代尔夫特食酸菌（D.acidovorans）为丛毛单胞菌科、代尔夫特菌属，广泛分布于自然界，如河水、沟渠水、土壤等环境。通常认为是非致病菌，但可以引起抵抗力低下宿主的多种机会感染，为人类少见的机会致病菌。能把离子转变为金纳米粒子，可以用于黄金冶炼。概述编辑加拿大汉密尔顿市麦克马斯特大学的科学家们在金溶液中，对一种被称为“代尔夫特食酸菌”的细菌进行了研究，他们观察到细菌的周围有黑色的环状物质，经过鉴别，这种黑色的物质是金纳米粒子。 科学家们表示，这是细菌的一种防卫机制的表现，金离子对这种代尔夫特食酸菌来说是有毒性的，于是细菌们就将金离子转换为金纳米粒子，从而防止其进入细胞壁之内。研究人员们将细菌中负责转换金离子的基因化学物质分离出来，这种细菌将无法产生金纳米环状物，并且科学家利用分离出来的这种基因化学物质，成功地在金溶液中转换出了金纳米粒子。防毒机理编辑研究人员发现该细菌分泌的一种分子能将金离子聚集一起生成较大的金，失去毒性。他们将该细菌分离出来进行生物信息分析后发现，这种分子名为肽类代尔夫肌动蛋白A。这种蛋白类似于传统的嗜铁素——一种能与离子相结合的分子——实验发现其确实能够吸附离子。但这种蛋白分子能与金离子反应的额外功能，以及该细菌所存在的特殊环境，让人欣喜地认识到这种细菌能让一种常见分子去除掉自然环境下金离子的毒性。 用途编辑澳大利亚阿德雷德大学的环境微生物学家法兰克·理斯表示，代尔夫特食酸菌所含有的这种基因化学物质将可以被用于从开采金矿产生的废水中提炼黄金。

定量工作菌株产品使用说明书使用前请仔细阅读说明书并确认产品标示的含量范围 【产品名称】定量工作菌株 【含量范围】1.0~2.0×105cfu/颗 【贮存条件】-20℃或-20℃以下 【有 效 期】12 个月 【菌株来源】本产品由中国医学细菌保藏管理中心（National Center For Medical Culture Collections, CMCC）提供的 0 代菌种生产。 【传代次数】第 4 代 【使用方法】  ① 平衡至室温：使用前将未开启的西林瓶平衡至室温。 ② 溶解:将适量的复溶液加入菌株西林瓶中，涡旋震荡 5~10s 或反复吹打使其完全溶解。 ③ 稀释:使用无菌生理盐水进行适当稀释。 ④ 按照相应标准或试验要求，吸取适量菌液进行相应接种培养即可。 【使用示例】 若接种方法为平板涂布法：① 使用前将未开启的西林瓶平衡至室温。② 吸取复溶液 2mL 加入 1 支西林瓶中，涡旋震荡 5~10s 或反复吹打使其完全溶解 (当 接种量不大于 100cfu 时)；或吸取复溶液 1mL 加入 1 支西林瓶中，涡旋震荡 5~10s 或反复吹打使其完全溶解（当接种量不少于 100cfu 时）。      ③ 吸取 1mL 已溶解完全的菌液，加入 9mL 无菌生理盐水中，混匀，逐级进行 10 倍稀 释。      ④ 吸取步骤③中 100µL 菌液，加至已凝固的无菌培养基平板中，再用无菌 L 型涂布棒 将菌液沿同一方向在平板上涂抹均匀，待菌液渗透入培养基内，将平板倒置，置于 所需温度培养即可。   2. 若接种方法为液体接种或倾注平皿法：   ① 使用前将未开启的西林瓶平衡至室温。   ② 吸取复溶液 2mL 加入 1 支西林瓶中，涡旋震荡 5~10s 或反复吹打使其完全溶解 (当 接种量不大于 100cfu 时)；或吸取复溶液 1mL 加入 1 支西林瓶中，涡旋震荡 5~10s 或反复吹打使其完全溶解（当接种量不少于 100cfu 时）。  ③ 吸取 1mL 已溶解完全的菌液，加入 9mL 无菌生理盐水中，混匀，逐级进行 10 倍稀 释。   ④ 吸取步骤③中 1mL 菌液，加至相应液体培养物中，置于所需温度培养。或是加至 无菌平皿中，注入 15~20mL 温度不超过 45℃已融化的培养基，混匀，凝固，倒置 培养。 3. 若应用于 “供试品计数方法适用性试验”（试验组，以供试液体积为 10mL 为例）： ① 使用前将未开启的西林瓶平衡至室温。 ② 吸取复溶液 2mL 加入 1 支西林瓶中，涡旋震荡 5~10s 或反复吹打使其完全溶解。  ③ 进行 1 次 10 倍稀释（吸取 1mL 已溶解完全的菌液，加入 9mL 无菌生理盐水或相应 稀释液中，混匀）。  ④ 吸取步骤③中 100µL 菌液，加至 10mL 已制备好的供试液中，混匀。 ⑤ 吸取步骤④中 1mL 菌液，加至无菌平皿中，注入 15~20mL 温度不超过 45℃已融化 的培养基，混匀，凝固，倒置培养。 【应用领域】 适用于药检中的灵敏度试验、促生长试验、无菌检查、适用性检查、控制菌检查等。  2. 适用于食品检验的定量、定性对照。   3. 适用于化妆品微生物检验质量控制。 【注意事项】 本产品为一次性产品，菌株复溶后，常温放置请于 4h 内使用完毕；冷藏（2～8℃）放置 请于 24h 内使用完毕。  2. 如果暂时不使用，请严格按照贮存条件存放。  3. 避免反复冻融本产品。   4. 按照适当的生物危害处理方式处理废弃的菌悬液。 5. 产品若出现受潮、密封不严等情况，请勿使用。  6. 仅供实验室使用。如有其它产品需要产品，可直接联系百欧博伟生物技术有限公司，销售：18701098095或者QQ：2852776741

           接种环灭菌器的结构原理、操作及使用维护！一、简 介火焰灭菌是古典的微生物学处理方法,但在使用过程中会产生气溶胶,并可使生物安全柜内气流乱,因此,火焰灭菌不适合于生物安全柜内使用。电子式灭菌器在功能方面不但可替代传统的酒精灯、本生灯等,而且还具有传统火焰灭菌工具所无法比拟的优点,非常适于实验室及生物安全柜内使用。电子式火焰灭菌器体积小巧,备有完善的安全保护装置,操作极其方便。所以世界卫生组织(WHO)及主要的生物安全柜制造厂商建议尽量不要在生物安全柜内使用火焰消毒而选用电子式灭菌器。二、基本结构及原理电子式灭菌器根据采用的原理不同,可分为红外加热式灭菌器、电子式火焰灭菌器和电阻加热式灭菌器。⒈红外加热式灭菌器红外加热式接种环灭菌器,由外壳、陶瓷管、电热丝、高温石英管和温度控制器等组成。陶瓷管为筒形,一端位于外壳顶端或侧面上,另一端位于外壳内,陶瓷管的两端分别装有外炉盖和内炉盖,在内炉盖的小圆孔内安装有温度传感器,陶瓷管的外面缠绕着电热丝,电热丝的外面又包覆有云母带,云母带的外面还包覆了高温航空棉。在所述的外売后上部安装有温度控制器和显3红外加热式灭菌器示器;在温度控制器与陶瓷管之间设有隔温板。炉管内配有高温石英管,以保证灭菌环境既卫生又安全。⒉电子式火始灭菌器电子式火始灭灌器在欧美等发达国家的实验室已被普遍使用。该灭菌器采用功能强大的微处理器控副,应用红外感应器点火开关,当微处理器收到点火请求,即发出指令打开电磁阀,并在燃烧器顶部发出红外热能供消港灭菌,温度过高时微处理器即关闭电磁阀,灭菌器也会停止工作。电子式火焰灭菌器的面世,令长期以来实验室常规火焰灭菌或灼烧用装置所带来的安全问题基本得以改善。⒊电阻加热式灭菌器电阻加热灭菌技术也叫欧姆灭菌,是一种利用接种环铂丝横截面小,电阻高的特点,借通入的电流使接种环内部产生的热量而达到灭菌目的一种灭菌技术。电阻加热式灭菌器构造相对简单,主要提供正负两极的接线柱用于灭菌。由于体积小,不耗氧,所以一般用于厌氧培养箱内使用。三、应用操作⒈红外加热式灭菌器(1)接通电源,打开开关,对于具有温度控制的可预先设定温度。然后预热至预期温度,或者等灭菌器内腔变红。(2)将接种环前端放入内腔,如果变红,说明仪器可以正常工作。(3)实验结東后,关闭电热灭菌器电源。⒉电子式火焰灭菌器(1)接通电源后,打开红外感应器点火开关,当微处理器收到点火请求,即发出指令打开电磁阀,并在燃烧器顶部发出红外热能。(2)消毒灭菌,温度过高,微处理器即刻关闭电磁阀,灭菌器停止工作。(3)如仪器工作时有回火现象,可调节空气旋钮,减小空气进入直至回火消除为止。(4)实验结束后,关闭红外感应器点火开关,断开电源。(5)仪器用完后切记关好燃气瓶的开关,并把仪器电源开关拔至OFF位。⒊电阻加热式灭菌器(1)接通电源,打开开关。(2)手持带有绝缘柄的接种针,将铂丝搭在正负电源柱上,铂丝瞬间变红,立即拿下接种环进行接种。(3)实验结東后,关闭电热灭菌器电源。四、使用及维护⒈使用电子式灭菌器时一定要严格按照说明书进行,要避免烫伤和电击。⒉仪器出现不工作现象时,可能是因长时间使用而造成保险丝熔断,需更换保险丝附近。⒊使用电子式火焰灭菌器保持工作环境通风良好。仪器工作时勿将易燃物品放于附近。⒋电子式火焰灭菌器的燃烧器工作时温度很高,不要触摸燃烧器以免灼伤,用完后也不要马上触摸燃烧器。⒌红外加热式灭菌器由于长期使用会造成内腔内堆积了一些灰分,需要适时清理。电子式火焰灭菌器一些是采用充电或使用电池的,所以要定期充电或更换电池。而电阻加热式灭菌器的正负电机柱上由于长时间使用,会在表面形成一层绝缘层,所以需要用细砂纸进行擦拭;如果解决不了,可以更换电极柱。⒍实验结束后,及时关闭电热灭菌器电源。总之,实验室接种环灭菌器的正确使用是一个实验室安全操作规范的重要组成部分,无论采用传统的酒精灯和本生灯,还是采用电子灭菌器,都必须严格按照有关装置的操作规程,才能充分有效地发挥其在常规实验操作中的作用。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

    艰难梭菌（Clostridiumdifficile）对氧极为敏感，分离培养较困难．故命名为艰难梭菌。艰难梭菌属厌氧性细菌。厌氧性细菌是指那些在无氧条件下要比在有氧环境中生长好的细菌，而人的肠道正好是一个相对无氧的环境。    艰难梭菌为革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，卵圆形芽胞位于次极端。芽胞在外环境可存活数月。分离培养基常用环丝氨酸一甘露醇等特殊培养基。艰难梭菌能形成芽胞，对热力、干燥、消毒剂等理化因素均有强大的耐受性，在干燥、消毒剂环境中可存活数月，在衣服、家具和环境中广泛存在。    艰难梭菌是人类肠道正常菌群成员，不规范使用抗生素时，可导致肠道菌群失调。耐药的艰难梭菌大量生长繁殖，导致抗生素相关性腹泻和伪膜性肠炎等疾病。    形态染色    革兰阳性粗长杆菌.大小为（1.3-1.6）μm×（3.6-6.4）μm.培养2日后易转为革兰阴性：芽胞卵圆形.位于菌体的次极端。    鉴别要点    1.本菌特征：革兰阳性粗大杆菌.芽胞卵圆形，位于菌体的次极端。菌落黄色、粗糙.不产生脂酶和卵磷脂酶.不凝固和不消化牛奶。    2.与产气荚膜梭菌的鉴别：艰难梭菌不消化牛奶.麦芽糖、蔗糖均阴性，而产气荚膜梭菌则相反。    培养特性    严格厌氧.在厌氧血琼脂平板上35℃培养48h.形成直径为3-5mm、圆形、白色或淡黄色、边缘不整齐、表面粗糙、不溶血的菌落。在CCFA（环丝氨酸、头孢甲氧霉素、果糖和卵黄琼脂）平板上产生较大、表面粗糙、边缘不整齐的黄色菌落。在紫外线照射下见黄绿色荧光。    生化反应    发酵葡萄糖、果糖.不发酵乳糖、麦芽糖和蔗糖.明胶、胆汁七叶苷和细胞毒性试验均为阳性.吲哚、H2S、卵磷脂酶和脂酶试验均为阴性.不消化牛乳。    分布范围    艰难梭菌广泛分布于自然环境中，如土壤、干草、沙、一些大型动物（牛、驴和马）的粪便，及狗、猫、啮齿动物和人的粪便，除此之外还大量存在于水和动物的肠道中婴儿的粪便中常含有艰难梭菌，为新生儿肠道中正常菌群，大约50%12月龄婴儿的肠道中有艰难梭菌，2岁以上儿童的带菌率大约为3%，但此菌在健康成人中出现频率较低，无症状带菌的成人在瑞典是1.9%，在日本为15.4%。    致病性    艰难梭菌是一种厌氧生长的革兰阳性梭状产毒芽孢杆菌，为人类肠道中的正常菌群，抗生素的应用可导致该菌过度生长。自1978年开始，艰难梭菌被认为与抗生素相关性腹泻有关，曰前认为25%的抗生素相关性腹泻由艰难梭菌引发。随着广谱抗菌药物的广泛使用，在全球范围内，艰难梭菌相关性腹泻发生率不断升高，近年来出现暴发流行，其流行菌株发生基因变异，产生毒素的能力增加，患者病死率及病情复发率升高，已引起医学界的重视。    艰难梭菌可产生两种毒素：肠毒素和细胞毒素。肠毒素能趋化中性粒细胞浸润回肠肠壁，释放细胞因子，导致肠道大量失水和出血性坏死。细胞毒素能解聚肌动蛋白，损坏细胞骨架，导致局部肠壁细胞坏死，有直接损伤肠壁作用。    艰难梭菌感染大多数为无症状携带者。长期服用抗生素可引起内源性感染。若易感人群较多，也可引起外源性感染。耐药艰难梭菌能导致抗生素相关性腹泻和假膜性结肠炎等疾病。    艰难梭菌感染引起肠炎，主要是结肠段的肠炎。长期大量应用抗生素，尤其是作用于肠道细菌的广谱抗生素，如氨苄西林、阿莫西林、克林霉素和各种头孢菌素等，可杀灭或抑制肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌等正常菌群的细菌，失去或减弱了对艰难梭菌的拮抗作用；而对这些抗生素耐药的艰难梭菌则大量增殖，引起菌群失调。导致抗生素相关性腹泻。

            大肠菌群平板计数法操作步骤与注意事项！本法参照国标GB 4789. 3-2010规定的大肠菌群测定方法第二法。⒈检验程序见图3-7⒉原理样品先经过VRBA琼脂平板的筛选，因其中含有胆盐和结晶紫，可以很好的抑制革兰氏阳性菌的生长，乳糖可以产酸，在中性红存在时，产生典型的紫红色周围有红色胆盐沉淀的菌落。因为其他阴性肠杆菌可以分解其他糖类产生红色菌落，因此需接种BGLB培养基证实。⒊操作步骤样品处理及稀释同MPN法。①加样制作平板：选取2-3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿ImL。同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。及时将15 -20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注．于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3～ 4mL VRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于（36±1)0C培养18~24h.②平板菌落数的选择：选取菌落数在15 ~150CFU的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0. 5mm或更大。③证实试验：从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，(36±1)℃培养24-48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。④大肠菌群平板计数的报告：经zuihou证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8. 3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（每毫升）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100 X 6/10 X 10-4 CFU/g(mL)＝6. 0 X 10一3 CFU/g（mL)。⒋检验时应注意的事项①检验步骤2008版前的大肠菌群的检验步骤采用三步法（乳糖胆盐发酵试验、EMB琼脂分离培养和证实试验）。diyi步乳糖发酵实验是样品的发酵结果，不是纯菌的发酵试验，所以初发酵阳性管，经过平板分离和证实试验后，有时可以成为阴性。大量的数据表明，食品中大肠菌群检验步序的符合率，初发酵与证实试验相差较大，不同食品三步法的符合情况也不一致，所以2008版之后改为两步法，取消了分离培养这一步，将大肠菌群MPN计数法的培养基由乳糖胆盐修改为月桂基硫酸盐胰蛋白膝肉汤；复发酵培养基由乳糖发酵肉汤改为亮绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤，大肠菌群MPN法中报告每100mL (100g）改为1mL(1g)。试验证实，修改后对大肠菌群的检出效果相同，发酵管对于阳性结果的判断只通过“产气”，不存在颜色的影响，明确了判断依据；减少了步骤，使操作更加简便，结果更接近真实。②产酸产气原因：在初发酵试验中，能出现产酸产气现象的原因很多，如大肠菌群发酵乳糖产酸产气；两种细菌共同作用发酵乳糖产酸产气，但其中任何一种不能单独发酵；食品中杂菌多时，（多黏芽抱杆菌、浸麻芽抱杆菌、产气荚膜梭菌）发酵乳糖产酸产气；有些非大肠菌群发酵葡萄糖等糖类产酸产气。因此必须做证实试验。③复发酵结果：从LST产气管接一环到BGLB中进行复发酵，（此时不受样品中非乳糖的干扰进行乳糖发酵，也避免了许多芽抱杆菌的干扰），在BGLB中产气的为阳性，不产气的为阴性。但此法也有缺陷，有时出现假阳性。由于亮绿遇胆盐降低了其活性，有时不能彻底抑制芽抱菌。为避免此缺陷，对BGLB中产气的划线于EMB上，挑典型菌落镜检。④抑菌剂：在大肠菌群检验中，经常使用的抑菌剂有胆盐、洗衣粉、十二烷基磺酸钠、亮绿、结晶紫、孔雀绿等。抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌，而有利于大肠菌群的生长和挑选，但对大肠菌群中的某些菌株有时也产生一些抑制作用。有些抑菌剂用量甚微，称量时稍有误差，即可对抑菌作用产生影响；有的抑菌剂当牌号、规格改变时，也可影响抑菌效果，而需重新测定抑菌的有效剂量，这些情况均给抑菌剂的使用带来不利条件。目前我国在食品大肠菌群检验方面采用胆盐作为抑菌剂，猪、牛、羊三种胆盐对大肠菌群的检验效果，经试验观察无明显差异，可相互替代，但其他胆盐的检验效果则不一致，故不宜相互替代。目前由于胆盐不易购买，有的实验室以3号胆盐、混合胆盐、去氧胆酸钠、兔胆盐等替代猪胆盐加入培养基中，这会影响大肠菌群的检验结果，应予注意。因此在2008版的检验标准中改为月桂基硫酸钠。两者的作用都是抑制革兰氏阳性球菌。但前者是化学试剂，批间差异小，易观察结果，对损伤菌有修复作用，检出率提高，检验结果稳定。后者是生物试剂，取自牛和猪等动物的胆囊，批间差异大，结果可靠性差。另外，在胆盐用量上实验表明1%, 0.5％和0. 25％三个剂量无任何差异，所以目前乳糖发酵管采用的胆盐剂量（(0. 5%)是适宜的，在称量时稍有误差，亦不致影响大肠菌群的检出。⑤平板计数法：若样品较脏，使用MPN法较不方便，一般使用结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）在平皿内样品稀释液与VRBA琼脂混合，等到凝固后，另加盖一层VRBA琼脂，以抑制专性需氧菌，从中挑取粉红晕的菌落计数，取30~150个菌落的平板，挑选其中10个有代表性的菌落分别接种到亮绿胆盐发酵管进行鉴定。⑥挑选菌落：大肠菌群是一群肠道杆菌的总称，大肠菌群菌落的色泽、形态等方面较大肠埃希氏菌类更为复杂和多样，而且与大肠菌群的检出率密切相关。所以在实际工作中，为了提高大肠菌群的检出率，应当熟悉大肠菌群的菌落色泽和形态。在检验中，大肠菌群在VRBA琼脂上典型菌落呈紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0. 5mm或更大。在伊红一美蓝（EMB)平板上的菌落呈黑紫色有光泽或无光泽的检出率zuigao；红色、粉红色菌落检出率较低。菌落形态的其他方面（如菌落大小、光滑与粗糙、边缘完整情况、降起度、湿润与干燥等）虽亦应注意，但不如色泽方面更为重要。影响大肠菌群检出率的因素较多，如食品种类、菌落色择和形态、细菌种类等，所以实际工作中通常挑选一个菌落，由于概率问题，难免出现假阴性，尤其当菌落不典型时。所以挑菌落一定要挑取典型菌落，如无典型菌落则多挑几个，以免出假阴性。⑦产气量：大肠菌群的产气量，多者可使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生小于米粒的气泡。一般来说，产气量与大肠菌群检出率呈正相关，但随样品种类而不同，有小于米粒的气泡，亦可有阳性检出。对未产气的乳糖发酵管如有疑问时，可用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑可能有气体产生，而应做进一步观察。这种情况的阳性检出率可达半数以上。⑧MPN法：MPN法是一种采用数学理论推算，用置信区间描述细菌浓度的一种间接计数法。虽然实验结果以MPN值表示，但MPN值并不能表示实际菌落数，而实际菌落数落在置信区间内的任何一点。该方法是1915年McCrady首次发表的。最可能数（MPN）是表示样品中活菌密度的估测。MPN检索表通常是采用三个稀释度九管法来计算的，当然也可以十五管或更多。稀释度的选择是基于对样品中菌数的估测，较理想的结果应是zuidi稀释度3管为阳性，而zuigao稀释度的3管为阴性。如果无法估测样品中的菌数，则做一定范围的稀释度。这次提供的MPN检索表列出了95％可信限，供作参考。另外，在查阅MPN检索表时，应注意以下几不问题。通常MPN检索表只给了三个稀释度，即0.1mL(g), 0.O1mL(g), 0.OO1mL(g)，如欲改用1mL(g)、0. 1mL(g)、0. 01mL(g）或0. 01mL(g)、0. 001mL(g)、0. 0001mL(g）时，则表内数字应相应增加或降低10倍，其余可类推。在MPN检索表diyi栏阳性管数下面列出的mL (g)，系指原样品（包括液体和固体）的毫升（克）数，并非样品稀释后的毫升（克）数，如固体样品lg经10倍稀释后，虽加人1mL量，但实际其中只含0. 1 g样品，故应按0. 1g计，不应按1mL计，或按1mL计，单检索数字必须再乘以稀释倍数。当检索表内三个稀释度检测结果都是阴性时，MPN值应按＜3判定，这样更能反映实际情况。例如11. 1mL(g）和1. 11mL(g）两个检测剂量，当它们都是阴性时，如按。处理，则两组样品虽相差10倍，但MPN值却无法区分，实际上这两个。的含义并不相等。如按照＜3和＜30处理，则MPN值能反映出两组所用样品量的不同，实际上11. 1mL(g）应为G3，而1. 11mL(g）应为＜30，二者还是有区别的。所以用＜3和＜30处理，更能反映实际情况。中国微生物菌种查询网专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

                提取细胞质和细胞核蛋白的操作步骤！操作步骤：⒈决定细胞生长状态，细胞生长状态应该是80%或者更好：⒉用离心机以1500r/min离心5min⒊弃上清液，用等体积的冷PBS洗细胞，像步骤2那样，反复3次⒋根据估计的沉淀量加入5倍体积的isotonic lysis buffer到细胞颗粒中，使细胞温和悬浮，尽量避免泡沫⒌加入裂解液lysis buffer在悬浮的细胞中，并放在冰上15min让细胞膨胀，可以通过显微镜检查⒍对于膨胀的细胞，加入10%的IGEPAL CA-630使zuihou的浓度达到0.3%，混匀，加的时候要温和⒎立即离心（量大的可以用1.5mlde EP管，以5500r/min离心30s；量大的可以用50ml的管子以5500r/min离心2min）⒏转移上清液（细胞质蛋白）到一个新的冷冻管中⒐用悬浮颗粒5倍体积的isotonic lysis buffer悬浮细胞，并混匀⒑用离心机离心细胞悬浮液，以1500r/min离心5min，移掉上清液⒒用2/3倍体积的extraction buffer悬浮颗粒⒓把管子放置在震荡混匀器上，以700r/min，15min震荡混匀，接着以1400r/min,15min,整个过程要仔细，避免泡沫产生⒔以9400r/min离心15min，离心完后转移上清液到一个新的冷冻离心管中⒕分成几份用液氮冷冻，并且保存起来（长期保存应放在-80上，短期保存要放在-20上）中国微生物菌种查询网是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株，ATCC菌种，细胞系以及培养基等产品的查询购买类网站！在本站中，我们提供的ATCC菌种达15000余份，ATCC各类细胞系达3000余份，保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供，中期合同保证，后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护，确保您在中国微生物菌种查询网中获得zuiyou质服务！也正因为此，中国微生物菌种查询网与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    细胞培养板的选择和使用方法！一、细胞培养板细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具，形状、规格、用途多样。你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫？你是否正为如何方便、正确使用培养板而苦恼？你对如何处理培养板是否也有困惑？对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会？二、细胞培养板的选择1）细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U型和V型）；2）培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；3）根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。三、平底和圆底（U型和V型）培养板的区别和选择1）贴壁细胞一般用平底培养板。2）悬浮型细胞的培养一般用V型。3）U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。4）V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。四、不同型状的板子自然有不同用途平底的什么类型的细胞都可用，但当细胞数目较少，如做克隆时，就用96孔平底板。另外，做MTT等实验时，无论贴壁和悬浮细胞，一般均用平底板。至于U或V型板，一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面，当做两种不同淋巴细胞混合培养时，需要二者相互接触以刺激。因此，一般需要U型板﹐因细胞会由于重力的作用而聚集在一个很小的范围內，V型板的用途更少，一般用于细胞杀伤实验时，为了使效靶细胞紧密接触﹐常使用V型板﹐但这种实验也可用U型板替代(加入细胞后﹐低速离心）。如果是养细胞的话， 通常是运用平底的， 另外要特別注意材质， 标示"Tissue Culture (TC) Treated"就是养细胞用的。圆底的通常是拿来做分析， 化学反应， 或是保存样品用。因为圆底比较好将液体吸得干净， 如果用平底的就不好吸了。 不过， 如果你是要测吸光值的话， 一定要买平底的才行。大部分细胞培养都用平底培养板，便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致，还便于MTT检测。圆底培养板主要用于同位素掺入的实验，需要用细胞收集仪收集细胞的培养，如“混合淋巴细胞培养”等。如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子(一)操作步骤1、加样品：将标本稀释液100ul（或2滴）加到包被板内（预留阴阳性及空白对照2－5孔），将待检血清用PBS或生理盐水按1：20稀释后取10ul加入反应孔内。2、加对照：加入阴性对照1－3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。3、温育：将反应板震荡使样品混匀后，置37℃温箱或水浴反应20分钟。4、洗板：用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。（1）手洗：将反应板孔内容物倾出，将洗涤液注满反应孔，放置30秒钟后用力甩去，如此重复5次后拍干。（2）机洗：5次，每孔注入洗涤液200ul或注满，停留30秒钟后吸尽拍干。5、加酶标工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶标工作液，置37℃温箱反应20分钟后，洗板5次，洗板操作同步骤4。6、显色和终止反应：将底物A、B液各50ul（或1滴）加到反应孔内，37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul（或1滴）混匀终止反应。(二)结果判定1、酶标仪设定波长450nm，先用空白调零，然后测定各孔OD值；如果选用双波长测定，不必设置空白对照孔。2、当阴性对照平均OD值小于0.08，阳性对照（pc）OD值大于0.30时，说明试剂盒有效且实验操作正确，否则应当重复试验。3、临界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋阴性对照平均（NC）OD值（当阴性平均OD值小于0.05时，按0.05计算；当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算）。4、标本OD值≤临界值为阴性，标本OD值>临界值为阳性。常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     菌肥硅酸盐细菌的种类及应用！一、种类硅酸盐细菌主要指胶冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus)的一个变种或环状芽胞杆菌(B.circulans)、及其它经过鉴定的菌株。B.circulans是得到国际承认的菌株，有文献表明其有一定毒力，需慎重对待。但我国和前苏联学者一般认为硅酸盐细菌是指胶冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus)，国际上现已承认其分类上的名称。后来有些研究表明某些非硅酸盐细菌也有类似的分解钾磷的功能。硅酸盐细菌在选择培养基平板上，菌落表面湿润而光滑，质地粘稠并有弹性，无色透明隆起度大，像半颗玻璃珠；菌体长杆形，大小为4～7微米×1～1.2微米，连同荚膜，大小为7～10微米×5～7微米，荚膜比菌体大10～15倍，有时甚至有2～4层荚膜。需要说明的是荚膜的产生、大小、层数与培养基的营养成分密切相关，营养丰富时，不形成荚膜或荚膜较小，反之荚膜大而肥厚，层数增多，荚膜的有无是鉴别硅酸盐细菌的重要形态特征。菌体两端钝园，菌体中往往有1～2个大脂肪类颗粒。此外，菌体中央还能形成粗大的椭圆形芽胞。革兰氏染色阴性，用复红染色能清晰地看到硅酸盐细菌形态特征。硅酸盐细菌对营养条件要求不高，对环境条件适应性强。在无氮培养基上长得很好，形成fengman的富弹性、粘稠半颗玻璃珠状的菌落，但固氮能力不高，一般每利用1克糖固定1～3毫克氮。在有氮培养基上也能生长，如牛肉膏培养基，但比在无氮培养基上长得慢些，菌落个也小，荚膜也小。硅酸盐细菌能水解和利用淀粉，在含有淀粉的培养基中不形成荚膜或荚膜很小，易形成芽胞。培养的最适宜温度是25～35℃，合适的培养pH值范围为7.5～8.0。二、应用目前的硅酸盐细菌肥料剂型主要是草炭吸附的固体剂型，其生产条件、工艺要求、质量要求和使用条件同于一般的微生物肥料，主要用于缺钾地区。我国农业土壤中的缺钾问题日趋明显，而我国钾素化肥生产能力严重不足，每年需要进口。实际上土壤中钾的总含量并不缺乏，只是速效钾供应不足，研究和开发利用解钾微生物，阐明其作用机理是微生物肥料研究和应用中的一个重要课题。硅酸盐细菌肥料适宜施用的作物种类多，在棉花、烟草、甘薯、水稻、玉米和果树等上表现出较好的效果，产量的增加达10%左右，并能提高品质。施用方式主要为拌种、穴施和根外追肥。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

           乳酸菌饮料都一样？活性乳酸菌对肠道更有益！中国微生物菌种查询网 随着人们健康生活观念的提高，乳酸菌饮料越来越受欢迎，有些人喜欢乳酸菌饮料独特的味道，而有些人看中饮料中乳酸菌对肠道的健康作用，但不少人却并不会选购乳酸菌饮料。尽管乳酸菌饮料上标明了“死菌”或“活菌”字样，但人们对此并不在意，认为两者之间没有区别。事实真的是这样吗？如何才能购买到对肠道健康真正有益的乳酸菌饮料呢？ 　　首先，我们需要知道平时喝的乳酸菌饮料到底是什么。据《中国医药报》报道，乳酸菌饮料是指以乳或乳制品为原料，在经乳酸菌发酵制得的乳液中加入水、白砂糖和（或）甜味剂、酸味剂、果汁、茶等配料中的一种或几种调制而成的饮料。 　　乳酸菌饮料中的乳酸菌有活菌与死菌之别。据《钱江晚报》报道，死菌与活菌的功能存在一定差异，一般认为活菌的有益作用更多，具有调节肠道菌群等功能，更符合健康消费需求。 　　那么，我们如何才能购买到对肠道健康真正有益的乳酸菌饮料呢？国立台湾大学食品科技微生物博士徐志安在接受《健康时报》采访时建议，要想买到真正对肠道健康有益的乳酸菌饮料，选择的时候要记住三个字：冷、活、量，具体有以下解释。 　　1.是否冷藏保存。乳酸菌饮品必须放在冰箱冷藏，使乳酸菌维持在半休眠状态，这样才能保证我们喝下去的时候是活菌。 　　2.找活菌。拿起一瓶乳酸菌饮品，看看包装上有没有标明“活性益生菌”，只有活菌才能达到补充肠道益生菌群、增强肠胃免疫能力的作用。 　　3.看活性菌的数量。要达到促进肠道健康的目的，每天至少要摄食10亿个到100亿个活的乳酸菌。所以，在选择乳酸菌饮料时，每100毫升含有的活性乳酸菌数量越多越好。中国微生物菌种查询网可以定制制备常用4代定量微生物菌种（生孢梭菌，大肠埃希氏菌，白色念珠菌，铜绿假单胞菌，黑曲霉等）不同浓度如10E3，10E5,10E6浓度。为了满足更广用户的不同需求，单位代理引进国际知名质控菌种产品生产厂家：法国梅里埃MBL，BIOBALL定量产品，赛默飞REMEL科技定性定量商业产品。jingzhun接种量，即用型使用方便快捷，产品种类齐全并且提供产品COA分析证书。PS：Remel质控微生物；BIOBALL质控微生物；Microbiologis（MBL）质粒微生物，点击有链接详细介绍。欢迎您的咨询！

