标准物质可以是纯的或混合的气体、液体或固体。例如，校准粘度计用的水、量热法中作为热容量校准物的蓝宝石、化学分析校准用的溶液。标准物质和化学试剂没有必然的联系。标准物质可以是高纯的[1]化学试剂（但高纯试剂不一定就是标准物质，还要看是否符合标准物质的特征以及是否有相应的标准证书），也可以是按照一定的比例配制的混合物（例如pH标准溶液），甚至可以是一些天然样品按照一定的方法制备的具有复杂成分的标准样品（比如临-床分析中的标准物质、工业上不同品质的样品）。　　有证标准物质　　有证标准物质certified reference material(CRM）：附有证书的标准物质，其一种或多种特性量值用建立了溯源性的程序确定，使之可溯源到准确复现的表示该特性值的测量单位，每一种认定的特性量值都附有给定置信水平的不确定度。　　有证标准物质一般成批制备，其特性量值是通过对代表整批物质的样品进行测量而确定，并具有规定的不确定度。当物质与特制的器件结合时，例如，已知三相点的物质装入三相点瓶、已知光密度的玻璃组装成透射滤光片、尺寸均匀的球状颗粒安放在显微镜载片上，有证标准物质的特性有时可方便和可靠地确定。上述这些器件也可以认为是有证标准物质。　　所有有证标准物质均应符合中国计量规范JJF 1001—1998（（通用计量术语及定义》中给出的“国家测量标准”的定义。有些标准物质和有证标准物质，由于不能和已确定的化学结构相关联或出于其他原因，其特性不能按严格规定的物理和化学测量方法确定。这类物质包括某些生物物质，如疫苗，世界卫生组织已经规定了它的国际单位。　　有证标准物质（CRM）是标准物质（RM）中的一个特殊类别，须附有符合一定要求的认定证书。根据以上定义，有证标准物质（CRMS）是标准物质（RMS）的子集，即，标准物质（RM）可以是有证标准物质（CRMs），也可以是非有证标准物质。但是，标准物质（RM）这个术语常被误用作表示非有证标准物质。　　认定证书中给出的认定特性值（certifled property value）具有溯源性，因为，该值是通过建立了溯源性的严格测量程序测定的，所以保证了认定值溯源到准确复现的表示该值的测量单位。　　认定的特性值须附有不确定度。因为没有不确定度的测量结果不是一个完整的结果，所以认定特性值必须都附有给定置信水平下的测量不确定度。由于认定证书是有证标准物质的重要技术证明和使用者的重要信息来源，因此，可以认为它是有证标准物质的重要组成部分。为使研制（生产）认定机构与使用者之间的这种信息传递方式更加有效，认定者发布的信息能够满足使用者的要求，国际标准化组织/标准物质委员会（ISO/REMCO）制订了有证标准物质证书的定义和有关标准物质证书的指南ISO指南31。注2是对有证标准物质的制备（生产）方式、定值测量原理和要求进行了一个简单的陈述，关于这些方面的更具体的描述和要求可以参考相关指南。　　现行的sI单位制并不能覆盖所有分析测量。遇到这类测量溯源性问题时，就需要寻求其他解决问题的途径。通常是要看其他国际权威机构是否定义并复现了相应的国际单位，如果没有的话，则要使测量参考至协议的有证标准物质，特定的方法或公议测量标准。为了在全球取得测量结果的溯源性和可比性，国际计量委员会（CIPM）开展的多边互认（MRA）也是按照这一思路进行的。

　　目前我国的试剂类规格基本上按纯度(杂质含量的多少)划分，共有高纯、光谱纯、基准、分光纯、优级纯、分析和化学纯等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要优级纯、分级纯和化学纯3种。(1)优级纯(GR：Guaranteed reagent)，又称一级品或保-证试剂，99.8%，这种试剂纯度最-高，杂质含量最-低，适合于重要精密的分析工作和科学研究工作，使用绿色瓶签。(2)分析纯(AR)，又称二级试剂，纯度很高，99.7%，略次于优级纯，适合于重要分析及一般研究工作，使用红色瓶签。(3)化学纯(CP)，又称三级试剂，≥ 99.5%，纯度与分析纯相差较大，适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色(深蓝色)标签。(4)实验试剂(LR：Laboratory reagent)，又称四级试剂。纯度远高于优级纯的试剂叫做高纯试剂(≥ 99.99%)。高纯试剂是在通用试剂基础上发展起来的，它是为了专门的使用目的而用特殊方法生产的纯度最-高的试剂。它的杂质含量要比优级试剂低2个、3个、4个或更多个数量级。因此，高纯试剂特别适用于一些痕量分析，而通常的优级纯试剂就达不到这种精密分析的要求。目前，除对少数产品制定国家标准外(如高纯硼酸、高纯的冰乙酸、高纯氢氟酸等)，大部分高纯试剂的质量标准还很不统一，在名称上有高纯、特纯Extra Pure)、超纯、光谱纯等不同叫法。除了上述四个级别外，目前市场上尚有：基准试剂(PT：Primary Reagent)：专门作为基准物用，可直接配制标准溶液。光谱纯试剂(SP：Spectrum pure)：表示光谱纯净。但由于有机物在光谱上显示不出，所以有时主成分达不到99.9%以上，使用时必须注意，特别是作基准物时，必须进行标定。根据高纯试剂工业专用范围的不同，可将其分为以下几种：⑴光学与电子学专用高纯化学品，即电子级试剂(EIectronicgrade)试剂。⑵金属-氧化物-半导体(Metal-Oxide-Semiconductor)电子工业专用高纯化学品，即UP-S级或MOS试剂(读作：摩斯试剂)。一般用于半导体，电子管等方面，其杂质最-高含量为0.01-10ppm，有的可降低到ppb数量级，金属杂质含量小于1ppb，尘埃等级达到0-2ppb，适合0.35—0.8微米集成电路加工工艺。⑶单晶生产用高纯化学品。⑷光导纤维用高纯化学品。此外，还有仪分试剂、特纯试剂(杂质含量低于1/1000000～1/1000000000级)、特殊高纯度的有机材料等。(5)等离子体质谱纯级试剂(ICP-Mass Pure Grade):绝大多数杂质元素含量低于0.1ppb，适合等离子体质谱仪(ICP Mass)日常分析工作。(6)等离子体发射光谱纯级试剂(ICP Pure Grade):绝大多数杂质元素含量低于1ppb ，适合等离子体发射光谱仪(ICP)日常分析工作。(7)原子吸收光谱纯级试剂(AA Pure Grade):绝大多数杂质元素含量低于10 ppb ，适合原子吸收光谱仪(AA)日常分析工作。国外试剂纯度级别说明Ultra Pure：超纯，与GR级相近。High Purity：高纯，与AR级相近。Biotech：生物技术级，与BR级相近。Reagent：试剂级，与CP级相近。ACS：美国化学学会标准，与AR级相近。USP：药用级具体来划分为：国标试剂：该类试剂为我国国家标准所规定，适用于检验、鉴定、检测基准试剂(JZ，绿标签)：作为基准物质，标定标准溶液。优级纯(GR，绿标签)(一级品)： 主成分含量很高、纯度很高，适用于精-确分析和研究工作，有的可作为基准物质。分析纯(AR，红标签)(二级品)： 主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。化学纯(CP，蓝标签)(三级品)： 主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。实验纯(LR，黄标签)： 主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。教学试剂()：可以满足学生教学目的，不至于造成化学反应现象偏差的一类试剂。指-定级 (ZD)，该类试剂是按照用户要求的质量控制指标，为特定用户订做的化学试剂。高纯试剂(EP)：包括超纯、特纯、高纯、光谱纯，配制标准溶液。 此类试剂质量注重的是：在特定方法分析过程中可能引起分析结果偏差，对成分分析或含量分析干扰的杂质含量，但对主含量不做很高要求。色谱纯(GC)：气相色谱分析专用。 质量指标注重干扰气相色谱峰的杂质。主成分含量高。色谱纯(LC)：液相色谱分析标准物质。质量指标注重干扰液相色谱峰的杂质。主成分含量高指示剂(ID)：配制指示溶液用。 质量指标为变色范围和变色敏感程度。可替代CP,也适用于有机合成用。生化试剂(BR)：配制生物化学检验试液 和生化合成。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成生物染色剂(BS)：配制微生物标本染色液。 质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成光谱纯(SP)：用于光谱分析。 分别适用于分光光度计、原子吸收光谱、原子发射光谱电子纯(MOS)：适用于电子产品生产中，电性杂质含量极低。当量试剂(3N、4N、5N)：主成分含量分别为99.9%、99.99%、99.999%以上。电泳试剂：质量指标注重电性杂质含量控制。此外，还有特种试剂，生产量极小，几乎是按需定产，此类试剂其数量和质量一般为用户 所指-定。简单的说，分析纯比化学纯的纯度要略高一些，但也不是分析纯就一定到多少个九，依 据不同的试剂，按国标来划分。

对检测样品的接收、流转、贮存、处置以及检测样品的识别等各个环节实施有效的质量控制至关重要。管理检测样品可以确保检测样品的代表性、有效性和完整性，从而保证检测结果的准确度。1.样品的采集样品应具有代表性。以样品的结果说明总体的情况，对总体作出结论。采样遵循如下原则：a）代表性：采样时应特别注意克服和消除各种因素的影响，使样品最大限度地接近总体情况，保证样品对总体有充分的代表性 。b）可获性：某些情况下，样品可能不具备代表性，而是由其可获性所决定。c）公证性：采样必须保证公正，由具有资格的人员（接受过采样培训且考核合格的人员）进行。必要时在现场与受检单位陪同人员一起签封，并做好现场采样记录。填写样品采集记录表，双方签字确认。2.样品的接收a）填写委托书无论抽检还是送检样品首先应由委托方填写“样品检验委托书，一般委托书一式二份，一份留检验机构存档，一份交委托方作为领取报告凭证”。b）审核委托书接收人员应审核样品检验委托书填写是否规范，是否有空项，手续是否齐备，资料是否完整，标准引用是否正确、适宜。c）核查样品样品应与“样品检验委托书”填写内容一致。样品包装应完好，如不完好应有文字记录。送检样品数量应符合检验、复验、仲裁的要求，如送检样品仅为检验样品应有文字说明。d）正式受理样品接收人员在“样品检验委托书”上签字并承诺出具报告日期。3.样品的编号为保证检验样品溯源 ，原则上一份样品给予一个唯1性编号（CNAS的要求是避免混淆，并不是要唯1性编号，当然唯1性编号肯定也满足要求）。对于同一事件的若干样品可视为一份样品给予一个编号。样品编号可由年份、样品类别代码和样品序号组成（或者其他的适合实验室的编号）。为保证样品编号的唯1性，一般由样品接收部门负责统一编制，或者有LIMS的实验室可以由系统生成。4.样品的识别样品的识别包括唯1性编号(样品受理编号)和样品不同试验状态(未检、在检 、检毕 、留样)标识 。对检毕样品应有“检毕”、“合格”、“不合格”标识。对于多个包装的同一样品应在样品受理编号后面加横杠和数字加以细分识别，以确保每个包装的唯1性。样品管理员负责将样品的识别标签逐一贴在样品上。5.样品的流转样品受理后，由承办人根据客户“样品检验委托书中的要求，向检测部门（人员）下达“样品检验交接单”，并通知检测室样品管理员取待检样品。检测室样品管理员在交接时应核查样品状况并在“样品检验交接单”上签收认可。样品传递到检测室后由检测室样品管理员统一登记。未检、在检、检毕样品应分别存放。检测员领取样品作试验时，样品识别号不得改变。样品在流转和检测过程中应加以防护，避免受到非检测性损坏或丢失。6.分包样品的管理对外提供给分包实验室的样品，在交付前应检查样品完好性，交付分包实验室的样品应有对方接收凭证。分包管理部门应做好分包样品的登记工作。分包方应有保护样品完整性的措施，做好样品的标记和保管。7.样品的贮存、保管样品贮存、保管应设有专门的样品窒并配备合适的设施；样品室由样品管理员专人负责，限制出入；样品贮存环境应安全，无腐蚀，清洁干燥且通风良好，有温湿度监控；对要求在特殊环境条件下贮存的样品，应严格控制环境条件，环境条件应定期加以记录；留样应按照规定数量、品种执行，以备复检、仲裁用；腐蚀性、易燃、易爆和有毒的危险样品应隔离存放，做出明显标记；样品管理员要对留样样品认真进行验收登记，不同性质的样品分类保存。8.样品的处理报告发出后留样样品留样期不得少于报告投诉反馈时间，对超标样品和特殊样品如有必要可重点延长留样期，检毕样品处理分以下几种处理方式：（1）客户要求领回的样品，在留样期满后，客户可领回。客户领回样品时，领样员需凭“样品检验委托书”到样品室，由样品管理员办理退样手续。（2）客户需提前(留样期内)领回样品时，应在样品检验委托书上签注“对本检测报告无异议”之后，方可由样品管理员办理退样手续；（3）对留样期已过的客户委托处理样品，应按客户填写的要求处理；（4）必须监护处理的样品，样品管理员必须按规定办法监护处理，防止污染环境及造成危害，监护处理应有记录。

