微生物的培养基通常指人工配制的适合微生物生长繁殖,或积累代谢产物的营养基质。广义上说,凡是支持微生物生长繁殖的介质或材料,均可作为微生物的培养基。一个适当的培养基配方,对发酵产品的产量和质量有着极大的影响。针对不同微生物,不同的营养要求,可以有不同的培养基。但它们的配制必须遵循一定原则。① 营养物质应满足微生物的需要。不同营养类型的微生物对营养的需求差异很大,应根据菌种对各营养要素的不同要求进行配制。② 营养物的浓度及配比应恰当。营养物浓度太低,不能满足微生物生长的需要；浓度太高,又会抑制微生物生长。糖和盐浓度高有抑菌作用。碳氮比（C∶N,以还原糖含量与粗蛋白含量的比值表示）：一般培养基为C∶N=100∶0.5～2。在设计培养基配比时,还应考虑避免培养基中各成分之间的相互作用,如蛋白胨、酵母膏中含有磷酸盐时,会与培养基中钙或镁离子在加热时发生沉淀作用；在高温下,还原糖也会与蛋白质或氨基酸相互作用而产生褐色物质。③ 物理、化学条件适宜。pH：各种微生物均有其生长繁殖的最适pH,细菌为7.0～8.0,放线菌为7.5～8.5,酵母为3.8～6.0,霉菌为4.0～5.8。对于具体的微生物菌种,都有各自的特定的最适pH范围,有时会大大突破上述界限。在微生物生长繁殖过程中,会产生能够引起培养基的pH改变的代谢产物,尤其是不少微生物有很强的产酸能力,如不适当地加以调节,就会抑制甚至于杀死其自身。在设计培养基时,要考虑培养基的pH调节能力。一般应加入缓冲液或CaCO3,使培养基的pH稳定。其他：培养基的其他理化指标,如水活度、渗透压也会影响微生物的培养。在配制培养基时,通常不必测定这些指标,因为培养基中各种成分及其浓度等指标的优化,已间接地确定了培养基的水活度和渗透压。此外,各种微生物培养基的氧化还原电位等也有不同的要求。④ 培养目的：培养基的成分直接影响培养目标。在设计培养基时,必须考虑是要培养菌体,还是要积累菌体代谢产物；是实验室培养,还是大规模发酵等问题。用于培养菌体的种子培养基营养成分应丰富,氮源含量宜高,即碳氮比值应低；相反,用于大量积累代谢产物的发酵培养基,氮源应比种子培养基稍低；当然,若目的产物是含氮化合物时,有时还应该提高培养基的氮源含量。在设计培养基时,还应该特别考虑到代谢产物是初级代谢产物,还是次级代谢产物。如果是次级代谢产物,还要考虑是否需加入特殊元素（如维生素B12中Co）或特殊的前体物质（如生产青mei素G时,应加入苯yi酸）。在设计培养基,尤其是大规模发酵生产用的培养基时,还应该重视培养基组分的来源和价格,应该优先选择来源广、价格低廉的培养基。 

　　1、什么是瞬时转染和稳定转染？　　瞬时转染：外源片段的表达时间短暂。这主要是因为外源导入的裸露的载体整合入基因组的几率非常低，所以以染色体外(episomal)形式存在，不能随细胞分裂而一同复制导致最后拷贝数被稀释导致的。而且考虑到细胞分裂会稀释质粒的量，所以起初转染的质粒拷贝数极高。这就导致瞬时转染呈现一个高拷贝到低拷贝迅速降低的过程，且无法在这个系统上实现可诱导表达。　　稳定转染：是相对瞬时转染而言，进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。在这个系统中，质粒表达稳定，拷贝数低，且能实现诱导表达。稳定转染并不是一种与瞬时转染不同的方法，只是对瞬时转染的细胞进行筛选，得到稳定整合的细胞株。稳定整合的几率因基因传递的方法而异，跨度可以从10-8到10-1。因此，对于有的转染方法，比如化学试剂介导的转染，其整合几乎可以忽略不计。质粒载体整合的位点并不是完全随机分布，依据不同的基因传递方法，呈现不同的靶向倾向性，所以是一种半随机整合。　　2、设计稳定株构建实验需要考虑的因素有哪些？　　稳定整合试验中需要考虑的几个关键因素有：　　1)，外源插入片段的拷贝数。多数情况下，低拷贝甚至是单拷贝可以减少人为实验因素的干扰。　　2)，整合的几率，这不仅决定了稳定株筛选的难易程度，而且还可以帮助人们更容易得到混合稳定株。　　3)，整合位点的转录活跃度，决定了稳定株中外源片段的表达质量。最理想的状况是单拷贝，但转录活性比较高。　　4)，整合后的稳定性。不同的整合位点决定了外源片段在染色体中的稳定性，有些区域易发生重组或者丢失，从而导致稳定株再次丢失的情况。　　5)，最好使用混合稳定株或者获得多个不同单克隆稳定株。因为稳定整合往往伴随这插入失活宿主内源基因，所以实验时通过使用混合稳定株，或者对多个单克隆稳定株进行比较，可以帮助研究人员获得更精确的实验数据。　　3、什么时候需要稳定细胞株？　　以下实验，构建稳定细胞株而不是瞬时转染更能满足实验要求：　　1)，外源片段在分裂细胞中长期(>2周)稳定表达。虽然普通转染实验一般只能保证2-4天的转染和表达效率，但腺病毒载体在多数分裂细胞中可以维持2-4周内的高转染效率和表达周期。而非分裂细胞，可以使用腺相关病毒载体转导外源基因，因为腺相关病毒载体在许多非分裂细胞中可以保持长达1年的高效表达。　　2)，需要构建使用诱导表达系统，这主要是由于：　　a)，过表达基因或者干扰目的基因引起细胞毒性或者抑制细胞生长等不利因素;　　b)，目的基因的过表达或者干扰需要时空特异性。　　3)，希望控制目的基因过表达或者干扰的拷贝数，以避免引入人为因素影响实验结果的精确性。构建稳定株可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究。　　4)，部分细胞种类，病毒载体亦无法达到高转导效率，通过构建稳定株，达到外源片段的高效表达。　　5)，长期在少数几类细胞中研究几个基因的功能，通过构建稳定株，可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本，也极大方便实验研究。　　6)，部分蛋白稳定性极强，瞬时RNA干扰因为作用周期短，只能抑制目的基因的表达，但无法去除已经表达的目的蛋白，所以需要通过构建稳定株实现更好的基因干扰效果。　　7)，需要往动物体内注射表达有外源片段的细胞。需要构建稳定细胞株，以防止注射入动物体内后，很快外源片段表达丢失。　　8)，细胞个体差异(同一类细胞，不同个体细胞基因组存在差异)对实验结果有干扰，需要构建单克隆细胞株去除干扰。　　9)，需要将外源片段插入基因组中，比如基因敲除，基因插入突变筛选等修饰基因组的实验。　　4、什么时候不需要构建稳定株？　　以下实验不需要构建稳定株：　　1)，希望迅速观察目的基因过表达或者干扰效果。例如在正式实验之前进行的小规模预实验。　　2)，2-4天的瞬时表达已经可以达到具体的实验目的，比如检测两个外源转染的目的蛋白之间的相互作用，或者观察某些细胞周期抑制，凋亡或细胞存活相关基因的细胞表型。　　3)，细胞个体差异对实验结果有影响。体外培养非原代细胞，多为转化细胞系或者癌细胞，细胞个体差异大，瞬时转染或者使用腺病毒/腺相关病毒载体进行转导更可以反映细胞群体行为。或者使用逆转录病毒载体构建混合稳定株。　　5、病毒载体构建稳定细胞株有什么优势？　　化学试剂介导的转染方法和电转，整合率低，同时整合位点不稳定，易发生再次丢失的情况，而且整合位点一般都在转录活跃区之外，所以并不是理想的稳定整合工具。　　另外，整合后的拷贝数是由核内的外源DNA局部浓度，而不是转染时的DNA的量决定，而化学方法在输入质粒载体入核的效率比电转和病毒载体相比要低得多，导致其转染相同细胞所用质粒载体用量要大大高于其它方法，造成入核质粒载体量难以控制，这也解释了为什么化学转染方法和其它两种方比，更倾向于得到串联多拷贝。以上种种因素，导致使用非病毒载体转染方法构建稳定株，成功率低，稳定性差，稳定克隆株易出现不均一(含有非整合细胞)等缺点。　　逆转录病毒载体由于整合率高，是非常理想的稳定株构建工具。而且通过控制逆转录病毒载体转导的实验条件，理论上可以确保每个细胞只有单拷贝插入。同时由于病毒载体是通过病毒重组酶将外源片段整合入染色体中，其整合特性和病毒自身整合特性非常相似：偏向于转录活跃区段，且整合后非常稳定，在传代100次后仍然保留在宿主基因组中。最重要的是整合几率和所有其它化学，物理转染方法比，增加5至6个数量，使得稳定株构建不再成为实验研究的障碍。由于整合几率非常高，所以很容易获得混合稳定株。　　腺病毒载体整合率和普通转染方法差异不大，被认为是不能整合的一类病毒载体，因此相关研究数据较少，不建议用来构建稳定株。非野生型腺相关病毒载体(Rep-)整合率较低，但因为野生型病毒载体可以定点将病毒基因组整合于人19号染色体，所以从安全性和稳定性角度来说，潜力都非常巨大。由于诸多因素，研究人员仍然在对其进行改造中，包括考虑到啮齿类动物不含有人19号染色体对应的整合位点序列。　　6、筛选稳定细胞株的方法主要有哪些？　　主要有三类方法：　　1)单克隆环法：此类方法多用于整合率低的转染方法或者需要得到单克隆细胞株的实验。　　其优点在于工作量小，只需将转染或者病毒载体感染后的细胞按照一定的细胞密度转移至新皿中，并使用合适的药物进行筛选，最后在克隆环的帮助下对单克隆细胞株进行挑选，并在新皿中完成扩增。　　缺点在于需要对细胞密度和药物浓度绘制致死曲线并选取合适的细胞密度和药物浓度进行筛选，一些细小的密度和浓度差别都会导致难以获取均一的单克隆，结果导致获取的克隆不纯，含有非整合的细胞。稳定整合的细胞在这样一类混合细胞中，很快会失去生长优势，最终导致失去稳定株。　　2)96孔单克隆稀释法：此类方法同样多用于整合率低的转染方法或者需要得到单克隆细胞株以及筛选悬浮细胞稳定株的实验。其优点在于，理论上可以得到非常均一的单克隆，同时可以筛选悬浮细胞稳定株。其缺点在于，工作量比较大。　　3)逆转录病毒混合克隆制备法：此类方法适用于需要制备混合稳定株。优点在于可以在短时间内(1周)获得稳定细胞株，同时也可以随时将细胞稀释转移至新皿中获得单克隆细胞株。缺点在于需要制备逆转录病毒载体。　　7、为什么常规转染方法筛选稳定株异常困难？　　常规化学转染或者电转方法，其整合是非同源重组随机整合，几率非常低(10-8-10-6) ，且这些转染条件下发生的整合多发生在转录非活跃区或者重复序列区，导致外源片段表达效率低，同时这些整合常常不稳定，随着传代次数的增加，即使在有压力选择的情况下也容易发生丢失。　　8、为什么病毒载体介导的稳定株筛选方法效率要比常规方法高？　　逆转录病毒载体的染色体整合依赖于病毒重组酶，是一个酶催化反应，因此效率相比随机整合要高多个数量级。而且整合位点多位于转录活跃区，因此表达效率高。同时其整合非常稳定，连续传代100代以上仍然保持稳定表达。　　9、如何选择适合的病毒包装类型进行稳定株筛选？　　并非所有的病毒载体都适合用来进行稳定株筛选，首先需要挑选整合效率高，整合位点稳定的病毒载体。至今为止，逆转录病毒载体是最有效的可以介导基因整合的病毒载体。其次，依据具体实验要求，挑选不同整合位点倾向性的逆转录病毒载体。倾向于整合于转录起始位点附近的，容易造成下游基因的激活; 而整合于转录活跃基因内的，容易导致整合区基因的插入失活。　　10、病毒载体介导的稳定株筛选方法可以适用于任何靶细胞吗？　　虽然普通的逆转录病毒载体可以用来进行稳定株的构建，然而这一类病毒载体并不能高效感染非分裂细胞，因此对于这一类分化细胞，可以使用慢病毒载体进行稳定株构建。也可以使用腺相关病毒载体高效感染非分裂细胞，这一类病毒载体虽然整合率低于慢病毒载体，但其可以以染色体外形式长期(数月至数年)存在于非分裂细胞中，因此可以避免进行稳定株筛选。　　11、为什么稳定株构建服务中不使用腺病毒载体？　　腺病毒载体由于其整合几率极低，被普遍认为是不具备整合能力的病毒载体，所以一般不用来进行稳定株构建。　　12、单克隆稳定株和混合克隆稳定株有什么区别？我该选择哪一类用于我的实验？　　单克隆稳定株顾名思义来源于含有稳定整合外源片段的单个细胞的扩增，而混合稳定株则由多个单克隆稳定株构成的克隆群，不同的单克隆其外源片段的整合位点不一样。由于体外细胞多属于细胞系，其基因组呈现不稳定的特点，因此即使是同类细胞，不同细胞个体基因组背景都存在差异。　　当需要去除细胞群体干扰因素的时候，推荐使用单克隆稳定细胞株，其基因组背景相对单一，对实验结果干扰因素小。当进行系统生物学研究时，多考虑这类因素。　　同时也是由于不同细胞个体差异大，而且不同整合位点的单克隆细胞株表现出来的细胞行为可能不一致，所以许多实验使用混合克隆株更能去除细胞间差异造成的干扰。混合稳定株可以通过逆转录病毒直接筛选获得，或者通过讲众多不同的单克隆稳定株混合获得。前者无论是是从质量，还是时间周期来看都更好。　　13、怎么判别筛选的稳定株是单克隆？　　1)，如果外源片段含有荧光标记，可以直接使用流式细胞仪检测其荧光是否均一; 如果还有其它标签，可以进行免疫荧光标记，再使用流式细胞仪观察荧光分布是否出现均一峰值。因为不同单克隆由于整合位点不一样，其表达强度也会受附近染色体结构的影响，出现差异。　　2)，如果外源片段不含任何标签或者荧光标记，则可以使用分子生物学比如Southern Blot的方法鉴定。　　3)，使用96孔板稀释法筛选，得到的阳性克隆一般是单克隆。因为最初如果混有非整合细胞，则含有整合外源片段的单细胞多半会失去生长优势，无法得到阳性克隆。使用单克隆环法，如果挑取的是致密，单一的克隆，那么多半也是单克隆。　　14、如何判别筛选的稳定株是100%含有外源整合片段的细胞群？　　通过观察所携带的荧光标记或者对外源插入片段进行免疫荧光标记可以判断稳定株是否混有非整合细胞。　　15、为什么有的时候构建RNAi稳定株对达到高效的基因干扰效果是必须的？　　RNA干扰效应主要是影响目的基因所表达的mRNA的稳定性或者翻译，并不影响已经存在的目的蛋白的状态。部分蛋白其稳定性异常高，即使mRNA的表达水平或者翻译受到干扰，目的蛋白仍然可以在很长一段时间内发挥功能。因此需要进行稳定株筛选，以挑取干扰效果好的细胞克隆进行实验。在一些极端情况下，甚至需要进行第2轮稳定株筛选，才能获得一个比较好的RNA Knock down细胞株。　　可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