                 外周血单个核细胞的分离与纯化方法！外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验最常用的细胞，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。1．原理PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的密度为1.076～1.090；血小板为1.030～1.035。因此，利用一种密度介于1.076～1.090之间、近于等渗的溶液（分层液）进行密度梯度离心，可使不同类别的血细胞按其相应密度分布，从而被分离。2．方法1）聚蔗糖-泛影葡胺分层液法 聚蔗糖-泛影葡胺（Ficoll-hypaque，F-H）分层液为密度梯度离心法最常用的分离液，其主要成分是聚蔗糖和泛影葡胺。聚蔗糖 （Ficoll） 分子量为40kD，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点；常用的Ficoll溶液浓度为6%，密度为1.020。泛影葡胺 （Hypaque） 用来增加密度，适量加入密度为1.200、浓度为34%的Hypaque于Ficoll溶液中，配成密度为1.077±0.001的分层液，称为淋巴细胞分层液，用于淋巴细胞的分离。分离细胞时，将肝素抗凝全血叠加在分层液上，使两者形成一个清晰的界面。水平离心后，形成不同层次的液体和细胞区带，从而分离出PBMC （图1）。红细胞和粒细胞密度大于分层液，同时因红细胞遇Ficoll而凝集成串钱状，沉积于分层液底部；血小板因密度小而悬浮于血浆中；PBMC的密度稍低于分层液，故位于血浆层和分层液的界面中，呈白膜状。吸出单个核细胞，计数，用台盼蓝染色检查细胞活力。本法分离单个核细胞的纯度可达95%，细胞获得率达80%以上，细胞活性达95％以上。小鼠淋巴细胞的比重与人淋巴细胞比重不同，若分离小鼠淋巴细胞应选用小鼠淋巴细胞分离液，比重1.092±0.001。2）Percoll分层液法Percoll是经过聚乙烯吡咯烷酮 （polyvinyl pyrolidone, PVP） 处理的硅胶颗粒混悬液，对细胞无毒性和刺激性。Percoll混悬液的硅胶颗粒大小不一，经过高速离心后，可形成一个连续密度梯度，将比重不同的细胞分离纯化。将1份10XPBS与9份Percoll贮存液混合，制成等渗Percoll悬液，此悬液被认为是100％Percoll悬液，其密度为1.1294g/ml。用PBS或细胞培养液稀释100％Percoll而获得所需密度的Percoll分离液用于相应细胞的分离。若分离淋巴细胞应使用1.0777g/ml，配制时用稀释液稀释60％即可。取比重1.077的Percoll分离液X ml与离心管中，将等倍稀释的抗凝血1/2 X ml 小心叠加在分离液上，经水平离心（1500rpm）后，便得四个细胞层，从而分离出淋巴细胞。表层为死细胞残片和血小板，底层为粒细胞和红细胞，中间有两层，上层富含单核细胞，下层富含淋巴细胞。该法是纯化淋巴细胞和单核细胞的一种较好的方法，淋巴细胞纯度高达98%，单核细胞纯度可达78%。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              原代小鼠心肌成纤维细胞分离培养方法！小鼠心肌成纤维细胞的组织来源于实验动物的正常心脏组织，心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官，主要功能是提供压力，把血液运行至身体各个部分。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能。心脏中，心肌成纤维细胞约占正常心肌组织细胞总数的60%-70%，是心脏中非心肌细胞的主要组成部分，广泛存在于心脏组织中，包围心肌细胞，连接心肌细胞间质，与缺血性心脏病、炎症、肥大、梗死等病理状态密切相关。细胞生长方式以长梭状细胞，贴壁培养。小鼠心肌成纤维细胞的方法有很多，小编今天提供的心肌成纤维细胞分离方法有两种，一种是贴块法，一种是消化法，这两种方法都可以用于分离和培养原代细胞。一、实验器械1.培养皿2.T-25细胞培养瓶3.100目不锈钢网筛4.200目不锈钢网筛5.眼科剪6.眼科镊7.离心管（15ml、50ml）二、实验分离和培养步骤1. 小鼠颈椎脱臼处死后，剃除腹胸部的被毛，放入装有75%酒精的烧杯中浸泡5min。2. 取出小鼠，在无菌环境下打开胸腔，取出心脏组织，注入盛有无菌1×PBS的培养皿中，洗净组织表面的血液。3. 将清洗干净的心脏组织转入装有75%酒精的培养皿中浸泡15s以杀死大多数的心脏被膜细胞，浸泡完成后立即转入装有无菌1×PBS的培养皿中震荡清洗。4. 清洗完成后，用剪刀镊子配合除去主动脉弓和心房组织，仅保留心室部分，再次用1×PBS清洗去除心室内的血液。5. 将清洗干净的心室组织用剪刀减成1mm3大小左右的碎块，之后用PBS清洗若干次后按下述两种方法之一进行后续操作。      A.贴块法6. 将清洗好的碎块转入另一培养皿中，用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡组织，室温消化3-5min。7. 消化完成后，添加数毫升FBS终止消化，之后吸弃液体，加PBS清洗组织块1次后，用200ul吸头将组织块平均接种于T-25培养瓶的培养面上，之后将培养瓶放置于37℃二氧化碳培养箱中，静置2-4h。8. 待组织处于略微脱水的状态时，小心添加2ml完全培养基，添加时注意尽量不要将组织块冲起，要使培养基接触所有的组织块。9. 之后放入培养箱中继续培养，一般2-4天后成纤维细胞会从组织块周围爬出，待爬出的细胞有较多数量时，可将细胞消化下来，去除组织块，转入另一培养瓶中培养。 B.消化法6. 将清洗好的碎块转入另一离心管中，加入混合消化液（0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型胶原酶）37℃水浴消化8min后，吸取上层混悬液弃去。7. 余下组织加入混合消化液10ml，37℃水浴震荡消化10min；吸取上层悬液至另一离心管中，加入适量FBS终止反应；剩余沉淀物再加消化液消化3-5次，直至组织块完全消化。8. 按1∶1加入含血清的培养基，中止酶反应，悬液过150目网筛去除较大的组织块。9. 收集全部中止后的消化液于离心管中，300g，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬细胞后计活细胞数。10. 调整细胞密度以1× 106个/ml 接种入的T-25培养瓶中，每瓶添加2ml细胞悬液。11. 培养瓶放置于37℃，5% CO2培养箱中静置40min后，吸弃上清液以去除未贴壁的非成纤维细胞和死细胞，再添加5ml完全培养基继续培养。除了上述的细胞分离方法以外，百欧博伟生物还有很多关于其他细胞的分离方法，想要学习的小伙伴可以来百欧博伟生物进行现场学习，如果想要其他原代分离培养方法，可在购买相应的细胞过程中，赠送该细胞的分离方法及培养条件，想要了解更多，打电话或咨询相关工作人员。中国微生物菌种查询网

                   致泻性大肠埃希氏菌的分类与致病性！一、大肠埃希氏菌的生物学意义大肠埃希氏菌的某些菌株具有致病性。该菌侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。人在感染大肠埃希氏菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。相对于大肠菌群和粪大肠菌群，大肠埃希氏菌与粪便污染的相关性zuihao，应用也最悠久。可作为粪便污染指标来评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。大肠埃希氏菌通称为大肠杆菌，存在于人类和动物肠道中，从对肠道的作用来看，可分为致病性与非致病性两大类。非致病性大肠杆菌是人类肠道中兼性厌氧正常菌群的优势菌种，一般情况下对人体无害，并可在肠道内合成维生素B和微生物K，产生的大肠菌群素能抑制痢疾杆菌等病原菌的生长，对人体有利。致病性大肠杆菌可致肠道感染，称为致泻性大肠埃希氏菌。二、分类致泻性大肠埃希氏菌是引起人体以腹泻症状为主的全球性疾病的常见病原菌,在我国引起感染性腹泻的发病率居所有传染病之首。致泻性大肠埃希氏菌分为：产肠毒素性大肠埃希菌ETEC、肠道侵袭性大肠埃希菌EIEC、肠道致病性大肠埃希菌EPEC、肠集聚性黏附性大肠埃希菌EAEC、产志贺毒素大肠埃希菌STEC（包括肠出血性大肠埃希菌EHEC）。三、致病性不同的致泻性大肠埃希菌引起的中毒，症状各不相同：①产肠毒素性大肠埃希菌ETEC引起的中毒主要症状是水样腹泻、腹痛、恶心、低热。每天腹泻可达8～12次。②肠道侵袭性大肠埃希菌EIEC的中毒症状与志贺菌引起的痢疾相似，发热、剧烈腹痛、水样腹泻、粪便中有少量粘液和血。③肠道致病性大肠埃希菌EPEC引起的中毒主要症状是发热、不适、呕吐、腹泻、粪便中有大量粘液但无血，有约20%患者由呼吸道症状，感染的症状通常比较严重。④肠集聚性黏附性大肠埃希菌EAEC引起的中毒症状成年人表现为中度腹泻，病程1～2天。婴幼儿多表现为2周以上的持续性腹泻。⑤产志贺毒素大肠埃希菌STEC-肠出血性大肠埃希菌EHEC引起的中毒，一般3～10天发病，常有突发性的腹部痉挛，有时类似于阑尾炎的疼痛。有的病人只有轻度腹泻；有些病人由水样便，转为血性腹泻，腹泻次数有时可达10多次，低热或不发热；许多病人同时有呼吸道症状。可发展为溶血性尿毒综合征和血栓性血小板减少性紫癜等多器官损害。老人和儿童患者死亡率很高。中国微生物菌种查询网可以定制制备常用4代定量微生物菌种（生孢梭菌，大肠埃希氏菌，白色念珠菌，铜绿假单胞菌，黑曲霉等）不同浓度如10E3，10E5,10E6浓度。为了满足更广用户的不同需求，单位代理引进国际知名质控菌种产品生产厂家：法国梅里埃MBL，BIOBALL定量产品，赛默飞REMEL科技定性定量商业产品。jingzhun接种量，即用型使用方便快捷，产品种类齐全并且提供产品COA分析证书。PS：Remel质控微生物；BIOBALL质控微生物；Microbiologis（MBL）质粒微生物，点击有链接详细介绍。欢迎您的咨询！

                植物病原物的分离、培养与接种方法！一、 目的和要求要求学会植物病原真菌、细菌、病毒和线虫的分离、培养和接种的一般方法，并掌握其基本原理；学习植物传染性病害研究中常用的接种方法，比较不同接种方法对病害发生发展过程与外界环境的差异。二、材料和用具新鲜的真菌和细菌病害材料（辣椒炭疽病果、水稻稻瘟病病叶片、水稻白叶枯病叶、烟草花叶病和番茄根结线虫病等）；番茄青枯菌/番茄、水稻稻瘟菌/水稻幼苗、水稻白叶枯病菌/稻苗、烟草花叶病/烟草  喷雾器、纱布、酒精灯、酒精缸、火柴、接种饵（针）、长镊子、玻棒、小木块、解剖刀、刀片、载玻片、蒸馏水（滴瓶）、漂白粉精片两研缸、漏斗、皱纹纸、毛笔、针、剪刀、三角瓶、试管、记号笔、标签、金刚砂、保湿罩、弥雾机。70％乙醇、0．1％升汞、灭菌培养皿（吸管）、灭菌水、灭菌培养基（PDA和NA）。三、内容与方法3.1 病原真菌的分离和培养 植物病原微生物分离和培养工作应该在专门的无菌操作室或超净工作台上进行，但是亦可在清洁和安静的房间中进行。工作时在桌面上铺一块沾湿的纱布，所有工作用具放在湿纱布上，尽量少在室内走动，减少空气流动，以减少污染。选用的分离材料应尽量新鲜，减少腐生菌混入的机会。从受病组织边缘靠近健全组织的部分分离，可减少污染，同时这部分病原生物处于较为活动的状态，生长快，易分离成功。植物病原真菌的分离有组织分离法和稀释分离法两种，在病组织上产生大量孢子的病原真菌以及病原细菌的分离都可用稀释分离法。3．1．1 组织分离法 按照以下步骤进行：（1）培养皿准备：取灭菌培养皿一个，置于湿纱布上，在皿盖上注明分离日期、材料和分离人姓名。  （2）培养皿平板制备：用无菌操作法向培养皿中加入25％乳酸1－2滴（减少细菌污染），然后将熔化而冷至45℃左右的马铃薯琼胶培养基一管倒入培养皿中，轻轻摇动使成平面（分离细菌时则不能加乳酸）。  （3）切取病组织小块（叶斑病类）：取新鲜病叶，选择典型的单个病斑，用剪刀或解剖刀从病斑边缘切取小块（每边长约3―5毫米）病组织数块。（4）表面消毒：将病组织小块放入70％酒精中浸数秒钟后，按无菌操作法将病组织移入0.1％升汞液中消毒1―3分钟，然后放入灭菌水中连续漂洗三次。也可用漂白粉精片（1－2片），研磨后加灭菌水10ml，消毒5―10分钟。果实、块茎和枝秆等组织内部的病原菌可用脱脂棉蘸70％酒精涂拭病部表面，通过火焰烧去表面酒精，重复进行2－3次，达到表面消毒。  （5）用无菌操作法将病组织小块移至培养基平面上，每培养皿内可放4－5块。  （6）翻转培养皿，放入26－28℃恒温箱内培养，3―4日后观察结果。  （7）用无菌操作法自培养皿中选择菌落，挑取少许菌丝及孢子，在显微镜下观察。如系玉米小斑病菌孢子，即可用接种针自菌落边缘挑取小块菌落移入斜面培养基，在26－28℃恒温箱内培养，3－4天后，观察菌落生长情况，如无杂菌生长，即得玉米小斑病菌纯菌种，可置于冰箱中保存。如有杂菌生长，需再次分离获纯培养后，方可移入斜面保存。3．1．2 稀释分离法以棉花红腐病果为材料，按照下列步骤分离：（1）取灭菌培养皿三个，平放在湿纱布上，分别编号（1 、2、3），并注明日期、分离材料及分离者姓名。  （2）用灭菌吸管吸取灭菌水，在每一培养皿中分别注入0．5－1．0ml灭菌水。  （3）用灭菌接种饵从棉花红腐病果上刮取病菌孢子，放入培养皿内的水滴中，配成孢子悬浮液。  （4）用接种饵蘸一饵孢子悬浮液，与diyi个培养皿中的灭菌水混合，再从diyi个培养皿移三饵孢子悬浮液到第二个培养皿中，混合后再移三饵孢子悬浮液到第三个培养皿中。每次移菌前，接种饵均需在酒精灯火焰上烧过。 ˇ（5）将三管熔化并冷却到45℃左右的培养基，分别倒在三个培养皿中，摇动使培养基与稀释的菌液充分混匀，平置冷却凝固。  （6）将培养皿翻转后放入恒温箱（26－28℃）中培养，3－4天后观察菌落生长情况。  （7）获纯培养后，从菌落边缘挑取菌丝块移入斜面培养3-4天后，放入冰箱保存。  要获得纯净培养，一般需经3次稀释分离（重复3次），当培养物高度一致时才能作为纯培养的菌种保存。3．1．3 真菌的培养植物病原真菌多为好气性真菌，在有丰富营养的培养基上能很好地生长，但它们对温度的要求差异较大，绝大多数的真菌可以在20－30℃间正常生长，但少数要在15－20℃间才能正常生长，少数真菌孢子必须在5℃左右的低温下才能萌发。3.2 病原细菌的分离与培养病原细菌的分离方法以稀释分离法和划线分离法为最常用。在进行分离之前，首先应对病材料作细菌学初步诊断，即经过镜检确认有喷菌现象以后，才对该病组织作分离（少数bingli无喷菌现象）。3．2．1 稀释分离法稀释分离法是最经典的标准分离法，方法与真菌孢子稀释分离法基本相同，但要将病组织放在灭菌水中用灭菌玻棒研碎并让组织碎块在水中浸泡30－60分钟（在灭菌培养皿中研碎并浸泡），让细菌充分释放到灭菌水中成为细菌悬浮液再进行稀释分离。  3．2．2 划线分离法除去上述稀释分离法以外，较为方便的方法是划线分离法，步骤如下：（1）预先把NA培养基倒在培养皿中，凝成平板后，翻转放在30℃恒温箱中4－6小时，使表面没有水滴凝结。  （2）配制细菌悬浮液。  （3）在培养皿盖上写上分离材料名称、日期和姓名。  用灭菌的接种饵蘸取细菌悬浮液在干燥的培养基平板表面按图17所示方法划线。划过diyi次线后的接种环应放在火焰上烧过，冷却后直接在diyi次划线的末端向另一方向划线，同上，灭菌后再划第三、第四次线。  （4）翻转培养皿，放在26－28℃恒温箱中培养，2－3天后观察有无细菌生长，在哪些地方有单菌落生长出来（C）。  （5）仔细挑取细菌的单菌落移至试管斜面，同时再用灭菌水把单菌落细菌稀释成悬浮液作第二次划线分离。如两次划线分离所得菌落形态特征都一致，并与典型菌落特征相符，即表明已获得纯培养，zuihao要经过连续三次单菌落的分离。确保纯化。3．2．3细菌的培养病原细菌的培养条件因种类不同而略异。棒杆菌属细菌的生长适温较低（20－23℃）；假单胞菌中的青枯菌类则要求在较高的温度（35℃）下才能良好地发育；软腐型欧氏杆菌在厌氧条件下生长比好气条件下生长更快，致病力更强。3.3植物病毒分离和纯化植物病毒的分离和纯化比较特殊，由于病毒是专性寄生物，因此不能离开活的寄主。操作时虽然不需无菌操作，但仍必须实行严格的隔离以防止污染和混杂。 ′以有花叶病症状的烟草病叶为材料，进行病毒的“单斑分离”与纯化，步骤如下：  （1）首先用肥皂水洗净双手，特别注意刷去指甲内的污染物。  （2）采摘半片病叶放在消过毒的研钵中，加磷酸缓冲液（0.01M PBS，pH7．2）  1ml（5－6滴），研碎。  （3）在供接种用的心叶烟幼苗和苋色藜幼苗健苗顶部平展叶片上，撒少许金刚砂（600目／英寸2），然后用手指蘸取病汁液轻轻涂抹叶片（摩擦接种），写好标签牌，插在盆钵中。  （4）3分钟后用自来水将接种叶冲洗干净，放在温室中培养。  （5）2-3天后在接种叶上即出现坏死性枯斑，初为褪绿，后为黄白色。  （6）剪下单个枯斑，再按上述方法接种健康的心叶烟和苋色藜幼苗，使它再次出现形状大小、色泽均一致的枯斑，即为已经分离纯化的病毒标样。材料经快速干燥后可置低温下保存。  （7）将此枯斑病叶分别接种到黄瓜或普通烟草上，又可得到系统的花叶症状。不同的病毒接种在不同的寄主植物上会变现不同的症状。选用这些特定寄主植物作为鉴别寄主，进行病毒和病毒病害的诊断，可做出初步鉴定。将病组织汁液接种在枯斑寄主上，根据枯斑的特征，还可进一步区分病毒的种类，并作为病毒定量的一种简易方法。3.4 植物病原线虫的分离大部分植物寄生线虫只为害根部，有些还是根内寄生的，少数可为害地上茎、叶、花果。从有病植物材料中和土壤中分离线虫的方法很多，它们各有优缺点，常用的方法有漏斗分离法、浅盘分离法、漂浮分离法等。3．4．1 贝曼（Baermann）漏斗分离法操作简单、方便，适于分离植物材料和土壤中较为活跃的线虫。一般是选用一只口径为10－15cm塑料漏斗，下接一段长约5－10crn带有弹簧夹的乳胶管，漏斗放在木架或铁环上，漏斗内盛满清水，病植物材料或土样用双层纱布包扎好，慢慢浸入清水中，浸泡24小时后样品中线虫因喜水而从材料中游到水中，并因自身重量逐渐沉落到漏斗底部的橡皮管中，慢慢放出5ml管中水祥于离心管中，在1500转／分的离心机中离心3分钟，倾去上层水液，将底部沉淀物连同线虫一起倒在表面皿或计数皿中，在解剖镜下计数，然后将线虫挑至装有固定液的小玻管中备用。样品材料也可用一网筛搁在漏斗口上，使水面能淹没材料，线虫也可以游离出来并沉降到底部。3．4．2 浅盘分离法 用两只不锈钢浅套放在一起，上面一只称筛盘，它的底部是筛网（10目／英寸2），下面一只浅盘略大些是盛水盘（底盘）。将特制的线虫滤纸放在筛盘中用水淋湿，上面再放一层餐巾纸，供分离的土样或材料放在餐巾纸上，在两盘之间隙缝中加水浸没材料，在室温（20℃以上）下保持8天，材料中的线虫大都能穿过滤纸而进入托盘水中，收集浅盘中的水样通过二个小筛子（上层为25目粗筛，下层为400目细筛）。线虫大多集中在下层筛上，可用小水流冲洗到计数皿中。  浅盘法比漏斗法好，它可以分离到较多的活虫，而且泥沙等杂物较少。3．4．3 胞囊漂浮器分离法（Fenwick－Oostenbrink改良漂浮法）对于没有活动能力的线虫胞囊可采用Fenwick漂浮筒漂浮的方法分离，筒内先盛满清水，把10.0g风干土样放在顶筛中。用强水流冲洗土样，使全部淋入筒内，再用细水流从顶筛加入，使土粒等杂物沉入筒底，胞囊和草渣等则逐渐漂浮起来沿倚口倾斜的环槽流到承接筛中（100目）,先把筛中胞囊等沈入烧杯中，再倒入铺有滤纸的漏斗中，收集滤纸上的胞褒。  在解剖镜或扩大镜下，学习用镊子、毛针、竹针、毛笔等工具从水样或滤纸上挑取线虫。3.5 拌种法和浸种法 种子传染的病害可采用这两种接种方法。拌种法是将病菌的悬浮液或孢子粉拌和在植物种子上，然后播种诱发病害。小麦腥黑穗病可采用此法接种。浸种法是用孢子或细菌悬浮液浸种后播种，大麦坚黑穗病、棉花炭疽病和菜豆疫病可用此法接种。3.6 土壤接种法 由粪肥、土壤传染的病害可以采用拌土接种法。土壤接种法是将人工培养的病菌或将带菌的植物粉碎，在播种前或播种时施于土壤中，然后播种。也可先开沟，沟底撒－层病残体或菌液，将种子播在病残体上，再盖土。  有的病原物能在土壤中长期存活（土壤习居菌），把带菌土攘或带有线虫接种体的土样接种到无菌（虫）土中，再栽种植物，就可以使植物感染，如棉花枯黄萎病、小麦土传花叶病毒和一些线虫病等。对于青枯菌可以采用土壤灌根的方法。3.7喷雾法和喷撒法 这两种方法适用于气流和雨水传染的病害，大部分细菌病害和真菌叶部病都可采用喷雾接种，如水稻细菌性条斑病、玉米大斑病、小斑病。将接种用的病菌配成一定浓度的悬浮液，用喷雾器喷洒在待接种的植物体上，在一定的温度下保湿24小时，诱发病害。3.8伤口接种 除了植物病毒接种时常用的摩擦接种属伤口接种之外，植物病原细菌、病原真菌也常用伤口接种法。许多由伤口侵入，导致果实、块根、块茎等腐烂的病害均可采用。先将接种用的瓜果等洗净，用70％酒精表面消毒，再用灭菌的接种针或灭菌的小刀刺伤或切伤接种植物，滴上病菌悬浮液或塞入菌丝块，用湿脱脂棉覆盖接种处保湿。  水稻白叶枯病的伤口接种常用剪叶接种和针刺接种法。先通过火焰或用75％酒精消毒解剖剪，将剪刀在白叶枯病菌悬浮液中浸一下，使剪刀的刃口蘸满菌液，再将要接种的稻叶叶尖剪去。接种处不必保湿，定期观察病情。细菌悬浮液的浓度为108cfu／ml。3.9 介体接种3．9．1 菟丝子接种 在温室中研究病毒、菌原体等病害广为采用的一种接种方法，先让菟丝子侵染病株，待建立寄生关系或进一步伸长以后，再让病株上的菟丝子侵染健株，使病害通过菟丝子接种传播到健康植株上。3．9．2 蚜虫及其他介体昆虫接种 详见植物病毒的传染方法。所有的接种实验都应设有对照，即用清水代替病菌，用同样的方法接种，观察发病与否。  分别用土壤灌根法接种番茄青枯菌、用喷雾接种法接种水稻稻瘟病菌、用剪叶接种的方法接种水稻白叶枯病菌，注意针对不同病害接种后培养的条件，观察不同病害症状出现的过程。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  微生物培养基制备的基本方法和注意事项！百欧博伟生物 在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。1、新购的玻璃器皿除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。2、用过的玻璃器皿peiyangji制备技术玻璃皿图凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。二、类型在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，划分为若干类型。1、根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分，可分为天然、合成和半合成培养基。１）天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。用这些物质配成虽然不能确切知道它的化学成分，但一般来讲，营养是比较丰富的，微生物生长旺盛，而且来源广泛，配制方便，所以较为常用，尤其适合于配制实验室常用的培养基。稳定性常受生产厂或批号等因素的影响。２）合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养基，它是用已知化学成分的化学药品配制而成。这类培养基化学成分精确、重复性强，但价格昂贵，而微生物又生长缓慢，所以它只适用于做一些科学研究，例如营养、代谢的研究。３）在合成培养基中，加入某种或几种天然成分；或者在天然培养基中，加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基。例如马铃薯蔗糖培养基等。这种培养基在生产实践和实验室中使用zui多。２、根据物理状态来区分，可以分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。１）液体培养基 所配制的是液态的，其中的成分基本上溶于水，没有明显的固形物，液体培养基营养成分分布均匀，易于控制微生物的生长代谢状态。２）在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶等，以琼脂最为常用，在实际中用得十分广泛。在实验室中，它被用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等。３）如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中，就制成了半固体。以琼脂为例，它的用量在0.2~1%之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。３、根据用途来区分，可分为选择、增殖和鉴别培养基。１）在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的称之为选择培养基。如链霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生长；而制霉菌素、灰黄霉素等能抑制真核微生物的生长；结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长等。２） 在自然界中，不同种的微生物常生活在一起，为了分离我们所需要的微生物，在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，称为增殖培养基，常用于菌种筛选和选择增菌中。在某种程度上讲，增殖培养基也是一种选择培养基。３）在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助开快速鉴别某种微生物，称之为鉴别培养基。例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝就是一种常用的鉴别性培养基。有些培养基是具有选择和鉴别双重作用。例如食品检验中常用的麦康凯培养基是一例。它含有胆盐、乳糖和中性红。胆盐具有抑制肠道菌以外的细菌的作用（选择性），乳糖和中性红（指示剂）能帮助区别乳糖发酵肠道菌（如大肠杆菌）和不能发酵乳糖的肠道致病菌（如沙门氏菌和志贺氏菌）。另外，根据营养成分是否“完全”，可以分为基本、完全和补充培养基，这类术语主要是用在微生物遗传学中。根据生产的目的来区分，可以分为种子培养基和发酵培养基。还有专门用于培养病毒等寄生微生物的活组织培养基，如鸡胚等；专门用于培养自养微生物的无机盐培养基等。三、制备的基本方法和注意事项１、配方的选定同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源。２、的制备记录每次制备均应有记录，包括名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。３、成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，zui好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方面军做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。４、各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。zui好使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化，如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，直至煮沸。如为琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，zui后必须加以补足。５、pH的初步调正因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，各成分完全溶解后，应进行pH的初步调正。例如，牛肉浸液约可降低pH0.2，而肠浸液pH却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握最终pH，保证培养基的质量。pH调整后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。６、过滤澄清液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成折扇或漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55~60°C的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/2，每1000ml培养基加入1~2个鸡蛋的蛋白，强力振摇3~5分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121°C加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。７、分装应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时zui好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时，分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于彻底灭菌。每批应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中，随该批同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。８、灭菌一般培养基可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。某些畏热成分，如糖类，应另行配成20%或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50°C左右的培养基中。琼脂斜面应在灭菌后立即取出，冷至55℃-60℃时，摆置成适当斜面，待其自然凝固。９、质量测试制备好以后，应仔细检查一遍，如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24~48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。10、保存应存放于冷暗处，zui好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板不宜超过3天。每批产品均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用！微生态环境对养殖生物排泄物、残饵的分解、转化、水质因子的调节有重要作用。它的正常与否决定水质的优劣，进而影响水产动物的健康。应用益生菌制成微生态制剂，是近年发展起来的一种新型绿色饲料添加剂。芽孢杆菌由于其稳定性好、抗逆性强、存活率高等比其它益生菌具有更多的优点，因而芽孢杆菌的研究开发与应用受到人们广泛重视。本文针对芽孢杆菌在水产养殖作为饲料添加剂和在水质调节剂的应用机理进行综述。一、芽孢杆菌概述芽孢杆菌（Baciuus）为革兰氏染色阳性，是普遍存在的一类好氧性细菌，多属芽孢杆菌属。在生长后期能形成芽孢(内生孢子)的杆菌或球菌。芽孢是休眠体，不是繁殖体。尽人多数足一个菌体仅肜成一个芽孢。芽孢位于菌体内，山核心、皮层、芽孢壳和外壁组成。核心是芽孢的原生质休，内含DNA、RNA、可能与DNA相联系的特异芽孢蛋白质以及合成蛋白质和产生能量的系统。此外，还有大量的吡啶二羧酸钙布满整个芽孢。皮层处于核心和芽孢壳之间，舍有丰富的肽聚糖。芽孢壳主要由蛋白质组成，此外，还有少量的碳水化合物和类脂类，可能还有大量的磷。最外层是外壁，其主要成分是蛋白质、一定量的葡萄糖和类脂。芽孢杆菌在制剂中以内生孢子的形式存在，孢子进进肠道后，在肠道上部能迅速复活并分泌活性很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶，有助于降解植物性饲料中某些复杂的碳水化合物，拮抗肠道内的氧气，造成厌氧环境。肠道原籍上风菌大多属厌氧菌，而有害菌和外来菌多为需氧菌，从而有利于维持肠道生态平衡。该类菌无毒性，能分泌出活性强的蛋白酶等多种酶类，在其生命过程中又能以孢子体形式存在，具有耐高温、耐盐碱、耐挤压、饲料加工对其损伤小等特性，易于生产和保存，作为饲料微生态添加剂和水体微生态调控剂都有广阔远景。当前芽孢杆菌制成的产品有促菌生（蜡样芽孢杆菌）、整肠生（地衣芽孢杆菌）、抑菌生（枯草芽孢杆菌）、乳康生（含蜡样芽孢杆菌）。二、芽孢杆菌的特性1.芽孢杆菌的抗逆性芽孢是芽孢杆菌特有的结构，其主要特点是抗性强，对高湍、紫外线、干燥、辐射等有毒化学物质有较强的抵抗力。由于芽孢具有厚而含水量低的多层结构，所以折光性强、对染料不u88致富网易着色。在孢子状念下稳定性好，耐氧化，而寸挤压，耐高温，如枯草芽孢杆菌一般在95℃下5分钟，89%能保持存活；耐酸碱，在酸性胃环境中能保持活性，可以耐唾液和胆汁的攻击，加工制粒后，9 5%的芽孢杆菌在水产动物体内可以萌投成营养体。2.芽孢杆菌的营养特性⑴产生多种消化酶：这是其进步水产动物生长性能的一个重要因素。