在液相色谱中，峰形对称性的优劣对峰面积和分离度有很大的影响，从而影响分析结果的准确性。能够引起峰形异常的因素很多：柱外死体积引起峰形异常有个特点——对先出的峰影响大，对后出峰影响小；柱头塌陷、柱头和筛板污染会引起所有的峰形都异常；硅醇基次级保留只引起部分峰拖尾；相塌陷除了引起保留下降外，也会造成峰拖尾。实际上，色谱实践中大部分的峰形问题都不是色谱柱的问题，仪器参数设定、色谱条件和方法正确与否对峰形有很大影响。01峰后拖图1: 常见的3种拖尾情况次级保留引起的峰拖尾：反相色谱中，通常非极性和弱极性的化合物能获得良好的峰形，而带有－COOH、－NH2、－NHR、－NR2等极性基团的化合物则比较容易产生拖尾，原因是硅胶表面残留硅羟基对极性和碱性样品分子产生次级保留效应。反相填料表面有残余的硅羟基，具有一定的酸性，其pKa约为4.5～4.7。根据电离规律，流动相的pH－pKa>2即pH>6.7时，99％以上的硅羟基应该是呈离子状态的，即Si-O-，而pKa－pH>2即pH上图是填料表面的示意图，完全硅羟化的硅胶表面硅羟基浓度为8μmol/m2，由于空间位阻的作用，通常与C18硅烷基发生反应的仅达2～3.5μmol/m2，需要再用小分子的硅烷跟硅羟基反应，如图中的三甲基氯硅烷，使硅羟基中的氢变成了三甲基硅烷的一个惰性基团。三甲基硅烷还是比氢原子大得多，还是不能将所有的残余硅羟基的活性封闭掉。相同的样品在不同品牌的柱子上产生拖尾的严重性不同，从填料合成的角度而言就是键合密度是否高、封尾是否彻底，高密键合和彻底的封尾能显著减少这种机会，获得良好的峰形。解决方案先检查样品是否过载，由于样品过载引起的峰形后拖不能通过改变色谱条件消除。如果发现过载，需降低进样量（包括进样体积或浓度），进样量越小，峰形越好。       例如头孢尼西钠的测定：              2. 调节流动相pH             将流动相的pH调至比弱酸pKa小2以上，比弱碱pKa大2以上，可有效抑制易离子化待测物的电离，从而取得良好峰形。              例如二甲基苯氧乙酸的测定：碱性化合物中，甲胺的pKa为10.64，那么在pH12.64，大于pKa2以上时，甲胺完全以分子状态形式存在，不会引起拖尾。3.增加缓冲盐或增大缓冲盐的浓度流动相中加入缓冲盐，增强了流动相的离子强度，在－NH3＋等极性基团和硅羟基Si－O－之间存在着许多离子的干扰，减少了样品分子与硅羟基之间相互接触的机会，有助于削弱极性基团与硅羟基之间的相互作用，改善峰形。这种适合于碱性较弱（如氨基的N原子与强吸电子基相连），或碱性很强。但在刚性结构中，比较难以接近被C18长链和封尾试剂覆盖的硅羟基。例如高乌甲素的测定：4）加入三乙胺、四丁基硫酸氢铵或辛烷磺酸钠等拖尾的产生是因为－NH2、－NHR、－NR2与硅羟基发生静电作用引起的，那么阻碍它们之间静电作用的途径，应该有两种，一种是占据硅羟基这个作用位点，另一种是占据－NH2、－NHR、－NR2这个作用位点。在流动相中加入三乙胺，能显著的改善峰形，消除拖尾，其作用是屏蔽硅羟基。三乙胺的pKa为11.09，在pH加入三乙胺改善峰形的时候，有两点需要注意：1）三乙胺的碱性很强，加入三乙胺后流动相的pH可能超出色谱柱的使用范围，对色谱柱造成损伤。pH的改变也会导致出峰时间的显著变化，可能引起的其它问题，建议流动相中加入三乙胺后回调至未加入前的pH值。通常即使pH回调过后，由于三乙胺成为了固定相的一部分，保留时间也有较大变化；2）三乙胺在210nm处有比较强的吸收，如果液相方法中检测波长在210nm以下测定时需要谨慎使用。四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等）在水中电离后，也形成了类似N＋H(CH2CH3)3的结构N＋(CH2CH2CH2CH3)4 ，这种结构也能有效的与Si-O-产生较强的静电作用，阻止氨基与硅羟基的接触，改善峰形。而且它还有一个不同于三乙胺的显著特点是，它在低波长范围的吸收比三乙胺弱。流动相中加入辛烷磺酸钠等烷基磺酸盐离子对试剂也能很好的改善峰形，其作用机理与三乙胺和四丁基硫酸氢铵颇为不同，是通过与样品分子的作用来阻止样品分子与硅羟基的作用来改善峰形。02峰前拖峰前拖发生的概率比较小，下面是三种前拖峰的表现形式：解决办法造成前拖峰的原因有多种，我们可依次逐一排查：样品是否过载降低进样浓度，看峰形是否有所改善。一般认为峰高在100mAU左右比较合适，不至于因过载影响峰形。检查是否是用流动相溶解样品溶解样品的溶剂（如纯甲醇）洗脱能力比流动相强会发生峰前拖。具体机理是：正常的峰形应该是样品在色谱柱上均匀的前移的情况下得到的，浓度分布在整个通过色谱柱柱床的过程中任何时候都呈正态分布。样品溶液进样后到达色谱柱时间很短，应还未被流动相充分稀释，洗脱能力更强的样品溶剂的局部存在，将使部分样品被洗脱的速度加快，导致峰前拖。增加流动相中缓冲盐的浓度增加缓冲盐浓度可以增大流动相中的离子强度，减少因静电的作用（有可能存在于样品分子之间、也有可能存在于样品分子与填料表面之间）引起的前拖。例如：注射用苦参碱的测定流动相中加入适量的四氢呋喃往流动相中加入少量的四氢呋喃有时可以改善峰形、增大分离度，很多色谱工作者都知道和使用，但其机理似乎少人提及。通常所加入的量在5％以内即可，需要的时候可以加入更大的量。升高柱温的温度升温有助于增加流动相传质速率，减少因静电作用引起的前拖，但温度不宜太高，温度太高容易损伤色谱柱，特别是含有离子对试剂的时候，最好不要超过40度。03其它峰形问题裂峰柱头污染和柱头塌陷都会造成裂峰，最常见的原因是筛板上颗粒物堵塞样品进入色谱柱不均一，只需反冲色谱柱将颗粒物除掉就可解决。

自2005年亨氏辣椒酱被检出含有“苏丹红一号”以来，多家餐饮、食品公司相继“涉红”，苏丹红事件席卷中国。苏丹红是一种化学染色剂，并非食品添加剂。该物质具有偶氮结构，这种化学结构决定了它具有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。因其鲜红的色泽，很多不法商家利用这一特性将其添加到辣椒粉、辣椒酱、辣椒油等辣椒制品中以牟取更高的利润。目前，国标GB/T19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法，使用的前处理柱是中性氧化铝固相萃取柱，存在着活度不易控制、回收率不稳定、净化后油脂较多等问题，严重干扰了苏丹红的检测，因此，寻找一种简便高效的检测食品中苏丹红的方法迫在眉睫。纳谱分析特别开发了苏丹红专用固相萃取小柱，可以快速、高效的提取、检测四种苏丹红，方法具有灵敏度高、重现性好、试剂用量少、油脂去除率高等优点。本实验针对三种不同来源（辣椒粉、辣椒酱、辣椒油）的苏丹红进行提取和检测。适用范围 参照国标GB/T19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法，适用于食品中苏丹红染料的检测。净化步骤1、待净化液的制备：    参照国标GB/T19681-2005中样品处理方法，得到待净化液，辣椒油等含油量较高的样品，需先称取2g无水硫酸钠于10 mL离心管中，再加入样品，提取后取上清液上样。2、SPE柱操作流程：（1）活化：SelectCore SDR苏丹红专用柱，规格500mg/6mL，依次使用5 mL二氯甲烷、5 mL正己烷活化SPE柱（2）上样：将待净化液上到SPE柱上（3）淋洗：使用5 mL正己烷淋洗SPE柱，弃去全部淋洗液（4）洗脱：先使用5 mL二氯甲烷洗脱，待5 mL二氯甲烷快要流干时，再加入2 mL二氯甲烷，并收集全部洗脱液，备用（5）将洗脱液在40 °C下氮吹至干，用1 mL乙腈复溶，超声2 min，涡旋10 s，过0.45 μm的有机滤膜，供液相色谱检测液相色谱条件色谱柱：ChromCore C18，4.6 ×150mm，3 μm，120?（厂商：纳谱分析）流动相：A：水；流动相B：乙腈梯度洗脱步骤如下表所示：柱温：30 ℃进样量：20 μL检测波长：500 nm实验谱图和加标回收率数据01苏丹红混标图谱02辣椒粉实验谱图辣椒粉加标回收率数据03辣椒酱实验谱图辣椒酱加标回收率数据04辣椒油实验谱图辣椒油加标回收率数据左为辣椒油提取液经过SelectCore SDR苏丹红专用柱净化后样品颜色右为中性氧化铝SPE柱净化后的颜色由上图可以看出，按照GB/T19681-2005中使用的是中性氧化铝SPE柱（右），经过净化后样品颜色较深，并且能看到明显的油脂。而采用专用柱——SelectCore SDR苏丹红专用柱（左）净化后，样品颜色澄清透明，没有明显的油脂。苏丹红专用柱结论SelectCore SDR苏丹红专用柱可以快速、高效的检测辣椒粉、辣椒酱、辣椒油等辣椒制品中的四种苏丹红，方法具有灵敏度高、重现性好、试剂用量少、油脂去除率高等优点。订货信息本应用相关产品 产品描述货号 苏丹红专用柱SelectCore SDR 500mg/6mL; 30/pkgSDR100-060500-1分析柱ChromCore 120 C18 3μm，4.6 ×150mmA001-030012-04615S