蛋白Marker可分为：一、未预染的Marker即宽分子 量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。在western blot 过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量精确无误了，实验结果才有说服力，除此之外，蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用，所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。总体来说，蛋白分子 量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。以下是关于蛋白分子量标准的小叙：一. 未染色(pre mixed)蛋白分子 量标准未染色的蛋白分子 量标准是最简单，也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数都选用预混和的Marker，方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示，因为混合的条带越多，越不好记，谁知道哪条是那条!数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。不过要记得，小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说，当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好，越近越好。如果你的蛋白不幸在两条跨度较大Marker条带之间，选别的Marker吧。预混的Marker使用上不如预染Marker(pre-stained)好用，因为电泳过程中完全看不到，要和目标蛋白一起等到最后染色才“开蛊”，无法对实验起预示参照作用。完全属于“后知后觉”型的，当然还是比“不知不觉”不做对照的要好。① 宽分子量蛋白标准如果从实验室总体考虑的，就选范围尽量宽，条带分布比较均匀的，这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断，避免正好落在一段空白区的危险。不过条带越多，每次上样量也就越费。拿到Marker后，如果买的是大包装，就应该考虑分装。多次反复冻融对于蛋白的危险，不用多说吧。另外要记得，宽谱的Marker不一定每条都能看到的，特别是Mini Cell。如果侧重大蛋白，那小的可能就已经跑掉了，不是质量不好哦。② 高分子量蛋白标准通常在检测大分子量蛋白经常使用到高分子量蛋白标准，③ 低分子量蛋白标准在一般的蛋白电泳当中，更常用的是低蛋白标准分子量，除了有指示蛋白大小的作用以外，有时还可以用作粗略的定量。实验室用在一般蛋白电泳的低分子量蛋白标准中。在低分子量蛋白标准这里还包括可特别小的蛋白标准，比如30kD以下蛋白或者多肽的分离辨别。其中GE的从2kD到16kD之间有6条带的蛋白标准挺不错，另外提醒一句，特别小的蛋白Marker条带如果要显色好，上样一定要上足够的量哦。二.预染蛋白分子量标准预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验，这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如，已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处，如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入最佳分辨区时停止电泳以得到最佳分辨效果;如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳;另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全，还可以在膜上标记蛋白分子量，所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联，所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化，可能导致一些偏差，所以不太适合精确定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样，我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小，最后都需要Western来定性，所以如果不是要区分大小相近的条带，预染Marker还是很好用的，而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。预染蛋白标准可以分为两种：单色预染和多色预染，其实区别就在于帮助在实验过程中辨认某个条带的大小——Marker条带越多参考价值越大，可就越难辨认区分，如果用不同的颜色来区别就比较好辨认啦。如果沉闷的电泳实验中跑出五颜六色的彩虹Marker，此时心情想必会愉快一些!单色的Marker通常是利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小的。还有一点特别要注意，由于转膜是一个将胶里的Marker浓缩在洁白的膜上，所以需要的上样量相对少一些，如果想要在电泳过程中看到美丽的“彩虹”，或者单色的Marker往往需要比说明书里多加一些Marker的。三、Western专用的蛋白分子量标准①生物素标记蛋白标准未染色的Marker在做Western时，需要在印迹前先用丽春红或者是SYPRO荧光蛋白染色液等不干扰Western Blot的染色方法显色，在胶上做标记最后才能“拼”在最后的结果中，如果是预染的Marker就要在转膜后标记膜，或者剪膜，最后在“拼上”。要是想直接将Marker结果显示在最后结果上，不用手工作图或者拼接，那就要Western专用的Marker了。比如生物素标记的蛋白标准。这种方法主要是配合化学发光法：在蛋白分子量上标记生物素，通过带有抗生物素的抗体或者偶联链亲霉素的抗体，在化学发光检测到目的蛋白带时就可以同时看到相应的分子量标准一起发光显影了。不同于普通蛋白分子量标准的便宜、预染蛋白分子量的方便，这一方法的优点是与Marker和目的蛋白对应性好，同时在同张片上显示，不用拼接，利于分析。缺点是如果样品中带有生物素背景，那个抗生物素抗体有可能影响结果，而且反应体系太过复杂也会干扰实验结果。②特殊标记蛋白标准在经过修饰的蛋白标准中，除了生物素标记以外，近些年由于下游蛋白操作的丰富化与复杂化，也出现带有“尾巴”的蛋白标准。比如His-Tag，如果每个Marker条带都有His –tag，那二抗添加His-Taq抗体很容易将Marker条带显示在Western结果上。很方便，问题就是有可能有潜在的干扰，比如样品中正好有类似Histag的结构。不过这可以通过对照检测的。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

　　标准物质的定义　　　　1. 标准物质：具有一种或多种足够均匀和很好地确定了的特性值，用以校准设备，评价 测量方法或给材料赋值的材料或物质。标准物质是一种计量标准， 都具有标准物质证书， 对每个标准值都具有给定置信水平的不确定度。　　　　2. 一级纯度标准物质：代号为 GBW，是指采用绝对测量方法或其它准确、可靠的方法 测量其特性值，测量准确度达到国内外最高水平的有证标准物质，主要用于研究与评价 标准方法，对二级标准物质定值。　　　　3. 二级纯度标准物质：代号为 GBW（E） ，是指采用准确可靠的方法、或直接与一级标 准物质相比较的方法定值的。也称为工作标准物质，主要用于评价分析方法，以及同一 实验室或不同实验室间的质量保证。　　　　4. 标准物质证书：是证明标准物质的标准值及其准确度，介绍标准物质的技术文件， 也 是向用户提出的质量保证书，随同标准物质提供给用户。在标准物质证书和标签上均有 “CMC”固定的设计格式标志。　　　　5. 基准试剂：是用于标定容量分析标准溶液浓度及 pH 计定位的标准物质，纯度高于优 级纯。分为工作基准试剂和第一基准试剂，基准试剂执行的是强制性标准，但第一基准 试剂是由计量部门负责发送及定值的。　　　　6. 容量工作基准试剂：是作为量值传递的基准，用于标定标准滴定溶液浓度。　　　　标准物质的作用　　　　⑴ 保存和传递特性量值，建立测量溯源性　　　　标准物质是特性量准确、均匀性和稳定性良好的计量标准，具有在时间上保持特性量值，在空间上传递量值的功能。通过使用标准物质，可以使实际测量结果获得量值溯源性。　　　　⑵ 保证测量结果的一致性、可比性　　　　通过校准测量仪器，评价测量过程，由标准物质将测量结果溯源到国家单位制(SI)，保证测量结果的一致性、可比性，从而达到量值统一。　　　　⑶ 研究与评价测量方法　　　　标准物质可作为特性量值已知的物质，用于研究和评价测量这些成分或特性的方法，从而判断该方法的准确度和重复性，并通过验证和改进测量方法的准确度，评价检测方法在特定场合的适应性，促进测试技术的发展。　　　　⑷ 建立测量系统的质量保证　　　　检测机构通过使用标准物质进行质量控制，实现质量保证，这是确保检测数据准确、可靠，具有可比性的做好方法。　　　　可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