Collington报道枯草芽孢杆菌能产生彩种消化酶，包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、糖化酶。帮助动物消化吸收营养物质，同时还能产生部分果胶酶、纤维素酶等，降解饲料中的果胶和纤维素等，其中很多是动物机体本身不能分解的酶。芽孢杆菌在生长繁殖过程中还能产生植酸酶，促使动物对植酸磷的利用和脂肪的消化吸收；产生的氨基氧化酶及分解硫化氢的酶类，可将吲哚类氧化成无毒、无害的物质，从而降低养殖环境中氦氮、亚硝酸盐、硫化氢等有毒有害物质的浓度，创造优质的养殖环境。⑵产生多种营养物质：芽孢杆菌能合成多种维生素，如尼克酸、叶酸、烟酸，维生素B1、B2、B6、B12等，促进机体对蛋白质的消化、吸收。凝聚芽孢杆菌、芽孢乳杆菌等菌株能产生乳酸，可进步动物对钙、磷、铁的利用，促进维生素D的吸收。此外，芽孢杆菌在生长过程中能产生乙酸、丙酸、丁酸等挥发悱脂肪酸，这些酸类能够降低动物肠道的pH值，有效抑制病原菌的生长，为乳酸菌的生长刨造条件，其巾，丙酸还能参与三羧酸循环，为动物新陈代谢提供能量。⑶增强水产动物免疫性能：芽孢杆菌通过产生抗体和进步嗜菌作用等刺激免疫，激发体液免疫和细胞免疫，使动物免疫活性增强。三、芽孢杆菌的作用1.拮抗致病微生物大量的研究表明，益生芽孢杆菌具有拮抗肠道病原细菌、维持和调节肠道微生态平衡的作用。2.改烧瑰内外生态环境饲喂芽孢杆菌后，能明显降低肠道大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌的数目，使机体内的益生菌增加而潜伏的致病菌减少，因而排泄物、分泌物中的益生菌数目增多，致病性微生物减少，从而净化了体内外环境，减少疾病的发生。3.增强动物体的免疫功能芽孢杆菌能通过产生抗体和进步噬菌作用等刺激免疫，激发体液免疫和细胞免疫，使动物免疫活性增强。有资料表明芽孢杆菌可使动物血清中的中性粒细胞吞噬率进步17%。4.产生多种消化酶芽孢杆菌能进步动物生产性能，是其产生多种消化酶的一个重要性能方面体现。Collington报道枯草芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时还具有降解饲料中复杂碳水化合物的酶，如降解果胶、葡聚糖、纤维素等酶，其中很多是动物本身不具有的酶。5.产生多种营养物质凝聚芽孢杆菌、芽孢乳杆菌等菌株能产生乳酸，可进步动物对钙、磷、铁的利用，促进维生素D的吸收。纳芽菜孢杆菌不仅具有分解蛋白质、碳水化合物、脂肪等大分子物质的性能，使发酵产品中富含氨基酸、有机酸、寡糖等多种易被吸收的成分，而且在纳芽菜孢杆菌发酵的纳豆中还发现一些生理活性物质，使其具有多种保健功能。四、芽孢杆菌在水产中的应用在水产上运用的芽孢杆菌主要是枯草芽孢杆致富网菌，其成杆状，宽度0.5～0.8微米，长度1.6～4.0微米。在水体或饲料中添加枯草芽孢杆菌制剂，可以有效抑制或杀灭水体中或养殖生物体内的某些有害致病菌，并且能增强有益菌的群落，而达到防治水产疾病的目的。芽孢杆菌具有很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性，可降解饲料中的某些抗营养因子，饲料转化率进步8%以上，促进鱼类生长。1.芽孢杆菌用于净化水质芽孢杆菌可以降低水体中硝酸盐、亚硝酸盐的含量，从而起到改善水质的作用。芽孢杆菌还可以通过消灭病原体或减少病原体的影响来改善水质。实验发现添加芽孢杆菌控制弧菌等致病菌比加抗生素更好。芽孢杆菌往往是复合微生态制剂的shouxuan菌株。2.芽孢杆菌用于饲料防霉在对芽孢杆菌B13（Bacillus.sp.B13）抑真菌作用的测定实验中发现：芽孢杆菌B13对各供试细菌均有一定的抑制作用。芽孢杆菌B13对白地霉和黑曲霉的抑制效果好，对黄曲霉、啤酒酵母和根霉的抑制效果次之，对青霉的抑制较差。可见，适当在粮食、饲料及其制品中添加芽孢杆菌B13，能够起到防霉作用，延长仓储时间。五、益生芽孢杆菌使用留意事项1.芽孢杆菌的菌株特异性同是蜡样芽孢杆菌，有的菌株对人畜有害，有的菌株有益。所以生产前必须shouxian确定其菌株特异性。所选的菌种，要经过严格驯化，使之更有利于生产。2.芽孢杆菌的使用时间益生芽孢杆菌使用时应具有持续性。应用时间要早，从幼鱼开始使用，以保证有益菌（芽孢杆菌）优先定植。就目前的饲养条件而言，将其作为一种生态调节剂用于病后的康复期，纠正菌群失调，治疗消化不良等更为实际。而窃冬芽孢杆菌在营养水平较低时作用更明显。3.芽孢杆菌的使用方法益生素在水产养殖中的使用方法有：①注射或浸浴生物体；②作为饲料添加剂；③直接加进水环境。另外芽孢杆菌复合添加，性能更加稳定；与其它益生菌混合应用时效果更好。芽孢杆菌在保存期间以芽孢的形式存在，养殖户在使用前，可用配制好的培养基活化、增殖，然后泼洒，可进步使用效果。由于大多数芽孢杆菌属好氧菌，在施用芽孢杆菌制剂时要留意保持水体中的溶氧量，以更好地发挥其作用。中国微生物菌种查询网可以定制制备常用4代定量微生物菌种（生孢梭菌，大肠埃希氏菌，白色念珠菌，铜绿假单胞菌，黑曲霉等）不同浓度如10E3，10E5,10E6浓度。为了满足更广用户的不同需求，单位代理引进国际知名质控菌种产品生产厂家：法国梅里埃MBL，BIOBALL定量产品，赛默飞REMEL科技定性定量商业产品。接种量，即用型使用方便快捷，产品种类齐全并且提供产品COA分析证书。PS：Remel质控微生物；BIOBALL质控微生物；Microbiologis（MBL）质粒微生物，点击有链接详细介绍。欢迎您的咨询！

             你知道嗜热菌为什么能在高温下存活吗？嗜热菌为什么在高温下仍然能够不失活性并进行正常生长呢？目前的研究工作认为有如下几方面的原因：（1）类脂的敏感作用　　嗜热菌细胞质膜的化学成分，随环境温度的升高不仅类脂总含量增加，而且细胞中的高熔点饱和脂肪酸也增加，即长链饱和脂肪酸增加，不饱和脂肪酸减少。脂肪酸熔点的高低和热稳定性呈如下顺序：直链饱和脂肪酸＞带支链饱和脂肪酸＞不饱和脂肪酸。　　另外，饱和脂肪酸比不饱和脂肪酸能形成更多的疏水键，从而进一步增加膜的稳定性。　　众所周知，细胞膜由双层类脂构成，但古细菌中嗜热菌其双层类脂进行了共价交联，成为两面都是水基的单层脂（如图①所示），并且保持了完整的疏水层，这种结沟，极大地增强了其耐热性。（2）重要代谢产物的迅速再合成　　嗜热菌中tRNA的周转率大于中温菌的周转率；并且，其DNA中的G－C含量高于中温菌的G－C含量。一般中温菌的G－C含量为44.9mol％，而嗜热芽饱杆菌DNA中的G－C含量为53.2mol％。G－C含量越高，DNA分子的解链温度也越高。嗜热菌在高温下不但热稳定性高，而且代谢快，其速率等于或大于热不稳定代谢物的转化，因此，重要代谢产物能够迅速再合成。（3）蛋白质的热稳定性　　目前科学家已从嗜热菌中分离出多种蛋白质，其中包括许多重要的酶类，它们的热稳定性高于中温型细菌的类似蛋白，而且，在细胞内生活状况下二这种差别更加明显。也就是说嗜热菌蛋白质的热稳定性取决于两个方面：一方面，其蛋白质的天然结构更加稳定；另一方面，嗜热菌细胞内存在着促进热稳定性的因素。买验证明，蛋白质一级结构中个别氨基酸的改变，就可导致其热稳定性的改变。嗜热菌蛋白质天然结构的稳定性，可能就是由于其中个别氨基酸的细微改变而引起的，至于究竟有哪些改变，还有待科学家的进一步研究。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  百欧博伟生物结核杆菌知识解析！结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。估计世界人口中1/3感染结核分枝杆菌。据WHO报道，每年约有800万新bingli发生，至少有300万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300人/10万，居各种疾病死亡原因之首，建国后人民生活水平提高，卫生状态改善，特别是开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，结核病的发病率和死亡率大为降低。但应注意，世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势。 结核杆菌的致病性：结核分枝杆菌不产生内、外毒素。其致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖引起的炎症，菌体成分和代谢物质的毒性以及机体对菌体成分产生的免疫损伤有关。结核分枝杆菌可通过呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起肺结核为最多。因肠道中有大量正常菌群寄居，结核分枝杆菌必须通过竞争才能生存并和易感细胞粘附。肺泡中无正常菌群，结核分枝杆菌可通过飞沫微滴或含菌尘埃的吸入，故肺结核较为多见。 1.肺部感染　由于感染菌的毒力、数量、机体的免疫状态不同，肺结核可有以下两类表现。 　　(1)原发感染：多发生于儿童。肺泡中有大量巨噬细胞，少数活的结核分枝杆菌进入肺泡即被巨噬细胞吞噬。由于该菌有大量脂质，可抵抗溶菌酶而继续繁殖，使巨噬细胞遭受破坏，释放出的大量菌在肺泡内引起炎症，称为原发灶。初次感染的机体因缺乏特异性免疫，结核分枝杆菌常经淋巴管到达肺门淋巴结，引起肺门淋巴结肿大，称原发综合征。此时，可有少量结核分枝杆菌进入血液，向全身扩散，但不一定有明显症状(称隐性菌血症)；与此同时灶内巨噬细胞将特异性抗原递呈给周围淋巴细胞。感染3～6周，机体产生特异性细胞免疫，同时也出现超敏反应。病灶中结核分枝杆菌细胞壁磷脂，一方面刺激巨噬细胞转化为上皮样细胞，后者相互融合或经核分裂形成多核巨细胞(即朗罕巨细胞)，另一方面抑制蛋白酶对组织的溶解，使病灶组织溶解不完全，产生干酪样坏死，周围包着上皮样细胞，外有淋巴细胞、巨噬细胞和成纤维细胞，形成结核结节(即结核肉芽肿)是结核的典型病理特征。感染后约5% 可发展为活动性肺结核，其中少数患者因免疫低下，可经血和淋巴系统，播散至骨、关节、肾、脑膜及其他部位引起相应的结核病。90% 以上的原发感染形成纤维化或钙化，不治而愈，但病灶内常仍有一定量的结核分枝杆菌长期潜伏，不但能刺激机体产生免疫也可成为日后内源性感染的渊源。 　　(2)原发后感染：病灶亦以肺部为多见。病菌可以是外来的(外源性感染)或原来潜伏在病灶内(内源性感染)。由于机体已有特异性细胞免疫，因此原发后感染的特点是病灶多局限，一般不累及邻近的淋巴结，被纤维素包围的干酪样坏死灶可钙化而痊愈。若干酪样结节破溃，排入邻近支气管，则可形成空洞并释放大量结核分枝杆菌至痰中。　2.肺外感染　部分患者结核分枝杆菌可进入血液循环引起肺内、外播散，如脑、肾结核，痰菌被嚥入消化道也可引起肠结核、结核性腹膜炎等。国外有报道332例血标本仅2例培养出结核分枝杆菌，但将此标本注入豚鼠皮下 12% 感染结核。说明结核分枝杆菌在血中播散的大多不是一般细菌型，而是一种不易生长的L型。近年有不少肺外结核的新报道，结核分枝杆菌的检出率L型多于细菌型：如儿童结核性脑膜炎10例脑脊液培养，9例培养出L型，细菌型仅1例。老年性前列腺肥大排尿困难，术后病理切片抗酸菌L型占61.2%，无1例为典型抗酸杆菌。慢性前列腺炎常规培养阴性者，近1/3检出抗酸菌L型。不育症男子精液检查单见抗酸杆菌7%，单见抗酸L型14%, 电镜检查见L型吸附于精子头、尾。以结核分枝杆菌L型感染小鼠，73% 睾丸间质炎症中见有抗酸菌L型。 为更好服务社会，创造双方利益zuida化，我们特设了中国微生物菌种查询网专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

                    恶臭假单胞菌的发酵条件与应用！一、背景假单胞菌在自然界分布广泛，种类繁多，是植物根际土壤周围起生物防治功能的主要细菌类群。目前，世界各地对假单胞菌的应用研究有了大量的报道，涉及领域包括用于农业生物防治、植物生长调节、环境保护和医药开发等，其中，在生物防治与促植物生长方面的研究最为透彻、应用最为广泛，生物防治主要作用对象为植物病原真菌，如雪霉叶枯菌、镰刀菌、棉花黄萎病菌、炭疽菌等。另外，假单胞菌还可用于生物杀虫，已分离到的具有杀虫活性的次级代谢产物有oxazoles、鼠李糖脂等。假单胞菌对植物生长的促进作用主要通过其产生的植物生长激素。在环境保护方面，假单胞菌主要被用于化学农药的降解、废水处理、油污处理等。恶臭假单胞菌为人类和鱼类共患病原菌，是一种常见的环境污染菌，也是人 类咽部的正常菌群。偶可从人类感染标本中分离 出，是人类少见的条件致病菌，不为临床所重视。因此，对其临床流行病学与耐药性研究较少，但人体感染后该菌自溶可释放内毒素而使人体出现中毒症状，可造成多器官感染、败血症、感染性休克，甚至危及生命。随着近年来广谱抗菌药物和免疫抑制剂的广泛应用，恶臭假单胞菌的感染和耐药率均有上升趋势，且以耐药菌株感染多见。因此，对恶臭假单胞菌进行流行病学与耐药特征分析，对其防控具有重要指导意义。二、耐药性恶臭假单胞菌为无芽胞革兰阴性需氧细长杆菌，属假单胞菌属，一般认为是鱼类的一种病原菌及环境污染菌，对人体是一种少见的机会致病菌，未引起临床重视。但随着抗菌药物的广泛应用，此菌耐药性上升，当患者出现菌群失调、宿主免疫力低下或创伤后等情况时，导致其感染率上升。有研究在233株非发酵菌中，恶臭假单胞菌检出 48株，达 20.6％，尿中检出率也较高，常因表现为难治性感染时被临床发现。研究显示，从患者年龄看，以老年患者占同期检出假单胞菌属细菌百分率较高，基础疾病以终未期肾病检出恶臭假单胞菌占同期同类基础疾病检出的假单胞菌属细菌百分率zuigao，其次为严重软组织损伤、呼吸道慢性疾病伴有呼吸功能受损和再生障碍性贫血等免疫机能受损的患者，提示恶臭假单胞菌作为条伴致病菌，致病力弱，其感染多见于老年患者，主要是有侵入性操作伴有基础疾病的免疫机能低下患者，应引起临床注意。从标本来源看，主要来源 于深部痰（占57.1％），其次为中段尿（占27.47％）；中段尿标本检出恶臭假单胞菌占同期同类标本检出的假单胞菌属细菌的6.39％，占比zuigao，其次为深部痰、血和伤口标本，分别占4.12％、3.27％、2.52％。从科室分布看，主要来源于呼吸内科（占28.57％），其次为心血管内科 （占 13.19％）、肾内科（占10.99％）；以ICU检出恶臭假单胞菌占同期同科室检出的假单胞菌属细菌百分率 （6.92％）z高、其次为骨科（6.33％）、肾内科（6.21％）；提示该菌感染以伴有严重基础疾病患者引起呼吸道感染为主，其次为泌尿道、血流和伤口感染。从108例医院获得性肺部感染中分离出77株病原菌，其中恶臭假单胞菌检出16株，占20.78％，检出率占第三位，仅次于铜绿假单胞菌；对61例非铜绿假单菌败血症中检出恶臭假单胞菌6例，占 9.84％，表现为严重感染和多重耐药；此外手术切口感染和骨髓炎等也有报道。研究显示，恶臭假单胞菌除对氨曲南耐药率 ＞50％，不应作为治疗shouxuan抗菌药物。对庆大霉素、 亚胺培南、左氧氟沙星、头孢他啶、美罗培南、环丙沙星的耐药率分别均＜10％，对阿米卡星、多粘菌素的 耐药率为0，上述药物可作为临床治疗恶臭假单胞菌感染的可选抗菌药物。多粘菌素虽然耐药率低， 但副作用较大，临床上大多仅用于对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株。因此，应加以分级管理，限制滥用；而庆大霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、头孢他啶、 环丙沙星等可作为临床治疗恶臭假单胞菌优选抗菌药物。随着抗菌药物的广泛应用，恶臭假单胞菌的耐药性也明显上升，对亚胺培南和美罗培南等碳青霉烯类抗生素的耐药率分别为9.89％和7.69％，耐药率显现上升趋势，应引起临床重视，不应作为临床shouxuan抗菌药物；临床也已有报道耐药株感染形成难治性疾病，是危险信号，与其产生氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶，尤其是金属酶、消毒剂/磺胺耐药基因、整合子、外膜蛋白缺失和外排泵等有关。综上所述，一般认为恶臭假单胞菌致病力弱，未引起重视，但随着抗菌药物的广泛应用，此菌耐药性和感染率有上升趋势。当患者出现菌群失调、宿主免疫力低下或创伤后等免疫功能下降情况时，极易引起呼吸道、泌尿道、切口、伤口、骨髓、血流等部位恶臭假单胞菌感染，甚至形成难治感染性疾病、败血症和食品污染食物中毒等，且多认为与医院感染有关。三、发酵条件恶臭假单胞菌发酵条件的研究有试验选取对恶臭假单胞菌 A3菌株发酵有较大影响的温度、pH、碳源 、氮源、通气量等因素进 行试验。研究结果表明，不同的发酵条件下菌株的生长量和抗病毒效果均存在一定差异，其中菌株 A3的适宜发酵温度是 28。C，适宜发酵时问为 60～72h，以葡萄糖为适宜的碳源可以更好的促进菌量的生长和抗病毒物质的分泌，有机氮中酵母膏或蛋白胨对菌株的生长和抗病毒活性成分生成均能达到理想的效果，鱼粉则不能被 A3菌株很好的利用，pH7～l0是菌株适宜的发酵范围，偏酸不利于菌株的生长，250mL三角瓶以加 100mL培养基为菌株繁殖的最适通气量 。