　　琼脂作为一种独特的食品添加剂，在我国已经有300多年的历史。是由琼脂糖和琼脂果胶所组成的亲水胶体，又被称为寒天、洋菜粉、琼胶、菜燕、冻粉等，是从石花菜或是其他藻类植物中提取出来的海藻胶。琼脂糖又被称为琼胶素或是琼胶糖，是琼脂中不带电荷的中性组成成份，而琼脂果胶是非凝胶部分，是带有硫酸酯（盐）、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的复杂多糖。　　条状琼脂为类白色或淡黄色半透明细长条状，粉状琼脂为鳞片状无色或淡黄色粉末，琼脂糖一般为白色粉末。它们在沸水中极易分解成溶胶，在冷水中不溶，但能吸水膨胀成胶块状，溶胶液呈中性反应。　　琼脂、琼脂糖因为有特殊的胶凝性质，尤其有显着的稳固性、滞度和滞后性，并且易吸收水分，有特殊的稳定效应；已经广泛应用于食品、医药、化工、纺织、国防等领域。在食品工业中，可用于水晶软糖、定型软糖、水产品、肉类罐头、果汁饮料、果肉饮料、米酒饮料、乳品饮料、乳品蛋糕等的生产。　　琼脂糖除了有跟琼脂同样的性质以外，还具有纯度更高、电渗小、凝胶强度高、无色等特性，在临床检验，生化分析， 蛋白质、酶、核酸、抗原、抗体、病毒和多糖的分离纯化，以及高级药物的制备等方面都已广泛应用。　　琼脂糖也是制yao厂制作胶囊药品外壳胶囊的唯1主料。还可用作代血浆的制造，也常用作安定剂与乳化剂。由于其良好的生物相容性又广泛用于生物分离介质的生产。简单地说，把琼脂中的琼脂果胶去掉，剩下的部分，就是琼脂糖。　　据悉，琼脂和琼脂糖的用途约有一千多种。其中，琼脂除了可直接食用外，还在科学研究领域中、工业领域中、yi药领域中有着广泛的用途。随着世界科技的发展，认识琼脂和琼脂糖的人越来越多，很多行业人抓住这个机遇，迅速加以利用，在各种相关产品中加入琼脂，使琼脂的利用率快速增长，前景甚好。

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要说做细胞实验大家最担心的是什么，那应该就是——细胞污染了，而其中支原体污染是细胞培养实验室重最常见、最“臭名昭着”的污染之一。为什么这么说呢?这是因为支原体污染几乎可影响所有细胞生长参数、代谢及研究的任一数据，并且，支原体缺乏细胞壁，所以常规的抗生素并不能对它们起到抵抗作用，而且由于其直径太小，滤菌器也无法过滤，所以，细胞一旦有支原体污染则十分难以被清除，会给我们的实验造成极大的损失。研究表明，细胞培养中有15-35%的细胞存在支原体污染，有些地区甚至高达80%。因此支原体检测成为了细胞质控中不可缺少的环节，被列入《中国药典》检测的范畴。细胞支原体污染的表现：细胞状态变差、生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生浑浊。细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。支原体污染从何而来？1. 已受污染的细胞;2. 操作人员的疏失;3. 已受污染的培养基、血清 ;4. 操作环境不良、实验器具不洁等。检测有无支原体污染可做如下检查：①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察，支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。②荧光染色法：荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258，可使支原体内含有的DNA着色，染色后用荧光显微镜观察，镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。③电镜检查：用扫描电镜方法简便快速，也可以利用透射电镜。④DNA分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高，但方法较为复杂。如果检测到有支原体污染，该如何处理呢?方法1：直接弃之!这就非常简单粗暴了，如果还没做处理，还是赶紧弃之吧，抢救不如重新复苏了，另外对培养箱要做由里至外的清洁处理。方法2：使用支原体清除培养基如果你培养的细胞比较珍贵，直接丢弃可惜，那么在确定对细胞的基因及蛋白表达没有影响的情况下，可以使用——支原体清除培养基。远慕生物支原体清除培养基的优势：1，活性范围广：各支原体株系均可作用。2，安全可靠：工作浓度低，无细胞毒性。3，使用方便：将支原体去除试剂加入污染培养物即可，操作简单。4，时效快：使用的第二天可以明显看出细胞内的小黑点变少，细胞状态变好。

基本信息生物指示剂是一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能，灭菌程序的验证，生产过程灭菌效果的监控等。生物指示剂的定义：对特定灭菌处理有确定的抗力，并装在内层包装中可供使用的染菌载体。用于确认灭菌设备的性能，灭菌程序的验证,生产过程灭菌效果的监控等。生物指示剂分类：1）按结构分可分为片状生物指示剂(strip biological indicator)和自含式生物指示剂(self-contained biological indicator)；片状生物指示剂需要使用阳性对照和阴性对照，而自含式生物指示剂只需要阳性对照即可。2）根据ISO 11138 -1(2006)的分类，目前的生物指示剂有环氧乙烷灭菌用生物指示物、湿热灭菌用生物指示物、干热灭菌用生物指示物、过氧化氢低温等离子灭菌生物指示物和甲醛灭菌用生物指示物。3）按培养时间可分为通用型生物指示剂和快速型生物指示剂。通用型生物指示剂根据芽孢复苏后指示菌种新陈代谢引起培养液pH值改变，通过酸碱指示剂变色来进行判读，时间一般在24或48小时以上；而快速型生物指示剂根据芽孢复苏后的酶促反应，通过荧光进行判读，时间一般为3-4小时。同时国外正在研发更加快速的生物指示剂，有望在1小时之内得出结果。生物指示剂重量质量特性：1）芽孢含量2）D值（生存曲线法测定）化学指示剂主要的作用是告诉客户，该产品已经经过灭菌处理。但是经过灭菌处理的产品不等于灭菌效果是合格的。如果客户要确认该产品是否灭菌合格，就必须要通过生物指示剂的检测报告来得知。化学指示剂不能确认产品是否灭菌合格的原因，是因为他的原理决定的。只要化学指示剂中的变色油墨接触到环氧乙烷气体，就会产生化学作用而变色。而影响灭菌合格的因素有很多，环氧乙烷气体的浓度，纯度，温度，湿度，压力，时间等等，是一个非常复杂的过程。化学指示剂只能体现其中有没有环氧乙烷这个因素。而没有办法表现其他的因素，所以是没有办法决定最终的灭菌效果的。

化学试剂在贮存过程中是否会发生变质，取决于内外两个方面的因素，内因是试剂本身化学结构所决定的理化性质;外因则是试剂所处的环境条件。要做到合理保管，一要了解试剂结构与性质间关系，二要创造适应试剂贮存的外部环境。1.引发和促使化学试剂变质的原因环境主要是指贮存的温度、光照和介质。介质一般是指空气和混有的杂质。贮存室里除空气中含有的氧、二氧化碳和水蒸气以外，还往往含有存放的各种挥发性试剂扩散到空气中的蒸气，常见的有氯化氢、硝酸、硫化氢、二氧化硫、溴、碘、乙烯、甲醛等蒸气;另外还有飘混在空气中的尘埃，其中有无机物也有有机物及各种微生物。化学试剂在一定的温度、光照、介质条件下会逐渐变化以致变质，该过程有物理变化，亦有化学变化。前者使化学试剂产生损耗，后者则能使试剂完全变质失效。引发和促使化学试剂发生变化的原因，大致可归纳如下。a.挥发挥发是挥发性试剂造成试剂损耗、浓度改变、规格下降的最常见的原因。挥发性试剂的一般特点是：分子量较小、沸点较低。常见的无机试剂有：浓盐酸、浓硝酸、发烟硫酸等，有机试剂则有碳原子数较少的液态物质，如：甲醇、乙醇、石油醚、汽油等。b.升华具有升华性质的一类试剂一般是升华热较少的分子晶体。实验室里一般有室温下升华的试剂(如碘萘等)和受热条件下升华的试剂(如硫与氯化汞)两种。这类试剂的升华主要造成损耗和污染空气。c.潮解和稀释能发生潮解的化学试剂为数不多，它们大部分是易溶性化合物，一般阴离子半径远小于阳离子半径，也有阴阳离子半径相近而阳离子所带电荷较多。此类试剂吸收水分在表面形成饱和溶液后，若产生的水蒸气气压小于空气中的水蒸气分压，潮解将继续进行，直至全部形成溶液。如：氢氧化钠、碱石灰等，有机物中易潮的有醋酸钠、醋酸铵等。稀释是指试剂溶液吸收空气中的水分导致浓度下降变稀的现象。发生原因与潮解一样，是外界水蒸气分压大于试剂的水蒸气分压所致。易发生稀释现象的常见试剂有浓硫酸、正磷酸、乙二醇等。d.风化风化的原因和潮解相反，是结晶水合物的水蒸气分压高于空气中水蒸气分压的缘故。空气越干燥，风化速度越快。实验室中常见的易风化学试剂有：Na2CO3?10H2O、Na2SO4?7H2O、CuSO4?5H2O、MgSO4?7H2O、ZnSO4?7H2O等。发生风化虽未波及试剂的化学性质，但使试剂外观改变，质量减少。e.浓缩和析晶浓缩和析晶产生的原因是在环境干燥的条件下，试剂溶液的水蒸气压高于外界空气中水蒸气压，造成溶液水分的蒸发而浓缩、析晶，各种固体溶质的试剂一般均有此类现象，特别是一些浓度较大的溶液，浓缩和析晶虽对瓶中试剂性质影响不大，但也会改变其浓度、规格和外观。对某些溶点较低的有机物，在外界温度下降较大的情况下，也会发生析晶现象，比较明显的例子是冰醋酸。f.水解容易水解的盐类试剂大都具有共价键，凡是强酸和弱碱和弱酸和弱碱所生成的盐，遇水都会发生不同程度的水解。实验室中一些金属元素的卤化物很容易水解，如：TiCl4、AlCl3、FeCl3、SnCl2，等，它们是带电荷高、半径小的阳离子化合物或是非惰气型的阳离子化合物。此类试剂可因易吸水水解而变质，易水解的有机物是含有酰基的化合物，如：酯、酰卤等物质。g.分解分解反应也是引发和促进试剂损耗和变质的原因。试剂的分解速度通常和环境温度密切相关。温度高分解速度加快，通常易分解的二元化合物其化学键键能较低。键能越低，越易分解，例如：碘化合物就比溴化物更易分解。有的分解反应还和试剂的含水量有关，如：硫酸氢铵，含水量越大，温度越高分解速度也越快。而含氧酸盐，如：硝酸盐、高锰酸盐则要在受热时才发生分解。h.氧化和还原通常易被氧化的是标准电极电位低，具有还原性的试剂，它的名称中常常带有“低”或“亚”字。还有部分活泼金属和非金属单质，过氧化物及某些有机试剂，常见的有硫酸亚铁、硫酸亚铁铵、亚硫酸、无水亚硫酸钠、钠、钾、钙、锌粉、还原铁粉、乙醛等。还原性越强的试剂越易因氧化而变质。使其氧化的原因是空气中的氧和具有氧化性的杂质所为。标准电极电位较高的试剂，在以固态形式存在时，通常在空气中比较稳定，如：高锰酸钾、重铬酸钾等。但以溶液存在时就易和空气中的一些还原性杂质，如H2S，SO2等作用而变质，如：KMnO4，Na2S2SO4，K3Fe(CN)6等溶液。i.非氧化——还原反应有些试剂的变质并非一定要引起元素价态的变化，即发生非氧化——还原反应也能使其失效。实验室中最常见的实例，如：生石灰因吸收水分变成熟石灰，进一步吸收二氧化碳而失效;氢氧化钠和氢氧化钾固体也因吸收二氧化碳而带有杂质，若长期暴露在空气中则完全转化成碳酸盐;此外氧化镁、氧化钡、氢氧化钡也应防止它们和空气中二氧化碳反应。J.聚合和缩合分子结构中含有不饱和双键或叁键的有机物质容易发生聚合，如：甲醛溶液常会聚合生成白色的三聚甲醛，氰化钾试剂也易聚合。有电荷高、半径小的中心离子形成的含氧酸盐溶液则能因缩合而析出多酸盐沉淀，如：钼酸铵溶液能缩合析出四钼酸铵沉淀，三聚甲醛经加热处理尚可重新释放出甲醛气体，但有些试剂，一旦发生聚合或缩合反应，往往是不可逆的，从而造成变质失效。k.光化学反应光作为一种能量也能使某些试剂反应而变质。光能引发分解反应导致银盐分解就是实例。光也能引发氧化反应，如：苯甲醛在光照下，易被空气氧化成苯甲酸，苯胺则能从无色变成棕色。此外，碘化汞、邻苯三酚、氯仿，硫酸汞、亚铁氰化钾等也易发生光化学反应。l.霉变所谓霉变则指在化学试剂中霉菌滋生繁殖的现象。在空气中尘埃里含有无数菌类微生物，在一定温度条件下就能繁衍。实验室中的碳水化合物，酯类、蛋白质类试剂，含有氮、硫、磷的有机试剂正是菌类繁衍的良好营养物质和温床。上述试剂只要密闭不严与空气有所接触皆可发生霉变。化学试剂因上述原因发生各种变化，通常借助颜色、形态、气味、数量增减均可察觉，而有的变化则需用实验方法方可判别，如：无水酒精是否已含有水分，只能用专门的试剂标准和检验方法加以测定才能确定。因此，科学贮存各类试剂乃是一种用心细致的工作，其中大有学问和文章可作。2.防止与缓解化学试剂变质的方法和措施为了保证化学教学、科研和化工生产的正常开展，降低试剂损耗，缓解试剂的变质，通常可采取以下方法与措施：a.密封这是最普遍通用的方法。试剂瓶的材料和密封程度应根据试剂性质而定。如：强腐蚀的“三酸”和液溴，可用带磨口玻璃的试剂瓶，或是有塑料衬垫的螺旋盖的玻璃瓶，氢氟酸则应密封贮藏在银制或塑料制容器内等。密封适用于易挥发、升华、潮解、稀释、风化、水解和氧化还原、霉变的所有化学试剂对于极易分解产生气体的试剂，一般不完全密封，要适当留有余地，否则可能使容器破裂。除了一般密封外，可再加蜡封，或用自制硝罗酊封口，如：三氯化铝、五氧化二磷等。b.隔离能和空气、水作用的试剂，如：很活泼的金属和非金属应隔离存放在对试剂相对而言稳定的液体或惰气之中，钾、钠、钙浸没在机油中，黄磷则浸没在水中贮放。这种隔离方法也称液封法，前者叫油封，后者叫水封。水封存也可使某些容易挥发的试剂减少损耗。如：在装有液态溴、二硫化碳的试剂中加一薄层水，就能大大减少挥发损失和空气污染。实验室中无机、有机试剂种类繁多，性质各异，应注意合理分类存放。有机物、无机物分开，普通药品和危险的分开，氧化剂和易燃物、还原剂分解、易挥发性酸和碱分开。做到这几个分开，一可避免药品间的不良影响，二则即使有意外事故发生，也能免除药品的相互作用，而产生更大的隐患。c.避光通常采用遮光性能较好的深棕色试剂瓶。将试剂放在暗处或遮光的专用试剂柜中。也可用照相纸的黑色厚纸包裹试剂瓶，如：浓硝酸、碘化钾、碘化钠、氯化汞的贮存就是如此d.低温普通挥发性试剂常放置在阴冷处，如：浓硝酸、浓盐酸、氨水等。某些特殊的生化试剂则要贮放在水箱或冰箱之中，如：酶试剂等。e.通风尽管装化学试剂的容器一般都处于密封状态，但也难免有跑、冒、漏、泄发生，在夏季高温天气，更易形成爆炸性混合气体，因此，贮藏室必须通风良好，应安装专用排风扇，并经常开启，使空气流通。f.适时这是根据某些试剂的特性，特别是一些极易变质失效的试剂应采取适当措施，应做到适时配制、适时使用和及时处理。如：极易氧化的氢硫酸溶液、氯水、溴水、碘水最好适时制备及时使用;做银镜反应的硝酸银溶液、氨水、乙醛溶液配好后，应及时使用才不致影响效果;硫酸亚铁溶液配好后应加些还原铁粉才能使其不被氧化;淀粉、蔗糖、蛋白质的溶液在使用后应及时清洗试剂瓶，以防霉变。上述诸种化学试剂在配制时除应注意适时外，配制数量也应根据需要而定，以免过剩造成浪费。