一、定义上的区别1、校准品：用于定量检测时对检测项目的校准，是具有在校准函数中用作独立变量值的参考物质。一般包含2个到多个浓度水平。2、质控品：用于检查分析仪器或方法的性能，是一种稳定的物质，用于验证分析仪器或方法的性能。3、标准品：具有确定特性量值，用于评价测定方法的物质。包括国家参考品和企业内部参考品，可用于主要原材料的质量控制、生产工艺及反应体系的确定研究、产品放行、注册检验、监督抽验等。二、是否都需要注册1、校准品：一般可与配合试剂合并申请注册，也可单独申请注册；2、质控品：一般可与配合诊断试剂合并申请注册，也可以单独申请注册。3、标准品：国家参考品由中国食品药品检定研究院负责组织制备、标定，并向国家药品标准品委员会申报获批。企业内部标准品是由企业根据产品的特性研制用于满足产品生产过程中的质量控制、性能评估等，一般不需要注册。三、是否都需要溯源性文件1、校准品：要求提供完整的溯源性文件。2、质控品：一般无溯源性要求，但对于定值质控品，有赋值准确度的要求。3、标准品：如已有相应的国家或国际标准品的项目，则企业内部标准品应溯源至国家或国际标准品；如无国家或国际标准品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，比如用金标准的方法或已上市同类产品对其进行验证确认等。四、性能评估指标1、对于校准品和质控品，除了溯源性上的差别外，一般都包括装量、瓶间差、生物安全性、稳定性等指标的要求。2、而对于标准品：根据项目的不同，选用相应的试剂盒或金标准方法等，对参考品进行验证分析。校准品、标准品、质控品三者同为参考物质。参考物质是一种材料或者物质，某一种或多种特性值只够均匀并被良好确定，用于校准测量系统，评价测量程序或为材料赋值。但三者并非用一个概念，他们有各自不同的应用场合。临床上常常有很多错误的应用，例如将不同厂商的校准品应用于检测系统；使用给定值的质控品评价检测系统；使用质控品来校准检测系统等等。校准品、标准品、质控品的来源及定值方式，得出正确使用三种参考物质的方法：1、传统的方法的缺点传统的检验项目，要使得检验结果可靠或者有依据，往往会使用一个已知浓度的标准品同样品一同测定。传统的标准液用纯水配制，同血清相比，成份非常简单，除了待测物质外只有水了。此时在将样品同标准品相比较时，引入了基质效应。基质效应：检体中的非测定物质对测定量的影响。换句通俗的话说也就是，检体中测定物外的其他物质对||检测的干扰，使检测结果偏离真值。此时通过同无基质效应的标准品比较得出的有基质效应的样品检测值，将偏离于真值。是否能使用标准液取决于检测方法学，干扰极小的决定性方法或者某些已知干扰的参考方法可直接使用标准品。2、标准品的定值一般而言，检验工作中使用的标准品属应用标准。将符合质量标准的纯品使用称量法和容量法配制成溶液。用决定性方法反复测定，结果在规定的范围内属合格。测定制的可靠性取决于鉴定方法，分析方法的可靠性不如公认的称量法和容量法。标准品值由称量和容量法计算确定。决不可将实测值替代修正。3、引入校准品为了克服纯标准品和病人样品间的基质差异，20年前开始应用具有与病人样品基质效应相似的校准品替代标准品，用于日常工作。4、校准品的定值1.校准品来源：校准品大多来源为人样品的混合物，如混合血清。本身内含被检分析物，植被时刻添加某些分析物，增加含量。2.定值方法：校准品中被检分析物的含量无法由称量法和容量法确定，只能依赖于分析方法。校准品的校准值只能取决于分析方法和检测系统。但所有用于检验中的检测方法、仪器、试剂等都是用来监测病人的新鲜样品的，不是用来监测校准品这样处理过的样品的。所有校准品都是处理过的样品，和新鲜样品有着新的基质差异。若使用公认的参考方法去标化测定校准品，测定程序是严格的，测定只是可靠的，但不是校准值。使用该测定值去校准常规的检测系统时，校准品中的分析物被检测时的表现明显不同于新鲜病人样品，不能将参考方法系列的准确度通过校准品传递给病人，如先使用公认的参考方法检测病人样品，再以具有参考值的病人样品去校准某检测系统。此时该检测系统在检测其他新鲜病人样品时，这些病人样品结果的溯源性可上溯至公认的参考方法。也即用新鲜病人样品是校准系统的最佳校准品。但是具有参考值的新鲜病人样品无法用于常规工作所有方法、仪器、试剂或检测系统的校准；只能依靠现有的校准品，如何去确定校准品的校准值是关键。评级校准值可靠性的唯一要求是：被校准品校准后的检测系统，对病人样品检测的检验结果和某些指定参考方法对病人样品的检验结果具可比性。校准值不是测定值，是纠正的调整值。5、校准品的专用性在以往的应用中用户往往不注意校准品的应用的专用性，任何方法或仪器、试剂使用一个校准品，严重影响检验质量。从上面的校准品定值方法中，我们可以知道，只有在使用了和定值时相同的检测系统，得出的结果才能同参考方法结果具可比性。6、质控品定值1.质控品的来源：质控品的来源同校准品大致相同，厂商可能会更具自己的要求添加了很多物质，此时有些物质的添加量常常达到病理状态的高浓度，在应用于某一项目时，对这个项目来说基质效应将更大。2.定值方法：有些厂商会给自己的标准品定一个定值范围，这个定值范围是由厂商联合几家使用同样检测系统的临床用户，仅多次测定得出的均值。此时如果将该质控品应用于另一个检测系统，由于方法学的不同，可能得出同厂商给出值有较大差异的值。此时不能认为该检测系统的准确度不佳。此时需要强调的是检测系统都是用来测定新鲜血清的，不是用来测定质控品或其他物质的。检测系统只有在检测新鲜血清是得出的结果才具有溯源性。不同检测系统之间只有在检测新鲜血清时才具可比性。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

纤维素酶（英文：cellulase）是酶的一种，在分解纤维素时起生物催化作用。是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。纤维素酶广泛存在于自然界的生物体中。细菌、真菌、动物体内等都能产生纤维素酶。一般用于生产的纤维素酶来自于真菌，比较典型的有木霉属(Trichoderma)、曲霉属（Aspergillus）和青霉属(Penicillium）。产生纤维素酶的菌种容易退化，导致产酶能力降低。细菌产纤维素酶的产量较少，主要是葡聚糖内切酶，大多数对结晶纤维素无降解活性，且所产生的酶多是胞内酶或吸附在细胞壁上，不分泌到培养液中，增加了提取纯化的难度，因此对细菌的研究较少。但由细菌所产生的纤维素酶一般最适pH 为中性至偏碱性。近20年来,随着中性纤维素酶和碱性纤维素酶在棉织品水洗整理工艺及洗涤剂工业中的成功应用,细菌纤维素酶制剂已显示出良好的应用前景。纤维素酶在食品行业和环境行业均有广泛应用。在进行酒精发酵时，纤维素酶的添加可以增加原料的利用率，并对酒质有所提升。由于纤维素酶难以提纯，实际应用时一般还含有半纤维素酶和其他相关的酶，如淀粉酶（amylase）、蛋白酶（Protease）等。纤维素酶种类繁多，来源很广。不同来源的纤维素酶其结构和功能相差很大。由于真菌纤维素酶产量高、活性大，故在畜牧业和饲料工业中应用的纤维素酶主要是真菌纤维素酶。英文名称 Cellulase英文别名 Cellulase [USAN]; Ku-zyme; Kutrase; Cellulase, aspergillus niger; Cellulase, trichoderma viride; Fungal cellulaseEINECS 232-734-4可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

 1.目的规范实验室的消毒灭菌工作，确保实验器材和废弃物品的安全处理，避免实验室污染物对实验室工作人员、环境和公众造成危害。2.适用范围适用于从事微生物实验活动的实验室，实验器材和废弃物品处理的控制。3.消毒程序及方法3.1室内空气的消毒使用洁净室/阳性菌前后用紫外线灯照射对室内空气消毒，照射时间≥30钟，并填写《洁净室/阳性菌使用记录表》 。3.2 表面的消毒3.2.1地面消毒实验室地面可用0.2%~0.5%的消毒剂喷洒，喷洒消毒剂的用量不得100ml/m2。3.2.2物体表面消毒实验室台面、桌椅、橱柜、门把手等物品的表面可用消毒剂喷洒、擦拭，并填写《洁净室/阳性菌消毒记录表》。3.3 实验器材的消毒处理3.3.1检测人员将检测过程使用的器材和实验废液作好标识，及时处理。3.3.2实验器材：使用过的玻璃器皿应立即进行高压灭菌处理。3.3.3洁净室/阳性菌室穿着的被污染衣物检测人员予以121℃ 30分钟高温高压处理后方可洗涤。3.4 报废菌株、超过保管期限的阳性样品的处理报废的菌株由生物安全员采用121℃ 30分钟高温高压处理后，填写《菌种、毒种（株）阳性标本销毁记录表》3.5 废弃物灭菌同培养基灭菌所用高压灭菌器应分开单独使用，灭完废弃物后空转一次方能进行培养基灭菌。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

蛋白酶抑制剂混合物（100×，哺乳动物样品提取用）规格：1ml /5×1ml储存条件：-20℃保存，有效期一年。产品简介蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100×)  (Protease  inhibitor cocktail  for mammalian cell and tissue extracts, 100×) 是一种用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物(100mMAEBSF,  80μM  Aprotinin,5mMBestatin,1.5mME64,2mMLeupeptin and1mMPepstatin A in DMSO)，并提供独立包装的0.5MEDTA。哺乳动物细胞或组织提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。本产品为经优化和测试的用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及氨基肽酶抑制剂。本产品使用便捷，通常以1:100的比例分别把蛋白酶抑制剂混合物和0.5MEDTA加入裂解液中，如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA。本产品可以有效抑制哺乳动物细胞或组织提取物中的各种蛋白酶活性，如丝氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂，其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似，可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作为PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。Aprotinin是丝氨酸蛋白酶的竞争性可逆抑制剂；Bestatin是氨基肽酶可逆抑制剂；E64是半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制剂；Leupeptin是丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶可逆抑制剂；Pepstatin A是天冬氨酸蛋白酶可逆抑制剂；EDTA作为螯合剂是金属蛋白酶的可逆抑制剂。一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。使用方法：1.本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，混匀后即可使用。根据需要，0.5M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中（如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA）。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。2. 待所需的抑制剂添加完毕混匀后，就可以开始进行哺乳动物组织的裂解和蛋白提取。提示：蛋白酶抑制剂混合物尽量避免反复冻融，第一次使用后，可按照每次使用量分装冻存。family:Arial'>1:100的比例加入到裂解液中。3. 待所需的抑制剂添加完毕混匀后，就可以开始进行常规细胞或组织的裂解和蛋白提取。提示：蛋白酶抑制剂混合物尽量避免反复冻融，第一次使用后，可按照每次使用量分装冻存。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

