人结直肠癌细胞DiFi的培养步骤与注意事项！

                    人结直肠癌细胞DiFi的培养步骤与注意事项！

一、细胞简介

平台编号：Bio-129775

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：DiFi

细胞名称：人结直肠癌细胞DiFi

产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

细胞数量：1x10^6；1x10^6

保存温度：37℃；-198℃

运输方式：常温保温运输；干冰运输

安全等级：1

用途限制：仅供科研3类

培养体系：DMEM高糖（HYCLONE SH30022.01）+10%FBS+1%三抗

培养温度：37℃

二氧化碳浓度：5%

细胞用途：仅供科研使用。               

简介：人结直肠癌细胞DiFi取自白人女性，贴壁培养。

用途：细胞系

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、DiFi人结直肠癌细胞特性

1）来源：DiFi人结直肠癌细胞

2）含量：>1x106 个/mL

3）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）培养基：DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

6）生长特性：贴壁生长

三、细胞的运输和保存

使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

四、DiFi人结直肠癌细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备：

1）准备基础培养基( GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠 0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

2、细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）DiFi人结直肠癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

五、DiFi人结直肠癌细胞注意事项

1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。

3.静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

4. 悬浮细胞：将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内，1000 转/分钟离心5min，培养基上清可备用，管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养；若密度未超过80%，细胞悬液移至原瓶继续培养，待达到80%时再正常传代。备注：聚团生长慢，有密度依赖，必须使用T25培养瓶竖立培养，3天一次半量换液一次，1-2周传代一次。

贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。备注：细胞贴壁慢，传代后细胞放2天不动。

5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。

6.因为DiFi人结直肠癌细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。

六、复苏细胞收货注意事项

收到细胞后，静置 3 小时，然后当天更换新鲜培养基！原瓶培养基不能继续使用！该细胞订单用户订购前，需核实确认。

培养基货号 DMEM(HYCLONE SH30022.01 或 GIBCO C11965500BT）

胎牛血清（GIBCO 10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产生售后问题，不予支持补发。培养基正常 pH 值为 7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需要尽快更换完全培养基。

七、冻存细胞收货注意事项

收到细胞后，当天存入-80℃冰箱或者-196℃的液氮罐中保存！该细胞订单用户订购前，需核实确认（冻存细胞以收到细胞后起 14 天之内为售后保障期 ，不是保存多日开始复苏后的 14 天之内 ）

培养基货号 DMEM(HYCLONE SH30022.01 或 GIBCO C11965500BT）

胎牛血清（GIBCO 10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产生售后问题，不予支持补发。培养基正常 pH 值为 7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需要尽快更换完全培养基。

八、常见问题

1、运输途中，细胞会因为晃动造成细胞脱落，此现象为正常现象，观察后，静置 3 小时。

2、传代后细胞漂浮原因：传代前密度过大导致细胞挤出凋亡；消化过度；移液枪吹打力道过大。

3、细胞复苏后贴壁性不好，尝试换液并血清提至 15%，待观察，若效果还不佳，需要联系销售及技术老师。

4、本产品有添加支原体抗污染剂及三抗（青霉素，链霉素，两性霉素 B），若收到细胞后 2 天内，发现细胞污染，请立即联系对应销售进行补发；3-14 天之内的污染，需要联系对应销售沟通并且核实详情后，进行下一步售后处理。

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