细胞培养板的选择和使用方法！

                    细胞培养板的选择和使用方法！

一、细胞培养板

细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具，形状、规格、用途多样。

你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫？

你是否正为如何方便、正确使用培养板而苦恼？

你对如何处理培养板是否也有困惑？

对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会？

二、细胞培养板的选择

1）细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U型和V型）；

2）培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；

3）根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。

三、平底和圆底（U型和V型）培养板的区别和选择

1）贴壁细胞一般用平底培养板。

2）悬浮型细胞的培养一般用V型。

3）U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。

4）V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。

四、不同型状的板子自然有不同用途

平底的什么类型的细胞都可用，但当细胞数目较少，如做克隆时，就用96孔平底板。

另外，做MTT等实验时，无论贴壁和悬浮细胞，一般均用平底板。

至于U或V型板，一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面，当做两种不同淋巴细胞混合培养时，需要二者相互接触以刺激。因此，一般需要U型板﹐因细胞会由于重力的作用而聚集在一个很小的范围內，V型板的用途更少，一般用于细胞杀伤实验时，为了使效靶细胞紧密接触﹐常使用V型板﹐但这种实验也可用U型板替代(加入细胞后﹐低速离心）。

如果是养细胞的话， 通常是运用平底的， 另外要特別注意材质， 标示"Tissue Culture (TC) Treated"就是养细胞用的。

圆底的通常是拿来做分析， 化学反应， 或是保存样品用。因为圆底比较好将液体吸得干净， 如果用平底的就不好吸了。 不过， 如果你是要测吸光值的话， 一定要买平底的才行。

大部分细胞培养都用平底培养板，便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致，还便于MTT检测。

圆底培养板主要用于同位素掺入的实验，需要用细胞收集仪收集细胞的培养，如“混合淋巴细胞培养”等。

如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子

(一)操作步骤

1、加样品：将标本稀释液100ul（或2滴）加到包被板内（预留阴阳性及空白对照2－5孔），将待检血清用PBS或生理盐水按1：20稀释后取10ul加入反应孔内。

2、加对照：加入阴性对照1－3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。

3、温育：将反应板震荡使样品混匀后，置37℃温箱或水浴反应20分钟。

4、洗板：用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。（1）手洗：将反应板孔内容物倾出，将洗涤液注满反应孔，放置30秒钟后用力甩去，如此重复5次后拍干。（2）机洗：5次，每孔注入洗涤液200ul或注满，停留30秒钟后吸尽拍干。

5、加酶标工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶标工作液，置37℃温箱反应20分钟后，洗板5次，洗板操作同步骤4。

6、显色和终止反应：将底物A、B液各50ul（或1滴）加到反应孔内，37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul（或1滴）混匀终止反应。

(二)结果判定

1、酶标仪设定波长450nm，先用空白调零，然后测定各孔OD值；如果选用双波长测定，不必设置空白对照孔。

2、当阴性对照平均OD值小于0.08，阳性对照（pc）OD值大于0.30时，说明试剂盒有效且实验操作正确，否则应当重复试验。

3、临界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋阴性对照平均（NC）OD值（当阴性平均OD值小于0.05时，按0.05计算；当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算）。

4、标本OD值≤临界值为阴性，标本OD值>临界值为阳性。

常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

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