气相色谱仪作为一种分析检测仪器，因具有分离效能高、准确度高、进样量少和多组分同时测定等优点，被广泛地应用于各种领域。但由于检测员素质、样品性质以及仪器本身等方面的原因，常常出现各种问题，严重影响正常的生产，甚至造成巨大经济损失。本文简单介绍气相色谱仪的几种常见故障及排除方法，以期与从事气相色谱仪维修和使用的同行交流探讨。壹 基线不稳，基线噪音过大 原因分析及解决办法：载气纯度不够，根据检测需要更换纯度较高的载气。 脱氧管，脱水管等载气过滤装置失效，可以查看过滤装置内的颜色变化情况等判断是否需要更换，如失效，应及时更换，防止造成整个检测系统污染。管路有漏气处，打开载气，使用检漏液对管路各连接点进行检漏，发现漏气处，重新连接。进样口、色谱柱或检测器有污染，判断污染出在何处，逐一进行排查。首先，拆下色谱柱连接检测器端，若基线仍不正常，刚说明检测器受污染，需要清洗检测器或用高温老化检测器数小时；每次关机后应使用夹子夹住尾气排放软管，防止空气回流进入检测器造成污染。若基线正常，检测器未受污染，则打开进样口，用溶剂清洗汽化室、分流平板，更换衬管内玻璃毛或更换新衬管；若基线仍不正常，拆下色谱柱连接检测器端，与进样口端正常连接，通载气，用色谱柱使用温度范围内较高温度老化数小时或用溶剂冲洗色谱柱或更换新色谱柱静电干扰或仪器电子控制元件问题，检查仪器是否良好接地，检查线路板及各电子部件是否松动，若问题仍旧，拆下通过流量控制阀后管线，用气体流量计测量实际流量是否稳定并且与设定值是否相符，若波动或相差较大，则需要更换气体流量控制阀。检测器老化。检测器使用时间过久，已达到使用年限，或是日常不正确的操作，致检测器受损严重，则需要更换部件或是更换检测器。柒自动进样器常扎弯进样针或进样针推杆 原因分析及解决办法：进样隔垫上的螺母拧得过紧，隔垫在高温时膨胀更紧，使得进样针难以扎进弄弯针头，拧隔垫螺母不应拧得过紧，随着进样口温度升高，进样隔垫膨胀自然会密封良好，既防止了针头扎弯，又能增加隔垫使用次数。进样针安装不正确造成进样口扎在其它部位，按要求正确安装进样针。进样针管内被污染，由于污染物造成推杆活动阻塞弄弯推杆，进样针使用一段时间后，特别是在重新开机前，应取下进样针，用手推进样针杆，感觉是否顺畅，若有阻塞感，应吸入溶剂反复推拉清洗，若污染物仍不能清除，可将推杆拉出，同针管一起放入溶剂中超声清洗。进样样品粘稠度过大，造成针杆难以推进。可以重新对样品净化处理或稀释进样样品或选用缓慢进样模式，若问题不能解决，则需要选用专用进样针或其它进样方式。叁 谱图中峰形重叠原因分析及解决办法：检测器长时间闲置，特别是在气候阴湿季节，造成点火困难，可以开机设置高温老化检测器数小时后点火。氢气或空气纯度不够或含水量过大。检查气体输出压力是否正常，若输出压力不够，则需要检查管路是否漏气，对于使用氢气发生器，则需要更换电解液。同时检查分子筛、干燥管等净化装备是否变色失效，若失效需要立即更换。点火线圈密封圈老化造成密封不严，更换密封圈。点火线圈故障不能打火，由于线圈使用过久，上面产生锈斑或污染物，可以用软布醮无水乙醇擦拭干净，晾干后安装。电子流量控制阀（EPC）不能正常控制气体流量。将气体流量计连接到电子流量控制阀的后端检测流量输出情况，若输出偏大或偏小但稳定，则可以通过流量计设置需要使用参数，若输出流量不稳定，则需要更换流量控制阀。有时也出现在用电脑联机操作时点不着火，可以尝试在仪器操作面板上按键点火，往往点火成功。肆 进样后不出峰 原因分析及解决办法：进样针堵塞，样品没有注入汽化室。取下进样针，手动吸取样品并推出，观察能否正常吸入排出。若堵塞可选择溶剂超声清洗，若超声清洗仍不能吸取，则需要更换进样针。样口或色谱柱受污染造成样品严重吸附。可以选择溶剂冲洗汽化室，超声清洗分流平板，分流/不分流进样时清洗或更换衬管，更换衬管内玻璃毛，截断一段连接进样口端色谱柱并重新安装老化，或选择其它类型色谱柱等方法排除问题。分流/不分流进样时衬管内玻璃毛过多，堵塞了样品进入色谱柱。安装玻璃毛应取少量并安放在进样针插入衬管针尖以下的位置。进样口漏气或色谱柱连接二端处严重漏气。检查进样口密封垫是否老化失效并及时更换，重新正确连接色谱柱，注意不要将螺母拧得过紧导致密封垫破碎。色谱柱被堵塞。拆下色谱柱连接检测器端，插入溶剂或水等液体中，观察是否有连续气泡产生。若没有气泡或很少量气泡缓慢吹出，则色谱柱被堵塞，可以尝试反接色谱柱，用大流量载气通入色谱柱并逐段截断或更换色谱柱。进样口汽化室温度太低，样品没有被汽化。根据样品性质升高进样口温度，使其能在较短时间完全汽化。检测器端故障。记录器或信号放大器连接线断开，检查线路连接。对于需要点火检测器，则可能火焰熄灭，需要重新点火，熄火原因则可根据问题三排查。伍 样品峰出现拖尾峰 原因分析及解决办法：进样口或色谱柱污染。由于有污染物质存在，吸附样品或随样品一起出峰造成拖尾现象，可以按照问题四中清除污染物的方法来处理。未吹扫或吹扫时间设置过大。样品在汽化室迅速汽化后没有迅速进入色谱柱或吹扫至尾气，则会造成进样延迟，导致样品峰出现拖尾现象，因此要设置合适的吹扫时间防止拖尾，通常时间应设在0.5至1.0分钟之间。进样量过大，分流比太小。由于进样量大，分流比小，需要进入色谱柱部分汽化样品不能迅速进入，造成样品溢出而出现峰拖尾现象。分析样品时通常由大至小设分流比，减少进样量，既能防止样品污染仪器，又能防止出现拖尾现象。陆样品峰呈现圆顶原因分析及解决办法有：超出检测器的线性范围。减小进样体积或增加分流比。2.色谱柱选择不当。由于色谱柱固定相对样品的吸脱能力太弱造成样品各组分未分离或固定相对样品吸脱能力太强导致样品延迟出峰，使峰呈现圆顶现象。根据样品中各组分的化学性质选择合适色谱柱才能得到好的分离效果，并有美观的峰形。柱箱温度过低或过高。柱温过低使得样品组分吸脱延迟导致峰形圆顶，柱温过高则有可能使样品物质发生分解改变。所以只有设置合适的柱温，才能保证峰形尖锐，分离度好，出峰时间短。柒谱图中峰形重叠原因分析及解决办法：载气流速过快或柱箱温度过高。样品中各组分在色谱柱中尚未完全分离就已进入检测器。适当降低流速或降低柱箱温度，但要防止出现圆顶峰。色谱柱极性与样品中组分极性不相容、色谱柱过短或色谱柱严重流失或污染，柱效较低。较低的柱效难以将样品中各组分分离，需要了解样品的组分性质，选择合适的具有较高柱效的色谱柱。进样量过大。较大的进样量往往遭成色谱柱过载，从而导致样品中各组分难以完全分离。适当减少进样量，既能提高柱效，增加谱图的分离度，又能得到尖锐峰形，更能防止仪器被污染。