四、应用有研究从土样中分离到 D.氨基葡萄糖酸高产菌株 GNA5，综合 Biolog细菌自动鉴定系统与 16SrDNA序列分析结果，鉴定为恶臭假单胞菌GNA5，能耐受较高浓度底物 D-氨基葡萄糖，可发酵积累 D-氨基葡萄糖酸。初步优化培养基为(g/L)-D.氨基葡萄糖盐酸盐 30，葡萄糖 5，尿素 5，KH2PO42，MgSO4.7H2O0.5，CaCO3 10，pH7.0.菌株 GNA5在该培养基中发酵 48h可制备 25.5g/L的 D.氨基葡萄糖酸，摩尔转化率达 93.91％，自行筛选的P.putidaGNA5显示了底物转化能力强及产物分解能力弱的特点，具有进一步产业化开发的潜力。此外，还有研究利用被硝基苯污染的某河流底泥中分离出的一株高效降解硝基苯的恶臭假单胞菌，对硝基苯污染河水的修复进行了研究，考察了河水中的微生物、营养液的投加、温度和硝基苯浓度等因素降解菌生长和硝基的降解的影响。结果在未投加细菌的实验，硝基苯浓度的降低小于 5；在 5℃对河水灭菌和不灭菌的条件下，投加细菌均将 20mg/L的硝基苯在 56h内降解完全；25℃条件下营养液的投加使 20mg/L的硝基苯降解提前 4h.5℃ 则提前 16h；在 25℃不添加任何营养液的情况下，投加的细菌利用河水中的营养物质以 1.5mg/L·h的平均降解 速率将 160mg/L硝基苯完全降，为污染河流生物修复提供了可能。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   植物组织直接PCR试剂盒的应用！一、背景植物组织直接PCR试剂盒利用该试剂盒可以在15分钟内开始从叶子（或其他植物组织）进行基因组DNA的PCR。该方法不需要用液氮对植物组织进行冰冻、机械处理、纯化或者DNA的沉淀。该试剂盒也可以对提取的基因组DNA进行PCR扩增。PCR试剂含有染料，可以直接在电泳胶上样。0.5到0.7cm的植物叶片与提取液在95度孵育10分钟提取基因组DNA。加入同样体积的稀释液中和。然后可以取部分提取物进行PCR扩增。植物组织直接PCR试剂盒采用独特的溶液系统可以快速从植物叶片，种子等样品中提取微量基因组DNA，可以在15-20min内完成基因组DNA提取，提取的DNA可以马上用于PCR反应，完全不需要其他去蛋白，RNA或者次生代谢产物的过程，足够满足快速检测的需要，因此特别适合大规模基因检测。只需要微量的样品（5mg左右）就能得到可以用于100次左右的PCR反应模板，节约用户宝贵的实验材料，整个过程不需要有机溶剂抽提等步骤，节省您宝贵的实验时间，而且试剂中不含有毒物质，免去实验人员接触有毒试剂的危险。使用本试剂盒提取的基因组DNA可以直接用于PCR扩增实验，或者于4°C保存备用。本试剂盒中提供的2×Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。二、注意事项1.试剂盒只适合于多糖多酚含量低的植物叶片样本，如小麦、水稻、烟草、玉米、大豆、油菜等。不适合多糖多酚含量高的植物样本。2.建议使用新鲜采取的叶片组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。叶片组织以幼嫩为宜，若为成熟的叶片，避免使用叶片主脉部位组织。3.电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。4.建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率zuijia。三、应用用于水稻黄绿叶基因YGL8和YGL9的克隆与功能分析水稻(Oryza sativa L.)是世界上极其重要的粮食作物之一,同时也是单子叶植物研究的重要模式植物。水稻主要通过叶片中的叶绿体进行光合作用,合成碳水化合物并将其贮藏于稻谷中。叶色突变是植物中普遍存在的一种现象,一般来说,叶色突变体都涉及到光合色素含量的变化,因而直接体现在叶片颜色的变化上。光合色素的主要功能就是吸收光能和传递电子,因此,其在光合生物的光合过程中扮演着关键角色。大量的研究结果显示,叶色突变体是研究植物光合色素代谢、叶绿体结构功能、叶绿体发育、光合作用以及光形态建成的理想材料。本研究利用了经EMS(ethyl methane sulfonate)诱变籼稻恢复系缙恢10所产生的两个黄绿叶突变体,克隆了两个水稻黄绿叶基因YGL8和YGL9,并对其进行了功能互补验证,同时,对这两个基因的器官特性表达情况以及相关基因的表达情况进行了分析,也对这两个基因所编码的蛋白的结构和功能等进行了分析。克隆了包含LOC_Os03g03990在内的6812 bp野生型基因组序列(包括4373bp的编码区上游序列、1167 bp的编码区序列和1272 bp的编码区下游序列)构建功能互补载体并转化ygl9突变体愈伤组织,阳性转化植株的叶片全部恢复了正常绿色且其叶绿素和类胡萝卜素含量也达到野生型水平。这些结果证明,LOC_Os03g03990基因就是YGL9基因。YGL9蛋白结构分析系统进化树显示,YGL9属于光合生物所特有的cp SRP43蛋白家族。亚细胞定位结果表明,YGL9位于叶绿体。氨基酸序列比对结果显示,YGL9与拟南芥的cp SRP43的序列高度相似,其成熟蛋白可能也包含了3个CD(CD1-3)结构域和4个Ank(Ank1-4)结构域,这些结构域可能介导了蛋白与蛋白之间的相互作用。中国微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！

                枯草芽孢杆菌的作用！百欧博伟生物百欧博伟生物 现在有一种非常流行的新型肥料：微生物肥料，相信大家都用过。它的主要功效就是里面所含有的活性功能菌。这些功能菌多种多样，而其中大部分的生物菌肥里面都会添加“枯草芽孢杆菌”。枯草芽孢杆菌菌到底有什么优势，对作物有啥好处这么备受推崇？下面我们就来一起认识一下。枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种，广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名枯草芽孢杆菌。我们都知道，大自然中的菌无处不在，与人们的生活息息相关。有的是对人类有害的，有的是对人类有益的。枯草芽孢杆菌是作用于植物身上的，对植物生长有益的菌。它对环境没有污染，能产生多种抗菌素和酶，能使作物提高抗逆能力。它能使多种农作物表现出很好的防病和增产增收效果。它的特点是生产工艺简单，施用方便可以制成各种剂型，而且生长快，储存期长等优势，所以在菌肥上有了广泛的应用。它能分解并抑制土壤中病菌、害虫的滋生，为作物根系的健康生长提供良好的环境。作物根系发达了才能健康生长，这毫无疑问。枯草芽孢杆菌施入土壤后，和其它有害微生物争夺氧气和营养物质，形成空间占位，激活土壤中有益菌的数量与活性，在作物根系形成一道防护墙以保护根部不受有害菌的侵扰。所以枯草芽孢杆菌对于重茬病、根腐病、灰霉病等疾病防治效果好，能减轻作物病害的原因。它能够诱导植物产生抗性并促进植物生长，产生类似细胞分裂素、植物生长激素的物质，使植物不受病原菌的侵害。并诱导作物产生吲哚乙酸等物质，提高作物生长刺激素的水平，从而促进作物更加健康的生长繁殖。以上就是关于枯草芽孢杆菌的相关解析。其实在生物菌肥中常用菌还有地衣芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌，坚强芽孢杆菌等等，这些菌种有各种各样的功能，有的固氮，解磷解钾，提高肥效利用率，有的提高作物的抗病抗逆能力等等，不一而举。由于枯草芽孢杆菌的功能作用最为特殊，所以它在生物肥里面应用相对比较广泛。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                      微生物三点接种法的操作步骤！百欧博伟生物 接种是微生物技术中最基本的操作之一，接种技术在微生物的分离纯化、生理生化等试验中都非常重要。由于接种的目的不同，所采用的接种方式也不同，接种可分成斜面接种、穿刺接种和三点接种等。选择正确的接种方法，对于微生物的分离、纯化、增殖和鉴别都有重要作用。因接种方法的不同，常常采用不同的接种工具，如接种环、接种针、移液管和涂布棒等。在接种过程中，必须进行严格的无菌操作无菌操作一般是在无菌室或接种箱内进行，并靠近煤气灯（或酒精灯，一般用酒精喷灯）的火焰操作。有条件的也可在超净工作台上操作。微生物三点接种法：三点接种是为了获得单菌落所使用的方法之一，它是在培养皿上接种，即用接种针蘸取少量霉菌孢子，在浇有琼脂培养基的培养皿（俗称平板）上，以等边三角形的三点轻轻点一点，培养后即在此三点上长出菌落。其优点是:同种菌落有三个重复，同时在菌落彼此相接近的边缘常留有一条狭窄的空白地带此处菌丝生长稀疏，较透明，还分化出典型子实体，因此可以直接把培养皿放在低倍镜下观察，便于根据形态特点进行菌种的鉴定。具体操作如下：步骤一，倒平板，将已灭菌的琼脂培养基放在水浴锅上加热熔化，待冷却至45℃（手握不觉太烫为宜）后，用无菌操作法倒平板。步骤二，标明三点位置，待平板凝固后，在培养皿底部注明菌种、日期等，并以等边三角形的三个顶点标上记号。步骤三，右手拿接种针，先在火焰上烧红灭菌并在平板培养基的边缘冷却且蘸湿。步骤四，蘸取孢子，将灭过菌而且蘸湿的接种针伸入菌种管，用针尖蘸取少量霉菌孢子。步骤五，点接，以垂直法或水平法把接种针上的孢子点到预先标记好的部位，注意切勿刺破培养基。将培养皿倒置，于28℃恒温条件下培养，48h后观察生长情况。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  成纤维细胞生长因子的功能介绍！一、背景及概述成纤维细胞生长因子存在于机体多种组织中的一类多肽生长因子。其名称源于它对成纤维细胞的明显促分裂作用，主要以酸性和碱性两种形式存在。因它对肝素有很大的亲和力，故又称为肝素结合生长因子。它除对成纤维细胞的促分裂作用外，对平滑肌、软骨、角质细胞和周皮细胞都有刺激增殖作用。已经知道FGF由血管内皮细胞合成，储存于细胞基底膜和外基质中。二、功能成纤维细胞生长因子常在成熟的组织通过重新激活信号通路介导代谢功能、组织修复和再生。通路组分哺乳动物的成纤维细胞生长因子家族中含有22个基因，并通过成纤维细胞生长因子酪氨酸激酶受体传递信号。分泌的信号成纤维细胞生长因子基于生化功能、序列相似性和进化关系可以分为一些亚科：旁分泌的成纤维胞生长因子的5亚科，内泌的成纤维细胞生长因子的一个亚科，和细胞内成纤维细胞生长因子的一个亚科。成纤维细胞生长因子15和成纤维细胞生长因子19在脊椎动物中很可能是直系同源基因。该直系同源基因在啮齿类动物被命名为成纤维细胞生长因子15，在其他脊椎动物命名为成纤维细胞生长因子。文章称这些因子为成纤维细胞生长因子15/19。1）典型(分泌)的成纤维细胞生长因子成纤维细胞生长因子1亚科：该成纤维细胞生长因子1亚科由成纤维细胞生长因子1和成纤维细胞生长因子2组成。这些成纤维细胞生长因子缺少经典的分泌信号肽，但容易从细胞中通过细胞膜直接易位。易位的机理是认为它包含一个复杂的分子伴侣，其中包括突触结合蛋白1和钙结合蛋白S100A13。成纤维细胞生长因子1和成纤维细胞生长因子2在某些细胞的细胞核中也被发现。但成纤维细胞生长因子通过什么运输穿过细胞的机制知之甚少，但被认为是需要结合及活化细胞表面酪氨酸激酶成纤维细胞生长因子受体，酪氨酸激酶成纤维细胞生长因子受体需要将肝素作为辅因子与热休克蛋白90相互作用。有些研究已经表明，细胞外成纤维细胞生长因子1穿过细胞膜，通过胞液移动，并进入细核。成纤维细胞生长因子1的功能主要是调节细胞周期、细胞分化、存活和细胞凋亡成纤维细胞生长因子1是惟一的可激活所有的成纤维细胞生长因子受体剪接变异体的成纤维细胞生长因子。成纤维细胞生长因子4亚科：成纤维细胞生长因子4家族由成纤维细胞生长因子4，5，6组成。本亚科的所有成员是都有可裂解的N端信号肽的分泌蛋白，他们可作为细胞外蛋白质通过结合和激活成纤维细胞生长因子受体来调节生物学效应。这些成纤维细胞生长因子激活成纤维细胞生长因子受体1-3和成纤维细胞生长因子受体4的Ⅲc部剪接变异体。成纤维细胞生长因子7亚科：成纤维细胞生长因子7家族由成纤维细胞生长因子3，7，10，22组成。成纤维细胞生长因子3，7，10，22优先激活成纤维细胞生长因子受体2和成纤维细胞生长因子3和成纤维细胞生长因子10的Ⅲb期剪接变异体，也激活成纤维细胞生长因子受体1的Ⅲb期剪接变异体。成纤维细胞生长因子8亚科：该成纤维细胞生长因子8亚科由成纤维细胞生长因子8，17，18组成。这个亚科的成员含有1个N端裂解信号肽。这些成纤维细胞生长因子激活成纤维细胞生长因子受体1-3和成纤维细胞生长因子受体4的Ⅲc部剪接变异体。成纤维细胞生长因子9亚科：该成纤维细胞生长因子9亚家族包括成纤维细胞生长因子9，16，20。这亚科没有典型的N端信号肽，但含内部疏水序列，内部疏水序列的功能是作为一个非切割的信号，用于将信号传输到内质网。这亚科具有独特的活化性能，活化除了成纤维细胞生长因子受体4和成纤维细胞生长因子受体1，2，3的Ⅲc部剪接变体还活化成纤维细胞生长因子受体3的Ⅲb族剪接变体。成纤维细胞生长因子1，4，7，8，9，，15/19亚科细胞外成纤维细胞生长因子相关辅因子和结合蛋白硫酸乙酰肝素蛋白多糖Klotho家族蛋白和成纤维细胞生长因子结合蛋白成纤维细胞生长因子和其受体表达和传递信号的微小RNA调控在人类和其他哺乳动物中成纤维细胞生长因子和其受体遗传疾病的基因突变在癌中成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体的突变与表达细胞内成纤维细胞生长因子-成纤维细胞生长因子11亚科成纤维细胞生长因子15/19亚科(内分泌的成纤维细胞生长因子)：该亚科包括成纤维细胞生长因子15/19，21，23。这些成纤维细胞生长因子独特之处在于，他们主要功能是作为内分泌因子，因而被称为内分泌成纤维细胞生长因子。与典型的成纤维细胞生长因子相反，内分泌成纤维细胞生长因子与肝素结合具有非常低的亲和性。降低了的肝素结合亲和力有助于从细胞外基质释放并允许这些成纤维细胞生长因子起内分泌因素的作用。然而，内分泌成纤维细胞生长因子用一种成纤维细胞生长因子受体-依赖性的方式调节他们的生物学效应，但受体结合和激活不是肝素作为辅因子，内分泌成纤维细胞生长因子需要Klotho(可βKlotho和Klotho-LPH相关蛋白(KLPH)-这也被称为乳糖酶状的Klotho(LCTL)或γKlotho。αKlotho和βKlotho是有1个短的胞质域的2）细胞内的成纤维细胞生长因子-成纤维细胞生长因子11亚科该亚科(成纤维细胞生长因子11、12、13、14)也被称为iFGFs。iFGFs是不分泌的，并没有与指定的信号成纤维细胞生长因子受体相互作用。iFGFs与细胞质电压门控钠通道的羧基末端尾部(Nav)相互作用。在成熟的神经元和可兴奋细胞如心肌细胞的通道发育和离子门控特性中，这种相互作用可能有助于调节在轴突初始段(Nav)通道的亚细胞定位。3）成纤维细胞生长因子受体成纤维细胞生长因子受体的配体结合亲和力和特异性的决定因素免疫球蛋白样结构域Ⅱ和Ⅲ，这些结构域之间的连接区域调节这4个成纤维细胞生长因子受体蛋白质与配体结合特异性。位于免疫球蛋白样结构域Ⅰ和Ⅱ之间的免疫球蛋白样结构域Ⅰ和酸性氨基酸序列(酸性盒)被认为能够抑制配体结合。成纤维细胞生长因子受体1-3产生两个额外的免疫球蛋白样结构域Ⅲ的主要剪接变体，称为Ⅲb和Ⅲc。成纤维细胞生长因子受体b和成纤维细胞生长因子受体c剪接变体是配体结合特异性必不可少的决定因素。成纤维细胞生长因子受体4的免疫球蛋白样结构域Ⅲ是不可选地拼接。在其他3个的成纤维细胞生长因子受体间，成纤维细胞生长因子受体2的选择性剪接在功能是上是最重要的。成纤维细胞生长因子受体1拼接和配体结合特性与成纤维细胞生长因子受体2的相同，在发育过程中这两种受体常表现的功能是重复的。成纤维细胞生长因子受体的其他剪接变异体也已经被确定。例如，成纤维细胞生长因子受体1的cDNA编码免疫球蛋白样结构域Ⅱ和Ⅲ产生分泌成纤维细胞生长因子受体结合结构域，可以在功能上抑制成纤维细胞生长因子受体信号。一个成纤维细胞生长因子受体3剪接变异体的外显子8-10，其编码的跨膜(结构)域，已被确定在正常上皮细胞和某些肿瘤细胞系之间跳跃。此剪接变体产生一个分泌的蛋白，而且它可以与成纤维细胞生长因子配体结合并在功能上抑制成纤维细胞生长因子受体信号。分泌成纤维细胞生长因子的配体结合特异性已经与各种促有丝分裂试验和对成纤维细胞生长因子受体直接测量亲和力进行了比较，结果表明，成纤维细胞生长因子1是可激活所有受体剪接变异体的惟一配体。此分析还表明，成纤维细胞生长因子亚家族成员有着非常相似的结合受体的特异性。成纤维细胞生长因子受体1和成纤维细胞生长因子受体2的可供选择的剪接变异体的表达以组织特异性的方式进行调节。间质组织表达了成纤维细胞生长因子受体1和成纤维细胞生长因子受体2ⅢC部剪接变异体，它们通常是被成纤维细胞生长因子配体活化，并且成纤维细胞生长因子配体在上皮细胞中表达，如成纤维细胞生长因子4和成纤维细胞生长因子8亚科成员。