蛋白酶抑制剂混合物使用方法

蛋白酶抑制剂混合物（100×，哺乳动物样品提取用）

规格：1ml /5×1ml

储存条件：-20℃保存，有效期一年。

产品简介

蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100×)  (Protease  inhibitor cocktail  for mammalian cell and tissue extracts, 100×) 是一种用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物(100mMAEBSF,  80μM  Aprotinin,5mMBestatin,1.5mME64,2mMLeupeptin and1mMPepstatin A in DMSO)，并提供独立包装的0.5MEDTA。

哺乳动物细胞或组织提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。

本产品为经优化和测试的用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及氨基肽酶抑制剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例分别把蛋白酶抑制剂混合物和0.5MEDTA加入裂解液中，如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA。

本产品可以有效抑制哺乳动物细胞或组织提取物中的各种蛋白酶活性，如丝氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂，其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似，可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作为PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。Aprotinin是丝氨酸蛋白酶的竞争性可逆抑制剂；Bestatin是氨基肽酶可逆抑制剂；E64是半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制剂；Leupeptin是丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶可逆抑制剂；Pepstatin A是天冬氨酸蛋白酶可逆抑制剂；EDTA作为螯合剂是金属蛋白酶的可逆抑制剂。

一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。

使用方法：

1.本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，混匀后即可使用。根据需要，0.5M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中（如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA）。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。

2. 待所需的抑制剂添加完毕混匀后，就可以开始进行哺乳动物组织的裂解和蛋白提取。提示：蛋白酶抑制剂混合物尽量避免反复冻融，第一次使用后，可按照每次使用量分装冻存。family:Arial'>1:100的比例加入到裂解液中。

3. 待所需的抑制剂添加完毕混匀后，就可以开始进行常规细胞或组织的裂解和蛋白提取。提示：蛋白酶抑制剂混合物尽量避免反复冻融，第一次使用后，可按照每次使用量分装冻存。

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