变形杆菌属通用PCR试剂盒的知识与应用及相关研究！

                 变形杆菌属通用PCR试剂盒的知识与应用及相关研究！

一、背景

变形杆菌属通用PCR试剂盒是一种用于检测变形杆菌属细菌的体外诊断试剂。它利用聚合酶链式反应（PCR）技术，能够快速、准确地检测出变形杆菌属细菌的特定基因片段。

变形杆菌属通用PCR试剂盒通常包含预混合的PCR反应液、引物和其他必要的试剂。使用时，只需将样品加入反应液中，然后在PCR仪中完成扩增和检测。由于PCR技术的高灵敏度和特异性，该试剂盒可以检测出极低浓度的变形杆菌属细菌，从而提高了诊断的准确性。

变形杆菌属细菌是一类常见的肠道细菌，但在某些情况下，它们也可能引起食物中毒、尿路感染等疾病。因此，对于变形杆菌属细菌的检测在临床诊断和治疗中具有重要意义。

需要注意的是，使用变形杆菌属通用PCR试剂盒需要具备一定的分子生物学知识和实验技能。同时，试剂盒的质量和可靠性对于实验结果至关重要，因此在使用前应进行质量检查和确认。此外，试剂盒的储存和使用应遵循说明书上的指示，以保证其有效性和安全性。

二、变形杆菌属通用PCR试剂盒的操作步骤如下

1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3、PCR反应体系准备：根据变形杆菌属通用PCR试剂盒的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在变形杆菌属的感染。

三、应用

变形杆菌属通用PCR试剂盒可以用于食源性变形杆菌属PCR检测方法的研究：

针对食源性变形杆菌属食物中毒事件逐年上升的趋势,研究建立新型快速灵敏的变形杆菌属检测鉴定方法。通过变形杆菌属通用PCR试剂盒建立3种常规PCR方法和1种荧光PCR方法,对66株变形杆菌属鉴定,与传统分离培养法和全自动微生物分析系统检测法进行比较研究,结果如下:根据1961-2007年发表的218篇关于264起变形杆菌属食物中毒案例分析,变形杆菌属食物中毒自二十世纪的80年代到90年代到目前的21世纪,呈现上升趋势,广东省和山东省为变形杆菌属食物中毒多发省份,绝大多数中毒事件都发生在夏秋季节,以城市中的饮食服务单位居多,中毒食品多为动物性食品,尤其是熟食制品,中毒菌种主要是奇异变形杆菌和普通变形杆菌。在187起变形杆菌属食物中毒的检测方法中,94.65%采用传统分离培养法,其余5.35%采用全自动微生物分析系统法,没有任何采用PCR及其它分子生物学检测方法的报道。

传统分离培养法和全自动微生物分析系统检测法对66株样本分离菌株的鉴定结果全部为阳性,鉴定结果与中山大学附属第三医院和暨南大学附属第一医院菌种鉴定保存的结果一致,符合率100%,验证了变形杆菌属菌种的真实性。选取atpD基因和tuf基因作为靶序列,设计了3对特异性引物,分别建立了3种相应的检测变形杆菌属的变形杆菌属通用PCR试剂盒常规PCR法,对3株变形杆菌属标准菌株、66株样品分离株及13株非变形杆菌属菌株进行扩增实验,结果显示,3种变形杆菌属通用PCR试剂盒常规PCR法对3株标准菌株和66株样品分离株的检测结果均为阳性,13株非变形杆菌属菌株检测结果均为阴性。

变形杆菌属通用PCR试剂盒鉴定结果与传统分离培养法和全自动微生物分析系统检测法结果完全一致,但检测时间仅为6-8 h,其检测速度、灵敏度和特异性表现出独特的优势。基于atpD基因设计1对特异性引物,建立了1种SYBR GreenⅠ荧光PCR法,用于检测变形杆菌属,其鉴定结果与常规变形杆菌属通用PCR试剂盒PCR方法完全一致,但本方法所耗时间仅为1-2 h,表现出更优的特异性、重现性和灵敏度,并且操作更为简便。对8条变形杆菌属菌株atpD基因测序,其结果与Genbank中变形杆菌属atpD基因序列不同,本文所测基因序列是截至目前为止尚未公开的新的变形杆菌属atpD基因序列。

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