头孢地嗪钠为半合成第三代头孢霉素，对革兰阳性菌、阴性菌均有抗菌活性，对β内酰胺酶稳定，对头孢菌素酶和青霉素酶极稳定。头孢占据市场上抗生素较大的份额、产量大需求多，感染较轻一般选用口服，感染较重会选择静脉滴注。而此类抗生素较易引发过敏反应，除去一部分过敏体质的患者，药品的质量问题也是造成过敏的主要原因之一。药物因自身降解形成高分子聚合物被引入人体后，与体内大分子载体如蛋白质、多肽及多糖等发生不可逆结合，引起抗原-抗体反应，引起一系列过敏反应症状，从而致敏。中国药典2015版中，头孢地嗪钠有关物质II检测项目就是对于其聚合物含量的检测，旨在通过该项检测进而减小因聚合物超标而引起的一系列药物不良反应，严格控制药品的质量，该分析方法主要依据分子排阻色谱法（SEC）进行测定。结构式

实验室数据完整性已成FDA检查制药企业的一把利器，其中一条关于随意手动积分或者无书面程序规定手动积分，说明了FDA本身并不是不认可手动积分，而是要求有操作规程规定什么情况可以手动积分，如何积分，并且应保存并记录积分参数。CFDA紧跟FDA的步伐，在2016年度多次飞检中，开具多条数据完整性方面的缺陷，收回多张GMP证书。关于手动积分并没有开具缺陷，制药企业应防患于未然，提前把手动积分管理好。手动积分的定义关于手动积分，并没有指南给出明确的定义。笔者只查到有两篇生物样本分析的方法验证指南规定了再积分(Reintegration)的注意事项。　　FDA的2001年定稿指南 Bioanalytical Method Validation，及相应的2013年草案指南也有类似的要求。 生物样本分析的方法验证2013草案指南，第III.C节“样本数据再积分”规定：SOP应该确定再积分的标准，和怎样进行再积分;应清楚描述、并记录再积分的理由;应报告原始和再积分数据。第VII.D节还规定：再积分数据应有管理人员授权再积分。　　EMA的2011年指南 Guideline on bioanalytical method validation，第5.5节规定：应该有SOP描述色谱的积分和再积分。应在分析报告中讨论偏离这个SOP的任何偏差。应该记录色谱积分、再积分的积分参数、初始积分数据、最终积分数据，并在要求时立即可得。手动积分的适用情况1)低分离度或低响应;2)流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小;3)运行过程中，出现异常峰;4)软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误(峰未积分和错误识别峰);5)由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降(由于某些梯度程序)、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。手动积分的权限及操作操作员在数据系统自动积分不正确时，领取手动积分处理报告表并填写，手动积分申请被QC经理批准后由QC经理或QC组长(若有)或其指定人员(一般是指经验丰富的资深QC)方可进行手动积分。手动积分注意事项1)手动积分不能试图通过以下动作来使数据符合标准要求：减少峰(减少峰面积);增加峰(增加峰面积);改变峰高;2)同一次检验的所有标准品、工作对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分。3)手动积分结束后，应打印自动积分图谱和手动积分图谱附于手动积分申请表之后，提交QC经理审核;QC经理应复核完整的数据找出根因，基于根因制定相应的CAPA措施来避免类似事件。4)自动积分的图谱不得删除或被覆盖，应与手动积分图谱保存于计算机中;打印的自动积分图谱和手动积分图谱应标识清楚签名，随同手动积分申请表附于检验原始记录后面一起交质量管理部经理、QP审核无问题后归档。色谱软件选型、权限设置和结果显示满足合规要求的色谱软件(例如Waters和Angilent的软件)，能够分别设置不同权限，例如普通化验员不具备进行手动积分的权限，需要主管进行操作，有些软件则不具备这些功能;即使是同一个品牌的软件，也有不同版本;即使软件有这个功能，企业也不一定启用。有两个信息是否显示，对色谱数据透明度非常重要：方法名称和数据版本。如果企业不使用手动积分(重画基线)，而采用修改参数的方式，则每修改一次，是不同的方法(规范的管理程序会要求更改方法名称保存，否则就只能到审计追踪才能查出来这个方法已经被修改了)，而打印的色谱图可以选择是否显示方法; 每处理一次数据，会形成一个数据版本，同样的，打印的色谱图可以选择是否显示数据版本。一个完全透明的结果显示，会在打印的色谱图上显示“方法名称+数据版本”(同时要求修改参数则改变方法名称，不需要QA或检查员仔细检查审计追踪才能发现修改痕迹)。

色素食用色素的前处理和分离食品的色彩是食品感观品质的一个重要因素。人们在制作食品时常会使用一种食品添加剂－食用色素。目前使用的食用色素有天然食用色素和合成食用色素两大类。合成食用色素即人工合成的色素，其优点不少，如色泽鲜艳，着色力强，但它对人体也造成一定的危害，如具有一定的毒性、致泻性、致突性（基因突变）和致癌性。鉴于合成食用色素的不安全性，国家加强了对这类合成色素的监管，制订了食品合成着色剂的测定标准（GB5009.35-2016）。其中的前处理方法采用的是聚酰胺吸附法测定，但是该方法有一定的局限性，实验中对填料的含水量、操作温度和滴定速度都有一定的要求，且由于该填料对色素的吸附力不稳定而导致回收率数据不稳定。而本实验采用的弱阴离子混合模式，针对人工合成色素中含有苯磺酸和苯甲酸结构的离子基团可以更好的结合，保证分析的稳定性，并且由于采用单分散聚乙烯吡咯烷酮基质，活化淋洗洗脱步相比其他竞争对手产品可以更快的处理，保证回收率的基础上达到更好的净化能力，适用于多个复杂基质样品的检测。1.样品制备1.取8种色素样品各20mg，分别溶于10%的乙醇水溶液中，根据HPLC的出峰峰高调整相应浓度，配置成50ppm浓度的混标溶液，待用。2.取果冻基质4g于离心管内，加入10mL的提取液（乙醇：氨水：水=7:2:1），震荡混匀1min，在4000转的条件下离心5min.提取上清液，重复三次，收集上清液备用。3.取八宝粥基质4g于离心管内，加入10mL的提取液（140mL的乙醇：乙腈（2:1），再加60mL水和2mL氨水），震荡混匀1min，在4000转的条件下离心5min.提取上清液，重复三次，收集上清液备用。4.各取两种基质的上清液2mL于两个10mL容量瓶中，用超纯水定容至10mL，加入200uL的50ppm的混标溶液，用柠檬酸溶液调节至pH=6（±0.1），作为上样液备用。2.实验方法前处理实验准备SelectCore WAX柱(150mg/6mL)1. 上样液：准备备用液。  2. 活化：依次用6mL 甲醇、6ml10%甲酸水溶液活化;(视频如下图，图左为SelectCore WAX  SPE柱，图右为Brand W  WAX SPE柱）3. 上样：上样液注入SPE小柱中，弃去流穿液;(视频如下图，左为SelectCore WAX  SPE柱，右为Brand W WAX SPE柱）↑左为果冻基质上样，右为八宝粥基质上样↑4. 淋洗：移取6mL的甲醇溶液注入SPE小柱中，弃去淋洗液;5. 洗脱：移取6mL的5%氨水甲醇液注入SPE小柱中，收集洗脱液;(视频如下图，左为SelectCore WAX  SPE柱，右为Brand W WAX SPE柱）↑色素回收实验中的色素洗脱环节↑6. 收集：氮气吹干,用10%乙醇水溶液定容至和上样时一样的体积，过0.45umPTFE滤膜，上HPLC检测。 HPLC设定方法流动相A：乙腈       流动相B:0.02m乙酸铵水溶液色谱柱：ChromCore C18 4.6×250 5μm（厂商：纳谱分析）波长：254 nm进样量：5uL柱温箱：35℃梯度设置:3.结果图1 混标图2 果冻基质图3 添加水平为2.5mg/kg的果冻中人工合成色素检测图谱回收率数据：图4 八宝粥基质图5 添加水平为2.5mg/kg的八宝粥中人工合成色素检测图谱回收率数据：4. 结论据实验结果显示，纳谱分析的SelectCore WAX对八种人工色素具有很好的保留效果，并对两种基质中杂质和化合物的净化也有一定优势，且在样品前处理过程中发现，相较于Brand W的WAX柱，纳谱分析的SelectCore WAX在流速上占有明显的优势---快且均匀，根据数据显示回收率也符合要求，综上所述，该款固相萃取柱适用于食品中合成着色剂检测的前处理分析。订货信息本应用相关产品产品描述货号 固相萃取柱SelectCore WAX 150mg/6mL;30/pkgWAX060-060150-1分析柱ChromCore  C18 5μm，4.6 ×250mmA001-050018-04625S