在我们实验室中经常用到安全色和安全标志来作为安全警示标志，其中安全色是指传递安全信息含义的颜色，分为红色、蓝色、黄色、绿色。同时，我们还会用到对比色，对比色是使安全色更加醒目的反衬色，包括黑、白两种颜色。一、安全色1、红色表示禁止、停止、危险以及消防设备的意思。凡是禁止、停止、消防和有危险的器件或环境均应涂以红色的标记作为警示的信号。2、蓝色表示指令，要求人们必须遵守的规定。3、黄色表示提醒人们注意，凡是警告人们注意的器件、设备及环境都应以黄色表示。4、绿色表示给人们提供允许、安全的信息。二、对比色对比色是使安全色更加醒目的反衬色，包括黑、白两种颜色。1、黑色黑色用于安全标志的文字、图形符号和警告标志的几何边框。2、白色白色作为安全标志红、蓝、绿的背景色，也可用于安全标志的文字和图形符号。三、安全色与对比色的相间条纹1、红色与白色相间条纹表示禁止人们进入危险的环境。2、黄色与黑色相间条纹表示提示人们特别注意的意思。3、蓝色与白色相间条纹表示必须遵守规定的信息。4、绿色与白色相间的条纹与提示标志牌同时使用，更为醒目的提示人们。四、安全色和对比色的使用规则1、红色各种禁止标志（参照GB2894中1中图形标志）；交通禁令标志（参照GB5768）；消防设备标志（参照GB13495）；机械的停止按钮、刹车及停车装置的操纵手柄；机器转动部件的裸露部分，如飞轮、齿轮、皮带轮等轮辐部分；指示器上各种表头的极限位置的刻度；各种危险信号旗等。2、黄色各种警告标志（参照GB2894中图形标志）；道路交通标志和标线（参照GB5768）；警戒标记，如危险机器和坑池周围的警戒线等；各种飞轮、皮带轮及防护罩的内壁；警告信号旗等。3、蓝色各种指令标志（参照GB2894中图形标志）；交通指示车辆和行人行驶方向的各种标线等标志（参照GB5768公路标线图）。4、绿色各种提示标志（参照GB2894中4.4.4表4图形标志）；车间厂房内的安全通道、行人和车辆的通行标志、急救站和救护站等；消防疏散通道和其他安全防护设备标志；机器启动按钮及安全信号旗等。5、红色与白色相间条纹公路、交通等方面所使用防护栏杆及隔离墩表示禁止跨越；固定禁止标志的标志杆下面的色带等。6、黄色与黑色相同条纹各种机械在工作或移动时容易碰撞的部位，如移动式起重机的外伸腿、起重机的吊钩滑轮侧板、起重臂的顶端、四轮配重；平顶拖车的排障器及侧面栏杆；门式起重和门架下端；剪板机的压紧装置；冲床的划块等有暂时或永久危险的地方或设置。要求两种颜色间的宽度应相等，一般为100mm，但可根据机器大小和安全标志的位置的不同，可采用不同的宽度，在较小的面积上其宽度要适当的缩小，每种颜色不能少于两条，斜度与基准面成45。在设备上其倾斜方向应以设备的中心线为轴线对称方向。有两个相对运动的剪切或挤压棱边上条纹的倾斜方向应相反。7、蓝色与白色相间条纹交通上指示性导向标志。固定指令标志的标志杆下部的色带等。8、绿色与白色相间条纹固定提示标志杆上的色带。9、相间条纹宽度安全色与对比色相间的条纹宽度应相等，即各占50%。斜度45°宽100mm，每种颜色不少于两条。五、使用要求使用安全色的环境场所，照明光源应接近自然白昼光如D56光源，在黑暗中为避免炫光或干扰应该减少亮度。凡涂有安全色的部位，最少半年至一年检查一次，应经常保持整洁、明亮，如有变色、褪色等不符合安全色范围和逆反射系数低于70%的要求时，需要及时重涂或更换，以保证安全色的正确、醒目，以达到安全的目的。

　　我国的化学试剂基本上按纯度(杂质含量的多少)划分，共有高纯、光谱纯、基准、分光纯、优级纯、分析和化学纯7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要有优级纯、分级纯和化学纯3种。　　(1)优级纯(GR)，又称一级品或保证试剂，99.8%，这种试剂纯度最-高，杂质含量最di，适合于重要精密的分析工作和科学研究工作，使用绿色瓶签。　　(2)分析纯(AR)，又称二级试剂，纯度很高，99.7%，略次于优级纯，适合于重要分析及一般研究工作，使用红色瓶签。　　(3)化学纯(CP)，又称三级试剂，≥ 99.5%，纯度与分析纯相差较大，适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色(深蓝色)标签。　　(4)实验试剂(LR)，又称四级试剂。　　(5)基准试剂(PT)，专门作为基准物用，可直接配制标准溶液。　　(6)光谱纯试剂(SP)，表示光谱纯净。但由于有机物在光谱上显示不出，所以有时主成分达不到99.9%以上，使用时必须注意，特别是作基准物时，必须进行标定。　　(7)高纯试剂(≥ 99.99%)。纯度远高于优级纯　　我国的化学试剂基本上按纯度(杂质含量的多少)划分，共有高纯、光谱纯、基准、分光纯、优级纯、分析和化学纯7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要有优级纯、分级纯和化学纯3种。　　(1)优级纯(GR)，又称一级品或保证试剂，99.8%，这种试剂纯度最-高，杂质含量最di，适合于重要精密的分析工作和科学研究工作，使用绿色瓶签。　　(2)分析纯(AR)，又称二级试剂，纯度很高，99.7%，略次于优级纯，适合于重要分析及一般研究工作，使用红色瓶签。　　(3)化学纯(CP)，又称三级试剂，≥ 99.5%，纯度与分析纯相差较大，适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色(深蓝色)标签。　　(4)实验试剂(LR)，又称四级试剂。　　(5)基准试剂(PT)，专门作为基准物用，可直接配制标准溶液。　　(6)光谱纯试剂(SP)，表示光谱纯净。但由于有机物在光谱上显示不出，所以有时主成分达不到99.9%以上，使用时必须注意，特别是作基准物时，必须进行标定。　　(7)高纯试剂(≥ 99.99%)。纯度远高于优级纯　　生化学试剂购买小贴士：　　1.  购买时要注意试剂标签的名称(包括俗名)、类别、产品标准、含量、规格、生产厂家、出厂批号(或生产日期)　　2.  到货后及时填写验收、入库、领用记录。试剂开瓶时写上开瓶日期和限用日期（根据自己的使用情况规定3-5年）然后用不干胶贴在不遮挡标志的空白处　　3.购买化学试剂一定要在有正规进货渠道的正规供应商处购买按照国家标准和化工部行业标准生产的试剂