相比之下，上皮组织表达成纤维细胞生长因子受体1和成纤维细胞生长因子受体2Ⅲb的剪接变异体与配体(这里的配体通常在间充组织中表达)结合，如成纤维细胞生长因子7亚科成员。这对成纤维细胞生长因子受体的可供选择的剪接变异体的间质表达和相互作用的成纤维细胞生长因子配体相互的表达，对许多器官的发育是必不可少的，特别是那些经历分支形态发生的如肺或唾液腺，并且如胚胎肢芽和皮肤的结构。虽然互补信号的这种模式是对于一些器官的发育是至关重要的，但它不是通用的。例如，选择性剪接的组织特异性调控对成纤维细胞生长因子受体3较不严格，其中2个剪接变异体是在上皮细胞类型中被发现。成纤维细胞生长因子9亚家族，虽然主要是表达于上皮细胞中，但除了激活成纤维细胞生长因子受体1-3的Ⅲc部剪接变体，其具有独特的能力是激活成纤维细胞生长因子受体3b。在一些上皮细胞类型中找到成纤维细胞生长因子10表达，如内耳发育中信号很可能就是以自分泌方式传到上皮细胞。在体节形成中，成纤维细胞生长因子4和成纤维细胞生长因子8在间质体节中表达和传递信号，在新生体节中它们能抑制分化。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                嗜热链球菌抑制法检测鲜乳中抗生素残留！               一、操作步骤原理：检样经过 80 ℃杀菌后，添加嗜热链球菌菌液。培养一段时间后，嗜热链球菌开始增殖。这时候加入代谢底物 TTC，若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，嗜热链球菌将继续增殖，还原 TTC 成为红色物质。相反，如果样品中含有高于检测限的抑菌剂，则嗜热链球菌受到抑制，因此指示剂 TTC 不还原，保持原色。二、检验程序⒈活化菌种：取一接种环嗜热链球菌菌种，接种在 9 mL 灭菌脱脂乳中，36 ℃±1 ℃培养 12 h～15h 后，置 2 ℃～5 ℃冰箱保存备用。每15 d 转种一次。⒉测试菌液：将经过活化的嗜热链球菌菌种接种灭菌脱脂乳，36 ℃±1 ℃培养 15 h±1 h，加入相同体积的灭菌脱脂乳混匀稀释成为测试菌液。⒊培养操作：取检样 9 mL，置 18 mm×180 mm 试管内，每份检样另外做一份平行样。同时再作阴性和阳性对照各一份，阳性对照管用 9 mL 青霉素 G 参照溶液，阴性对照管用灭菌脱脂乳 9 mL。所有装有样品的试管置 80 ℃水浴加热 5 min，冷却至 37 ℃以下，加入测试菌液1 mL，轻轻旋转试管混匀。36 ℃±1 ℃水浴培养 2 h，加 4％TTC 水溶液 0.3 mL，在旋涡混匀器上混合 15 s 或振动试管保证液体与样品混匀。36 ℃±1 ℃水浴避光培养 30 min，观察颜色变化。如果颜色没有变化，于水浴中继续避光培养 30 min 作最终观察。观察时要迅速，避免光照过久出现干扰。⒋判断方法：在白色背景前观察，检样呈乳的原色时，指示乳中有抗生素存在，为阳性结果。检样呈红色为阴性结果。如最终观察现象仍为可疑，建议重新检测。三、报告最终观察时，检样变为红色，报告为抗生素残留阴性。检样依然呈乳的原色，报告为抗生素残留阳性。本方法检测几种常见抗生素的zuidi检出限为：青霉素0.004 IU，链霉素 0.5 IU，庆大霉素 0.4 IU，卡那霉素 5 IU。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   微生物对污染物的降解与转化！中国微生物菌种查询网：由于微生物代谢类型多样，所以自然界所有的有机物几乎都能被微生物降解与转化。随着工发展，许多人工合成的新的化合物，掺入到自然环境中，引起环境污染。微生物以其个体小、繁侠、适应性强、易变异等特点，可随环境变化，产生新的自发突变株，也可能通过形成诱导酶、生新的酶系，具备新的代谢功能以适应新的环境，从而降解和转化那些“陌生”的化合物。大事实证明微生物有着降解、转化物质的巨大潜力。一、环境中的主要污染物    所谓污染物，是指人类在生产生活中，排人大气、水体或土壤内的能引起环境污染，并对人环境有不利影响的物质的总称。这些物质主要有农药、污泥、烃类、合成聚合物、重金属、放射性核素等。总体可归为无毒和有毒污染物2大类，前者如纤维素、淀粉等有机物和酸、碱等无机物，后者如苯酚、多氯联苯等有机毒物和氰化物、各种重金属等无机毒物。污染物对人类的危害是极其复杂的，有些污染物在短期内通过空气、水、食物链等多种媒介侵入人体，造成急性危。也有些污染物通过小剂量持续不断地侵人人体，经过相当长时间，才显露出对人体的慢性危害或远期危害，甚至影响到子孙后代的健康。二、微生物对农药等有毒污染物的降解    农药是除草剂、杀虫剂、杀菌剂等化学制剂的总称。我国每年使用50多万吨农药，利用率只“10％。绝大部分残留在土壤中，有的被土壤吸附，有的经空气、江河传播扩散，引起大范围污染。目前的农药多是有机氯、有机磷、有机氮、有机硫农药，其中有机氯农药危害性zuida。这些有毒化合物在自然界存留时间长、对人畜危害严重。实验证明，环境中农药的清除主要靠细菌、放线菌、真菌等微生物的作用，    微生物降解农药的方式有2种，一种是以农药作为weiyi碳源和能源，或作为weiyi的氮源物质，此类农药能很快被微生物降解，如氟乐灵，这是一种新型除草剂，它可作为曲霉属的weiyi碳源，所以很易被分解；另一种是通过共代谢作用，共代谢是指一些很难降解的有机物，虽不能作为微生物weiyi碳源或能源被降解，但可通过微生物利用其他有机物作为碳源或能源的同时被降解的现象，如直肠梭菌降解666时需要有蛋白胨之类物质提供能量才能降解。微生物降解农药主要是通过脱卤作用、脱烃作用，对酰胺及脂的水解、氧化作用、还原作用及环裂解、缩合等方式把农药分子的一些化学基本结构改变而达到的。 三、重金属的转化    环境污染中所说的重金属一般指汞、锅、铬、铅、砷、银、硒、锡等。微生物特别是细菌、真菌在重金属的生物转化中起重要作用。微生物可以改变重金属在环境中的存在状态，会使化学物毒性增强，引起严重环境问题，还可以浓缩重金属，并通过食物链积累。另一方面微生物直接和间接的作用也可以去除环境中的重金属，有助于改善环境。    汞所造成的环境污染最早受到关注，汞的微生物转化及其环境意义具有代表性。汞的微生物转化包括三个方面无机汞的甲基化；有机汞还原成汞；甲基汞和其他有机汞化合物裂解并还原成汞。包括梭茵、脉胞菌、假单胞菌等和许多真菌在内的微生物具有甲基化汞的能力。能使无机汞和有机汞转化为单质汞的微生物也被称为抗汞微生物，包括铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌等。微生物的抗汞功能是由质粒控制的，编码有机汞裂解酶和无机汞还原酶的是mer操纵子。    微生物对其他重金属也具有转化能力，硒、铅、锡、镐、砷、铝、镁、把、金、钝也可以甲基化转化。微生物虽然不能降解重金属，但通过对重金属的转化作用，控制其转化途径，可以达到减轻毒性的作用。四、固体废物的生物处理    固体废弃物处理的方法有物理法、化学法和生物法。其中生物法主要是利用微生物分解有机物，制作有机肥料和沼气。且在发酵过程70-80℃高温能杀死病原菌、虫卵及杂草种子，达到无害化目的。根据微生物与氧的关系，可分为好氧性堆肥法和厌氧发酵法两大类。 ⒈好氧堆肥法好氧堆肥法是指有机弃废物，在好氧微生物作用下，达到稳定化，转变为有利于土壤性状改良并利于作物吸收和利用的有机物的方法。所谓稳定化是指病原性生物的失活，有机物的分解及腐殖质的生成。从堆肥到腐殖质的整个过程中有机污染物发生复杂的分解与合成的变化，可分为3个阶段。⑴发热阶段  堆肥初期，中温性好氧细菌和真菌，充分利用堆肥中易分解、可溶性物质(淀粉、糖类)而旺盛增殖，释放出热量，使堆肥温度逐渐上升。⑵高温阶段  堆肥温度上升到50℃以上进入高温阶段。中温性微生物逐步被高温性微生物取代，堆肥中除剩余的或新形成的可溶性有机物继续被分解转化外，复杂有机物也开始分解，腐殖质开始形成。在50℃左右，堆肥中的微生物主要是嗜热性真菌和放线菌，温度达到60℃时，真菌几乎全部停止活动，只有嗜热放线菌和细菌活动，当温度升到70℃时，微生物大部分死亡，或进人休眠状态。高温可使有机物快速腐熟，并可杀灭病原性生物。⑶降温腐熟保温阶段  当高温持续一段时间后，易分解或较易分解的有机物已大部分被利用，剩下难分解物质(如木质素)和新形式的腐殖质。此时微生物活动减弱，产生热量少，温度下降，中温性微生物逐渐形成优势种群。残留物质进一步被分解，腐殖质积累不断增加，堆肥进入腐熟阶段。为避免堆肥有机物矿化损失肥效，应把堆肥压紧，使造成厌氧状态。⒉厌氧发酵法厌氧发酵法包括厌氧堆肥法和沼气发酵。厌氧堆肥法是指在不通气条件下，微生物通过厌氧发酵将有机弃废物转化为有机肥料，使固体废物无害化的过程。堆制方式与好氧堆肥法基本相同。但此法不设通气系统、有机废弃物在堆内进行厌氧发酵，温度低，腐熟及无害化所需时间长。利用固体废弃物进行沼气发酵与污水的厌氧处理情况基本相似。

                   植物RNA的提取方法与步骤！首次使用要加试剂：RNA wash buffer II 加48ml无水乙醇；RB buffer 每毫升加20μL2-mercaptoethanol (硫基乙醇)。 试剂使用顺序：RB—RWF wash Buffer –RNA wash Buffer II---DEPC/ddH2O2（65℃预热）；提前开水浴锅65℃ 1、100mg植物材料液氮研磨，加入到1.5ml 离心管；2、迅速加入500μL RB buffer，旋涡震荡至完全悬浮；3、吸取液体过柱（gDNA 蓝），室温离心14000r，5min；（去除gDNA）4、加入0.5倍体积的无水乙醇（约250μL）于过柱液体，吸打混匀；5、吸取700μL过柱（RNA橙色），室温离心12000r，1min；6、弃掉滤液，将剩余液体加入吸附柱，12000r，1min； （可重复步骤5.6过柱一次  吸附RNA）7、加入400μL RWF，10000r离心1min；8、弃掉废液，加入500μL wash buffer II，10000 r离心30s；9、弃掉废液，加入500μL wash buffer II，10000 r离心30s；10、换新管，12000r空离2min；室温晾干（滤膜干了就行，不能太久，过干难洗脱），去除乙醇11、将过滤柱转移至新1.5ml离心管，加入65℃预热的DEPC/ ddH2O2水50-100ul （分2次加，每次25ul洗脱RNA）；，室温2min；10000r离心2min12、琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量，分光光度计检测浓度及OD值；RNA储存在-80℃。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 大肠杆菌检测培养基的配方及原理！大肠杆菌检测培养基的配方及原理⒈月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)⑴原 理：月桂基硫酸钠，别名月桂醇硫酸钠，表面活性作用强，具有乳化作用。一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等胰蛋白胨或胰酪胨 20g 提供碳源和氮源满足细菌生长的需求 。 ⑵配方：（g/L）⒉煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤（Brilliant Green Lactose Bile Broth） ⑴原理：胆盐（Bile Salt）：是一种胆酸的钠盐，是胆酸的羧基和甘氨酸或牛磺酸(C2H7NO3S)的氨基(C2H5NO2)，通过酰胺键结合而成。① 可降低培养基与细菌细胞膜界面上的表面张力，使细胞膜紊乱，导致细菌自溶。②肠杆菌科细菌在肠道内长期与胆汁接触。对胆盐有一定的抵抗力。合适的胆盐量能促进该科细菌的生长。③胆盐遇酸生成沉淀，使菌落色素不致扩散从而有利于鉴别。④ 胆盐中含有一定量的胆红素、粘蛋白、色氨酸，对不受胆盐抑制的细菌生长有营养作用。煌绿（亮绿）：抑制革兰氏阳性菌和大多数非沙门氏菌的革兰氏阴性杆菌，通常抑制发酵乳糖、蔗糖的细菌。煌绿和枸櫞酸钠对大腸菌的生长、菌体蛋白质的合成和糖的利用都有显著的抑制作用,以煌绿的作用为较强。枸酸钠能抑制大腸菌的呼吸,而煌绿的抑制作用则较弱。混合胆盐及硫代硫酸钠对大腸菌的上述代谢活动都没有抑制作用。 ⑵配方：（g/L）⑶用法：将蛋白胨、乳糖溶于约500 ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 ml（将20.0 g 脱水牛胆粉溶于200 ml 蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 ml，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 ml， 用蒸馏水补足到1000 ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml 。121 ℃高压灭 15 min 。 ⒊伊红美蓝琼脂(EMB)Eosin-Methylene Blue Agar⑴原理：伊红美蓝琼脂含有伊红和美蓝两种苯胺类染料，它们可以抑制革兰氏阳性菌的生长。伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。 ⑵配方：（g/L）⑶用法：称取本品 37.4g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15分钟, 备用。  ⒋EC肉汤 (E.Coli Broth)⑴用途：用于粪大肠菌群、大肠杆菌的测定(GB2008、SN标准) ⑵配方：（g/L） ⒌营养琼脂斜面 营养琼脂（NA）Nutrient Agar⑴用途：细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准)。 ⑵配方：（g/L）北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  您知道让细胞活泼的诀窍有哪些吗？1.保证所有实验室材料都无菌　　穿插污染是细胞培育的大敌。即使是轻微的污染，也或许毁了几个星期的效果。因培育箱内温暖湿润，真菌极易成长，因而有必要注意定时清洁。此外，在将培育瓶、移液管及其他的相关物品放入超净台之前，运用酒精擦拭干净，以防止污染。 2.选择上佳的培育基开发策略　　在细胞培育进程中，培育基是操控产品质量、产量和本钱的重要要素。有必要针对每种培育物来定制培育基，以优化实验成果。在决定以哪种方法来开发您的培育基时，您需要考虑时间和本钱等要素。 3.在传代之前不要让细胞彻底集合　　集合度是指贴壁细胞占有培育瓶表面积的份额。彻底集合意味着的表面都被贴壁细胞覆盖。一定要防止这种状况，由于它意味着细胞不能继续成长。不过，燃眉之急是运用活泼成长的细胞。 4.运用对数成长期的细胞　　细胞培育进程共有3个阶段：停滞期、对数期和平台期，分别代表了低细胞成长、高细胞成长和无细胞成长。有生机的细胞是健康的，快速分裂的，在对数期以70-80%的集合度存在。 5.在运用前正确解冻细胞　　尽管解冻看起来是个简略的步骤，但有必要操作得当，防止损伤细胞。长期暴露在高温条件下会使细胞无法铺板。因而，冻存管应当在37°C水浴中放置2分钟，然后用条件培育基稀释，以防止DMSO造成直接损伤。  6.小心处理您的培育物　　细胞培育的脆弱性怎样强调也不为过。剧烈摇晃，或接连的温度波动或许会对成长发生不利的影响。保证培育箱是水平的，温度均一，且远离电动仪器。此外，尽量防止一次处理多个细胞系，由于它或许会影响细胞的基因型和表型。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                       人脂肪组织提取物的应用！一、背景人脂肪细胞提取物是从人原代脂肪细胞提取的，人原代脂肪细胞从正常人脂肪组织制备。正常人脂肪组织采集自各地方医院可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。人体脂肪存在于人体和动物的皮下组织及植物体中，是生物体的组成部分和储能物质。人体内的脂肪细胞可分为白色和棕色脂肪细胞两大类，两类脂肪细胞在形态、功能和来源方面都有很大的差异。每个成人体内，大约含有300亿个白色脂肪细胞，其组织又称脂肪组织，常呈白色，在幼儿期大量增殖，到青春期数量达到dianfeng，此后数量一般不再增加。细胞内含有大量富含脂肪的小泡，称为脂质泡，富含光面内质网。此外，还有一种褐色脂肪细胞，在人体内主要存在于肩胛骨间、颈背部、腋窝、纵隔及肾脏周围，含有高度团缩的褐色脂肪，作用是将脂质分解产热，调节体内脂质比例。