人参皂苷是人参的主要成分，都具有相似的基本结构：含有由30个碳原子排列成四个环的甾烷类固醇核。他们依糖苷基架构的不同而被分为两组：达玛烷型和齐墩果烷型。其中，达玛烷类型包括两类：人参二醇型（A型），人参三醇型（B型）。人参皂苷Rg1、人参皂苷Re属于人参三醇型；人参皂苷Rb1属于人参二醇型。不同种类的人参皂苷有着不同的功效，如人参皂苷Rg1、Re可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用。人参皂苷Rb1则具有影响动物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用。12人参中人参皂苷的分离（中国药典2015）人参类草本植物中各类人参皂苷含量各有差异，因此明确各人参皂苷组分的含量对于中药材质量的控制有着重要意义。结论本应用依照药典方法，选用ChromCore C18反相色谱柱对人参中有效成份人参皂苷进行分离，使人参皂苷Rg1和人参皂苷Re之间拥有良好的峰型及分离度（分离度大于2.0），符合药典规定。——纳谱分析关注我们，更多干货分享我们坚持以质量、创新和服务为广大色谱工作者提供优质的色谱分离产品和技术支持。产品应用涉及小分子药物及多糖分析、生物分离、DNA/RNA核酸分离、手性拆分和样品前处理等。纳谱分析技术（苏州）有限公司

自2011年3月15日“瘦肉精”事件曝光后，政府加紧对瘦肉精这种非法添加物的管控。瘦肉精是一类药物的统称，因其食用后可导致急性中毒、代谢紊乱等症状，中国农业部已禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用。但是，一些不法商家铤而走险，违法添加瘦肉精，使得消费者深受其害，寻找一种快速高效检测瘦肉精的方法成为目前亟待解决的问题。应用分享猪肉中四种β受体激动剂的提取与检测 适用范围参考农业部1025号公告-18-2008 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法，本方法适用于猪肉、猪肝、牛肉等动物源性食品中沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗、氯丙那林等β-受体激动剂的检测。实验步骤1、样品酶解和提取：2 g样品加入8 mL乙酸铵缓冲液，充分混匀后加入50 μL β-盐酸葡萄糖醛苷酸酶-芳基硫酸酯酶，超声15 min，37 ℃酶解16 h，酶解后放置至室温，涡旋混匀，10000 rpm离心10 min，转移上清液于另一50 mL离心管内，加入0.1 mol/L高氯酸溶液5 mL，涡旋混匀，用高氯酸调节pH至1.0±0.2，10000 rpm离心10 min，将上清液转移于另一50 mL离心管内，用10 mol/L NaOH溶液调节pH至9.5±0.2，加入乙酸乙酯15 mL，涡旋混匀，并振荡10 min，5000 rpm离心5 min，取出上层有机相至另一50 mL离心管内，下层水相中再加入10 mL叔丁基甲醚，涡旋混匀，并振荡10 min，5000 rpm离心5 min，合并有机相，50 ℃氮气吹干，用2%甲酸水溶液5 mL溶解，备用。2、净化处理：SPE柱活化：SelectCore MCX，60mg/3mL小柱依次用甲醇、水、2%甲酸水溶液各3 mL进行活化；上样：取全部备用液过柱子；淋洗：依次用2%甲酸水溶液、甲醇各3 mL进行淋洗，再减压抽干；洗脱：使用2.5 mL 3%氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液在50 ℃下用氮气吹干，甲醇-0.1%甲酸水溶液复溶后离心取上清液上机。3、液相色谱条件色谱柱：ChromCore  C18，2.1 ×100mm，3 μm流动相：A：0.1%甲酸水；流动相B：乙腈，梯度洗脱步骤如下表所示：柱温：30℃进样量：2μL4、质谱条件离子源：电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）电喷雾电压：4000V干燥气：N2 （11L/min，300℃）雾化气压力：45psi实验谱图及加标回收率结果图1：10ng/mL 4种β-受体激动剂标准溶液的多重反应监测（MRM）色谱图图2：空白样品里的4种β-受体激动剂的多重反应监测（MRM）色谱图图3：添加量为1.0 μg/kg的4种β-受体激动剂的多重反应监测（MRM）色谱图样品加标回收率实验结果（添加水平为1.0 μg/kg）客户评价 该应用采用的SelectCore MCX固相萃取柱应用广泛，来自客户的好评不断！客户A某食药监用户你们的MCX柱子我用了，挺不错的，尤其流速确实很快，之前我做鸡蛋用Waters的小柱必须要先除酯才能过柱，而且流速很慢的，现在用你们的柱子不用除酯直接过柱，流速比预想的快很多，而且回收率也挺好。订货信息本应用相关产品产品描述货号 固相萃取柱SelectCore MCX 60mg/3mL;50/pkgMCX060-030060-1分析柱ChromCore  C18 3μm，2.1 ×100mmA001-030018-02110S