试剂规格基本上按纯度(杂质含量的多少)划分，共有高纯试剂、光谱纯试剂、基准试剂、分光纯试剂、优级纯试剂、分析试剂和化学纯试剂等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要优级纯、分级纯和化学纯3种。选用不同纯度试剂的标准主要是不同的反应需求，以及该试剂所含杂质对分析要求有无影响。按照国家标准，根据试剂中所含杂质的多少，划分为三个等级国对比如下：实验试剂(LR：Laboratoryreagent)，又称四级试剂。 除了上述四个级别外，目前市场上尚有：化学试剂;基准试剂：专门作为基准物用，可直接配制标准溶液; 光谱纯试剂(SP)：表示光谱纯净。但由于有机物在光谱上显示不出，所以有时主成分达不到99.9%以上，使用时必须注意，特别是作基准物时，必须进行标定。纯度远高于优级纯的试剂叫做高纯试剂(≥99.99%)。目前，国外试剂厂生产的化学试剂的规格趋向于按用途划分，常见的如下：生化试剂(BC：Biochemical) 生物试剂(BR：Biologicalreagent) 生物染色剂(BS：BiologicalStain) 络合滴定用(FCM：ForComplexometry)试剂。定义及分类试剂纯化工产品纯度就是原料的纯净程度，相对来说也是指原料的含杂程度。纯度越高的原料所含的杂质种类和数量越少。化工原料按纯度可分为工业纯和试剂纯二大类。而试剂纯的原料按纯度高低又可分为四级。对化学试剂，我们习惯上有许多混乱的称谓：以含量为基础的称谓标准物质、标准溶液、标准杂质溶液、标准对照品、标准样品、行标试剂、指示试剂、基准物质、基准试剂、化学基准、化学标准、仪器标准、分析试剂、一类试剂、二类试剂、超纯试剂、高纯试剂、当量试剂、医药标准、农药标准、光谱纯、色谱纯、电子纯、钢铁标样、生铁标样、煤标样、矿石标样等……以用途为基础的称谓化学试剂、通用试剂、分析试剂、诊断试剂、教学试剂、实验试剂、分离工具、缓冲溶液、指示试剂、生物染色素、感光材料、合成试剂、中间体、化工原料、水质分析、残留农药测试、分子生物学试剂……以来源为基础的称谓进口试剂、天然物提取、浸膏、干粉、提取物…… 以习惯为基础的称谓：化学药品、精细化学品、药品、冷偏试剂、特种试剂、一类试剂、二类试剂、三类试剂、小品种试剂……以性质为基础的称谓无机试剂、有机试剂、同位素及标记化合物、生化试剂、氨基酸及其衍生物、蛋白质与多肽、核苷酸及其衍生物、单糖与多糖、酶和辅酶、抗生素、维生素、染料及色素、培养基、层析介质、电泳介质、生物缓冲剂……化学纯：是指一般化学试验用的，有较少的杂质，不妨碍实验要求。分析纯：是指做分析测定用的试剂，杂质更少，不妨碍分析测定。色谱纯：色谱纯试剂是在最高灵敏度下以10-10克下无杂质峰来表示的。是指进行色谱分析时使用的标准试剂，在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。实验纯：代号LP，一般使用黄标签，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。超高纯试剂：UP-S级(也就是MOS级)：金属杂质含量小于1ppb,适合 0.35—0.8微米集成电路加工工艺。等离子体质谱纯级试剂(ICP-Mass Pure Grade)：绝大多数杂质元素含量低于0.1ppb，适合等离子体质谱仪(ICP Mass) 日常分析工作。等离子体发射 光谱 纯级试剂(ICP Pure Grade)：绝大多数杂质元素含量低于1ppb，适合等离子体发射光谱仪(ICP) 日常分析工作。原子吸收 光谱纯级试剂(AA Pure Grade)：绝大多数杂质元素含量低于10 ppb，适合原子吸收光谱仪(AA) 日常分析工作。优级纯与色谱纯的区别试剂纯度级别：农残级>色谱级>优级纯>分析纯。优级纯与色谱纯纯度都很高，色谱纯主要是指对吸光物质的限量作为指标考察。但是，优级纯的试剂里含有微量(甚至痕量)的具有紫外吸收的物质，对于化学反应来说，这些物质可能并不影响，但是做液相实验干扰就大了，常用于精密分析试验，可作为基准物质。色谱纯是指色谱专用溶剂或者试剂，在低波长处的透光率比较好。也特指进行色谱分析时使用的标准试剂，在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。避免了一些不良影响。一般情况下都用色谱纯，在气质时用农残级。色谱试剂与色谱纯试剂区别两个截然不同的概念，色谱纯是指试剂的纯度而色谱试剂是指试剂应用的对象。色谱纯试剂纯度发很高，除要求含量高以外，还对微尘、水分都有很高的要求，属于高纯试剂的范畴。而色谱试剂是指用于色谱分析、色谱分离、色谱制备的化学试剂。因色谱种类多，过程复杂，故又把色谱试剂分类成各种不同的色谱试剂如：气相色谱试剂、高压液相色谱试剂、薄层色谱试剂、柱层析色谱试剂、离子色谱试剂、离子对色谱试剂等。而各种色谱试剂中根据用途的不同，又分为色谱标准物、色谱固定相、色谱固定液、色谱担体、高压液相色谱淋洗剂、离子标准液、离子对试剂。色谱试剂通常泛指用于色谱分析，包括各种色谱仪器、色谱方法上所用的试剂，对试剂没有强制的纯度或一定数据数值规定，如用于气相色谱固定液、簿层层析用等;色谱纯试剂已经提升到“纯”的要求和规定，就应该有纯度或一定技术数据和数值的规定，至少要有一项标准规范，不然，不同产地的“色谱纯”会得出相同的结果吗?那么为什么有了液相色谱的HPLC溶剂，还要有农残级溶剂，上世纪液相色谱还有用AR级溶剂作流动相的。所以，GB/T 22388—2008 中的3.2.1 甲醇：色谱纯、3.2.2 乙腈：色谱纯，其“色谱纯”应该更明确一些出处或制定配套标准。GC级色谱纯与HPLC级色谱纯区别色谱纯是指试剂的纯度而色谱试剂是指试剂应用的对象.色谱纯试剂纯度发很高,除要求含量高以外,还对微尘、水分都有很高的要求,属于高纯试剂的范畴.而色谱试剂是指用于色谱分析、色谱分离、色谱制备的化学试剂.因色谱种类多,故又把色谱试剂分类成各种不同的色谱试剂如：气相色谱试剂、高压液相色谱试剂、薄层色谱试剂、柱层析色谱试剂、离子色谱试剂、离子对色谱试剂等.而各种色谱试剂中根据用途的不同,又分为色谱标准物、色谱固定相、色谱固定液、色谱担体、高压液相色谱淋洗剂、离子标准液、离子对试剂.色谱纯(GC)：气相色谱分析专用.质量指标注重干扰气相色谱峰的杂质.主成分含量高.色谱纯(LC)：液相色谱分析标准物质.质量指标注重干扰液相色谱峰的杂质.主成分含量高化学试剂有效期化学试剂在贮存、运输和销售过程中会受到温度、光辐照、空气和水份等外在因素的影响，容易发生潮解、霉素、变色、聚合、氧化、挥发、升华和分解等物理化学变化，使其失效而无法使用。因此要采用合理的包装，适当的贮存条件和运输方式，保证化学试剂在贮存、运输和销售过程中不变质。对一些对贮存和运输有特殊要求的应按特殊要求办理。有些化学试剂有一定的保质期，使用时一定要注意。化学试剂的有效期随着化学品的化学性质的改变，有着很大的区别。一般情况下，化学性质稳定的物质，保存有效期就越长，保存条件也简单。稳定性判断原则初步判断一个物质的稳定性，可遵循以下几个原则：无机化合物只要妥善保管，包装完好无损，可以长期使用。但是，那些容易氧化、容易潮解的物质，在避光、荫凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5年)内保存，具体要看包装和储存条件是否合乎规定。有机小分子量化合物一般挥发性较强，包装的密闭性要好，可以长时间保存。但容易氧化、受热分解、容易聚合、光敏性物质等，在避光、荫凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5年)内保存，具体要看包装和储存条件是否合乎规定。有机高分子尤其是油脂、多糖、蛋白、酶、多肽等生命材料，极易受到微生物、温度、光照的影响，而失去活性，或变质腐败，故此，要冷藏(冻)保存，而且时间也较短。基准物质、标准物质和高纯物质原则上要严格按照保存规定来保存，确保包装完好无损，避免受到化学环境的影响，而且保存时间不宜过长。一般情况下，基准物质必须在有效期内使用。小结大多数化学品的稳定性还是比较好的，具体情况要由实际使用要求来判定。如果分析数据作为一般了解，或者分析结果没有特定的准确要求，如一般教学实验，对化学试剂的质量级别就可以做一般要求。但工厂化验数据为指导生产而用，化学试剂的质量指标绝对不能含糊。而用于一般合成制备使用用的化学试剂，在大多数情况下，使用工业级别的化学试剂就可以满足。但研究型和某些特种化学品的合成制备，有些情况下，对原料的质量要求非常严格，需要严格把关。还要再次提醒，一定要区分好试剂类型和用途，避免出现该用色谱纯的时候用了分析纯这样的低级错误，而导致实验失败，无形中也浪费了实验试剂，得不偿失哦!

如何提高RT-PCR反应体系的灵敏度：1、分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂如EDTA或SDS等，以及尽可能减少基因组DNA污染。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的大值。2、使用无RNaseH活性的逆转录酶在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。不管是M-MLV还是AMV，在本身的聚合酶活性之外，都具有内源RNaseH活性。RNaseH活性同聚合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。3、提高逆转录保温温度较高的保温温度有助于RNA二级结构的打开，增加了反应的产量。对于多数RNA模板，在没有缓冲液或盐的条件下，将RNA和引物在65℃保温，然后迅速置于冰上冷却，可以消除大多数二级结构，从而使引物可以结合。4、促进逆转录的添加剂包括甘油和DMSO在内的添加剂加到*链合成反应中，可以减低核酸双链的稳定并解开RNA二级结构，多可以加入20％的甘油或10％的DMSO而不影响SuperScriptⅡ或M-MLV的活性。AMV也可以耐受多20％的甘油而不降低活性。5、RNaseH处理在PCR之前使用RNaseH处理cDNA合成反应可以提高灵敏度。对于某些模板，在cDNA合成反应中的RNA会阻止扩增产物的结合，在这种情况下，RNaseH处理可以增加灵敏度。一般当扩增较长的全长cDNA目标模板时，RNaseH处理是必需的，比如低拷贝的tuberous scherosisⅡ。对这种困难模板，RNaseH的处理加强了SuperScriptⅡ或AMV合成的cDNA所产生的信号。对于多数RT-PCR反应，RNaseH处理是可选的，因为95℃保温的PCR变性步骤一般会将RNA：DNA复合物中的RNA水解掉。6、小量RNA检测方法的提高当仅有小量RNA时，RT-PCR尤其具有挑战性。在RNA分离过程中加入的作为载体的糖元有助于增加小量样品的产量。可以在加入Trizol的同时加入无RNase的糖元。对于小于50mg的组织106个培养细胞的样品，无RNase糖元的建议浓度为250μg/ml。在使用SuperScriptⅡ的逆转录反应中加入乙酰化BSA可以增加灵敏度，而且对于小量RNA，减少SuperScriptⅡ的量并加40单位的RnaseOut核酸酶抑制剂可以提高检测的水平。如果在RNA分离过程中使用了糖元，仍然建议在使用SuperScriptⅡ进行逆转录反应时加入BSA或RNase抑制剂。7、减少基因组DNA污染：RT-PCR所遇到的一个潜在的困难是RNA中有基因组DNA污染，可以在逆转录之前使用扩增级的DNaseⅠ对RNA进行处理以除去沾染的DNA。将样品在2.0mM EDTA中65℃保温10分钟以终止DNaseⅠ消化。EDTA可以螯合镁离子，防止高温时所发生的依赖于镁离子的DNA水解。为了将扩增的cDNA同沾染的基因组DNA扩增产物分开，可以设计分别同分开的外显子退火的引物。来源于cDNA的PCR产物会比来源于污染的基因组DNA的产物短。另外对每个RNA模板进行一个无逆转录的对照实验，以确定一个给定片段是来自基因组DNA还是cDNA。在无逆转录时所得到的PCR产物来源于基因组。

原因一：试剂盒在运输途中时间太长，温度太高。解决方案：尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温。原因二：试剂盒未充分平衡。解决方案：试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）。原因三：培养箱温度不足37℃。解决方案：注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意。原因四：保温时间不足。解决方案：校正定时钟准确定时。原因五：洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加。解决方案：按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数。原因六：移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。解决方案：校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，一次性使用。原因七：蒸馏水水质有问题。解决方案：使用新鲜合格的蒸馏。原因八：底物作用时间不足。解决方案：准确定时。显色一定要控制时间，根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过短，结果偏低；显色时间过长，空白增高或者非特异性显色增加。

