保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定

1. 实验部分 1.1 实验仪器及耗材 

Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪； 

色谱柱：ShimNex CS C18 (4.6×150 mm，5 μm；P/N：380-01230-02)； 

纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器） 

SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）； 

LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）； 

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）； 

SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）； 

SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。 

1.2 混合对照品溶液的制备 

 分别准确称取5种组分标准品适量，加水溶解并稀释至1.0 mg/mL的单标溶液，然后分别量取各组分单标溶液适量，加甲醇-水-磷酸（100：400：0.5）溶液稀释得到如下浓度的混合对照品溶液：盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇0.05 mg/mL，烟酸和烟酰胺0.1 mg/mL，咖啡因浓度为0.5 mg/mL，混匀，备用。 

1.3 试样溶液的制备 

 取液体试样适量，过0.22 μm滤膜，备用。 

1.4 分析条件 

色谱柱：ShimNex CS C18 (4.6×150 mm，5 μm；P/N：380-01230-02) 

柱温：25℃ 

检测波长：280 nm（盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺咖啡因）/260nm（盐酸硫胺素） 

流速：1.0 mL/min 

进样量：10 μL 

流动相： 

1） 盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因： 

A：癸烷磺酸钠溶液（1.22g→850mL）+乙腈+磷酸=850+150+1 

B：乙腈 A：B=95：5 

2）盐酸硫胺素： 硫酸月桂酯钠溶液（5g→530mL）+乙腈+磷酸=530+470+1 

2. 实验结果 

按照上述色谱条件（1.4）进行采集，混合对照品溶液和供试品溶液色谱图如下： 

混合对照品溶液（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因） 

混合对照品溶液放大图（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因） 

试样溶液（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因） 

试样溶液放大图（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因） 

混合对照品溶液（260nm：盐酸硫胺素） 

试样溶液（260nm：盐酸硫胺素） 

重现性 

混合对照品溶液重现性 

试样溶液重现性 

3. 结论 

本文建立了保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的HPLC测定方法。参照国标GB/T 5009.197-2003中色谱条件并进行优化，采用色谱柱ShimNex CS C18（4.6*150mm，5μm）分析保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因等5种组分，5个化合物峰形良好，分离度大于1.5，满足日常检测需求。此方法可为保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因等5组分的HPLC分析提供参考。