化阳性；可产生荧光素，不产生绿脓素，4℃生长，42℃不生长。 恶臭假单胞菌 1、细菌特性 革兰阴性杆菌，有些菌株为卵圆形，单端丛毛菌，运动活泼。专性需氧，最适生长温度25℃~30℃，42℃不生长，4℃生长不定，菌落与铜绿假单胞菌相似，但只产生荧光素（青脓素），不产生绿脓素，借此可与铜绿假单胞菌相区别，其陈旧培养物有腥臭味。 2、临床意义 恶臭假单胞菌（P.putica）为鱼的一种致病菌，常从腐败的鱼中检出，可作为人类咽部的正常菌群，是人类少见的条件致病菌，偶从人类尿道感染、皮肤感染和骨髓炎标本中分离出，分泌物有腥臭味。 3、微生物学检验 鉴定中注意与其他假单胞菌相区别，只产生荧光素不产生绿脓素，42℃不生长可与铜绿假单胞菌区别；不液化明胶、不产生卵磷酯酶、陈旧培养物上有腥臭味，有别于荧光假单胞菌。 斯氏假单胞菌 1、细菌特性 革兰阴性杆菌，一端单鞭毛，运动活泼；最适生长温度35℃，4℃不生长，大部分菌株在42℃生长，氧化葡萄糖产酸，在6.5%高盐培养基中可生长；营养要求不高，普通平板可生长，新分离菌株在培养基上可形成特征性干燥、皱缩样菌落，黏附于琼脂表面难以移动，可产生黄色色素，无荧光。 2、临床意义 斯氏假单胞菌(P.stutizeri)存在于土壤和水中，在医院设备及各种临床标本中亦有发现，本菌引起的感染并不多见，偶可引起抵抗力低下患者伤口、泌尿道、肺部感染等。 3、微生物学检验 注意与曼多辛假单胞菌相鉴别，其特征性菌落、精氨酸双水解试验阳性、不分解麦芽糖和甘露醇，有别于曼多辛假单胞菌。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 N9小鼠小胶质细胞的培养操作步骤及注意事项！ 小鼠小胶质细胞由小鼠小神经胶质细胞经逆转录病毒介导转染v-raf/v-myc获永生化。该细胞系保留有小神经胶质细胞多种形态、表征和功能特征。免疫组化结果显示细胞为MAC1,MAC2阳性，而MAC3，胶质细胞原纤维酸性蛋白，半乳糖脑苷脂为阴性。 一、细胞简介平台编号：Bio-120286 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：N9 细胞名称：小鼠小胶质细胞N9  产品规格：T25培养瓶x1 1.5ml冻存管x2 细胞数量：1x10^6 1x10^6 保存温度：37℃ -198℃ 运输方式：常温保温运输 干冰运输 安全等级：1 用途限制：仅供科研           培养体系：1640培养基+10%FBS+1%三抗  培养温度：37℃ 二氧化碳浓度 5% 简介：小鼠小胶质细胞N9取自CD-1小鼠，贴壁培养 用途：种属鉴定正确注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常脑组织。2)细胞鉴定：CD68免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：圆形细胞，不规则细胞，贴壁培养。 三、N9小鼠小胶质细胞收到后处理细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 四、N9小鼠小胶质细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。 五、注意事项1、细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；2、细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；3、常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片）；4、干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染；5、细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力；6、细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                生物反应器中微生物培养条件的重要性与调控方法！ 百欧博伟生物：生物反应器是一种用于培养和维持微生物生长和代谢活动的设备。在生物反应器中，合适的微生物培养条件对于保障高产、高效以及优质产品的产出至关重要。    本文将介绍微生物培养条件在生物反应器中的重要性，并探讨常用的调控方法，旨在提供有关如何优化微生物培养条件以达到更好发酵效果与产品质量的指导。 一、温度调控　　 温度是影响微生物活性和代谢速率直接的因素之一。不同菌株对温度有不同需求，因此，在选择合适菌株时需要考虑其适宜工作温度范围。同时，在操作过程中也需要精确地控制反应器内部温度，以确保发酵效果。　　 二、pH值调节　　 pH值是另一个关键参数，可以直接影响酶活性、底物溶解和代谢产物稳定性等方面。不同微生物对pH值有不同耐受能力，在进行大规模发酵时必须调节反应器内的pH值，并根据微生物特性合理选择调节方法，如使用缓冲剂、酸碱自动控制系统等。 