免疫亲和层析技术使用单克隆抗体或经过亲和层析纯化的多克隆抗体。在某些情况下，可用未纯化的多克隆抗体，但一般不使用混合的单克隆抗体。1. 应用多克隆抗体进行免疫亲和层析使用多克隆抗体进行免疫亲和层析有一定的局限性，因为多克隆抗体通常结合抗原分子上的多个表位，虽然亲合力高，但洗脱困难。当一种抗原与多种不同的抗体结合后，需要很苛刻的洗脱条件，通常会损坏抗体层析柱，至少也会使部分抗原变性。在这种情况下，每种抗原和抗体相互作用的洗脱条件不同，故难以建立有效的洗脱条件。应用多克隆抗体的另一缺点是其中含有大量针对无关抗原的抗体。两种类型的多克隆抗体可以用于免疫亲和层析柱，即针对合成肽或某种抗原中特定区域的抗体。在这两种情况下，由于结合到层析柱上的抗原位点局限在一个很小的区域，因此可能实现有效的洗脱。如果要将多抗用于免疫亲和层析，一种方法是利用抗原亲和层析柱来纯化特异性的抗体。这种方法要求能得到足够量的抗原供制备亲和层析柱。另一种方法是利用针对某一物种蛋白的抗体，来纯化其他物种的同源蛋白。用抗原亲和层析柱来纯化多克隆抗体时，只需收集与抗原结合的抗体，因为是从抗原上洗脱下来的，从免疫亲和层析柱上洗脱抗原的条件已经确定，故不存在问题。2. 应用单克隆抗体进行免疫亲和层析应用单克隆抗体进行免疫亲和层析具有许多优点。单克隆抗体的来源不受限制，而且高亲和力的单克隆抗体可以结合抗原的容量大，因为所有的抗体都是均质的，并结合相同的表位，所有结合的抗原可以在相同的条件下被洗脱。由于单克隆抗体结合的是抗原分子上的单一表位，抗原-抗体之间的结合键基本上是均质的，洗脱抗原的条件也比使用多克隆抗体容易掌握。应用单克隆抗体进行免疫亲和层析时出现的问题，通常涉及抗原的特性，低亲和力或交叉反应，低亲和力通常是免疫亲和层析法存在的共同问题。使用单克隆抗体时，交叉反应并不常见，主要出现在某些抗体的亚类上，由于抗体与其他抗原上的相同表位结合所致。这些表位可能有广泛的同源性，这种性质单克隆抗体可用于这些相关蛋白的研究，而不能用于抗原的纯化。另一方面，交叉反应可能只限于表位本身。在这种情况下，使用针对该抗原中其他表位的单抗能够消除交叉反应。另一个解决办法就是采用其他层析或抽提技术从杂蛋白中纯化抗原。3. 用混合的单克隆抗体进行免疫亲和层析除特殊情况外，一般不应将混合单抗用于制备免疫亲和层析柱。使用单克抗体混合物所遇到的与洗脱有关的各种问题已在上面提到。混合单抗通常仅用于纯化那些在使用之前需要经过变性的抗原，或制备抗原-抗体-微珠复合物用于免疫动物。

首先你要有这样的觉悟：样品称量是分析实验的重要环节，称量不准确会导致整个实验失败。实验室分析样品称量不准确的原因大体可分为分析天平没校准、环境及样品物理因素影响和操作不当等3个方面的原因。到底为什么老是称不准？1.分析天平在使用前没有经过校准一台分析天平在使用之前，首先要确认它的正确性是否合格。天平的正确性是指天平横梁两臂相等的精确程度以及3个刀刃的等距、平行的精确程度。分析天平从shou次使用起，应对其定期校准。连续使用的天平，大约每星期校准一次。校准时应按规定程序进行，必须使用标准砝码进行校准，否则将起不到校准的作用。2.分析天平安装不正确在安装分析天平时首先要选择选防尘、防潮、防震、防风、防晒、恒温的房间作为天平室。其次，天平应安放在牢固可靠的工作台上，并选择适当的位置安放。天平安装前，应按装箱清单进行清点，看各部件是否齐全、完好，并对天平的所有部件进行仔细清洁。安装时，应参照天平的说明书正确装配天平。安装完毕后应再次检查各部分安装是否正常，然后检查电源电压是否符合天平的要求，打开天平检查是否正常。 3.环境及样品的物理因素影响1）温度的变化对分析天平的影响如果在称量过程中发现显示值单方向漂移，就有可能是温度变化所产生的影响。若样品与周围环境之间的温度存在差异，则这个温度差异就会导致沿称重容器流动的气流。空气沿着容器外侧流动产生一个向上的作用力，这个力就导致称重结果产生错误。当把样品从干燥炉或冰箱中取出以后，要等到样品温度与实验室或称量室温度一致时才可以称量。样品要放在表面积尽可能小的去皮容器中，取放称量容器要使用镊子夹取，而不能将手放入称量室中。2）样品吸湿或挥发对称量结果的影响如果在称量的过程中显示值单方向持续漂移，则可能测量的是挥发性或吸湿性样品。对于吸湿性或挥发性样品可使用细颈容器，给容器加盖或上塞，使用清洁干燥的称重容器并保持称盘上不粘有灰尘、污染物及水滴。3）样品或容器带静电对称量结果的影响如果每次称量都显示不同的称量结果或显示值不稳定，或称量结果的重复性差，则可考虑是称量容器或者样品带有静电。静电现象的影响使每次称量时称重容器均显示不同的重量，结果的重复性很差。具有高绝缘度的材料如玻璃、塑料制的称重容器等容易带静电。这种带电现象主要是由于样品或容器在搬运过程中搅拌或摩擦产生的，而且一旦带电则排除电荷会非常缓慢，在相对湿度低于40%的干燥空气中出现样品或容器带静电的几率会增加。通常可采用打开加湿器或适当调节空调系统来增加空气湿度，把称重容器放在金属容器内再进行称量，设法给分析天平接地等措施，来去除或屏蔽称重样品上的静电。4.使用者操作不当造成称量不准确称量前应检查天平是否正常，天平是否水平，称盘是否洁净，圈码指数盘是否在“000”位，圈码有无脱位，吊耳有无脱落、移位等。检查和调整天平的空盘零点，可用横梁平衡螺丝粗调并用投影屏调节杠微调。1）在分析天平开启状态下进行取放称量物和增减砝码的操作。一般分析天平加、减砝码或取、放称量物必须在天平处于关闭状态下进行。在称量过程中一直是半开启天平，直到最后一刻才可完全开启天平。2）使用者在转动读数盘时操作不稳，导致挂码脱落或缠绕。使用天平上的机动开关，如开启和关闭天平、加减天平挂码等，必须缓慢均匀地转动。根据所称物重，用取中法则缓慢平稳地转动砝码旋钮，用最简捷的操作加减砝码。3）称量时用手直接取放称量物。如果称量时用手直接取放称量物，会使手上的汗渍污渍粘到称量物上，造成称量误差，所以称量时不可直接用手接触称量物，一般可戴手套并用纸条取放称量杯。4）读数错误造成称量结果错误。读数砝码确定后，全开天平旋钮，待标尺停稳后即可读数。称量物的质量等于砝码总量加标尺读数。砝码总量要依砝码从大到小依次相加，最后和标尺读数相加。

微生物实验室检测需要使用较多的玻璃器皿，清洗洁净的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件。今天，远慕生物整理了一些微生物实验检测用玻璃器皿的清洗攻略，送给各位科研人！常规人工清洗机械清洗方法  即用刮、刷等方法清洗化学清洗方法  即用各种化学去污溶剂清洗清  洗  方  法含有培养基的培养皿的洗涤方法  先将器皿中的琼脂刮去，然后用清水洗涤，并用软毛刷反复刷洗，以除去粘污在壁上的灰尘和油垢，用清洗剂溶液洗去油污后，再用水冲洗，洗好的器皿倒置晾干或置于干燥箱中干燥至无水滴。载玻片及盖玻片的洗涤法  新载玻片及盖玻片先在2%的盐酸溶液中浸一小时，再用自来水冲洗2~3次，最后用纯化水冲洗2~3次。用过的载玻片及盖玻片，用纸擦去油垢，再放在5%的洗衣粉水中煮30分钟后立即用自来水冲洗，然后放在稀的洗液中浸泡2小时，再用自来水冲洗至中性，清洁后烘干或擦干。移液管、倒管的洗涤方法  新的移液管及倒管先在5%的盐酸溶液中浸一小时，然后用自来水冲洗几次，最后用纯化水冲洗几次。用过的移液管、倒管先用自来水洗去表面的残液，再放在清洗剂溶液中浸泡一小时以上，再用自来水冲洗至管内壁无残渣，最后用纯化水冲洗几次，晾干后入恒温干燥箱中烘干。清洗注意事项① 任何洗涤方法，都不应对玻璃器皿有所损伤，不能用有腐蚀作用的化学药剂，也不能使用比玻璃器皿硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。② 一般新的玻璃器皿用2%的盐酸液浸泡数小时后用水冲洗干净。③ 用过的器皿应立即洗涤，放置太久会增加洗涤困难。④ 强酸、强碱及其它氧化物和有挥发性的有毒物品，都不能倒在洗涤槽内，以免污染环境水质，必须倒在废液缸中。⑤ 含有对人体有传染性病菌的器具，先高压灭菌后再进行洗涤。⑥ 难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起，有油的器皿不要与无油的器皿混在一起，以免增加洗涤的麻烦，浪费清洗剂和时间。

实验室试剂在开启后受到空气、水分、光照和温度的影响会发生物理化学变化，发生变质。一个实验室，难免会有或多或少过期的化学试剂。那这些过期的实验室试剂我们该拿它们怎么办呢？一般来讲，试剂的保质期为1—2年，有些性质稳定的保存期就长点，这取决于保存方法是否恰当。未开启的化学试剂，保质期到了未必就不能用，不要直接丢弃或重新购买，我们要杜绝浪费。试剂过期了不要紧，只要我们处理好，不对环境造成污染就可以了。过期的试剂处理方法主要有以下几种：一、溶解法，对于一些无毒的无机物，在水中溶解度较大的，直接溶于水倒掉即可。二、稀释法，对于实验室内的无机溶液，无毒无害的就直接加水稀释后倒掉。三、中和法，对于酸碱类物质，可加废酸或废碱至pH接近7后倒掉。四、烘干法，对于实验室产生的硅胶、已变潮的试剂等，不要丢弃，可以选择适当的温度在烘箱烘干后再重复利用。五、蒸馏法，对于有机溶剂应尽可能采用蒸馏方法加以回收利用。如无法回收，可分批少量加以焚烧处理。切忌直接倒入实验室的水槽中。六、分解法， 对于含氰溶液，可采用此法处理。将试液调至pH＞10后，通入氯气和加入次氯酸钠（漂白粉），使氰化物分解成氮气和二氧化碳。七、沉淀法，这种方法一般用于处理含有害金属离子的无机类溶液。处理方法是：在待处理溶液中加入合适的试剂，使金属离子转化为难溶性的沉淀物，然后进行过滤，将滤出的沉淀物妥善保存，检查滤液，确证其中不含有毒物质后，才可排放。当然（小声说），有朋友建议把过期未开启的试剂返给供应商，集中废液回收处理，也不失为一个安全有效的办法~