目前纳谱的色谱柱种类越来越多，合作伙伴也越来越多，所以对纳谱的产品和技术的咨询也日益增多，今天小编将一些大家经常咨询的问题和解答提供如下，便于大家的理解和更好地在以后的工作中使用。Q1:填料中孔径的概念？A1：我们通常所说的孔径实际上是个统计的、平均的概念，即平均孔径，它是指累积孔径分布曲线50%处的平均孔径，或是与孔径分布曲线的最高频度相对应的平均孔径。通过测试纳微UnSil5-1000与进口同类型的色谱填料的孔径分布，得出孔径分布曲线（图3），可以看出UnSil的孔径分布较窄，而进口填料的孔径分布较宽，因而UnSil的硅胶填料孔径的控制更加精准。以下是纳微科技不同孔径的微球在扫描电镜下的图片（图4）。纳微可以定制最大4000?孔径的微球。Q2:为什么要做封端处理？A2:一般常见的硅胶填料（没有经过封端处理），pH耐受性都在2-8之间，在碱性环境下，硅胶的Si-O-Si-O结构会被破坏而溶解。即使在pH5-7的环境中，硅胶表面的Si-OH也会电离。使得碱性化合物产生拖尾，严重影响分离效果。封端处理以后可以减少待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应，改善和保持较好的峰形，这对于碱性化合物的分离尤其重要。而不同的封端技术也会直接影响色谱柱的效能。纳微科技的硅胶填料经过特殊封端处理技术后(如UniSil Ultra系列产品），使得填料的pH耐受性有所提高（pH 2-10）,并且覆盖硅胶金属杂质还可以减少碱性化合物的拖尾，增强峰型对称性。通过在同等条件下，对UniSil Ultra与同类型的进口硅胶填料进行碱（pH10.0）冲洗，可以看出UniSil Ultra比同类型的进口D硅胶填料可以耐受更多次数和更长时间的强碱清洗（图5），从而证明UnSil Ultra的的耐碱性更强，使用寿命更长。碱洗条件：MeOH/TEA (pH=10.0)=40:60冲洗体积：60CV柱效测试：流动相：ACN/H2O=60:40柱温：35℃样品：甲苯Q3:C18柱选用的基本原则？A3:(1)选用经封端处理的色谱柱，可以防止碱性化合物的拖尾现象。(2)选用含碳量高的柱子，可以增加保留值。（还要综合考虑孔道结构和空间）(3)选用小颗粒的填料，可以提高分离度。（还要综合考虑压力和设备投入）(4)分子量大的组分选用大孔径填料的柱子。(5)纳微可以根据不同的样品条件提供不同规格的C18填料，例如常规的UniSil®C18, 耐碱性较强的UniSil® C18 Ultra,以及适用于100%水溶液的UniSil® C18 Polar等。Q4:测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？A4: 多肽一般还是可以用C18的，根据分子量不同可以选择150?、300?的孔径，有些小肽用100?也可以。在C18上保留太强时，C8，苯基，C4，C3也都可以用于多肽的分离。三肽也可以尝试100? C18，不过小肽往往极性偏大，普通C18上可能没有保留，这时需要使用亲水型C18或Hilic模式。以下是为大家推荐的纳谱ChromCore的色谱分析柱产品：（1）分子量较大的多肽（2000D以上）可以优先考虑纳谱ChromCore C18，ChromCore 300 C18。（2）小肽可以用ChromCore 120 C18，如果无保留，选择亲水型C18或Hilic模式。(3) C8系列有ChromCore 120 C8、ChromCore C8、ChromCore 300 C8、ChromCore AQ C8（亲水型)。(4) 苯基系列有ChromCore Phenyl、ChromCore PFP、ChromCore Biphenyl。(5) C4系列有ChromCore C4、ChromCore 300 C4、ChromCore 300 C4-T。(6) 亲水型C18可选ChromCore AR C18、ChromCore AQ C18、ChromCore Polar C18。(7) Hilic模式可选ChromCore HILIC-Amide、ChromCore HILIC-Imidazole、ChromCore Diol、ChromCore CN等。Q5:我之前有了解到贵公司也有手性色谱柱，之前买过国外品牌的手性柱，其手性柱价格相比普通反相色谱柱，要高出很多倍，不知道是本身柱子装填技术的难度大还是其他什么原因？它的主要技术关键在什么方面？A5：这个问题我们请纳微科技专门负责手性产品的朱总解答（1）手性柱使用的填料介质是大孔多孔介质，生产工艺复杂；（2）在介质上涂敷或键合的手性位点官能团生产工艺复杂；（3）官能团与介质基球涂敷或键合工艺难度大，且工艺复杂；（4）装柱工艺及成本也较高。这些都导致了手性色谱柱比普通反相柱价格高出很多。纳微科技手性填料包括OD、OJ、OZ、AS、AJ 5个型号的产品，手性色谱柱从填料的生产（包括直链淀粉产品研发）到装柱一系列过程都是自己完成，所以和国外相比，性价比更高，另纳微还可以提供手性拆分纯化服务。Q6:色谱柱的技术都有哪些？国内外的色谱柱都有何差别？A6:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术，填料是色谱柱的心脏，填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单，不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出紧密、稳定、均一的柱床，需要经验积累。纳微有专门提供装柱培训的课程。有兴趣的朋友可以联系我们。很多人都认为国内和国外的色谱柱差距很大：原因在于国内的的公司都不会自己开发填料，一般都会买国外现成的填料装柱，填料质量控制权不在自己手里。另外，对色谱柱性能很关键的基础材料——裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比，差距很大。    纳谱分析的填料供应商纳微科技经过长达十余年的潜心研发，目前已拥有单分散硅胶色谱填料的精准制备技术、表面功能化技术和规模化生产能力，打破了填料长期依赖进口的局面。从基球的大规模生产-表面键合和封端-装柱全程在公司内部完成。可以保障整个生产工艺过程可控和可溯源。

引言现代高效液相色谱分析中，色谱柱的选择直接影响了分离效果的好坏，选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间，并且使方法更具稳定性。但是现在市场上色谱柱种类繁多，选择色谱柱时哪些参数是我们必须考虑的呢？色谱柱参数一、物理性质柱管规格：即柱长和内径，如最常见的250*4.6mm。一般柱长在2—250mm，柱越长，分离度越高，但柱压更高，分离所需时间更长;但分离度与理论塔板数的平方根成正比，所以一昧增加柱长并不是最有效的分离手段，且要考虑实际柱压的影响。一般情况下，150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。粒径：粒径能够影响色谱分离度。粒径越小，分离越快，柱效越高，但柱压力越高，柱容易被污染，导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料，复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径，更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而，3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍，因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。图1：相同倍数下1.7-10um填料（来源:纳微单分散微球）    3.孔径，60A，120A，300A等。孔径小，则含孔率高，比表面积大，载碳量高;色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配，保证分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配，通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。图2：孔径电镜图（来源：纳微单分散微球）    4. 填料颗粒形状，一般有球形和不规则形，当使用黏度较大的流动相时，球形颗粒可以降低柱压，延长色谱柱寿命。一般HPLC色谱柱均为球形填料，在中低压制备领域仍在采用大量的无定性填料。     5.比表面积，指的是每克填料的表面积，如180m2/g—350m2/g，与粒度和含孔率有关;比表面积大，会增加样品与键合相之间的反应，增加保留和分离度;比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间，并不是比表面积大或者小就更好，需要选择合适的比表面积。二、化学性质硅胶基质：最通用的基质，强度大，化学修饰容易，但使用的pH值范围有限(一般为2—8，特殊修饰的可以达到1—12)。聚合物基质：多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化学稳定，应用pH范围宽，具有更强的疏水性，对蛋白质等样品分离效果较好;但强度较小，有机溶剂可能导致聚合物溶胀而受损，批次重复性较差，商品化色谱柱不多，一般价格较贵。载碳量：基质表面键合相的比例，载碳量高，则保留增加，适合分析非极性化合物。键合相：键合试剂不同，对化合物的选择性不同，一般长链的烷基键合相(C18 C8)比短链的(C4 C3)稳定;非极性的键合相比极性的键合相(-NH2)稳定。封端：用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来，以减少残留的硅醇基，减轻待测组分与酸性硅羟基反应而引起的色谱峰拖尾现象。尤其对于极性样品而言，未封端处理的色谱柱分离效果较差。正相&反相色谱：目前市场上主要以反相色谱为主，约占80%的比例。 在了解了色谱柱的基本知识后，色谱柱的选择也就迎刃而解了。柱长及内径的选择　　长度的选择：柱越长，总柱效越高(n值越大)，柱越长，分析时间也越长。250—300mm是最普遍的柱长，实验室一半以上的工作都是采用此规格柱子，一般用来分离l0到50个组份的中等至复杂混合物;500—600mm，要求较高分辨率的应用，—般用来分离大于50个组份或包含有难分离物质的复杂样品程序升温分析。　　内径：柱效率与柱半径平方成反比，内径越小柱效越高，但内径越大，柱容量也增加，允许进样量就越多。当进样量超过柱容量时，则因柱内每块理论板内不能建立真正的平衡，将会导致色谱蜂畸变，柱分辨率降低，重现性不好。因此对于复杂样品需要精确分离，必须使用小内径柱子。另一方面若样品中存在具有很不相同浓度组份化合物，为了增加样品容量就必须使用内径大的柱子，目前实验室使用最常见的柱子内径一般是4.6mm。一般选择原则分析大分子量化合物选择大孔径色谱柱 ;对于高pH值或者碱性化合物需要选择高封端或者特殊封端的色谱柱，以改善峰形，延长色谱柱使用寿命等。　    现在商品化的液相色谱柱琳琅满目，根据色谱柱的参数可以给我们提供一个初步的选择，但由于各个仪器厂商的填料技术和键合技术都有差异，即使都是C18柱，同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高温的、有适合碱性样品的等等。所以在选择色谱柱前要好好研究色谱柱参数，仔细阅读色谱柱说明书，才能找到合适的色谱柱和适宜的分离方法。关注我们，更多干货分享我们坚持以质量、创新和服务为广大色谱工作者提供优质的色谱分离产品和技术支持。产品应用涉及小分子药物及多糖分析、生物分离、DNA/RNA核酸分离、手性拆分和样品前处理等。纳谱分析技术（苏州）有限公司