标准物质对于实验室的小伙伴来说都不陌生，几乎是每天的必用物质。它在实验中起到的作用自是无须赘述，是准确定性定量的关键。那么，如何选择合适、纯度高的标准物质呢?在选择过程中都会遇到哪些问题呢?首先，什么标准物质?标准物质reference material：是一种已经确定了具有一个或多个足够均匀的特性值的物质或材料，作为分析测量行业中的"量具"，在校准测量仪器和装置、评价测量分析方法、测量物质或材料特性值和考核分析人员的操作技术水平，以及在生产过程中产品的质量控制等领域起着不可或缺的作用。Q：选择、购买标准物质应考虑哪些要素?A：1、特性量的种类及定值方法：某些标准物质可能只适用某一特定方法或专属领域的应用，某些标准物质的值有特殊规定，如含结晶水的值，应对证书中该类说明加以注意，防止误选误用;2、特性量水平：标准物质的特性量水平应与日常测量样品的水平匹配;3、可接受的不确定度水平：标准物质特性量的相关不确定度水平应与日常测量中的精密度和正确度限度要求匹配;4、基体及可能的干扰：标准物质用于开展方法确认、质量控制以及一些基体效应较为严重的测量方法的校准时，基体应与日常测量样品基体尽可能接近;5、形式：标准物质可制备成不同的形式，如冻干与冰冻样品，制备方式的不同可能会导致相同特性在标准物质与真实样品中的行为差异，从而产生互换性问题，选购前应充分调研;6、最小取样量：只要标准物质证书中规定了最小取样量，用于测量的取样量应不小于该最小取样量，因此选购时应考虑最小取样量是否能满足测量方法要求;7、用量：标准物质的购买用量应足以满足整个实验计划中的应用，包括根据需要考虑的备样;8、稳定性：选购前应确认所购买批次标准物质的有效期限，避免使用时发生过期的情况。Q：新购买的有证标准物质如何验证?A：对于购买到的标准物质，在收到后应首先对照证书确认标准物质的运输条件是否符合要求，然后核对品种、数量等是否与购买要求一致，包装、外观是否正常，标识是否清晰、完整;有无证书，是否在证书声明的有效期内等。核对完毕后，立即按照证书中规定的保存条件进行保存。如有问题，应及时与研制或发售单位联系。Q：有证书(certificate)的标准物质就是有证标准物质么(CRM)吗?A：回答这个问题，首先要理解“有证标准物质”(Certified Reference Material)的含义。有证标准物质是指“附有由权威机构发布的文件，提供使用有效程序获得的具有不确定度和溯源性的一个或多个特性值的标准物质”。因此，有证书的标准物质不一定就是有证标准物质。Q：有证标准物质应具有以下基本特征?A：1、溯源性和不确定度声明;2、标准物质的制备、定值及认定符合由ISO指南34和指南35给出的有效程序，我国已将上述指南等效转化为JJF1342《标准物质研制(生产)机构通用要求》和JJF1343《标准物质定值的通用原则及统计学原理》，成为国家标准物质的评审、发布的技术依据。Q：有证标准物质和其它标准物质在使用上有什么区别?A：首先应明确，只有有证标准物质提供的认定值或标准值才能够用于校准、为其他物质赋值以及测量正确度确认，并通过其使用来声明测量结果的计量学溯源性。在我们的日常测量中还会使用其它类型的标准物质，它们主要用于开展测量质量控制、测量精密度确认等。有时，在缺少有证标准物质的情况也不得不使用这些标准物质来开展校准等活动，但是应进一步评估这些标准物质是否符合有证标准物质的特征，或溯源性和量值不确定度水平能够充分满足测量结果溯源性和准确度要求。Q：有证标准物质的参考值或信息值?A：有证标准物质的证书中，有时会提供一些额外的参考值或信息值，这些值通常缺少明确的计量学溯源性，缺少不确定度信息或不确定度评估不全面。因此它们的主要用途是帮助用户了解标准物质基体组成，判断标准物质的适用性，或视可靠程度用于开展测量质量控制。Q：标准物质一定要在有效期内使用吗?A：标准物质的有效期是研制单位根据稳定性研究数据，为了确保标准物质量值及不确定度的可靠性而确定的，因此，务必在有效期内使用。到期后未使用的标准物质也许仍旧稳定，对于一些批量较大、稳定性周期较长(如五年以上)的标准物质，研制单位有时会提供延长有效期的服务，但是在标准物质的稳定性无法得到研制单位保证的情况下，用户如果继续使用该标准物质，需自行承担责任。Q：为什么一定要按照证书中规定的条件使用和保存标准物质?A：标准物质证书中规定的使用和保存条件是确保的必要条件。标准物质的保存条件是在稳定性研究中确定的，而标准物质的使用条件，如温度、配制方法、干燥方法、水分校正方法、混匀方法等，则是标准物质定值过程严格确定和遵守的，不按照规定使用和保存会导致标准物质的量值不再有效，测量结果与标准值相比较出现偏差。Q：打开后的标准物质如何保存?A：标准物质证书中有时会规定“一次性使用”，这些标准物质一般不稳定或具有较高的量值准确度，如安瓿瓶分装的国家一级溶液标准物质，在打开包装后量值易发生超出不确定度范围的变化，应按照要求尽快移取，不能留存后反复使用。可一次性制备成中间标准储备溶液保存、使用。对于可多次使用的有证标准物质，确保标准物质包装单元开封后的恰当保存和包装、证书的完整性非常重要。某些情况下，有必要根据证书要求，对剩余的物质进行重新密封包装。取样时应采取防止沾污的措施。Q：标准物质的最小取样量有什么意义?A：标准物质的最小取样量是在均匀性研究中规定的。使用标准物质时的实际取样量应不低于标准物质的最小取样量，当小于标准物质的最小取样量使用时，证书中声明的标准物质特性量值和不确定度等参数可能会由于标准物质的不均匀性而不再有效。Q：标准物质的测量值一定要在不确定度之内吗?A：如果实验室对标准物质的测量值超出了标准物质特性量值的不确定度范围，是不能直接得出测量结果存在偏差的结论的，原因是标准物质的不确定度U标准物质仅包括了与标准物质定值、均匀性、稳定性有关的不确定度U测，没有涉及用户在实验室里对标准物质进行测量有关的随机不确定度。因此，应采取以下通用公式判断标准物质测量值与标准值之间存在显著偏差：S代表标准偏差，n代表重复次数，t值可根据n和置信概率水平查表得到。此外，要注意在测量条件达到稳定后使用标准物质，否则会导致错误的结论。Q：校准用标准物质的稀释和使用过程中应注意什么?A：用户购买到的校准用标准物质常常浓度较高，不能直接使用，应做好这些过程的质量控制。标准物质稀释配制过程中所使用的容器与稀释剂需要引起注意：有些物质用玻璃瓶存储时，容易受降解或溶出影响，这时就要使用其它材料的瓶子，如K、Na等元素溶液标准物质需采用塑料瓶保存;有些物质用塑料瓶存储则会发生吸附或溶出，如汞在塑料瓶中可能会产生吸附现象，因此选择玻璃瓶较为可靠。所采用的稀释剂除了应对空白进行必要的控制外，不同的稀释剂其稳定效果也不同，原则上应按照检测标准方法中规定的稀释剂品种及浓度进行配制。标准物质称量、稀释过程中使用的计量器具，如天平、移液器、容量瓶等，应经适当的校准或检定确认符合精度和准确度要求，特别是有机分析中使用的微量注射器和移液枪的误差较大，应注重进行日常校准。Q：标准物质如何开展量值核验?A：如何在使用环节做好标准物质的量值控制常常是用户困惑的问题。标准物质的量值控制应分以下情况制定具体的措施：1、对于有证标准物质，只要按照标准物质证书上所规定的条件和方法保存，并在有效期内使用，量值是有保障的，这类标准物质的核查应简化为检查包装、标签及证书的完好性、有效期、保存条件等;如果是开封后可多次使用的有证标准物质，除了上述核查外，实验室应制定相应的文件规范其后续使用和管理，定期检查其使用的情况，必要时与另一未开封单元或批次的标准物质通过比对进行量值核验。2、对于内部标准物质或实验室由有证标准物质制备的校准溶液等，由于没有充分的均匀性和稳定性数据，严格的量值控制是非常必要的。可采取的方式视实验室的经济和技术条件灵活掌握，如利用质量控制图进行趋势检查、通过上下批标准物质量值比对或实验室间比对验证量值的准确性等。此外核查的频次要根据标准物质的特点制定，稳定性预期良好的标准物质可相对放宽核查的时间间隔。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

1.    总磷a)    指水体中磷元素的总含量，一般包涵正磷酸盐、焦磷酸盐、偏磷酸盐、亚磷酸盐和有机团结合的磷酸盐等。b)    主要来源为生活污水、化肥、有机磷农药及近代洗涤剂所用的磷酸盐增洁剂等。2.    有机磷a)    指含有碳-磷键的有机化合物，有机磷化学即是研究有机磷化合物性质和反应的有机化学分支。磷元素与氮同族，具有类似的价电子层结构，因此有机磷化合物的性质与有机含氮化合物有些相似。b)    通俗理解，有机一般如下:焦磷酸盐、偏磷酸盐、亚磷酸盐、次磷酸盐。除磷剂无法去除有机磷，需要做强氧化等预处理等工序，目前是行业内难题。3.    无机磷a)    无机磷可以默指正磷酸盐，即PO4-表示。正磷酸是三元酸，有三种正磷酸盐:b)    ① 磷酸二氢盐MH2PO4,又称一代磷酸盐,都溶于水；c)    ② 磷酸氢盐MHPO4，又称二代磷酸盐；d)    ③ 正磷酸盐M3PO4，又称三代磷酸盐。e)    无机磷相比有机磷要去除要容易很多，常见的污水行业有:生活污水、食品废水、酸洗磷化废水。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

蛋白胨是一种外观呈淡黄色的粉剂，浓缩干燥而成的浅黄色粉末，具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好物理性状。可配制各种微生物培养基。一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白(酪蛋白、肉类)和植物蛋白(豆类)两种。蛋白胨当中不仅含有丰富的氨基酸，特别是含硫氨基酸较多，而且含有更多的细菌生长需要的维生素和其它生长因子。是生物制药发酵及各种培养基制备的基础原材料。在培养基当中它起的主要作用是提供氮源。蛋白胨的用途：实验室用作培养基，培养细菌。食品中用作提高蛋白含量。用于饲料中显著降低了饲料厂的生产成本，是饲料行业中蛋白源不足的良好佳品。胰酪蛋白胨是一种优质蛋白胨，亦称胰酶蛋白胨或称胰蛋白胨。该蛋白胨系采用酪蛋白经胰酶消化后，浓缩干燥而成的浅黄色粉末，具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好物理性状。可配制各种微生物培养基。酪蛋白胨是用酪蛋白经胰酶水解精制而成，色泽呈淡黄色或白色。月示胨采用精蛋白为基质，经特殊水解提取制备的干燥粉末，营养极为丰富，可做多种培养基的基础。大豆蛋白胨是是用大豆为基质，采用新工艺提取而成的淡黄色粉末，含有多种营养成份，适合做微生物培养用原料。专门用于培养链球菌、肺炎球菌、布氏杆菌等，营养丰富，也可用做工业化生产的发酵原料。牛肉蛋白胨用新鲜精牛肉，采用最新工艺精致而成在培养基当中它起的主要作用是补充蛋白胨以及其它氮源的营养不足。多价胨采用先进生物提取工艺精致而成，为淡黄色干燥粉末，营养极为丰富，可做多种培养基的基础。适合奈瑟氏菌、沙门氏菌属等生长。骨蛋白胨系蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、牛奶粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋白、血纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工艺所得的产物。市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其分子量约2000左右。不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

采样的基本原则采样的基本原则是：为了掌握总体物料的成分、性能、状态等特性，往往需要按一定方案从总体物料中采得能代表总体物料的样品，通过对样品的检测了解总体物料的情况。因此，被采得的样品应具有充分的代表性。有时采样的费用较高，在设计采样方案时可以适当兼顾采样误差和费用。但首先是要满足对采样误差的要求一、保证采样器具的无菌性1.玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌，保证恒温、时间足够（但不可时间过长，导致玻璃器皿易裂纹而报废）。2.取样筐：使用前要用 75%酒精进行喷洒消毒3.取样勺、浓奶取样提子：要保证其清洁消毒，清洁后用 75%酒精进行擦拭消毒。4.取样袋：可现用酒精进行擦拭消毒，再在超净台用紫外灯照射消毒，（包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒）。5.电子称表面用 75%酒精消毒。二、人员操作1.保证手部的清洗、消毒：取样前及做样前都要先洗手再消毒。2.取样要具有代表性（随机样、目的样、综合样）且要标示清楚。3.取样完毕，不可在车间逗留，要及时将样品放入超净台，对其外表面进行紫外灯照射消毒。4.在要求的做样区域进行操作。5.做样前，要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒，再开口。6.往盐水瓶加样品时，要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。7.样品计量要准确，稀释倍数也要准确（1mL 吸管不允许将管口敲掉），进行 100 倍稀释时，1mL 吸管要伸入盐水中，不可以将样品管壁流下去，同时要避免将管底部捅破。8.盐水温度以 40℃左右为宜，不能过热，将部分微生物烫死，也不能温度太低，不能将奶粉溶解完全。9.进行稀释时，要摇匀，保证溶液的均一性。10.倾倒平皿时，要注意培养基瓶口不要接触到平皿；倾倒的培养基要适量，不可以太少，在培养过程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右为宜。11.做大肠菌群样时，要提前将乳糖胆盐培养基培养管按需要量备好，放入超净台对外表面进行紫外线灭菌。12.接二步时，要注意先将接种针（环）进行冷却，避免出现接不上菌落的情况发生，导致无法判断、确认。13.做样完毕，及时放入相应培养箱进行培养，并清理清洁超净台。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