革兰氏染色是大家检测过程中常用到的基本技能之一，也是辅助我们鉴别菌种种类的基础方法之一。但大家在日常的革兰氏染色过程中有没有发现过这样的问题：明明是革兰氏阴性菌，怎么我的染色结果是阳性呢？或者怎么阳性菌被我染成阴性了呢？为什么会产生这样的偏差？　　革兰氏染色是一项经典的细菌鉴别手段，自19世纪80年代丹麦的医师GRAM创立起，至今已经近一个半世纪，仍旧在细菌的检测和鉴定分类上被广泛应用着。在我国，GB 4789系列的国标中很多致病菌的检测也都需要进行革兰氏染色，可见其重要性。甚至可以说没有精准掌握革兰氏染色的微生物检验员，不会是一个合格的检验员。　　革兰氏染色的原理：　　细菌细胞通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。　　革兰氏染色的步骤：　　涂片、晾干、固定、染色、水洗、媒染、脱色、复染。此处不加赘述。　　影响革兰氏染色结果准确性的关键因素：　　1.试剂影响。这是我们首先应该确保的，我们使用的试剂必须是有效的。实验室应当建立有效的试剂管理程序，从试剂的验收到存放、使用、过期后的废弃处理都应有严格规定，确保我们使用的试剂是有效的。工欲善其事必先利其器，这也是我们试验成功最基础的一环。　　2.染色菌的选择。菌龄对革兰氏染色结果的影响是十分大的。我们染色过程中选择的菌应该是处于活跃生长期，这样的细菌活性强，生理特征明显，所以染色的结果准确度高，一般情况下不会出现误差。培养时间较长的革兰氏阳性菌，由于细胞老化，甚至有部分菌在染色之前就已经死亡或者自行溶解了，造成细胞壁通透性增加，就会呈现出假阴性。以金黄色葡萄球菌为例，金葡是典型的革兰氏阳性菌，有人曾经统计过培养至不同时间的金葡的革兰氏染色结果，结果表明，在金葡活跃期的22h-26h之间，染色结果的准确率基本可以达到100%，而超过26h之后，准确率就开始下降，培养至36h时，准确率大概会下降30%左右。所以我们在染色时，一定要选择处于活跃期、活性较强的菌落，在检测过程中一定要严格的在国标要求的时间段内进行染色试验，不能提前或者延后。　　3.涂菌的状态。在染色最初的涂布中，在挑取菌体后应该在无菌水上涂成薄薄的菌膜。而在涂布过程中，若是菌体堆积，也会极大影响染色结果的准确性。菌落堆积过多，往往菌体之间变得毫无缝隙，而其细胞壁的成分影响造成了脱色的情况不佳，容易产生假阳性的结果。同时，在初染、媒染及复染的过程中，应将染液覆盖整个菌膜，避免一部分菌染色而另一部分菌没有染色。因此在涂片过程一定要将菌膜涂得少而均匀，这样才能达到最佳效果。　　4.媒染时间。媒染时间对革兰氏阴性菌的染色结果有很大影响。由于媒染时间过长，结晶紫在碘液长时间作用下过分牢固结合在菌体细胞壁上，影响了酒精的脱色效果，从而会导致这种假阳性的效果。以典型的革兰氏阴性菌大肠埃希氏菌为例，有人做过统计，媒染时间严格控制在40s-60s之内，染色结果准确率基本可达到100%，而超过60s准确率会有一定的降低，若媒染超过100s，准确率甚至可降低接近20%左右。因此在媒染过程中一定要注意媒染时间，控制在50-60s为宜。　　5.酒精脱色。酒精脱色也是一个对结果影响较大的操作过程。革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌最主要的差异是细胞壁肽聚糖层厚度和结构，革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层很薄，脂多糖含量高因此在酒精脱色时，细菌细胞壁的多糖成分会被酒精溶解，增大了细胞壁的通透性，结晶紫及碘复合物就很快被酒精洗脱，之后就会被沙黄复染呈红色；而阳性菌肽聚糖层厚，脂多糖少，酒精只能起到脱水效果而无法进入，这样结晶紫和复合物就无法洗脱出来使细胞呈紫色。因此，酒精脱色时间短，脱色效果不佳，会导致阴性菌菌体内的结晶紫和复合物不能有效的全部洗脱出来，就会出现明显的误差，使阴性菌出现假阳性。而洗脱时间过长，也会导致阳性菌的细胞壁被酒精破坏，导致细胞内的紫色被洗脱，呈现假阴性。因此洗脱时间也是革兰氏染色的关键环节。洗脱时间应当严格控制在20s-30s之间，同时保证洗脱效果。　　总结一下，在整个革兰氏染色过程中，在保证试剂有效的前提下，需要严格控制的几个方面：染色菌必须是在其活跃期内，涂布状态不可太厚，媒染时间严格控制在50s-60s之间，脱色时间严格控制在20s-30s。把握以上的关键控制点，革兰氏染色基本就不会出现问题啦！

经甲醛固定的部分组织细胞，因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇，使免疫组化标记敏感性明显降低，因此在染色前，有些抗原需进行修复或暴露。抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法，常用胰蛋白酶及胃蛋白酶，配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时，浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。1、pH的应用范围及选择  抗原修复液的pH非常重要，有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要，同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强，但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好hao的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效，而对固定很长时间旧的存档组织，酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。2、抗原修复时应选择最佳温度  70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性，但经福尔马林固定的蛋白质，温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示，温度为92-98℃是合适的，95℃效果最hao。3、抗原修复液必须遵循自然降温规律，否则效果不好或达不到抗原修复的目的  抗原修复持续时间过后，取出放于室温中让其慢慢地降温，绝对不能为了争取时间，强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结，要有一个自然环境让其自然放松下来，随着温度的降低，它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。4、尽量使用足量的抗原修复液  应用于抗原修复的液体，一定要充足，防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时，由于它的量较大，可延缓液体的沸腾时间，增加切片受微波辐射的量，对抗原修复将达到彻底。

当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色①确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。②确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。③对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必须是山羊/兔抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。④检查抗体所使用的稀释度及稀释溶液。⑤检查抗体的有效期和保存条件，尤其是标记了酶或荧光素的抗体，现在大多数试剂公司的抗体均要求在4~8℃条件下保存，应避免反复冻融，试剂保存时一定要避免与挥发性有机溶剂同放一室，以免降低抗体的效价。⑥检查标本的储存条件，最好用已知阳性的标本来同时做阳性对照。⑦检查色原/底物溶液，最jian单的检测方法是将一滴标记有酶的抗体加入到制备好的底物溶液中，如果底物发生预期的颜色变化，则可排除底物的因素。需要注意的是，有些底物在制成工作液后应在一定时间内用完，否则会失效。⑧检查冲洗液是否和反应试剂匹配，溶液的pH值很重要，与过氧化物酶底物匹配的溶液中不应含有叠氮钠。⑨检查复染剂和封片剂是否和所使用的色原匹配。弱阳性如果阴性对照没有染色而阳性对照标本弱阳性，除了考虑上述因素外，还应考虑：①标本的固定方式，不当的固定方式或固定时温度过高，都会影响到所检测的抗原的数量和质量。②不适当的抗原修复方式，由于石蜡切片在制作的过程中固定剂对抗原的封闭作用，必须用抗原热修复或酶消化或两种同时使用的抗原双暴露法，至于使用哪一种方法，应参照生产厂家的说明，同时结合标本的具体情况而定。③抗体的稀释度是否过高或者孵育的温度/时间是否正确。一般试剂生产厂家都会对试剂给出一定的使用范围，但是由于使用者的标本来自各种组织，处理过程也不尽相同，所以应参照使用范围，对所使用的一抗进行梯度测试，找出最佳的使用浓度。④切片上遗留了过多的冲洗液，当抗体加至切片上时，等于人为地对抗体进行了进一步的稀释。⑤孵育时切片是否放置水平，否则会导致抗体流失。如果阴性对照没有反应，阳性对照反应良好，而标本弱阳性，则可能是由于阳性对照不是同一种组织、或固定方式不同等原因所致。非特异性染色①是否有效地去除了内源性酶和生物素。应注意的是，并不是每一种组织均需要进行此步骤，但对于内源性酶或生物素丰富的组织，如肝脏、肾脏等，需考虑此原因。处理的方法为：灭活碱性磷酸酶：最chang用的方法是将左旋咪唑（24mg/m1）加入底物液中，并保持pH值在7.6~8.2，即能除去大部分内源性碱性磷酸酶，对于仍能干扰染色的酸性磷酸酶，可用50mmol/L的酒石酸抑制。饱和处理内源性生物素：消除内源性生物素的方法是事先滴加亲和素，以饱和内源性生物素，使之不再有剩余的结合位点。具体方法是在ABC法或SP法染色前将切片浸于25ug/ml亲和素溶液中处理15分钟，PBS清洗15分钟后即可染色。②是否选择使用了正确的封闭血清。电荷吸附所造成的非特异性背景染色消除方法是以二抗动物的非免疫血清，用PBS稀释为3%-10%溶液孵育切片，以封闭吸附位点。有时其它无关蛋白，如牛血清白蛋白也常应用。另外，取材时避开出血、坏死区亦极重要。最近有些国内的实验室应用5%脱脂奶粉替代血清进行抗原封闭，效果也不错。③所选择的抗体是否符合试验要求。因抗原不纯、标本片中含有与靶抗原相似的抗原决定簇等原因造成的非特异性染色只能通过采用高纯度、高效价的抗体、或针对更具特异性抗原决定簇的单克隆抗体来解决。④一抗的使用浓度是否过高。⑤清洗是否充分。应严格操作规程。因在缓冲液中含有一定量的盐，这亦有利于减低背景着色，通常0.05mol/l Tris—HCl，0.15mol/l NaCl已适用于多数染色方法，溶液内加入吐温20，效果更佳。特殊标记时，试剂公司一般都提供缓冲液的配方。⑥ DBA的使用是否正确。DAB的孵育时间和配制方式可以产生某些背景颜色，使用浓缩型DAB试剂盒时，请严格按照说明书标明的滴加顺序操作，注意校正蒸馏水的pH值，以确保实验结果的正确性；粉剂DAB溶解时，常有一些不溶性颗粒，这些颗粒须经过滤除去，否则可能沉积于切片组织上，产生斑点状着色。另外，DAB保存不妥产生氧化物亦可沉积于切片上，因此需将DAB保存于避光干燥处，现用现配，临用前加H2O2。孵育时间过长也会造成背景染色。⑦标本染色过程中是否曾经干涸，否则会造成边缘部的非特异性染色。⑧检查二抗与标本的内源性组织蛋白是否有交叉反应。

在我们日常的细胞实验中，总会遇到各式各样的问题，其中关于胎牛血清（FBS）的问题最多，今天为大家汇总了血清一些常见问题，满满的干货！那些可以忽略的小却重要的细节：1. 血清的保存温度？未拆封的血清应保存在-15℃至-20℃，避免反复冻融。拆封后的血清应无菌分装成适当的用量并存放于 -15 ℃ 至 -20 ℃，2~8 ℃ 溶解后建议一个月内使用。2. 血清的有效期是多久？大部分血清效期是 5 年，针对每个批次，请通过质检文件确定具体效期日期。3. 血清应如何融解？血清从冷冻箱取出后，置于2～8℃冰箱使之融解，不时规则地摇晃均匀，充分融解后分装或使用。4. 为什么有时血清中出现沉淀？是否需要去除？如何去除？血清中的白色沉淀主要是脂蛋白、冷凝集素、玻连蛋白、胎球蛋白、磷酸钙、胆固醇等、絮状沉淀物主要是纤维蛋白。多种原因可能导致血清中沉淀的形成，最常见的原因之一是融化过程中，脂蛋白聚集所致。该现象一般不会影响产品质量。若需要去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g 稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为血清中的絮状物会阻塞过滤膜。5. 血清是否需要做灭活处理？血清是否需要灭活取决于您的应用。加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES 细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。灭活过程中，会导致血清中某些成分被破坏，如氨基酸，维生素，生长因子等。所以只有在您的实验对血清有特殊要求时，才会考虑对血清进行灭活处理。如您的实验对血清中的某种组分敏感，需要去除该组分。最常见的情况是需要去除血清中的补体蛋白，因为补体在机体中参与细胞杀伤，巨噬细胞和淋巴细胞活化，肥大细胞和血小板组胺释放，平滑肌收缩等过程，所以一般在免疫学相关研究中及肌细胞和干细胞的培养过程中需要对血清进行灭活处理。6. 如何进行血清灭活处理？血清请先按上述「血清应如何融解」中的操作步骤融化和混匀，热灭活时请将血清置于 56 ℃ 水浴 30 分钟。为尽量减少热灭活对血清品质的影响，一次灭活的血清体积不宜过大。最好准备同样的容器装相等体积的水（与血清相同温度），灭活时将装有血清和水的容器同时放入 56 ℃ 水浴, 在装水的容器中放置温度计，加热过程中不时轻轻旋转混匀血清，当温度计显示达到 56 ℃ 左右，开始计时。56 ℃ 水浴后，建议马上转移到冰上降温。