热点事件紧急下架！法国核桃油品牌“拉杜蓝乔”7月15日，一份网传文件显示，法国核桃油品牌“拉杜蓝乔（La Tourangelle）”的国内进口商对所有批次产品检测，发现均存在“邻苯二甲酸酯类物质”残留，要求各渠道代理商从15日起紧急下架所有产品。内容显示：因 LA TOURANGELLE产品在抽查中发现部分产品含有“邻苯二甲酸酯类物质”成分残留，不符合原卫生部办公厅文件《卫办监督函(2011)551号》的要求。该品牌在国内尤其是电商平台十分火爆，虽然价格不菲（一瓶近百，价格是其他普通国内品牌核桃油的好几倍），但仍然受到母婴群体的大力热捧，是名副其实的“网红”核桃油。其中，京东一家全球购店铺售卖的该品牌500ML食用核桃油已累计获得1.6万条评价。评论区也显示核桃油购买者以母婴群体为主，购买者会在婴儿辅食中添加。事件争议报复还是良心发现？代理商为何自爆？有意思的是：此次事件为中国总代理千麦实业（上海）有限公司主动批露，称近期对其所有批次核桃油产品进行全面检测后，发现均存在该物质残留问题。而生产商 LA TOURANGELLE SAS发文，强调该程度的残留是无害的，本着对消费者负责的态度谨慎起见，公司决定即日起暂停销售所有LA TOURANGELLE产品。文件要求各渠道代理商请紧急安排下架事宜，统计批次数量等候进一步召回安排。该通报称，7月15日紧急提醒各渠道商暂停销售，只是一个风险警示，并非全面召回，待得到全面检测报告后将第一时间通报情况，并对特定批次发布召回方案。网上不少言论称，是因为这家经销商的代理资格马上就要到期了，他们出于报复的心态自爆产品有问题。不管是出于利益纠葛还是别的原因，塑化剂超标是事实，商家的行为侵害消费者的权益。塑化剂影响超标了吗？邻苯二甲酸酯类物质是什么？首先，超标了吗？是的。不管是在中国还是品牌所在地法国，都是不合规定的。据原卫生部办公厅发布的《卫办监督函(2011)551号》文件中提及，严禁在食品、食品添加剂中人为添加“邻苯二甲酸酯类物质”，不得接触油脂类食品和婴幼儿食品。由于担心邻苯二甲酸酯带来的潜在不良影响，欧洲也已经禁止某些邻苯二甲酸酯用于化妆品和婴儿玩具。什么是邻苯二甲酸酯？邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，是邻苯二甲酸形成的酯的统称，主要用于聚氯乙烯材料，令聚氯乙烯由硬塑胶变为有弹性的塑胶，起到增塑剂的作用，也就是俗称的“塑化剂”。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品（如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液）等数百种产品中。在本次事件中，商家不存在任何动机往油脂中添加塑化剂，因此食用油脂中发现塑化剂微量存在，不是蓄意添加，而是因为在生产、物流、包装等环节中接触到一些塑料制品，瓶子用的塑料垫圈都可能造成迁移。塑化剂有脂溶、醇溶的特性，对食用油脂来说，确实应该在工艺流程和包装材料上“无塑化”，彻底和塑化剂划清界限。邻苯二甲酸酯对人体有哪些影响？研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，可干扰内分泌，是造成男子生殖问题的“罪魁祸首”。目前已在实验动物中证实其能导致发育缺陷或生殖系统危害，可干扰啮齿类动物的生殖功能，目前还没有太多扎实的流行病学研究证实塑化剂对成年人严重健康风险，但已发现塑化剂可能造成成年男性精子质量的降低。研究还发现孕妇产前塑化剂暴露，可能导致男性婴儿的生殖系统畸形，包括阴茎短小、睾丸发育不全。通常认为，儿童，尤其是尚在母亲体内的男性胎儿可能会较一般人更易受塑化剂伤害，当塑化剂经由母体血液进入胎儿体内的时候，可能会干扰、抑制男性生殖系统的发育。同时，美国国家毒理学计划（NTP）在第12版致癌物报告中指出，邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯也叫DEHP合理地被认为是一种人类致癌物质。而婴幼儿和胎儿阶段是生长发育重要的窗口期，这个时候如果接触到这些化学物质，可能造成儿童智力和认知水平下降，会对健康造成长期持久影响。专家建议，尽管目前尚缺乏塑化剂对人类生殖功能产生损害的直接证据，但对于孕妇、婴幼儿而言，要尽量减少塑化剂暴露，对于婴幼儿食品，塑化剂应该作为必检项目。此外，在化妆品中，指甲油的邻苯二甲酸酯含量最高，很多化妆品的芳香成分也含有该物质，化妆品中的这种物质会通过女性的呼吸系统和皮肤进入体内，如果过多使用，会增加女性患乳腺癌的几率，还会危害到她们未来生育的男婴的生殖系统。已经购买使用了怎么办？根据欧洲食品安全局的风险评估，增塑剂DEHP的每日耐受摄入量TDI为0.05mg/kg体重。按照代理商提供的检测报告含量，8kg体重的婴儿每天摄入250ml的核桃油才达到耐受量，因此各位家长无需过度的自责恐慌。1.停止使用。2.如果是在拉杜蓝乔天猫旗舰店购买的，可以联系客服，把订单号、产品批号发给他们，等待具体召回的信息虽然超标不会致命，但我们也绝不容忍！那么，邻苯二甲酸酯如何检测？检测手段高效液相色谱法：邻苯二甲酸酯的分离U.S. EPA  606规范了该类物质的测试方法，可选用ChromCore 120 C18色谱柱，结合简便的乙腈/水系统进行梯度洗脱，在该色谱条件下，各组分均有良好的分离度和峰型，可用于这类化合物的分析检验。希望相关部门加强监测力度，共同打造健康的食品安全环境。纳谱分析同样致力于食品安全、环保、医药研发领域，为广大色谱工作者提供优质的气液相色谱分离产品和技术支持！关注我们，更多干货分享我们坚持以质量、创新和服务为广大色谱工作者提供优质的色谱分离产品和技术支持。产品应用涉及小分子药物及多糖分析、生物分离、DNA/RNA核酸分离、手性拆分和样品前处理等。纳谱分析技术（苏州）有限公司

气相色谱法中，为了扩大气相色谱法的适用范围，提高检测灵敏度，有些样品在注入色谱柱前需要作适当的前处理。常用的样品前处理技术有顶空法、衍生化法、裂解法、吸附管法等，今天和大家简要介绍应用较多的顶空法和衍生化法。1.顶空分析法    对于有些固体或液体样品中的挥发性成分，可采用顶空技术进行试样的前处理。这种方法是将固体或液体样品定量加入到一定容积的容器中，容器口用硅橡胶等材料的塞子密封，恒温保持一定的时间，使试样中的挥发性组分挥发到容器上部的气相（顶空）中，并使组分在气相与液相（或固相）中的分配达到平衡，然后用注射器抽取容器上部的气体进行分析。由于挥发性组分在气相中的浓度与其在液相中的含量成比例，所以可以在相同的实验条件下，通过比较试样与已知标准品的色谱峰面积，进行定量分析。   目前，顶空分析的装置已做成精巧的气相色谱仪专用附件，供用户选购。一般实验室采用血清瓶等容器作试样瓶，用水浴箱作恒温装置，用注射器作进样器，也可进行简易的顶空分析，但准确性和重复性有时不够好。  由于固体试样和成分复杂的液体试样是不能直接在气相色谱上进样的，采用顶空法技术作这些试样的前处理，可以避免采用其他复杂费事的试样前处理手段，并提高检出灵敏度。而且，由于注入气相色谱仪的气体比较“清洁”，色谱分离容易，色谱柱的寿命也能得到延长气相色谱的顶空分析技术应用较多。例如，测定污水中的挥发性有害成分；测定生物材料（体液等）中挥发性有机组分；测定咖啡、茶或其他饮料中的挥发性香味成分等。2.样品的衍生化法         有许多化合物由于其挥发性差、极性太强或色谱峰拖尾严重，用气相色谱法分析有困难。通常可采用将试样进行衍生化处理，以实现以下目的：增加试样的挥发性。减小化合物（酸、酚和醇）的极性。增加试样的热稳定性。引入对某种选择性检测器（例如ECD）有特别敏感响应的基团（例如CF3)。将试样从水相中有效地提取出来（例如酚胺的酰化反应）。通常，试样的衍生化处理是通过化学反应将一些极性化合物（例如含NH，OH，SH基团的化合物）的活性氢原子进行取代。根据所用的试剂和发生的反应，衍生化方法可分为五类，即酰化、烷基化、硅烷化、缩合和酯化。关注我们 更多干货分享液相色谱·气相色谱·样品前处理

