要说做细胞实验大家最担心的是什么,那应该就是——细胞污染了,而其中支原体污染是细胞培养实验室重最常见、最“臭名昭着”的污染之一。
为什么这么说呢?
这是因为支原体污染几乎可影响所有细胞生长参数、代谢及研究的任一数据,并且,支原体缺乏细胞壁,所以常规的抗生素并不能对它们起到抵抗作用,而且由于其直径太小,滤菌器也无法过滤,所以,细胞一旦有支原体污染则十分难以被清除,会给我们的实验造成极大的损失。
研究表明,细胞培养中有15-35%的细胞存在支原体污染,有些地区甚至高达80%。因此支原体检测成为了细胞质控中不可缺少的环节,被列入《中国药典》检测的范畴。
细胞支原体污染的表现:
细胞状态变差、生长变慢,在显微镜下观察可能会有小黑点,但培养基一般不发生浑浊。细胞传代以后就出现细胞间黑点,细胞空泡化,很多类似凋亡、坏死的细胞,最终细胞漂浮,完全死亡。
支原体污染从何而来?
1. 已受污染的细胞;
2. 操作人员的疏失;
3. 已受污染的培养基、血清 ;
4. 操作环境不良、实验器具不洁等。
检测有无支原体污染可做如下检查:
①相差显微境检测:将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上,24h后取出,用相差油镜观察,支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。
②荧光染色法:荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258,可使支原体内含有的DNA着色,染色后用荧光显微镜观察,镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。
③电镜检查:用扫描电镜方法简便快速,也可以利用透射电镜。
④DNA分子条文检查或支原体培养等方法:检出率高,但方法较为复杂。
如果检测到有支原体污染,该如何处理呢?
方法1:直接弃之!
这就非常简单粗暴了,如果还没做处理,还是赶紧弃之吧,抢救不如重新复苏了,另外对培养箱要做由里至外的清洁处理。
方法2:使用支原体清除培养基
如果你培养的细胞比较珍贵,直接丢弃可惜,那么在确定对细胞的基因及蛋白表达没有影响的情况下,可以使用——支原体清除培养基。
远慕生物支原体清除培养基的优势:
1,活性范围广:各支原体株系均可作用。
2,安全可靠:工作浓度低,无细胞毒性。
3,使用方便:将支原体去除试剂加入污染培养物即可,操作简单。
4,时效快:使用的第二天可以明显看出细胞内的小黑点变少,细胞状态变好。
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