一、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。　　一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传性状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。二、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。三、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤(5克)，置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤最-大持水量的60%为宜)，然后高压灭菌。再将需保存的微生物进行大量接种，培养至菌丝能用肉眼确认的程度为止，移入干燥器中经短时间干燥或风干后密封，冷藏或室温保存。②砂土保存法：取清洁的砂，筛去掉大砂粒，并用磁铁吸去砂中铁屑，再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗数次，干燥后，置于试管或安瓶管中保持2～3cm深，再经干热灭菌后，加入1mL菌种培养液，经充分混匀后，放入真空干燥器中，完-全干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂(经HCl预处理)和一份贫瘠、过筛的黄土搀和后灭菌，再进行菌种保藏。③硅胶保存法：以6～16目的无色硅胶代替砂子，干热灭菌后，加入菌液。加菌液时，由于硅胶的吸附热常使温度升高，因而需设法加以冷却。④磁珠保存法：将菌液浸入素烧磁珠(或多孔玻璃珠)后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶(或无水CaSO4)，上铺玻璃棉，再放上10～20粒磁珠，经干热灭菌后，接入菌悬液，最-后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。⑤麸皮保存法：在麸皮内加入60%的水，经灭菌后接种培养，最-后干燥保藏。⑥纸片(滤纸)保存法：将灭菌纸片浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥后，置于装有干燥剂的容器内进行保存。四、悬液保存法：即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的方法有：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。五、寄主保存法：即令微生物侵入其寄主后加以保存的方法。用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。六、冷冻保存法：适用于抗冻力强的微生物。这些微生物可在其菌体细胞外遭受冻结的情况下而不受损伤，而对其它大多数微生物而言，无论在细胞外冻结还是在细胞内冻结，都会对菌体造成损伤，当采用这种保藏方法时，应注意以下几点：① 要选择适于冷冻干燥的菌龄细胞。② 要选择适宜的培养基，因为某些微生物对冷冻的抵抗力，常随培养基成分的变化而显示出巨大差异。③ 要选择合适的菌液浓度，通常菌液浓度越高，生存率越高，保存期也越长。④ 最hao在菌液内不添加电解质(如食盐等)。⑤ 可在菌液内添加甘油等保护剂，以防止在冷冻过程中出现菌体大量死亡的现象。同样，也可添加各种糖类、去纤维血液和脱脂牛乳等具有良好保护效果的溶剂，但对有些微生物而言，不加保护剂时更有效。⑥ 原则上应尽快进行冷冻处理，但当加入保护剂时，可静置一段时间后再进行处理。⑦ 就动物细胞而言，应在-20℃范围内以1℃/min左右的速度缓慢降温，此后必须尽快降到贮藏温度；而对绝大多数微生物而言，则不必如此，如结构较为复杂的原虫则可在-35℃范围内进行缓慢降温，而噬菌体则必需采用上述的二阶段法进行冷冻。⑧ 若进行长-期保存，则贮藏温度越低越好。⑨取用冷冻保存的菌种时，应采取速融措施，即在35～40℃温水中轻轻振荡使之迅速融解。而就厌氧菌来说，则应选择静置融化的措施。当冷冻菌融化后，应尽量避免再次冷冻，否则菌体的存活率将显着下降。

　　细胞生长缓慢的常见原因:　　(1)培养基可能缺乏细胞生长所需的某种因子。　　通常情况下，当小伙伴购买细胞，并没有按照ATCC或国内细胞库推荐的方法制备培养基，使用实验室兄弟姐妹使用的培养基来培养细胞。解决方法一般是按照推荐的方法制备培养基，或直接购买培养细胞的培养基。(B)细菌、支原体、真菌等污染:虽然培养基中通常添加双抗体(青霉素和链霉素)，但如果无菌操作观念不强，仍有可能造成污染。处理方法:如果有冷冻细胞，可以丢弃污染细胞。当然，丢弃并不是随意的，扔进垃圾桶。应按照实验室生物安全规定进行。然后复苏培养物，建议培养箱完全消毒。　　如果不冷冻，而且这种细胞非常珍贵，常用的治疗方法是药物治疗:细菌污染加5-10倍的抗生素;真菌污染加抗真菌药物;支原体污染再加上抗支原体药物，具体药物可以咨询技术支持，他们会更加专业。　　(C)许多细胞的生长依赖于密度。如果传代后细胞密度过小，也会影响细胞生长。这段时间没有什么特别好的，就是更换液体。如果细胞培养瓶为T75，则可以消化、离心、复苏，然后接种到T25瓶中。　　(4)冷冻细胞中添加DMSO(二甲基亚砜)的量不正确，没有逐渐梯度冷却。下一次恢复后的细胞总是坏的。处理方法:按推荐的冷冻保存方法制备冷冻液。部分细胞适合10% DMSO，部分细胞适合5% DMSO;严格遵循渐变冷却的原则，细胞恢复后迅速解冻。　　(5)换液间隔时间太长。一些小伙伴真的把细胞“佛”系生长。当他们想到它的时候，才会换下液体，相信一个句子。“你已经是一个成熟的细胞了。你应该学会养活自己，成长”。在这种情况下，细胞培养瓶中积累了大量的细胞代谢废物，影响细胞活性。推荐:勤奋点　　(6)细胞的“消化”时间不宜过长，减少对细胞的损伤;此外，EDTA一般添加到胰腺酶中，螯合钙离子，影响细胞粘附。治疗方法:控制细胞“消化”时间，尽量去除干净的胰蛋白酶和EDTA。　　PH值:细胞需要在一定的PH值下生长，这个小朋友知道。但是很多时候PH值是我们忽略的东西，这也是想强调的一点。随着使用时间的增加，我们使用的介质可能会慢慢变成碱性!(当然，它也可能变酸，但改变碱是常见的)。一般来说，过碱的培养基会影响细胞的生长。治疗:简单的方法就是更换新鲜的培养基!当然，如果你有时间和条件，你可以调整介质的pH值。

动物实验中的安全防护主要指在实验过程中可能对实验人员造成的危害和对公共环境造成的污染各种不安全因素进行的防护。这些不安全因素主要来自化学、物理和生物等方向。动物实验中的安全防护包括防火、防毒、防爆、防触电、防辐射、防外伤等，还包括防动物咬伤、防动物传染，特别要防来自动物的气溶胶吸入感染。为保护工作人员、实验者及其周围的人群安全，可采取八点有效措施： （1）建立强有力的安全防护组织（2）制定严密的安全制度（3）抓好深入的安全教育（4）进行认真的医学检测（5）推广安全的操作技术（6）提供良好的防护设备（7）设计合理的实验室布局（8）采取有效的消毒方法实验动物人员的安全管理一、人员的安全教育二、人员的健康管理三、意外损伤的防护1、外伤防护2、化学防护要按操作规程进行3、 药物管理4、辐射和紫外线的防护 实验动物安全管理（一）人畜共患病的防护（二）动物健康管理 安全操作技术（一）注射器的使用（二）吸管的安全操作（三）菌（毒）种接种的安全操作（四）离心物品的安全操作（五） 避免操作中产生气溶胶 及时有效的消毒（1）污染物品（2） 建筑物内部表面（3）污染的空气（4）排出的污水 安全实验室安全制度和管理（一）建立安全管理组织（二）制定安全规章制度（三） 贯彻安全规章制度（四） 普遍防御意识 动物实验后废弃物的无害化处理一、组织管理二、污水的无害化处理三、污物的无害处理（一）实行专人管理和处理（二）分类收集（三）无害化处理四、废气动物及动物尸体无害化处理

标准菌株亦称模式菌株，在给某细菌定名，分类作记载和发表时，为了使定名准确和作为分类概念的准则，以纯粹活菌（可繁殖）状态所保存的菌种。相当于动植物分类中的模式标本。在进行细菌等的分类和鉴定时，生理学和生物化学特性十分重要，但若就这些性质进行试验，就必须应用许多纯分离的新细胞。因此，作为分类标准的菌种，也有必要进行纯粹分离，并以活菌（可以分裂）状态保存。在标准菌种中，对于从作过原始记载的作者实际分离或应用的菌株，通过营养繁殖获得和保存的菌株，称为正标准菌株。此外，当原作者使用复数菌株，以后的研究者选择其中之一作为最适当的菌株时，称该菌种为选定标准菌株。当原作者使用的菌株失掉，以后的研究者就新的菌株研究，记载后，确认可以作为国际上正标准菌株的代替菌株时，称该菌株为新模式菌株。保存菌种时，必须留心不使菌株在保存过程中死亡或发生变异。最常用的保存方法是冻结干燥法。模式菌株应由适当的菌种保存机构保存。派生菌株从技术角度来讲，标准菌株都是从国家认可的机构或者国外菌种保藏机构购买得到的，为0代菌种的冻干粉，在使用前需要进行复苏、传代、鉴定和保藏等工作，并且在使用前需要提前一天进行活化，需要梯度稀释后对其进行计数定量。而商业派生菌株则是由标准菌株派生出来的，通常为冻干形式，一般是3~5代菌种，它的特点是不需要进行活化、传代、鉴定和保藏，即得即用，无需进行提前活化和梯度稀释，按照厂家提供的说明书操作即可得到所需数量的菌液，大大节省了微生物实验室工作人员的工作负担。从文件管理方面来讲，使用标准菌株时，从标准菌株到标准储备菌株，再到工作菌株，这一系列的使用过程均应有相应的程序文件和记录，相关的人员一定要进行必要的培训，具备齐全的培训记录；而使用商业派生菌株则只需要由生产厂家提供质检报告和溯源性报告，保证其与标准菌株所有相关特性等效，同时保证其可溯源性。除此之外，与商业派生菌株相比，标准菌株的使用过程中对于硬件设施及耗材的投入相对较大，成本也并不比商业派生菌株低。在微生物检验领域，商业派生菌株的应用范围和标准菌株并无明显区别，可用于药检中的灵敏度试验、促生长试验、无菌检查、培养基适用性检查、控制菌检查等；食品检验的定量、定性对照、培养基质控等；化妆品微生物检验质量控制。质控菌株本质上是标准菌株的商业衍生产品，其应有可靠的溯源证明追溯至其使用的标准菌株来源，在微生物实验室仅可作为工作菌株进行使用，在使用前也应进行特性和纯度的确认。质控菌种基本上分为两类：第一种满足低浓度接种量的要求，细菌含量一般小于100cfu，这是各种微生物培养基促生长试验、微生物阳性对照试验的接种量要求，无菌工艺模拟试验中培养基的灵敏度检测、无菌或微生物限度检查实验方法验证等。为了满足高浓度接种的需要，其他种类的细菌含量一般为105-106cfu。是对防腐剂、抑菌剂、消毒剂等抗菌活性物质功效的试验或挑战性试验。这种实验对对数滴的微生物有统计要求，因此需要相对高浓度的细菌溶液。质控菌种的优势：1、精确的CFU已知应变个数降低实验失败率这个优势真的很棒。实验室至少需要3-6个月的时间，才能建立稳定的各种菌株的稀释定量方法。培养人员有效实施该方法需要3个月的时间。购买菌株的原始情况不同。即使同一菌株、同一复苏方法、培养条件、培养时间、同一稀释方法各不相同，但稀释的细菌数量仍不相同。每一个微生物实验室必须在同一天对供试品进行稀释和添加后，发现第二天的计数结果超标，或第二天在冰箱中取出的菌液中的菌株全部死亡，没有阳性反应，这些实验都需要重做，如果是原料试验或成品试验，很难解释，因此质量控制菌菌株的稳定、定量特性对实验室具有重要意义，大大提高了微生物实验的成功率。2、质控菌种的CFU数量稳定，减少了样品之间的差异这在各种微生物检验中非常有用，因为需要对各种样品进行比较。如果加菌量相差较小，则评价结果更为准确。例如，试验样品阳性的实际添加量为10 CFU，阳性对照的实际添加量为90 CFU。虽然它们都满足如果只看无菌试验中菌株的生长情况，可能对弱生长和好生长有不同的判断，也可能影响定量试验的回收率。但如果我们使用质控菌种，我们可以更准确地判断结果，避免此类问题。3、大大缩短实验准备时间，使用方便，降低成本传统的菌种实验需要经过菌种回收、培养、稀释等过程，还需要准备培养基和消耗品配合实验。例如，黑曲霉的培养需要5-7天，加上实验，至少在制备前7天。但质控菌种实验只需要无菌水和具有一定无菌操作能力的人员加上使用移液枪的能力普通实验室人员可以胜任对实验中难以控制的菌株如铜绿假单胞菌和黑曲霉的控制。另一方面，也可以降低人员成本。