一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。流动相的选择选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。④粘度要低(应高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。秘诀1由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。秘诀2三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。秘诀3粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺(如，三乙胺)又称为减尾剂或除尾剂。(三乙胺triethylamine 氨分子中的氢原子被3个乙基取代的产物。分子式(CH3CH2)3N。易挥发的无色液体，有氨的气味。熔点-114.7℃，沸点89.3℃，相对密度0.7275(20/4℃)。溶于水和乙醇、乙醚等有机溶剂。三乙胺有碱性，与无机酸能生成易溶于水的盐类。可由N，N-二乙基乙酰氨与氢化铝锂反应制取，也可用乙醇胺进行气相烷基化反应合成。用于制橡胶硫化促进剂、润湿剂和杀菌剂等，也可用作溶剂和用于合成四级铵化合物。)缓冲液pH值的选择在选择缓冲液pH值之前，应先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka两个pH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，从pH公式：pH=Pka+log([A-]/[A])得知，溶液pH值高于或低于Pka两个单位，化合物中99%以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。例如苯甲酸的Pka等于4.2，理论上由pH公式得知，当溶液pH值等于2.2时，99%的苯甲酸以中性化合物存在，pH值等于6.2时99%的苯甲酸以离子形式存在，所以当缓冲液pH值等于2.2时，中性化合物以羧酸形式保留于反相柱。当化合物只有氨基时，缓冲体系的选择十分简单，大多数氨基化合物在pH值小于9时都被质子化，所以所有pH值在7或更低的溶液均适合应用，你也许会问水的pH值大约是7，为什么还用缓冲盐，因为缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，pH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为pH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。在上面两个例子中，pH=3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，在一般情况下，它是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。流动相的脱气HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。(噪声增大，基线不稳，突然跳动)。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相(如，烷基胺)反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。溶解氧能与某些溶剂(如，甲醇、四氢呋喃)形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收(特别是在260nm以下)，并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰(假峰)。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中(特别是还原电化学法)，氧的影响更大。除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。超声脱气比较好，10~20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了(一般500mL溶液需超声20~30min方可)，此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。离线(系统外)脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。在1~4小时内，溶剂又将被环境气体所饱和。在线(系统内)脱气法无此缺点。最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体(通常是氦)将空气替换出来。此外还有在线脱气机。一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。但氦气昂贵，难于普及。流动相的滤过所有溶剂使用前都必须经0.45μm(或0.22μm)滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外(除非在标签上标明“已滤过”)。用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相(脂溶性)滤膜和水相(水溶性)滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解!溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。流动相的贮存流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。卤代有机溶剂应特别注意的问题卤代溶剂可能含有微量的酸性杂质，能与HPLC系统中的不锈钢反应。卤代溶剂与水的混合物比较容易分解，不能存放太久。卤代溶剂(如，CCl4、CHCl3等)与各种醚类(如，乙醚、二异丙醚、四氢呋喃等)混合后，可能会反应生成一些对不锈钢有较大腐蚀性的产物，这种混合流动相应尽量不采用，或新鲜配制。此外，卤代溶剂(如，CH2Cl2)与一些反应性有机溶剂(如，乙腈)混合静置时，还会产生结晶。总之，卤代溶剂最好新鲜配制使用。如果是和干燥的饱和烷烃混合，则不会产生类似问题。

醛酮类化合物的检测醛酮类化合物是城市大气中主要的污染物之一，具有慢性毒性，对人体产生重大危害。例如甲醛被广泛应用于化工、木材加工、纺织及消毒防腐等领域，但因其对皮肤粘膜的刺激作用危害较大，所以在木材、纺织领域的应用已被严格限制或是被其他的化合物取代，因此检测醛酮类化合物在大气、室内，车内以及其他场所的含量是十分重要的。在常温常压下，低级醛为液体，高级醛为固体，只有甲醛是气体。醛的化学性质非常活泼，能与亚硫酸氢钠、氢、氨等起加成反应，并易被弱氧化剂氧化成相应的羧酸。U.S. EPA Method 554规范了环境中醛酮类化合物的检测方法。醛酮类化合物一般采用液相色谱法检测，但因这类物质较为活泼，因此在检测前需先对这些化合物进行衍生化（DNPH）处理，生成稳定的腙类化合物，再对其进行分析。结论本次应用选用了ChromCore C18反相色谱柱，根据各组分疏水性的差异，结合简便的甲醇/水系统进行梯度洗脱，在该色谱条件下具有良好的峰型，可用于醛酮类化合物的检验。——纳谱分析关注我们，更多干货分享我们坚持以质量、创新和服务为广大色谱工作者提供优质的色谱分离产品和技术支持。产品应用涉及小分子药物及多糖分析、生物分离、DNA/RNA核酸分离、手性拆分和样品前处理等。纳谱分析技术（苏州）有限公司

这是一条强烈推荐的分割线纳谱分析体积排阻色谱(SEC)是用来测定大分子和聚合物类分子量分布的重要方法。它是一种不通过分析物与固定相之间吸附作用或分配作用的色谱方法。其原理是根据填料孔隙而分离样品分子，样品大分子不能进入或只能进入部分孔隙，而较小分子则能进入大多数或全部孔隙。在SEC中，大分子先从柱中洗脱，较小分子后洗脱，而能够进入所有孔隙的最小分子最后从柱中洗脱出来。同时，随着以单克隆抗体（单抗）为基础的生物药物迅速发展，需要对复杂的生物分子的关键质量属性(CQA)进行严格的监测和控制，以保证药物安全性和有效性。SEC也是广泛应用于生物制药中单抗和相关聚体检测的重要分析手段。BioCore SEC 高效体积排阻色谱柱BioCore SEC是纳谱分析推出的全新高性能体积排阻色谱柱系列。该产品采用自主创新技术开发的高性能体积排阻分离介质，以孔道结构经过特殊设计的单分散多孔硅胶为基质，在硅胶表面键合中性亲水层以将分析物与固定相之间的相互作用降到最低，广泛地应用于生物制药，医疗，科研等领域。BioCore SEC系列BioCore SEC-150 适用于多肽，多糖，低分子量寡核苷酸和蛋白分离BioCore SEC-300 适用于单克隆抗体单体和聚体分离BioCore SEC-500适用于高分子量蛋白及聚体和DNA/RNA分析特点1高柱效，良好的分离度2蛋白非特异性吸附极低，具有峰形对称和回收率佳的优势3填料耐压性能优越，比同类产品具有更长的使用寿命4产品系列丰富，提供各种孔径涵盖宽广的分子量范围，满足从小分子化药到生物大分子的分离需求01  基球粒径更均匀，更强的机械强度同等倍数下，BioCore SEC填料颗粒度均匀，粒径高度均一。6000psi的压力下，BioCore SEC填料形态完好，竞争对手SEC填料则出现明显破裂。↑02  非特异性吸附（离子交换）更低Lysozyme在同类竞争产品SEC柱上的保留时间随流动相中盐浓度的降低而显著增加，有着较强的离子交换这一非特异性吸附作用,而在BioCore SEC-300上的保留时间受流动相中盐浓度的影响很小，是一种性能更佳的体积排阻分离介质。↓BioCore SEC系列参数标准曲线应用案例蛋白分离头孢地嗪钠有关物质II 头孢曲松钠聚合物低分子量肝素单克隆抗体（IgG1）的聚体分离单克隆抗体（IgG4）的聚体分离融合蛋白 (Fusion Protein)人血白蛋白及其聚体应用谱图分享1.蛋白分离2.头孢地嗪钠有关物质II （中国药典2015 SEC方法）3.头孢曲松钠聚合物（中国药典2015 G-10等效SEC方法）4.低分子量肝素（欧洲药典EP 9.8）参照CRS标准表对谱图进行处理，使用GPC模拟软件，以保留时间为横坐标分子量的对数值为纵坐标拟合三次方程，建立校正曲线，相关系数0.99965.单克隆抗体（IgG1）的聚体分离6.单克隆抗体（IgG4）的聚体分离7.融合蛋白 (Fusion Protein)8.人血白蛋白及其聚体订货信息*4.6×50mm为一体式保护柱*4.6×10mm为保护柱柱芯，保护柱卡套货号：Guard-04601S1.色谱柱内径的选择：除了传统的7.8mm内径色谱柱，我们同时提供更加节省溶剂的4.6mm内径规格。使用内径较小的SEC色谱柱，在样品量受限制的情况下可以提高灵敏度，且能够为您节约溶剂消耗及环保处理费用。2.保护柱的选择：50mm长度的一体式保护柱具备更好的耐受性，而保护柱套装（卡套+柱芯式）经济成本更小。关注公众号在线申请试用