白色脂肪细胞形态为单泡脂肪细胞，即在一个白色脂肪细胞内，90%的细胞体积被脂滴占据，把细胞质挤到细胞的边缘，形成一个“圆环”样细胞质；并且细胞核也被挤扁、挤平，形成一个“半月”形的细胞核，只占细胞体积的2%～3%。一层薄薄的膜把脂滴和细胞质分开来。细胞质内的细胞器比较少，细胞中心的脂滴95%的成分都是三酰甘油（甘油三酯），也包含一些游离脂肪酸、磷脂和胆固醇。二、应用用于脂肪组织提取物对组织工程室内构建物早期血管形成及成脂化影响的研究全球范围内每年大约有130万的乳腺癌新发bingli,乳癌切除后必将造成大范围软组织缺损。为解决以上难题,zhenpi移植、人工合成材料、胶原注射剂及自体脂肪移植等被越来越多的的应用于临床工作中。而这些方法都有各自的缺点和不足,比如合成材料容易引起机体的异物反应和感染；脂肪组织因能够提供容量和轮廓支持而受到临床医生的青睐,但其吸收率高达30～50%,限制了其在临床上的应用；带蒂脂肪瓣移植由于其移植后,应用显微外科技术即刻重建脂肪内部的血液循环,移植后体积缩小少,能取得移植的zuijia效果,但带蒂脂肪供区有限,切取大量脂肪后易导致供区继发畸形,这限制了带蒂脂肪瓣移植在临床的应用。近年来脂肪组织工程技术为解决软组织缺损的修复提出了全新的思路。在脂肪组织工程中细胞、支架和微环境是三个主要因素,但不管是通过优化种子细胞或者改性生物活性材料支架或者改善局部微环境,z终构建的工程化脂肪组织,其体积都无法超过1ml,并且在组织构成和组织稳定上都难以达到满意的结果。2003年Hofer SO等人移植轴型血管蒂到一个充满胶原基质的生物惰性材料制作有一定硬度的保护性容器内,为拟构建的组织提供血运基础、营养物质和生长所需空间,生成了非特异性的肉芽组织,首先提出“血管化组织工程室”的概念。这种创新型的构建模式为我们的组织工程研究大大拓宽了思路。随着研究的深入,2007年Dolderer等人把带血管蒂的腹壁脂肪瓣放入中空的小室内植入老鼠的腹股沟皮下,发现脂肪组织显著增长,组织形态学分析显示增加的组织是正常的血管化成熟脂肪组织,形成了“脂肪组织工程室”。2011年将这种方法应用到大动物,体积z大达56.5ml,然而所产生的脂肪组织的体积未达到置入工程室的容积,生长受到限制,并且组织形态学研究发现其组织成分为；纤维结缔组织、脂肪组织、血管、PLGA,并且纤维结缔组织的量和脂肪组织的量是相同的。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              对鲍曼不动杆菌耐药性及耐药基因的研究！⒈目的：研究鲍曼不动杆菌耐药性与耐药基因之间的关系 ⒉方法：用VITEK-2型全自动微生物分析仪,检测331株鲍曼不动杆菌和42株重耐药菌的药敏情况,用PCR方法检测多重耐药菌的耐药基因。⒊结果：鲍曼不动杆菌对21抗生素的平均耐药率分别59.8%和62.8%；对头孢曲松、头孢唑啉和头孢替坦的耐药率均为；42株多重耐药菌株（）对头孢曲松、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯、头孢唑啉、头孢替坦和氨苄西林完全耐药,且均检测有TEM-1和ampC基因;38株多重耐药菌均检测到TEM-1、ampC、aac（3）和gyrA型基因。⒋结论：鲍曼不动杆菌已成为医院重要致病菌, 且多重耐药率很高，与携带的TEM-1、ampC、aac（3）和gyrA型基因有关。鲍曼不动杆菌已成为医院获得性肺炎的重要致病菌,且很容易在监护病房流行。由于鲍曼不动杆菌在自然界的广泛存在及其复杂的耐药机制,对β内酰胺类、氨基糖苷类以及喹诺酮类抗生素已呈现多重耐药，给临床治疗其所致感染带来很 困难。为能好地指导临床选择合适的抗生素，本文对本院2005～2006年住院患者标本分离的331株鲍曼不动杆菌进行药敏分析,并对2006年分离的42株多重耐药鲍曼不动杆菌的基因进行测序和研究,现报告如下。一、材料与方法⒈菌株来源  331株鲍曼不动杆菌均为我院临床标本中分离并按全国统一操作规程。标本主要包括血液、尿液、痰和其他分泌物。⒉仪器试剂  VITEK-2型全自动微生物分析仪、ID-GN 鉴定卡、AST-GN09药敏卡由法国Bio-Merieux公司生产; VITEK 比浊计（V 1210） 由日本生产；PCR扩增仪为美国PERKIN ELMER公司9600型基因扩增仪；日本三洋MDF型超低温冰箱;德国Hettich公司22R型低温超速离心机;美国水套式恒温培养箱。⒊菌种鉴定、药敏  所有实验菌株分离纯化后按VITEK-2的使用要求配制成菌悬液和稀释液, 分别填充到ID-GN和AST-GN09卡中, 用VITEK-2仪器自动完成细菌的鉴定和药敏实验。⒋质控菌株  由卫生部临床检验中心提供的标准菌株大肠埃希菌（ATCC 25922）、铜绿假单胞菌（ATCC 27853）, 药敏质控结果符合NCCLS 药敏质控要求。⒌统计学处理  细菌耐药性分析用 WHONET5软件进行分析，耐药率显著性差异用SPSS10.0统计软件分析,两组耐药率比较应用χ2检验。⒍耐药基因的检测  采用碱裂解法和蛋白酶K法提取被测细菌的质粒和染色体基因,提取方法根据不同引物设立不同PCR条件；以ATCC700603肺炎克雷伯菌和TEM-26型大肠埃希菌分别作SHV型和TEM型阳性对照；其余 ampC、PER-1、OXA-23基因阳性对照均为北京华明公司基因检测室经基因测序后比对的阳性菌株。⒎PCR耐药菌基因  根据GenBank提供的耐药基因，采用Primer软件设计引物。反应体系均为25μl,其中缓冲液2.5μl,10mmol/L 4×dNTP 0.5μl,50μmol/上下游引物各1μl,DNA多聚酶0.25μl,DNA模板1μl,超纯水18.75μl 。根据不同引物设立不同PCR反应条件。以ATCC700603肺炎克雷伯菌作SHV型阳性对照，以TEM-26型大肠埃希菌作TEM型阳性对照,产物经电泳,在紫外线下观察结果,并在凝胶上成像。二、结果与分析⒈鲍曼不动杆菌的临床分布  本文鲍曼不动杆菌均来源于本院的住院病人，其中2006年160株,按标本分为血（6株）、痰（136株）、尿（6株）和其他分泌物12株；2005年171株, 按标本分为尿（5株）、痰（82株）和其他分泌物（89株）。⒉鲍曼不动杆菌对常用5大类21种抗生素的药敏结果 2006年和2005年鲍曼不动杆菌对21种抗生素的平均耐药率分别为62.8%和59.8%，经χ2检验，差异无显著性（P>0.05）。2006年鲍曼不动杆菌对头孢曲松、头孢唑啉和头孢替坦的耐药率均为；对头孢他啶、头孢吡肟、头孢呋辛钠和头孢呋辛酯的耐药率分别为57.7%、44.6%、98.0%和98.0%；对β内酰胺和碳青霉烯类如氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南的耐药率分别为、48.3%、54.4%、17.7%和75.8%，对亚胺培南和美洛培南的耐药率分别为23.5%和38.3%。2005年鲍曼不动杆菌对头孢曲松和头孢替坦的耐药率均为；对头孢他啶、头孢吡肟、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯和头孢唑啉的耐药率分别为43.9%、37.2%、92.1%、92.1%和96.5%；对β内酰胺和碳青霉烯类如氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南的耐药率分别为、49.5%、55.2%、15.2%和86.9%，对亚胺培南和美洛培南的耐药率分别为28.9%和34.9%。2006和2005年鲍曼不动杆菌对呋喃妥因的耐药率均为，对左旋氧氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为8.4%、21.5%和75.4%、54.4%。⒊多重耐药菌的药敏结果  从2006年分离的42株多重耐药鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果见表3。42株（）菌株对头孢曲松、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯、头孢唑啉、头孢替坦和氨苄西林完全耐药,35株（83%）菌株对氨曲南耐药；25株（60%）菌株对亚胺培南敏感,23株（55%）菌株分别对哌拉西林/他唑巴坦、妥布霉素和美洛培南敏感,17株（40%）菌株对庆大霉素和哌拉西林敏感。⒋耐药基因检测  在42株多重耐药的鲍曼不动杆菌中,均检测有TEM-1和ampC基因,5株（12%）检测到ESBLs, 说明鲍曼不动杆菌对β- 内酰胺类抗生素有极高的耐药性;38株（90%）多重耐药菌均检测到TEM-1、ampC、aac（3）和gyrA型基因;19株（45%）检测有TEM-1、PER型基因。所有菌株均未检出SHV、PER-1、VEB-1、IMP、VIM、OXA-23、OXA-24型基因。⒌测序结果  将PCR型阳性扩增产物做双向基因测序,并与GenBank 据库公布的相关基因序列进行比对分析, 所有与产超广谱酶的目标基因（Z21957）的PCR产物同源性为;将OXA -23型PCR扩增阳性的4份标本产物做单向测序,结果与OXA -23产碳青霉烯酶基因（AF201828）序列的同源性达到99%； 另8份Ampc酶PCR阳性产物作单向测序,结果与染色体介导的高产Ampc酶目标基因（AJ009979） 的同源性为;6份gyrA型基因扩增产物测序与目标基因（X82165）比对显示,在83位点的丝氨酸均被亮氨酸取代。三、讨论⒈本组鲍曼不动杆菌85%来自呼吸道标本，说明不动杆菌虽然是呼吸道的寄居菌，但在人体内成为优势菌时，也能引起呼吸道感染，而且可导致多脏器、多系统感染,尤其容易发生于危急重症病人。大量广谱抗生素的应用,使耐药的鲍曼不动杆菌得到优势生长,也成了鲍曼不动杆菌肺部感染的危险因素。⒉本组鲍曼不动杆菌对常用5大类21种抗生素的平均耐药率为59.8%和62.8%，对头孢曲松等5 种头孢菌素和氨苄西林的耐药率几乎达，对亚胺培南和美洛培南也有23.5%和38.3%的耐药率，说明本组鲍曼不动杆菌产生了严重的多重耐药性。⒊本组鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦加酶抑制剂的耐药率为48.3%和49.5%，明显低于氨苄西林的耐药率。对哌拉西林/他唑巴坦加酶抑制剂的耐药率仅为17.7%和15.2%，说明舒巴坦和他唑巴坦均能有效抑制β内酰胺酶。由于鲍曼不动杆菌对β内酰胺类抗生素的耐药主要是产生β- 内酰胺酶，而且不动杆菌极易经质粒结合,并与多种耐药质粒共存。可以是质粒介导的TEM - 1 和TEM - 2β-内酰胺酶,也可以由染色体介导的β- 内酰胺酶，或由于青霉素结合蛋白（PBPs） 的改变等原因导致耐药。所以本组鲍曼不动杆菌对氨苄西林加舒巴坦后的耐药率由降至48.3%，对哌拉西林加他唑巴坦后的耐药率由54.4%降至17.7%。因此在对鲍曼不动杆菌感染的治疗时,可选用加舒巴坦或他唑巴坦的β内酰胺类抗生素。不加酶抑制剂的抗生素已不适合临床应用，不能作为经验用药。⒋鲍曼不动杆菌产生耐药的机制比较复杂,且多重耐药率很高，还能诱导革兰阴性杆菌产ESBLs 与高产AmpC 酶的作用。 在本组42株多重耐药的鲍曼不动杆菌中,均检测有TEM-1和ampC基因,5株（12%）检测到ESBLs, 说明鲍曼不动杆菌对β内酰胺类抗生素有极高的耐药性。尤其AmpC酶的普遍存和过量表达，表现出对β- 内酰胺酶极高的水解活性,可水解第三代头孢菌素。由于AmpC酶为非诱导酶,无论诱导剂是否存在,均可高产此水解酶。所以在抗感染治疗中，要严格禁止随意使用第三代头孢菌素，以防止或延缓各种高耐药株细菌的产生与蔓延。⒌本组多重耐药的鲍曼不动杆菌均产生氨基苷乙酰转移酶［aac（3）-1 和aac（3）-2］,而普通株均不产该酶,说明aac（3）基因与鲍曼不动杆菌的多重耐药有密切关系。另外,由gyrA和gyrB分别编码的2 A或B亚单位是喹诺酮类药物靶位的DNA旋转酶,其主要功能是催化革兰阴性菌的DNA超级结构。是否耐药取决于DNA旋转酶的1个或2个基因点的突变, 本组多重耐药株在83位点上的丝氨酸（TCA）被亮氨酸（TTA）取代是喹诺酮类药物的耐药原因。⒍本研究说明,鲍曼不动杆菌的多重耐药与同时产TEM型广谱酶,高产AmpC酶, aac（3）基因编码的氨基苷乙酰转移酶和gyrA基因编码的DNA旋转酶突变有密切关系。

                 影响药品生产的微生物生态学分布！⒈空气中的微生物空气中的微生物及微粒，是空气洁净技术要解决的主要对象。尽管空气不是适合微生物生长繁殖的天然环境（因不含必需的水分和营养），但是一般的大气环境仍含有不少的细菌、霉菌和酵母菌。例如，葡萄球菌属、链球菌属、杆菌属、梭状芽胞杆菌属、棒状杆菌属、青霉属、曲霉属、毛霉属和红酵母属等。空气中的微生物来自灰尘微粒（自然因素如风，人为因素如车），来自人的皮肤与衣服，以及由谈话、咳嗽、打喷嚏等造成的飞沫。空气中微生物数量取决于灰尘量和活动状况，例如，有活跃人群比无人群的地方微生物多，不洁的房间比清洁的房间多，潮湿的地方比干燥的地方多。在药品生产中，减少空气中微生物数量的方法有多种，其中常用的有以下3 种方法：⑴空气洁净技术采用的过滤方法过滤是最常用的方法。过滤介质种类很多，例如：纤维素、玻璃棉或人造纤维等。一般应除去大于0.1um 的微粒及微生物。空气净化装置可用于整个房间如无菌操作室，也可只限于操作区域局部如超净工作台。它允许经过滤的空气气流不断地流过工作区，气流方向可以是垂直的或者是横向的，取决于设备的类型及设计。制药企业应对空气净化装置定期监测检查，确保各种技术参数符合法定的技术标准。⑵化学消毒方法化学消毒剂种类较多，有一些化学消毒剂如甲醛，因有刺激性，所以作用受到局限。福尔马林为40%的甲醛溶液，熏蒸在空气中的浓度为1-2mg/L，相对湿度为80-90%时效果较好，但现已较少用。使用臭氧发生器的效果已得到证实，现已开始广泛应用。其灭菌是物理、化学及生物学等综合作用。    ⑶紫外线照射方法房间安置固定的或可移动的紫外线灯，采用紫外线波长为240-280nm之间，以253.7nm处杀菌力zuida。但穿透力较差，可被不同的物品表面反射。使用时应考虑灯具的寿命，约1400h时需更换。⒉制药用水中的微生物工艺用水在制药企业防止污染及作为制药用水方面至关重要。因为它不仅作为产品的一个成分，而且需用其洗涤或冷却。药品的微生物污染的关键环节在于工艺用水，因为水是微生物生长代谢的一个必要成分。水中的微生物种类较多见的有：假单胞菌属、产碱杆菌属、产黄菌属、产色细菌属和沙雷菌属等。这些细菌营养要求不高，适宜温度较低，一般来自土壤侵蚀、雨水冲刷及腐败动植物的污染。被粪便污染的水中含有大肠杆菌、变形杆菌属、其他肠道菌、粪链球菌和梭状杆菌属。在饮用水标准中，大肠杆菌（又称大肠埃希菌）的含量是判断饮用水水质污染程度的指标。垃圾和工业废液污染的水源中约98%含有革兰阴性细菌、微球菌属、噬细胞菌属，此外还有酵母菌、类酵母菌和放线菌。制药用水的质量，根据工艺需要选用饮用水、纯化水或注射用水。例如，制备注射剂必须采用注射用水，制备口服制剂需用纯化水。中国药典收载了纯化水和注射用水的质量标准。常用的对水消毒的方法，与空气消毒的方法一样，也是化学消毒剂、过滤与紫外线照射3种。化学消毒剂方法对水的消毒以化学消毒剂方法较常用，效果也zuihao。常使用次氯酸钠或通氯气。在使用中，应注意到水系统中不能留有消毒不到的“死角”。膜过滤法适用于水系统的连续循环处理。常用的微孔滤膜的孔径为0.22um。在此之前，还应有其他过滤方法配合。紫外线照射法在水系统中应用紫外线照射消毒，适用于需要特殊处理的水（如光学透明度要求高），一般在末端之前。这种方法因处理过的水无臭无味，而优于化学消毒剂方法；因不产生微生物移居滤器的现象，而优于膜滤器。因此，在水系统中，这3种方法综合应用，设计安装在适当的位置。对制药用水的消毒方法除应用于水的本身消毒以外，还必须包括水系统中的设备、管道的消毒问题。⒊厂房建筑与设备表面的微生物厂房建筑物的内表面，以及设备表面、容器内外表面等，都可能是微生物寄存的地方。制药企业生产车间的厂房、库房及实验室都必须清洁整齐。建筑物表面不透水，光滑平整、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落，并能耐受清洗和消毒。设备、管道应易于拆卸、结构简单，便于清洁和消毒。特别是药品生产过程中使用的容器，包括内包装容器，都应进行清洗和消毒。⒋人体的微生物和微粒⑴人体的微生物微生物广泛分布于自然界，人体与自然环境接触，当然也不能例外。凡是人体体表皮肤与外界相通的腔道如口腔、鼻咽腔、肠道、眼结膜、泌尿生殖道均存在不同种类的微生物，其中有些微生物可以长期寄居在人的体表、皮肤和黏膜上。这种正常状态的微生物群有一定的种类和数量，与宿主及体外环境三者保持动态平衡，有益于宿主健康，构成相互依赖、相互制约的生态学体系，这类微生物称为“正常菌群”，这种生态环境称为“微生态平衡”。例如正常状态下的肠道细菌可以合成一些维生素。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！