天然色素具有安全无毒性、无致癌性和可生物降解等特点，随着各国对绿色环保产品的追求，天然色素在市场上的需求逐年增加，单单依靠动植物中的提取已经不能满足人类的需求。而微生物的分布广，种类繁多，因此，微生物染色在纺织领域具有广阔的应用前景。1、微生物色素微生物色素是微生物的一种次级代谢产物，色素颜色种类较多，有红、橙、黄、绿、青、紫、黑、棕等各种颜色。微生物色素可以分为水溶性和非水溶性色素两种。与其他天然染料相比，微生物色素的生产周期短，成本低廉，更易于工业化生产。微生物色素的产生方式主要有两种，一种是微生物生长过程中的分泌物，另一种是以培养基中的某一成分作为底物进行转化而形成的色素。对于后者，需要在培养基中加入色素产生需要的物质，促进色素生成，提高色素产量。2、微生物染色方法萃取液染色法萃取染色法就是用液体培养基培养微生物，使之代谢出大量的色素，并经过分离、萃取和浓缩的过程，得到色素溶液。所得色素溶液既可以直接作为染液使用，也可以被制成色素粉末使用。萃取液染色法的优点是适用范围广，易于工业化生产，缺点是提取工艺繁琐，成本较高。菌体染色法菌体染色法因培养基的不同而分为两种方式。一种是液体发酵培养液，当微生物代谢出大量色素时，直接将无菌织物放入培养液中培养染色；另一种是固体琼脂培养基，经过一段时间培养，微生物代谢出大量色素时，将菌体和培养基内加入水，煮沸，然后再将织物在80℃条件下染色。菌体染色法的优点是工艺简单，省时省力，易于操作，缺点是不适用于产生非水溶性色素的微生物。微生物天然染料由于其生态环保、发酵工艺成熟、生物相容性好等优点，越来越受到人们的喜爱。采用微生物染料对纺织品进行染色加工，染色工艺多样，色泽独特，显示出了巨大的应用前景。

二苯胺磺酸钠指示液取二苯胺磺酸钠0.2g，加水100ml使溶解，即得。二苯偕肼指示液 取二苯偕肼1g，加乙醇100ml使溶解，即得。双硫腙指示液 取双硫腙50mg，加乙醇100ml使溶解，即得。石蕊指示液 取石蕊粉末10g,加乙醇40ml，回流煮沸1小时,静置，倾去上层清液，再用同一方法处理二次，每次用乙醇30ml，残渣用水10ml洗涤，倾去洗液，再加水50ml，煮沸，放冷，滤过，即得。变色范围 pH4.5~8.0(红→蓝)。甲酚红指示液 取甲酚红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液5.3ml使溶解，再加水稀释至100ml，即得。变色范围 pH7.2~8.8(黄→红)甲酚红-麝香草酚蓝混合指示液取甲酚红指示液1份与0.1%麝香草酚蓝溶液3份,混合，即得。甲基红指示液取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围 pH4.2~6.3(红→黄)。甲基红-亚甲蓝混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2%亚甲蓝溶液8ml，摇匀，即得。甲基红-溴甲酚绿混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30ml，摇匀，即得。甲基橙指示液取甲基橙0.1g，加水100ml使溶解，即得。变色范围 pH3.2~4.4(红→黄)。甲基橙-二甲苯蓝FF混合指示液 取甲基橙与二甲苯蓝FF各0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。邻二氮菲指示液取硫酸亚铁0.5g，加水100ml使溶解,加硫酸2滴与邻二氮菲0.5g,摇匀，即得。本液应临用新制。茜素磺酸钠指示液取茜素磺酸钠0.1g，加水100ml使溶解，即得。变色范围 pH3.7~5.2(黄→紫)荧光黄指示液取荧光黄0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。钙黄绿素指示剂 取钙黄绿素0.1g，加氯化钾10g，研磨均匀，即得。钙紫红素指示剂取钙紫红素0.1g，加无水硫酸钠10g,研磨均匀，即得。姜黄指示液取姜黄粉末20g，用冷水浸渍4次，每次100ml,除去水溶性物质后，残渣在100℃干燥，加乙醇100ml，浸渍数日，滤过，即得。结晶紫指示液取结晶紫0.5g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。酚酞指示液取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得。变色范围 pH8.3~10.0(无色→红)。铬黑T指示剂取铬黑T 0.1g，加氯化钠10g，研磨均匀，即得。淀粉指示液取可溶性淀粉0.5g，加水5ml搅匀后，缓缓倾入100ml沸水中，随加随搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液，即得。本液应临用新制。硫酸铁铵指示液取硫酸铁铵8g，加水100ml使溶解，即得。溴酚蓝指示液取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围 pH2.8~4.6(黄→蓝绿)。溴麝香草酚蓝指示液取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围 pH6.0~7.6(黄→蓝)。麝香草酚酞指示液取麝香草酚酞0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。变色范围 pH9.3~10.5(无色→蓝)。麝香草酚蓝指示液取麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液4.3ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围 pH1.2~2.8(红→黄);pH8.0~9.6(黄→紫蓝)。

全球平均有约15~35%细胞实验室发生支原体污染（65~80%严重污染），超过一半实验室有两种支原体污染；而全球各地的细胞库中，也有发现5~35%不等的支原体感染率，日本甚至高达60%。但！全球目前有在做常规支原体监控的细胞实验室却不到50%！支原体为细菌的一类，最早在1898年由法国 E. Nocard 及 E.R.Roux 从肺疫牛只中分离出来，1956年才正式命名为支原体 (Mycoplasma)；支原体大小介于细菌与病毒之间 (直径介于0.15-0.3?m)，为目前发现最小最简单的原核微生物，唯1可见的胞器是核糖体，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜 ，所以呈高度多形性，有球形、杆形、丝状，分枝状等多种态 。大多支原体基因组只有0.58－1.38百万碱基，这使得它的生物合成能力薄弱，必须利用本身细胞膜表面高密度的黏附素附着于宿主细胞表面，并交换宿主的细胞质及细胞膜成分，来获取增殖需要的物质。但由于支原体生长条件复杂，使得菌体培养困难重重，导致过去支原体一直不受关注；近几年，拜分子生物学与基因组学的进步所赐，基因构造简单的支原体已引起了较为广大注意。实验室污染种类至今，共有超过180种支原体被发现，有超过20种能感染体外培养的细胞，而目前实验室最常见(95% 以上)的支原体则来自其中6种：源自于实验人员鼻腔、口腔，并经由飞沫传至培养细胞中的口腔支原体（M.orale）、猪鼻支原体（M.fermentans）及人型支原体（M.hominis），居于首位（占总体的50%以上）。其次则为大多来自牛血清的精氨酸支原体（M. Arginini）、莱氏无胆甾支原体（A. Laidlawii）、及来自猪源胰酶的猪鼻支原体（M. Hyorhinis）。PS：BI胰酶经过辐照，不含活的支原体。既然支原体是细菌的一种，抗生素一加不就好了吗?为什么可以搞到全球这么多细胞库污染?1.支原体体积非常小, 极易通过0.22um滤膜, 且一般光学显微镜无法观察到。2.支原体能附着并存活在器物表面(操作台, 培养箱,显微镜等), 提高操作污染概率。3.支原体生长缓慢，通常不破坏宿主细胞但默默改变了细胞生长代谢，且对传统抗生素具抗性，因为抗生素大多破坏细菌细胞壁, 而支原体恰恰没有细胞壁。4.支原体污染初期, 培养基不变色, 细胞形态正常，但等大量污染时, 为时已晚, 耗时又耗力。目前检测方法可大致分成四种：1.微生物培养法将样品培养在特殊琼脂培养基上，在37?C有氧环境中孵育2周，阳性培养基上会长出100~400um大小的“煎蛋状”菌落。2.DNA萤光染色法支原体DNA中A-T含量占多数（55～80%），容易被Hoechst 33258此荧光剂染上，被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点。3.ELISA法将支原体16S核糖体RNA标上标签，然后用特定抗体预包被过的微孔板对标签进行捕获，再加入显色用的抗体及底物，最后通过比色法得出检测结果。4.PCR法原理为扩增支原体16S核糖体RNA的基因，能检测多达19种支原体，操作快速、准确性高

按照中华人民共和国GB15346-94化学试剂包装标准规定： 第9.1.1.M规定：要求注明有效期的必须注明有效期;生产日期或生产批号。我国化学试剂的分类：优级纯(GR，绿标签)：主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质。分析纯(AR，红标签)：主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。化学纯(CP，蓝标签)：主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。实验纯(LR，黄标签)：主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。指示剂和染色剂(ID或SR，紫标签)：要求有特有的灵敏度。指定级(ZD)：按照用户要求的质量控制指标，为特定用户订做的化学试剂。电子纯(MOS)：适用于电子产品生产中，电性杂质含量极低。当量试剂(3N、4N、5N)：主成分含量分别为99.9%、99.99%、99.999%以上。化学试剂有效期 :化学试剂在贮存、运输和销售过程中会受到温度、光辐照、空气和水份等外在因素的影响，容易发生潮解、霉素、变色、聚合、氧化、挥发、升华和分解等物理化学变化，使其失效而无法使用。因此要采用合理的包装，适当的贮存条件和运输方式，保证化学试剂在贮存、运输和销售过程中不变质。对一些对贮存和运输有特殊要求的应按特殊要求办理。有些化学试剂有一定的保质期，使用时一定要注意。化学试剂的有效期随着化学品的化学性质的改变，有着很大的区别。一般情况下，化学性质稳定的物质，保存有效期就越长，保存条件也简单。初步判断一个物质的稳定性，可遵循以下几个原则：无机化合物，只要妥善保管，包装完好无损，可以长期使用。但是，那些容易氧化、容易潮解的物质，在避光、荫凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5年)内保存，具体要看包装和储存条件是否合乎规定。有机小分子量化合物一般挥发性较强，包装的密闭性要好，可以长时间保存。但容易氧化、受热分解、容易聚合、光敏性物质等，在避光、荫凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5年)内保存，具体要看包装和储存条件是否合乎规定。有机高分子，尤其是油脂、多糖、蛋白、酶、多肽等生命材料，极易受到微生物、温度、光照的影响，而失去活性，或变质**，故此，要冷藏(冻)保存，而且时间也较短。基准物质、标准物质和高纯物质，原则上要严格按照保存规定来保存，确保包装完好无损，避免受到化学环境的影响，而且保存时间不宜过长。一般情况下，基准物质必须在有效期内使用。以上实验室的各种化学试剂开瓶后的有效期介绍!希望能给大家带来帮助。

CMA《检验检测机构资质认定评审准则》中所说的“检验检测机构”是指一个机构?还是指“检验机构”和“检测机构”两个机构?我们来看“检验检测机构”的定义：《检验检测机构资质认定评审准则》的条款3.2的定义是：依法成立，依据相关标准或者技术规范，利用仪器设备、环境设施等技术条件和专业技能，对产品或者法律法规规定的特定对象进行检验检测的专业技术组织。这个定义其实并没有给出“检验检测机构”中“检验”和“检测”的区别。我们再看另外一份文件认监委颁发的一份文件：附件2《检验检测机构资质认定评审准则》及释义在对条款3的释义中这样解释：检验检测机构：本评审准则所称的检验检测机构是对从事检验、检测和检验检测活动机构的总称。检验检测机构取得资质认定后，可根据自身业务特点，对外出具检验、检测或者检验检测报告、证书。结论：从解释中我们可以看出“检验检测机构”是指“检验机构”、“检测机构”、“检验检测机构”是不同的，是有区别的，是三类从事不同活动的机构。检验、检测、检查三个术语到底有什么区别?我们来看ISO17000中的定义：检测(testing)按照程序确定合格评定对象的一个或多个特性的活动注：检测主要适用于材料、产品或过程。检查(inspection)审查产品设计、产品、过程或安装并确定其与特定要求的符合性，或根据专业判断确定其与通用要求的符合性的活动注1：对过程的检查可以包括对人员、设施、技术和方法的检查。注2：检查有时也称为检验。从ISO17000的定义得到如下结论：检查和检验是一个定义，是等同的(从检查的定义中注2可看出);检测是指实验室对来样做检测，得到样品的各项数据，但是并不对来样合格不合格，质量好与坏等做判断;检验是实验室对送检的产品做符合性的判断，判断过程中用到的数据可能来自实验室自己测试出来的，也可能来自客户或者其他相关方提供的。实验室根据自己的检测能力测试产品的性能指标，并根据性能指标做出产品符合性的判断，这种既做检测，又做判断的实验室则称作“检验检测机构”举例说明某实验室对牧草种子进行了水分测定，并根据质量标准对送检的牧草种子GB/T 2930.8进行了质量分级，在这个过程中：a)实验室对牧草种子水分含量是多少得出实验数据，是检测;b)实验室根据其他实验室提供的牧草种子水分结果(带CMA的报告)，依据GB/T 2930.8的要求对木牧草种子进行了质量分级，是检验;c)实验室自己测出来牧草种子中的水分含量，并依据GB/T 2930.8的要求对木牧草种子进行了质量分级，是检验检测。