 喜报2019年6月，苏州市科技局财政局下发了苏科资[2019]33号文件，纳谱分析技术（苏州）有限公司董事长刘晓东博士荣获苏州市“2019年度第一批姑苏创新创业领军人才”称号（简称“姑苏领军人才”）。这是刘晓东博士继2018年12月荣获苏州工业园区“2018年度科技领军人才”（中共苏州工业园区工作委员会文件苏园工〔2018〕207 号）之后再次传来的喜报。发布日期：2019.6.21发布日期：2018.12.7刘晓东 博士曾任世界500强生命科学仪器巨头公司色谱耗材部全球研发总监、资深色谱专家。擅长色谱柱填料的设计、 表面改性、装填及应用开发，主导过40余项新型液相色谱耗材产品的研发生产和商品化。美国发明专利25项，撰写技术论文50余篇, 并在国际大型色谱会议发表邀请报告50余篇。2018年5月共同成立了纳谱分析技术（苏州）有限公司，致力于新一代液相色谱耗材产品的研发、生产、应用及国产化。纳谱分析纳谱分析技术（苏州）有限公司是一家专注于研发、生产和销售液相色谱产品的中外合资企业，采用国际领先而具有创新性的UniSil®和UniCore®单分散硅胶/聚合物微球，结合世界先进的微球表面处理及键合封端修饰技术，推出了全新的色谱分离产品，具备卓越的产品性能和稳定性，服务于化工、制药、生物技术、食品安全和环保等行业领域，为广大色谱工作者提供优质的产品和技术支持。 未来我们将与对标世界先进水平，提高核心技术竞争优势，加强创新成果转化，优化产品结构，积极发挥引领示范带头作用，组建一批优秀的管理人才队伍和技术人才队伍，矢志成为具有持续竞争力的创新型科技企业。长按关注

乙腈(ACN)和甲醇(MeOH)是在反向色谱柱方法开发中广泛使用的两种常见溶剂。所以，除了知道乙腈比甲醇有更高的洗脱能力这一事实外，色谱分析人员还应该知道其他的特性吗?让我们来讨论一些所有色谱专家都应该知道的问题。 流动相溶液的准备首先，对流动相溶液的准备提出几点意见。 只有纯水溶液部分才能正确调整pH值。不要尝试测量或调整有机或有机混合物的pH值。 制备二元混合物的方法有两种，即V/V流动相溶液。 方法1是用特定体积的“A”溶液填充一个量瓶，然后用“B”溶液将量瓶填满。 方法2是用指定数量的“A”溶液填充量筒(或容量瓶)；用指定数量的“B”溶液填充第二个量筒(或容量瓶)，然后将两者的内容混合在一起。 无论您使用哪种方法，请在您的高效液相色谱法中完整地记录它，以便任何阅读它的人都能准确地复制它。上面描述的两种方法在设计上都是正确的，但是会产生不同性质的结果。紫外线吸收光对于HPLC级溶剂(我们在HPLC分析中应始终使用HPLC级溶液)，乙腈的吸光度在这两种溶剂中最低，非常适合低紫外光分析。甲醇在205-210nm左右有较高的紫外光吸收值，在非常低的紫外光范围内略有限制。溶解性乙腈和甲醇在溶解多种缓冲盐和样品的能力上存在显著差异。这些差异在方法开发中至关重要。 1.流动相溶解度 梯度运行显示低重现性或失败的一个常见原因可能与运行高浓度缓冲液和高浓度有机溶液有关。而含有浓度小于10mM盐溶液的水溶液/有机溶液在大多数梯度条件下不太可能沉淀（最多98%是有机溶剂，而不是100%)，大多数与高效液相色谱应用一起使用的缓冲溶液会有更高的盐浓度，当分析条件中有机溶剂含量较高时可能会从溶液中析出（导致堵塞，泄漏，插头和不准确的结果）。在反向色谱法中选择有机组成时要谨慎。确保使用的溶液在所有浓度下都是稳定的。还要验证缓冲能力是否仍然存在，当使用高有机浓度时(当缓冲液被稀释时)。不确定盐是否会溶解?只要把同样浓度的溶剂混合起来做测试就行了。观察它，有任何浑浊或可见颗粒吗?你就可以得到你需要的答案。 甲醇总体上具有更好的溶解度特性(优于乙腈)，这意味着它在较高浓度下能更好地溶解大多数盐，从而获得更好的性能和更少的沉淀。 2.样品的溶解度(对峰形和保留的影响)液相色谱的一个基本要求是样品完全溶解在流动相(初始流动相)中。在分析前，将样品溶解在流动相或强度稍弱的溶液（不是更强的溶液）。这确保它将作为一个集中的段塞加载到柱的顶部，以改善峰形和RSD。如果样品没有完全溶解在流动相，那么你实际上并没有分析整个样品。甲醇优于乙腈的另一个方面是它能完全溶解更多类型的样品。这一改进的溶解度可能导致更好的整体峰形。甲醇的选择性也不同于乙腈(不仅仅是洗脱强度)，这可能导致峰洗脱时间与预期的保留时间不同。这也是为什么在开发反向方法时，我们总是尝试使用含有乙腈或甲醇的不同流动相混合物的另一个原因。 永远不要假设一种溶剂会比另一种溶剂更好。太多的色谱新手只使用乙腈作为他们方法开发的主要有机溶剂。请不要犯他们的错误，这样的策略表明缺乏实践经验和知识。您必须首先分别尝试它们（乙腈&甲醇）用你的样品来评估结果（在适用的情况下最好从不同pH值的全面梯度开始）。如果您在最初的时间内测试了这两种类型的溶剂，那么将获得回报，因为还没有开发出能够使用您自己的样品来预测真正准确的结果的模拟器。可能会惊讶地发现，有多少样品使用甲醇溶液显示出更好的峰形和性能。如果没有看到任何改善，至少你现在知道了，因为你已经尝试过了，并且可以满怀信心地前进。背压乙腈的粘性比甲醇小，因此通常会导致整体柱压和系统背压降低。乙腈和水的混合物也会发生吸热反应(冷却溶液)，从而在溶液中捕获气体。如果你预先混合你的流动相，让它静置几分钟后在制备。 甲醇比乙腈更粘稠。它还有一个不寻常的特性，就是甲醇和水的50/50混合物会产生一个比甲醇或水更高的系统和柱背压。它的峰值压力是由50/50的混合物所观察到的。两种溶液在开始混合释放出一些气体也会产生放热反应。在制备溶液时，最好是让溶液静置几分钟，然后在高压液相色谱系统中使用。希望这篇关于这两种常用高效液相色谱溶剂的差异的简短讨论将有助于您开发出更好的高效液相色谱和LC-MS方法。

     2019年6月18日至6月20日，由Informa Markets、中国医药保健品进出口商会主办，上海博华国际展览有限公司协办的第十九届世界制药原料中国展（CPHI China）在上海新国际博览中心召开。第十九届世界制药原料中国展（CPHI China）携手第十四届世界制药机械、包装设备与材料中国展（P-MEC China），2019世界生化、分析仪器与实验室装备中国展（LABWorld China）等同期展会，展出面积超过20万平方米，共17个展馆，吸引3200余家国内外展商和70000余人次的观众参加。    纳谱分析携手纳微科技、赛谱仪器共同参加这一亚洲首屈一指的制药工业贸易盛会，重磅展出“智造引领世界”的多款明星填料、预装柱、分析柱及分离纯化解决方案。