曾经有人做过这样一些实验：实验一：强电解质溶液的pH试验——在50mL去离子水中加入1.6g的Na2SO4，用NaOH和H2SO4调节pH，结果……实验二：中浓度缓冲渡pH的试验——250mL去离子水中加入pH6.86标准混合磷酸盐2.5g，用NaOH和H2S04调节pH，结果……实验三：多种缓冲剂混合溶液的pH试验——250 mL去离子水中加入pH 4.008标准邻苯二甲酸氢钾1.25g，pH6.86标准混合磷酸盐0.85g及pH9.18标准四硼酸钠0.92g，用NaOH和H2s04调节pH。看了上面的实验，是不是吓了一大跳？下面是小编今天要说的重点、重点、重点：从理论上讲，pH计和pH试纸所依据的测试原理是不同的！！！pH计：一般使用玻璃电极，其膜电位Em与待测溶液氢离子活度a（H+）之间的关系，符台能斯特方程，因此，pH计测量pH值时无需消耗H+或OH-。因此，pH计测得的值比较正确地反映了溶液的实际pH值！pH试纸：原理是基于指示剂的显色反应：试纸上含有一定量的指示剂，当它要从一种颜色变为另一种颜色就要消耗一定量的H+或OH-。当溶液中H+或OH不足以使指示剂从一种颜色变为另一种颜色，这就造成pH试纸无法准确显示溶液的pH。缓冲溶液缓冲理论指出：在缓冲溶液的缓冲范围内，H+或OH-的少量增加或减少溶液的pH基本上稳定不变，也就是说能够提供足够的H+或OH-使pH试纸变色，而溶液的pH基本不变，pH试纸不产生误差。当溶液的实际pH超出了缓冲范围，少许H+或OH-会引起溶液pH很大的变化。用pH试纸测试时，使溶液实际pH超出缓冲范围的少许H+或OH-不足以使试纸变色至实际的pH，而（浸润试纸的）溶液原本的实际pH已改变（回到缓冲范围附近），pH试纸往往仍显示缓冲范围附近的值，产生了误差。远慕生物总结：pH试纸测试时要消耗一定的H+或OH-，所以pH试纸极易产生误差！对于强酸性溶液及强碱性溶液，pH试纸一般不会不产生误差。pH试纸更多地体现了缓冲溶液的性质：在缓冲体系的缓冲范围内，pH试纸很好地显示溶液的实际pH；而在缓冲范围外，pH试纸的值就会偏离溶液的pH，严重的可达好几个pH单位……可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

培养基的质量是微生物实验室检测工作的基础，事关检测工作的准确性、可靠性，在微生物实验室检测工作中举足轻重。如果在工作中忽视任何一个环节的质量问题，都将导致检验结果科学性、客观性的偏离。因此，加强培养基的实验室质量控制，认真地做好培养基的质控工作，不断完善和提高培养基的质控水平，才能为微生物检测实验室提供高质量的培养基。培养基的制备流程1.培养基用水培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水，最好不使用离子交换器生产的去离子水。2.称量称量时要用专用的角匙，避免交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如有条件，尽量在湿度较低的房间称取培养基。干粉培养基应严格按照生产商提供的有关说明准确配制。3.复水复水时不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长；容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出；含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热,最多只能加热两次,第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。4.灭菌培养基应按培养基配方中.规定的条件及时进行灭菌，通常是121℃.15.min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份，含糖或特殊培养基，按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。已配制好的培养基必须立即灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。高温可破坏培养基的营养成分，还会使琼脂的凝胶强度下降，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌。高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定，并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。5.pH测定微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。灭菌前后PH会有所变化，所以灭菌前就要准备好，可以用1mol/L.Na0H或.lmol/L.HCL调整，注意不可反复调pH，否则会影响培养基的渗透压。6.配制好的培养基保存灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。所以建议平板倾注后立即使用。保存时,尽可能贮存在不会改变其成分的条件下，即避光或在4.℃.~.12℃冰箱密闭保存。如果保存时间超过2d,应将其放人密封的塑料袋中保存;配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期,应将其放在带有螺旋盖的试管或其他密闭的试管或容器中防止蒸发。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

蛋白质是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。蛋白质主要用于维持、生长、妊娠和泌乳等需要。因此蛋白质含量的检测成为一项日常性且必需性的工作。蛋白质含量测定的方法有微量凯氏定氮法、双缩脲法、folin―酚试剂法、考马斯亮兰法、紫外吸收法等。接下来远慕生物带你一一了解。蛋白质含量测定的几种方法 1.紫外分光光度法蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值，在一定的范围内，蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比，可作定量测定。该法操作简单、快捷，并且测定的样品可以回收，低浓度盐类不干扰测定结果，故在蛋白质和酶的生化制备中广泛被采用。但此方法存在以下缺点：1.当待测的蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基含量差别较大会产生一定的误差，故该法适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的样品。2.若样品中含有其他在280nm吸收的物质如核酸等化合物，就会出现较大的干扰。但核酸的吸收高峰在260nm，因此分别测定280nm和260nm两处的光吸收值，通过计算可以适当的消除核酸对于测定蛋白质浓度的干扰作用。但因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的，虽经校正，测定结果还存在着一定的误差。2.Bradford法1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的原理，是一种能够迅速并且准确的定量蛋白质的方法。染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收光的改变，从465nm变为595nm。蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度(最低检出量为1μg)。染料与蛋白质的结合是很迅速的过程，大约只需2min，结合物的颜色在1h内是稳定的。一些阳离子(如K+，Na+，Mg2+、)、(NH4)2SO4、乙醇等物质不干扰测定，而大量的去污剂如TritonX-100，SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。由于染色法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛用于蛋白质含量的测定。总氮量的测定——微量凯氏定氮法：当被测定的含氮有机物与浓硫酸共热消化时，分解出氮、二氧化碳和水，其中氮与硫酸化合成硫酸铵。由于分解反应进行得很慢，故可加入硫酸铜和硫酸钾或硫酸钠，其中硫酸铜为催化剂，硫酸钾或硫酸钠可提高消化液的沸点，氧化剂(过氧化氢)也能加速反应。消化终止后，在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使硫酸氨分解放出氨;用水蒸气蒸馏，将氨蒸入过量的标准无机酸溶液中，全部蒸完之后，用标准的盐酸溶液滴定收集的氨量，准确测定氨量，从而折算出蛋白质含量。3.双缩脲法具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应，蛋白质在碱性溶液中能与Cu2+络合呈紫红色，颜色深浅与蛋白质浓度成正比，故可用比色法进行测定，根据标准曲线进行计算可以确定蛋白质浓度。4.Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的经典方法，它是在双缩脲法的基础上发展而来的。它操作简单、迅速、灵敏度高，较双缩脲法灵敏100倍。Folin-酚法所用的试剂由两部分组成，试剂A相当于双缩脲试剂。蛋白质中的肽键与试剂A中的碱性硫酸铜反应形成铜-蛋白质复合物。这个复合物可与试剂B中磷钼酸-磷钨酸发生氧化还原反应。由于磷钼酸与磷钨酸易被酚类化合物还原而呈蓝色反应。而蛋白质中的酪氨酸和色氨酸均可发生此呈色反应。颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。故可用比色法测定蛋白质的含量。此法易受蛋白质样品中酚类化合物及柠檬酸的干扰。另外，试剂B中的磷钼酸-磷钨酸仅在酸性pH值时稳定，故在将试剂B加入到碱性的铜-蛋白质溶液时，必须立即混合均匀。以确保还原反应能正常发生。此法也适用与酪氨酸和色氨酸的定量测定。5.微量凯氏定氮法含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸铵。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！ 

防止细胞培养出现污染的方法如下：1、从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。2、操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。操作前，准备好所有实验所需物品，以减少走动，物品需有序摆放在超净台触手可及的地方，同时空留足够操作空间。3、操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，移至操作区外围，尽量不要从开口容器上经过。4、使用移液枪时，将容器倾斜以便于移液，切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况，要及时用酒精棉球擦拭，以免液体残留导致细菌滋生。5、冻存细胞时冻存管盖子需拧紧。复苏细胞时，从液氮罐取出冻存管，轻拧盖子，以确认盖子是否拧紧。动物细胞培养技术的应用(1)生产病毒疫苗、单克隆抗体、干扰素等。(2)利用动物细胞培养技术中的细胞贴壁生长和接触抑制的特点，可用烧伤病人自己的健康皮肤细胞培养出大量的自身薄层皮肤细胞，以供植皮所需。(3)培养的动物细胞用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

细胞分裂和细胞分化是多细胞生物个体发育过程中的两个重要事件，两者之间有密切的关系。通常细胞在分裂的基础上进行分化，而早期胚胎细胞的不对称分裂所引起的细胞质中转录因子的差异制约着细胞分化方向和进程。细胞分化发生于细胞分裂的G1期，在早期胚胎发育阶段特别是卵裂过程中，细胞快速分裂，G1期很短或几乎没有G1期，此时细胞分化减慢。细胞分裂旺盛时细胞分化变缓，分化较高时分裂速度减慢是个体生长发育的一般规律。例如，哺乳动物的表皮角质层细胞等终末细胞分化程度较高，分裂频率明显减慢，而高度分化的细胞，如神经元和心肌细胞则很少分裂或完全失去分裂能力。细胞分化与细胞分裂伴随发生但不完全平行。例如，有的细胞在下一步分化开始之前要先经过多次分裂；而来自一个同源群的细胞在进行分裂前可能处于不同的分化程度，桑椹胚(morula)和成体的软骨细胞都是明显的例子。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

概念EMSA 称凝聚阻滞实验或凝胶电泳迁移率检测， 是一种用于研究转录因子和其相关的 DNA 结合序列相互作用的技术，能对各类转录因子的 DNA 结合活性进行定性和半定量分析，是一项研究细胞信号转导通路的关键实验技术。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。原理EMSA 主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针，当核酸探针与样本蛋白混合孵育时，样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物；这种复合物由于分子量大，在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时迁移较慢，而没有结合蛋白的探针则较快；孵育的样本在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳并转膜后，蛋白-探针复合物会在膜靠前的位置形成一条带，说明有蛋白与目标探针有互作。分类同位素标记探针特点：特异性强、敏感性高达到10-18mol水平，对操作人员身体有害非同位素标记探针------应用最为广泛特点：无需放射显影，采用生物发光或化学发光原理。灵敏度高，信号强EMSA的特异性常用实验技术中免疫组化、免疫印迹 ( WesternBlotting) 和 EMSA 均可用于转录因子检测，但三者的侧重点各有不同。免疫组化或免疫荧光技术可以较准确的反应转录因子的表达部位和表达细胞， Western Blotting 可以精确定量转录因子。但并非所有转录因子均可以与 DNA 结合以刺激基因转录，唯有 EMSA 技术可以反映转录因子是否具有 DNA 结合活性，故 EMSA 是证明细胞信号转导通路最终效应的必要实验技术。实验步骤（步骤来源与网络仅供参考）探针的标记①:探针标记的反应体系(1.75pmol/μl) 2μlT4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 1μlNuclease-Free Water 5μl[γ-32P]ATP (3,000Ci/mmol at 10mCi/ml) 1μlT4 Polynucleotide Kinase (5-10u/μl) 1μl总体积 10μl②:使用水浴或PCR仪37℃反应10min.③:加一定体积的终止液、混匀、终止探针标记.④:加入一定体积的TE、混匀.探针的纯化(视情况定）对于100μl标记好的探针，加入一定量的醋酸铵和无水乙醇在-70℃沉淀1h或在-20℃沉淀过夜在4℃12000g-16000g 离心30min 弃上清在4℃12000g-16000g 离心1min、吸去残余液体加入一定体积的 TE ,使沉淀溶解探针使用时间一般不超过3天，保存在-20℃实验中常见的问题：1、为什么看不到迁移带？1）蛋白样本提取质量不高，蛋白降解或者提取量不足。2）样本中没有可以与探针结合的蛋白。3）探针与蛋白无特异性的相互作用。4）转膜效率低，蛋白或者探针未转移到膜上。5）曝光或者成像时间过短。6) 在 Super-Shift EMSA 测定中看不到 Super-Shift DNA/蛋白复合物带还可能有以下原因：a. 抗体没有工作。不是所有的抗体都可以用于 Super-Shift EMSA，只有对非变性蛋白的表面抗原决定簇起反应的抗体才能够用于 Super-Shift EMSA。b. 测定的活化的 DNA/蛋白复合物中没有希望检测的构成成分存在。此时既看不到 Super-Shift 的带，也看不到 DNA/蛋白复合物的量的减少。c. 使用的抗体过度稀释。一般 10～20 ul 的反应液需要使用 0.5～1 ul 原倍的抗体。d. 多抗与 DNA/蛋白复合物形成大的聚集物而不进胶。在这种情况下，虽然看不到 Super-Shift 的带，但应当可以看到 DAN/蛋白复合物的电泳带明显减少。2、为什么实验背景高？1）曝光或者成像时间过长。2）封闭时间不足或者效率不高。3）洗涤效果不佳。4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。3、EMSA 测定需要多少量的蛋白与标记的探针？对每一个特定的结合蛋白和探针，所用的纯化蛋白，部分纯化蛋白，粗制核抽提液需作优化：一般所用纯化蛋白的量在 20～2 000 ug 间，用粗制核抽提液，需要 2～10 ug 蛋白形成特异的复合物。部分纯化蛋白与粗制核抽提液应保存在 -80 ℃、探针应保存在 -20 ℃ 以防止降解。无论探针或是结合蛋白都应避免多次冻融。4、用什么凝胶条件将蛋白质/探针复合物和游离的探针分离开？将结合蛋白或粗制核抽提液和目的探针结合，蛋白/探针复合物和游离探针可在非变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离。聚丙烯酰胺的浓度一般为 6%，在特定条件下可用高或低的浓度。也可将 TGE 缓冲液（12.5 mM Tris，pH8.3，95 mM 甘氨酸，0.5 mM EDTA）用于不稳定的蛋白/DNA 复合物。在 4 ℃ 进行结合和电泳实验以阻止不稳定复合物和探针的解离。5、Poly(dI:dC)，非特异性竞争 DNA，特异性竞争 DNA 在 EMSA 测定中的作用？Poly(dI:dC) 由肌苷和胞嘧啶组成。在 EMSA 反应中加入 poly(dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中转录调节因子与标记探针的非特异结合。结合溶液中的 poly(dI:dC) 的用量需在正式实验前进行优化，一般用量大约在 0.05 mg/ml 左右。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入 poly(dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过 50～100 ug。对核抽提液，每 2～3 ug 核抽提液用 1 ug poly(dI:dC)。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