三、氧气供给与搅拌 氧气是微生物呼吸和能量代谢的重要底物，因此，在发酵过程中确保适当的氧气供给至关重要。通过调节进气速度、改变曝气方式或增加搅拌强度等手段可以实现对溶解氧浓度的精确控制，以满足不同微生物对溶解氧需求的差异。 四、营养物质提供 在培养基中添加合适比例和浓度的营养物质是维持微生物正常生长所必需的。不同菌株具有不同对营养物质需求，因此需要根据具体情况进行合理配方。同时，也要注意在发酵过程中及时补充消耗完毕或被转化为代谢产物的营养成分。　 五、防止污染　 微生物培养条件中最大威胁之一就是外源性污染。因此，在操作过程中严格遵守无菌技术原则，并采取适当的措施，如使用高效过滤器、消毒设备等来防止微生物污染。　　 优化微生物培养条件对于提高发酵效率和产品质量至关重要。通过精确调控温度、pH值和氧气供给，以及合理提供营养物质并防止污染，可以促进微生物的正常生长与代谢活动。 因此，在设计和操作生物反应器时，必须充分考虑这些因素，并根据具体情况进行相应的调节与改进。只有在给定合适培养条件下，才能实现高产、高效且品质稳定的发酵过程。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   小鼠小胶质瘤细胞的培养操作步骤及应用研究！ 一、背景 小鼠小胶质瘤细胞是由E·Blasi建立于1990年；此细胞源自C57BL/6小鼠小胶质细胞。由小鼠小神经胶质细胞经逆转录病毒介导转染v-raf/v-myc获永生化。BV-2细胞保留有小神经胶质细胞多种形态、表征和功能特征；免疫组化结果显示，BV-2细胞为MAC1、MAC2阳性；而MAC3、胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。膜表面表达envgp70抗原；在形态学、表型及功能上有吞噬细胞的特征。 二、小鼠胶质细胞瘤培养步骤 1、小鼠胶质细胞瘤培养基及培养冻存条件准备： 1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；2mM L-谷氨酰胺;10mM HEPES;双抗，1%。 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 三、应用 小鼠小胶质瘤细胞可以用于杨梅黄酮对小鼠及人脑胶质瘤细胞体外抑制作用的研究： 应用小鼠脑胶质瘤GL261细胞及人神经胶质瘤U251细胞通过体外实验探究杨梅黄酮对胶质瘤细胞的抑制作用。主要从以下三个方面进行研究,分别是杨梅黄酮对GL261细胞与U251细胞增殖及凋亡的影响;杨梅黄酮对胶质瘤细胞迁移及侵袭能力的影响;杨梅黄酮对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外成管能力的影响。为进一步研究杨梅黄酮对胶质瘤的治疗作用及机制奠定实验基础。 （一）杨梅黄酮对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响 1、杨梅黄酮对胶质瘤细胞活性的影响通过CCK-8实验检测杨梅黄酮对GL261细胞与U251细胞活性的影响。结果显示,对于GL261细胞,杨梅黄酮在浓度为20μM时即可对其活性产生抑制作用,与对照组相比有统计学差异(p 2、杨梅黄酮对胶质瘤细胞增殖的影响通过流式细胞术检测杨梅黄酮对两种细胞周期的影响。结果显示,杨梅黄酮可增加两种细胞G1期的比例,将细胞周期阻滞于G1期,从而抑制细胞的增殖。进一步通过Western-blot实验检测细胞周期蛋白,结果显示杨梅黄酮可抑制U251细胞周期蛋白Cycline D1的表达。 3、杨梅黄酮对胶质瘤细胞的凋亡诱导作用通过Hoechst 33342染色观察杨梅黄酮对GL261细胞与U251细胞的凋亡诱导作用。荧光显微镜下观察可发现杨梅黄酮可使两种胶质瘤细胞凋亡小体出现的比例增加。进一步通过流式细胞术检测杨梅黄酮对GL261细胞与U251细胞凋亡的影响,结果显示,杨梅黄酮可增加两种细胞早期凋亡与晚期凋亡细胞的比例,与相应的对照组相比均有统计学差异(p （二）杨梅黄酮对胶质瘤细胞迁移及侵袭的影响 1、杨梅黄酮对GL261细胞与U251细胞迁移的影响利用Transwell实验检测杨梅黄酮对GL261与U251细胞迁移的影响。结果显示,对于GL261细胞,杨梅黄酮浓度在5μM时即表现出对其迁移的抑制作用(p 2、杨梅黄酮对GL261细胞与U251细胞侵袭的影响为研究杨梅黄酮对胶质瘤细胞侵袭的影响,我们在Transwell小室底部铺上Matrigel以模仿细胞外基质,然后进行实验。 结果显示,杨梅黄酮可减少穿过小室的GL261细胞与U251细胞的数目,与相应的对照相比,细胞数目差异具有统计学意义(p （三）杨梅黄酮对HUVEC体外成管能力的影响利用CCK-8试剂盒检测杨梅黄酮对HUVEC增殖的影响,通过HUVEC的迁移及在Matrigel上成管检测杨梅黄酮对HUVEC成管能力的影响。 结果显示,杨梅黄酮可抑制HUVEC的增殖,且具有剂量-时间依赖性。划痕实验显示,同对照组相比,杨梅黄酮可抑制HUVEC的迁移(p 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！