稀释是指对现有溶液加入更多溶剂而使其浓度减小的过程。在稀释后溶液的浓度减小，但溶质的总量不变。例如将一摩尔(约58.5克)的食盐(溶质)溶在一升的水(溶剂)中，溶液的体积摩尔浓度为1M，若再加入一升的水，溶液的体积摩尔浓度变为0.5M，但溶液食盐的总量仍为一摩尔。稀释倍数的公式稀释倍数就是稀释前溶液浓度除以稀释后的溶液浓度所得的商。要想知道如何配置稀释液，需要知道你原液的浓度。稀释倍数=原液浓度/(原液浓度×移取体积/定容体积)例如，你有一瓶100mg/L的溶液，要稀释3倍、5倍、10倍、20倍。现有300毫升的容量瓶或其他可定容的容器。稀释3倍，即移取100mg/L的溶液100mL，定容至300mL;稀释5倍，即移取100mg/L的溶液60mL，定容至300mL;稀释10倍，即移取100mg/L的溶液30mL，定容至300mL;稀释20倍，即移取100mg/L的溶液15mL，定容至300mL。试验样品稀释倍数的计算方法预估未知的大概范围，如100-500ug/ml，或1000-5000ug/ml，用预估浓度除以标准样品?2ug/ml，得到一个数，这个数接近100,200,500，1000，2000,5000这类的数，接近那个，那么未知样就稀释多少倍。如一个未知的预估值在3600ug/ml，3600ug/ml除以2ug/ml等于1800，那么这个未知样就得稀释2000倍。如果未知的预估值在3000ug/ml，3000ug/ml除以2ug/ml等于1500，那么这个未知样就得稀释2000倍或1000倍。总之，在仪器检测时的结果必须在标准样品1ug/ml,?2ug/ml,3ug/ml的中间，最好是正中间?2ug/ml附近。要是检测值超过，说明稀释倍数不够，用检测到的值再除以?2ug/ml，得到的倍数如12或18，即未知样还得至少稀释这个倍数的整数倍数10或20。可通过添加下方微信公众号与我们联系，感谢您对远慕生物的支持！

相信从事生命科学研究领域的小伙伴对于Western Blot一定不陌生吧，这是一个步骤繁多的常用基础实验，其中电泳过程至关重要，稍有不慎我们就只能对着 「微笑线」和 「皱眉线」 叹气，而质量好的电泳能让目的条带整齐，结果图让人眼前一亮。电泳的支持介质为聚丙烯酰胺凝胶，该凝胶的聚合则由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体在自由基的催化下完成。丙烯酰胺介质为网状结构，小孔尺寸与生物大分子具有相似的结构，带负电荷的蛋白，在电场的驱动下从电极负极向正极迁移。分子量大的蛋白滞留在上方，小分子蛋白继续迁移，从而分离不同分子量的蛋白。在实验室中若要自行配制WB所需凝胶时需准备很多试剂和材料，包括：ddH2O，30%丙烯酰胺混合液，1.5M Tris（pH 8.8），1.0M Tris（pH 6.8）,10%SDS，10%过硫酸铵，四甲基二乙胺(TEMED)等。其中丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体具有神经毒性，作用具有累积性。APS也有一定毒性，对皮肤粘膜有刺激性和腐蚀性；眼、皮肤接触可引起强烈刺激、疼痛甚至灼伤，长期皮肤接触可引起变应性皮炎；吸入后引起鼻炎、喉炎、气短和咳嗽；口服则会引起腹痛、恶心和呕吐。TEMED具有强神经毒性，对粘膜和上呼吸道组织及皮肤有极大破坏作用，因此配置电泳凝胶必须注意个人防护，戴好各种防护装置，如口罩、手套，并在通风橱中进行，但依然常有很多研究人员因为实验操作不慎而受伤中毒乃至影响到生命安危。鉴于人们在自行配置中存在误触有毒试剂的风险以及人工配制胶质量的参差不齐，预制胶这个新兴种子选手逐渐走入了大众视野。预制胶拥有以下优点：1. 即开即用，无需自行配制所需溶液、灌胶、等胶凝固，节省了科研人员宝贵的时间和精力；2. 无需接触其中具有积累性神经毒性的试剂，大大降低了实验的安全风险；3. 性能优秀，分离能力强，分辨率高；4. 大规模生产，胶与胶之间重复性好，质量稳定，不像手工配置胶那样结果差异大；5．超长保质期：2-8℃可以稳定保存一年；随着预制胶的逐渐推广，有些商家更是推出了有如下买点的彩色凝胶试剂盒：1. 彩色上层胶：可制备红色或绿色上层胶，加样孔清晰易辨，方便上样及区分不同凝胶；2. 配胶过程短：可快速配置一块或多块彩色PAGE凝胶，无需复杂计算及配置，只需将等体积凝胶溶液及缓冲液混合，并加入少许促凝剂即可，操作简便；3. 稳定且环保：促凝剂无TEMED成分，避免难闻臭味，4度即可稳定保存。凝胶均匀，弹性好，不易碎，电泳蛋白带型美观；4. 条带清晰：小分子蛋白条带更清楚可见。在预制胶里，由于丙烯酰胺已经聚合成了聚丙烯酰胺，不再有毒性，彻底杜绝了丙烯酰胺对实验人员可能造成的人体毒害。在国外，大多数实验室都已开始使用预制胶，这使得蛋白电泳变得简便，检测更加快速，省去了自己配胶的诸多麻烦，实验效率得到显著提高。

一、蛋白质组学概述“蛋白质组”一词的英文是Proteome，它是proteins 和genome 两个词的组合，意思是proteins expressed by a genome，即为基因组表达的蛋白质。蛋白质组的概念是1994 年由Wilkins首先提出，并在1995 年7月的“Electrophoresis”上发表，指“一个细胞或一种组织基因组所表达的全部蛋白质”， 蛋白质组学(proteomics) 是从整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律。与基因固定不变的基因组不同，蛋白质组作为相应基因组所表达的产物随时间、地点、环境等条件变化。在同一机体不同的组织和不同细胞中、蛋白质的种类、数量不同； 即使同一组织或细胞在不同的发育阶段、生理状态、甚至不同的外界环境下，其蛋白质组也是在不断的变化之中； 在病理或治疗过程中， 与正常生理过程也不同。因此， 蛋白质组是一个动态的概念。其目的是从整体的角度分析机体内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平、修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用和， 揭示蛋白质功能与生命活动的规律。蛋白质组学的研究分为3方面:(1) 蛋白质大规模鉴定和转录后修饰的微特征研究。(2) 差异显示蛋白质组学，即蛋白质表达水平的研究， 对肿瘤等疾病的应用有着广阔的前景。(3) 蛋白质间相互作用和翻译后修饰的研究。分析不同蛋白质的表达可用来比较正常组织和肿瘤组织之间的差别，蛋白组学将成为鉴别疾病的标记物，可以阐述某种机制，这种机制在越来越多的分析中被应用。人类的基因组比预期要小的多，并且基因组计划中的肿瘤相关基因现在才被知道，然而较小的基因不能反映单一的蛋白质组。通常，广泛的翻译后修饰例如磷酸化、糖基化，蛋白水解处理作用都是很常见的方式。蛋白质翻译后修饰能够显著地改变蛋白质的功能，因此可以表达出细胞和组织特征。因此，在基因组中，蛋白组学的挑战之一就是通过蛋白效应器的知识理解组织特征，并且把它应用到临床中。二、蛋白质组学分析方法蛋白质组学可以利用蛋白微数列、电泳和质谱分析法检测、识别和特征标记的蛋白进行分析。这些方法有其独特的优点和局限性，根据各自能力评估蛋白质组谱。1.蛋白微数列技术蛋白微数列是将大量抗体或者大量组织蛋白质样品一次标记在载玻片上进行检测分析。这种方法能够检测大量蛋白质的存在或者大量组织样本表达的水平，但是这种技术在特异性和敏感性抗体的可用性方面是有限的。此外抗体的特异性必须通过免疫印迹证实，并且需要内部的对照，尤其是抗体的微数列没有预测的亲和力和特异性。尽管如此，大量商品化抗体的应用使得应用蛋白微数列成为可能。2.双向凝胶电泳双向电泳在1975年由O’Farrell发明,其原理是：*向基于蛋白质的等电点不同，用等电聚焦分离.第二向则按分子质量的不同用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分离，这种方法尤其适用于分子量相似的蛋白质。采用蛋白质组重叠群 , 即利用多个不同pH梯度和分子量上相互重叠的2-DE 图谱, 拼接成一张完整2-DE 图谱, 大大提高了分辨率和进样量, 这对于低丰度蛋白的检出十分有利。个别蛋白质可以被染色水解为肽，这些可以通过质谱分析法进行分析。肽的酶解图谱可以根据蛋白质的数据库进行分析。3.质谱分析法蛋白组学主要的工具之一就是质谱分析法。这种方法是将基因转变成气体离子后，根据投料比例分析蛋白质。吸解作用和离子化技术例如基质辅助的激光解吸离子化技术，为检测和分辨蛋白质提供了高水平的敏感度和度，这种技术的高敏感度和样品的简化使得这项技术便利化，但是它也存在局限性。分析复杂的样品例如血清相比检测蛋白困难大的多。

1、细胞裂解液细胞裂解液作用：(1) 利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；(2) 溶解蛋白；(3) 蛋白变性使其稳定；(4) 抑制蛋白酶活性。细胞裂解成分一般使用的是表面活性剂，常用的有曲拉通X-100（Triton X-100）、脱氧胆（deoxycholate）、乙基苯基聚乙二醇（Nonidet P40，NP-40）、十二烷基磺酸钠（SDS）。其中Triton X-100和NP-40为非离子型，deoxycholate和SDS为离子型。不同裂解成分的裂解强度不同，一般来说Triton X-100和SDS的裂解能力较强，deoxycholate和NP-40的裂解效果较为温和，可以根据不同的实验需求选用不同的裂解液。2、蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。蛋白酶抑制剂（protease inhibitor）从广义上指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白变性的物质。各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。常用的蛋白酶抑制剂和各自作用特点如下：(1) 苯甲酰磺酰氟（PMSF）：抑制丝氨酸蛋白酶（如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）；(2) 乙二胺四乙酸（EDTA）：作为螯合剂可逆抑制金属蛋白水解酶；(3) 胃蛋白酶抑制剂（pepstantin）：抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶；(4) 亮抑蛋白酶肽（leupeptin）：可逆抑制丝氨酸、半胱氨酸蛋白酶和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B；(5) 胰蛋白酶抑制剂（aprotinin）：竞争性可逆抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶；(6) AEBSF：一种水溶性的丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂，其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似，可以有效抑制胰蛋白酶（trypsin）、糜蛋白酶（chymotrypsin）、纤溶酶（plasmin）、激肽释放酶（kallikrein）和凝血酶（thrombin）等蛋白酶，作为PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。(7) 乌苯美司（I Ubenimex，NN，也称为bestatin）：竞争性，可逆的氨基肽酶抑制剂，对精氨酰氨基肽酶（氨基肽酶B），白三烯A4水解酶（显示环氧化物水解酶和氨基肽酶活性的锌金属蛋白酶），丙氨酰氨基肽酶（氨肽酶M /N），亮氨酰/胱氨酰氨基肽酶（催产素/血管加压素酶）（白三烯D4水解酶）有抑制作用；(8) N-（反式-环氧丁二酰基）-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺（E64）：半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制剂；(9) 胃酶抑素A（Pepstatin A）：天冬氨酸蛋白酶可逆抑制剂。3、磷酸酶抑制剂细胞或组织裂解时会释放出大量内源性蛋白磷酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中适量添加外源性磷酸酶抑制剂，有利于在之后的Western blotting、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质和蛋白激酶活性测定等实验过程中抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，维持蛋白质的磷酸化状态。常见的磷酸酶有蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶，常用的磷酸酶抑制剂如下：(1) 氟化钠（sodiμm fluoride）：酸性磷酸酶可逆抑制剂；(2) 焦磷酸钠（sodiμm pyrophosphate）：丝氨酸/苏氨酸磷酸酶不可逆抑制剂；(3) β-甘油磷酸（β-glycerophosphate）：丝氨酸/苏氨酸磷酸酶可逆抑制剂；(4) 正钒酸钠（sodiμm orthovanadate）：碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶可逆抑制剂：(5) 钼酸钠（sodiμm molybdate）：酸性磷酸酶不可逆抑制剂；(6) 二水酒石酸钠（sodiμm tartrate dihydrate）：酸性磷酸酶可逆抑制剂；(7) 咪唑（imidazole）：碱性磷酸酶可逆抑制剂。

　　一、标准品的制备　　标准品的制备是非常复杂的问题，也是标记免疫分析中比较难于制备的一个成分。以下讨论的是实验室标准品(或商品化试剂中标准品)的制备。　　（1）基质的制备：如前所述，作为标准品的介质(基质)成分应与被测样品相同。对大多数用于测定血清中某物质的标准品，应用不含被测物质的零血清制备，以求反应的介质环境相当。但有时零值血清的制备十分困难，所以有些标准品用适当的缓冲液制备，并在缓冲液中加入一定量的载体蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其与样品的介质环境相近。　　零值血清的制备方法有：　　A、吸附法：血清中小分子物质如三碘甲状腺原氨酸 (T3)、甲状腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。这种方法简便，但待测物质难以清除干净，而且大分子活性物质不能用此法进行制备。　　B、反复冻融法：对大分子活性物质可选用低值血清，经反复冻融使被测物质失活。用这种方法可使某些蛋白类激素大部分失活，但也难以得到真正的零值血清。　　C、亲和层析法：用特异性抗体制备亲和层析柱，用以吸附被测抗原。用这种方法可以得到高质量的零值血清，但本法比较复杂而且成本也高。　　（2）标准物纯品的选择：应选择高化学纯和高免疫纯的纯品作标准品。其中免疫纯尤为重要，在标准品中不应含有与被测物质有交叉反应的物质。　　（3）标准品的制备：先用零值血清配置高浓度的标准品，然后根据实验系统的要求，用零值血清将高值血清稀释至应有的浓度，制成符合预定要求的，由不同浓度组成的系列标准品。　　二、标准品的鉴定　　（1）免疫活性的鉴定：选用高特异性的抗血清分别作公ren标准品(如WHO的国际参考品或国家标准品)的待鉴定标准品的剂量反应曲线，并观察两条曲线的平行性。如两条剂量反应曲线平行，说明两种物质对同一抗体有相同的亲和力，即二者是同质性物质。如两条剂量反应曲线不平行，说明两种物质具有异质性，因而这一待鉴定的标准品是不能使用的。　　（2）浓度的标定：用已鉴定过的，免疫活性合格的标准品，与公ren的标准品作浓度相同的剂量反应曲线。此时，两条剂量反应曲线应该是基本重合的。如果两者平行但不重合，则取两条剂量反应曲线的50%结合处的相应剂量( ED50 )计算二者的换算系数，然后调整待鉴定标准品的浓度，直至使两条剂量反应曲线wan全或基本重合为止。　　三、标准品的计量　　许多小分子抗原或半抗原已能得到纯品或进行合成，它们对作为标准品的要求可以得到基本的满足，其计量多直接用单位体积中的重量表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。最近WHO推荐用质量单位取代重量单位，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。对大分子的活性物质则比较复杂。由于得不到绝对的纯品，故很难直接用单位体积中的重量或单位体积中的质量计量。因此，常用该物质的生物活性单位表示，如IU / L、mIU / L等。

标准品是标记免疫分析定量的依据。标准品的正确与否直接影响样品的测定结果。如果在连续测定中，或各实验室之间使用的标准品不一致，则可影响到实验结果的可比性。为此，对标记免疫分析所使用的标准品应满足如下要求。1、化学结构：原则上标准品应与被测物具有完全相同的化学结构，包括相同的立体化学结构。但在实际工作中，用化学结构完全相同的物质作标准品是十分困难的。这是由于一方面来源有限，另一方面有些被测物本身的化学结构还不清楚，或是有明显的异型性。所以有时也用结构类似的物质作标准品。此时，应充分了解这些物质与真正标准品之间的定量关系。2、化学纯度：所有通过化学合成法制备的小分子化合物，都应是高化学纯度的纯品。对某些蛋白类物质，则可能由于纯化的方法不同而有差异。对此，在最初建立该方法时，应与国际上公认的标准参考品或高纯度的纯品进行比对。3、免疫纯度：标记免疫分析是通过比较被测物质与标准品的免疫活性实现的，故被测物质与标准品对所用抗体的免疫活性应该完全一致，即两者对所用的同一抗体有完全相同的亲和力。因此，标准品的免疫纯度比其化学纯度更重要。4、反应介质：免疫学反应受反应介质和温度等条件的影响，所以理论上要求标准品和被测物应在完全相同的介质中进行反应。如测定血清中某物质的浓度，其所用的标准品也应溶解在无被测物的零值血清中；如测定尿液中某物质的浓度，其所用的标准品也应溶解在无被测物的尿液中等。但在实际工作中这一点很难做到。因为，血清中的成分十分复杂，因而无被测物的零值血清的制备非常困难，而且个体血清中还可能存在一些干扰物质。理想的标准品应该用与被测样品相同的基质(如血清)，先将被测物质完全去除，然后再加入已知量的被测物质的纯品。5、干扰物质：标准品中不能有干扰分析的物质。在作为标准品使用前，必须对那些从机体提取到的大分子物质活性进行测定。6、标准品的批量：为保证检测的连续可比性，每批标准品应有相当大的量，以保证在较长的时间内使用。每批标准品如保存的条件适当，在相当长的时间内可保持其浓度和免疫活性的稳定。这对于生产标记免疫分析试剂的厂家尤为重要。

　　药物杂质因其可能对药品质量、安全性和有效性产生影响，目前成为国内外药品监管机构的重点关注内容之一。那么，你知道药物杂质都是怎么划分的吗？接下来跟着远慕一起了解一下。　　杂质控制要合理，即合理地确定杂质检查项目与限度，合理地选择杂质检查方法。有机杂质在药品质量标准中的项目名称：　　1、以杂质的化学名称作为项目名称　　当被检查的杂质是已知化合物时(特定杂质)，就以该化合物的化学名称作为质量标准中的项目名称。例如:卡比马唑及其片剂中的“甲巯咪唑',阿司匹林中的“游离水杨酸”、磷酸可待因中的“吗啡”等。如果杂质的化学名太长,又无通用的简称,可选用相宜的简称或习称作为项目名称，并在质量标准起草说明中应写明该已知杂质的结构式。例如:肾上腺素中的“酮体”。　　2、以某类杂质的总称作为项目名称　　当杂质不能明确为单一物质而又知为某一类物质时，则以这类物质的总称作为项目名称。例如:硝酸毛果芸香碱中的“其他生物碱”、山梨醇中的“还原糖”和“总糖”、黄体酮中的“有关物质”、许多原料药物中的'残留溶剂'等。　　3、以检测方法作为项目名称　　当被检查杂质的结构未知，亦不属于具体的类别时，根据检查方法相应的名称作为项目名称。例如:“杂质吸光度”,“溶液透光率”、“易炭化物',“不挥发性杂质”等。　　杂质检查项目的确定　　1.杂质检查项目的确定要有针对性。药品标准中的杂质检查项目，应包括药物在质量研究和稳定性考察中检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物。所以，原料药和制剂中的杂质检查项目，均应根据其起始原料、生产工艺及稳定性情况确定。　　2.尤其是降解产物和毒性杂质，通常均作为必须的检查项目。除降解产物和毒性杂质外，在原料中已控制的杂质，在制剂中一般不再控制。单一对映体药物，其可能共存的其他对映体应作为杂质检查。消旋体药物，当已有其单一对映体药物的法定质量标准时，应在该消旋体药物的质量标准中设旋光度检查项目。　　杂质限度的确定　　1.杂质限量的确定要合理，在确保用药安全有效的前提下，应考虑到生产的可行性及批与批之间的正常波动，还要考虑药品本身的稳定性。可以根据原料药每日剂量来制订质控限度。　　2.如果所制订的限度超过该限度值，就必须提供所订限度的合理性依据。有机杂质的限度规定应包括:每一个已知杂质、未知杂质及总杂质。在确定仿制药品的杂质限度时，应与已上市产品进行质量对比研究。　　杂质的研究规范　　制药企业应该按照经国家药品监督管理部门依法审查批准的规定工艺和规定原辅料进行药品的生产，如果变更生产工艺或原辅料，并由此而带进新的杂质，需对原质量标准进行修订，并应依法向有关药品监督管理部门申报批准。在新药的研发中，应该对新药中的杂质进行检测和安全性研究。　　杂质检查方法的选择与验证　　1.药物中杂质的检测方法包括化学法、光谱法、色谱法等，因药物结构及杂质的不同采用不同的检测方法。有机杂质的检测方法多采用色谱法，特别是HPLC法。　　2.用于杂质检查的分析方法要求专属、灵敏。为验证杂质分析方法的专属性，可根据原料药或制剂的生产工艺及储存条件,以中间体、立体异构体、粗品、重结晶母液、经加速破坏性试验后的样品作为测试品进行系统适用性研究，考察产品中各杂质峰及主成分峰相互间的分离度是否符合要求。　　3.当采用HPLC法检查有机杂质时，由于等度洗脱具有可能漏检杂质的缺点，所以国内外药典中也常常采用梯度洗脱，例如司帕沙星、丝裂霉素、地高辛、辛伐他丁等药物中有关物质检查都采用了梯度洗脱。　　4.分析方法的检测限一定要符合质量标准中对杂质限度的要求,检测限不得大于该杂质的报告限度。

在日常检测中，有的时候虽然我们的检测方法优良，仪器设备检定合格，环境条件满足检测要求，检测员技术娴熟，但是，往往得到的检测结果却不可能是绝对准确的。即使是同一个检测人员对同一个检测样品、对同一项检测项目进行多次检测，得到的结果也不会完全相同，总会产生各种不同的差别，换句话说，任何项目的检测都不可能是绝对准确的，测得值与真实值之间总是或多或少的存在着差别，即误差。1、实验室表示误差的常用术语有哪些准确度 测量结果与真实值之间一致的程度。（测量结果与真实值差值越小，准确度越高）准确度只是一个定性概念而无定量表达。精密度 相同条件下，多次平行检测结果相互接近的程度。（各次检测结果之间越接近，则说明分析检测结果的精密度越高）重复性 相同操作条件下，由同一检测人员，在同一实验室内，使用同一仪器，短时间内多次测量所得结果之间的最大差值。重复性条件 相同的条件、程序、人员、仪器、环境，以及尽量短的时间内完成重复测定。再现性 在不同的测量条件下，同一被测量的测定结果之间的一致性。2、误差的种类、产生原因及如何消除在定量分析中，由于各种原因造成的误差，按照性质可分为系统误差、偶然误差和过失误差。系统误差 系统误差又称可测误差。由某种固定的原因所造成的，一般有固定的方向，重复进行测定时重复出现。产生原因：1.仪器和试剂引起的误差，如容量瓶刻度不准，试剂纯度不够等。2.方法误差，检测方法不恰当引起的，如滴定分析中，反应进行的不完全。3.操作误差，操作不当引起的误差，如滴定分析中，检测员对滴定终点颜色不敏感，对终点判定有误。消除系统误差的方法：1.校准仪器对仪器设备进行校准，以校正值的方式，消除系统误差。如：被测样品的含量=样品的检测结果×校正系数。2.对照实验如方法比对、人员比对、留样再测、实验室间比对等。3.空白实验没有试样，其他条件完全相同，所得的结果为空白值。如：实测值=测得值-空白值。偶然误差 偶然误差是由于在测定过程中一系列有关因素微小的随机波动而形成的具有相互抵偿性的误差。产生原因：分析过程中种种不稳定随机因素的影响。如温度、湿度和气压等环境因素，仪器不稳定等。偶然误差是无法消除的，但可以通过增加实验次数减小。过失误差 过失误差也称粗差，是指工作中的差错，是由于工作粗枝大叶，不按操作规程办事等原因造成的。如读数错误、记录错误、测量时发生未察觉的异常情况等。过失误差无规律可循，但基本上是可以避免的。一旦出现了过失误差，就应该舍弃相关数据重新测量。另外消除过失误差的关键是实验人员必须培养专心、认真、细致的工作态度，并要不断提高理论和操作技术水平。3、在质量控制中如何应用误差理论误差理论在结果质量控制中，有着重要意义。质量监控的分类包括以下几种：1.定期使用有证标准物质（参考物质）次级标准物质（参考物质）对仪器和检测方法开展内部质量控制。2.参加国内或国际能力验证计划或实验室间的比对实验。3.使用相同或不同方法进行重复检测或校准。4.对存留样品进行再检测或再校准。5.分析一个样品不同特性结果的相关性。

  实验室试剂在开启后受到空气、水分、光照和温度的影响会发生物理化学变化，发生变质。一个实验室，难免会有或多或少过期的化学试剂。  过期的试剂还可以使用吗？  一般情况下，化学试剂的保质期为1-2年，有些性质稳定的保存期就长点，这取决于正确的保存方法。这就需要考虑存储条件是否符合说明书上的要求，例如温度、光照和湿度等，对于那些没有明确存储条件的试剂，更要注意存储条件，通常高温、暴晒和高湿度，非常容易造成产品的失效。  未开启的化学试剂，保质期到了未必就不能用。如果你之前能够记录周围环境的变化，特别是遇到一些极端的温度、湿度等环境的变换，就可以判断过期的试剂是否可以再继续使用。  如何预防化学试剂变质？  a. 密封  这是最普遍通用的方法。试剂瓶的材料和密封程度应根据试剂性质而定。如：强腐蚀的“三酸”和液溴，可用带磨口玻璃的试剂瓶，或是有塑料衬垫的螺旋盖的玻璃瓶，氢氟酸则应密封贮藏在银制或塑料制容器内，等等。  密封适用于易挥发、升华、潮解、稀释、风化、水解和氧化还原、霉变的所有化学试剂对于极易 分解产生气体的试剂，远慕生物提醒，一般不完全密封，要适当留有余地，否则可能使容器破裂。除了一般密封外，可再加蜡封，或用自制硝罗酊封口，如：三氯化铝、五氧化二磷等。  b.隔离  能和空气、水作用的试剂，如：很活泼的金属和非金属应隔离存放在对试剂相对而言稳定的液体或惰气之中，钾、钠、钙浸没在机油中，黄磷则浸没在水中贮放。这种隔离方法也称液封法，前者叫油封，后者叫水封。小编提醒，水封存也可使某些容易挥发的试剂减少损耗。如：在装有液态溴、二硫化碳的试剂中加一薄层水，就能大大减少挥发损失和空气污染。  实验室中无机、有机试剂种类繁多，性质各异，应注意合理分类存放。有机物、无机物分开，普通药品和危险的分开，氧化剂和易燃物、还原剂分解、易挥发性酸和碱分开。做到这几个分开，一可避免药品间的不良影响，二则即使有意外事故发生，也能免除药品的相互作用，而产生更大的隐患。  c. 避光  通常采用遮光性能较好的深棕色试剂瓶。将试剂放在暗处或遮光的专用试剂柜中。也可用照相纸的黑色厚纸包裹试剂瓶，如：浓硝酸、碘化钾、碘化钠、氯化汞的贮存就是如此  d. 低温  普通挥发性试剂常放置在阴冷处，如：浓硝酸、浓盐酸、氨水等。某些特殊的生化试剂则要贮放在水箱或冰箱之中，如：酶试剂等。  e. 通风  尽管装化学试剂的容器一般都处于密封状态，但也难免有跑、冒、漏、泄发生，在夏季高温天气，更易形成爆炸性混合气体，因此，贮藏室必须通风良好，应安装专用排风扇，并经常开启，使空气流通。  f. 适时  这是根据某些试剂的特性，特别是一些极易变质失效的试剂应采取适当措施，应做到适时配制、适时使用和及时处理。  如：极易氧化的氢硫酸溶液、氯水、溴水、碘水最好适时制备及时使用；做银镜反应的硝酸银溶液、氨水、乙醛溶液配好后，应及时使用才不致影响效果；硫酸亚铁溶液配好后应加些还原铁粉才能使其不被氧化；淀粉、蔗糖、蛋白质的溶液在使用后应及时清洗试剂瓶，以防霉变。

　　实验室细胞培养中常见的生物污染包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染。　　1.细菌污染　　细菌在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据感染菌的种类不同，可能会呈现不同的形状，培养液一般会变得浑浊、黄色，对细胞生长有明显影响。　　2.霉菌污染　　正常情况下，培养基在 37℃ 培养箱中培养两三天，在倒置显微镜下仍保持透明，无杂质。一旦出现絮状杂质，显微镜下可见丝状和团块状漂浮物，菌丝明显。此时，虽然细胞仍在生长，但它们的生命状态会在长时间后逐渐恶化。　　3.支原体污染　　支原体是隐蔽的污染物，不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象，比如细胞病变和浊度或 pH 值变化（即使在严重污染的培养基中），这样就会导致我们产生错误的安全感。而在牛血清中，支原体是最常见的微生物之一。　　4.黑点污染　　黑色的游动点能穿透滤膜并在空气中扩散。它们在低倍镜下显示为黑色圆点，在高倍镜下显示为可移动的黑色斑点。培养液也不浑浊，一般影响较小，因此细胞仍可使用。通常，黑点污染后，细胞生长良好，运动物体无明显增加，培养基的颜色和透明度无明显变化。在同一批血清培养的细胞中也可以发现类似的现象。　　5.真菌污染　　真菌污染后，培养基一般清澈，保持原色。细丝可以在显微镜下观察到。最初，一些真菌类似于死细胞碎片，但其中许多清晰可见，看起来像珊瑚，比较容易区分。此外，它们会慢慢长出细细的黑色细丝，因为它们生长得比较慢，不像细菌那样容易被发现，一旦发现培养基被污染，它们将很难存活。　　6.原生动物污染　　原生动物污染后，细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下，大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长，但繁殖速度减慢，细胞生长状态不好，边缘不清，变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时，原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍，但以细胞为主，因为原生动物的数量相对较少，因而对细胞的正常生长没有影响，只有当它们达到一定数量时，才最终爆发成为恶性循环。　　细胞培养过程中细胞受到污染的原因：　　1，取放细胞时引起的污染　　细胞培养过程中，取放细胞是基本的操作，培养房开关门的瞬间，环境中的微生物或多或少会进入培养箱中，而且内外温差导致内门冷凝水的产生，极易吸附微生物，都是造成培养箱污染的风险因素。　　2，灭菌不彻底造成的二次污染　　细胞培养过程中，因其它操作问题（如培养基泼洒，水盘污染等），造成培养房的大规模污染也时常会发生，此时就需要对培养箱进行灭菌消毒，常规的消毒（如紫外照射）只能达到表面消毒的效果，特别是对真菌等顽固性污染，无法进行彻底灭菌，导致后续培养过程中细胞污染频发。

　　化学试剂按照形态的差异分为固体、液体、粉末、颗粒等不同种类，针对不同的试剂需要选用符合其特性的试剂瓶，所以试剂在取用时也会有所差别。　　为了防止试剂洒出来，同时避免试剂挥发，液体试剂主要存放在瓶口较小的细口瓶中，取用时遵循以下规则：　　1、用少量液体试剂时，常使用胶头滴管吸取，用量较多时则采用倾泻法。　　2、从细口瓶中将液体倾入容器时，把试剂瓶上贴有标签的一面握在手心，另一手将容器斜持、并使瓶口与容器口相接触，逐渐倾斜试剂瓶，倒出试剂。　　3、试剂应该沿着容器壁流入容器，或沿着洁净的玻棒将液体试剂引流入细口或平底容器内。　　4、取出所需量后，逐渐竖起试剂瓶，把瓶口剩余的液滴碰入容器中去，以免液滴沿着试剂瓶外壁流下。　　5、若实验中无规定剂量时，一般取用1至2 mL。定量使用时，则可根据要求选用量倚、滴定管或移液管。　　6、取多的试剂也不能倒回原试剂瓶，更不能随意废弃，可倒入指定容器内供他人使用。尤其在取用有毒试剂时，应严格遵照规则取用。　　化学试剂常具有危险性，如易燃易爆、易挥发、剧毒、易变质、易氧化等，在取用试剂时需要特别注意，熟知各种试剂的特性及取用规则，可以确保实验的安全性，避免发生危险事故。

琼脂糖凝胶电泳仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳，广泛用于核酸研究。琼脂糖凝胶属于大孔胶，可分析分子量为107的大分子，这种大孔特性有利于免疫电泳和微量制备。琼脂糖形成凝胶后孔径的大小取决于琼脂糖凝胶浓度，琼脂糖凝胶浓度与平均孔径的关系如下：一、琼脂糖凝胶浓度为0.075%时，平均孔径为800nm。二、琼脂糖凝胶浓度为0.16%时，平均孔径为500nm。三、琼脂糖凝胶浓度为1%时，平均孔径为150nm。四、琼脂糖凝胶浓度为2%时，平均孔径为20nm。琼脂糖凝胶的浓度选择：目的产物大小80BP的片段，你可以用2.0%的琼脂糖凝胶进行电泳，琼脂糖以及TAE的量的多少，首先与你跑得样品的个数有关，因为你样品的个数决定了你胶槽的体积，胶槽的体积决定了你的TAE的量，决定了琼脂糖的量，比如说你胶槽的体积是20ml, 那么你要配2.0%的胶，就需要20ml的TAE和0.4g的琼脂糖。做胶的时候要注意一定要让琼脂糖充分溶解，可以煮沸，同时也要注意煮沸的过程中TAE的蒸发，我第一次做胶的时候，用烧瓶煮沸差点都蒸发光了；再就是加EB的时候以不烫手为标准，因为高于70度时EB会升华蒸发，过于冷却了会使EB的浓度不均；因为EB为致癌物质，所以操作时一定要注意做好自我保护；再就是胶槽要洗干净，梳齿一定要放正，免得跑出来的带不整齐。跑胶的时间和电压成反比，电压和电泳槽两个电极之间的距离成正比，一般是小于5V/cm. 因为你的片段很小，所以很有可能和引物二聚体无法区分，所以你再跑电泳时时间应该适当延长一些，可以使溴芬兰指示条带跑过胶的2/3处，因为时间长了，因物二聚体就会跑没了，而目的产物不会。