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公司动态

WelPacker DAC装填秘籍

动态轴向压缩柱(DAC)是大家在制备液相中常用的一种设备,由于拥有超出常规静态柱的超长使用寿命,受到用户的欢迎。那么该如何来正确装填DAC呢?本期文章中,小编就以WelPacker 50mm规格的DAC为例,给大家分享一下,月旭科技服务工程师装填DAC积累的经验和小窍门。01填料用量和匀浆液体积计算填料用量计算:V=3.14×r2×hr:柱管内部半径(cm)h:装柱高度(cm)m= ρ×Vρ:填料的堆密度(g/mL)V:装柱体积(mL)因为装填后的填料处于紧密状态,实际填料用量M是计算值m的1.1倍左右,以10μm的C18填料为例,如果填料堆密度是0.56g/mL,50mmDAC装填250mm的柱床高度需要约300g的填料。匀浆液体积计算:最常用的匀浆液是异丙醇,匀浆液体积数值一般是填料质量数值的两倍,例如300g的填料需要加入600mL的匀浆液进行匀浆。02DAC硬件的清洁和准备工作装柱之前的准备和清洁工作很重要,这直接关系到DAC的性能。其中包括如下几点:➯ 柱管内壁需要清洗去除油污、灰尘等污渍,确保内壁光滑。➯ 筛板需要进行超声清洗处理,确保清洁且没有堵塞。➯ 分配器、密封圈和管路等直接接触流动相的部件也需要提前清洗以确保不会造成填料污染。➯ 清洗完成的部件需要吹干。03填料匀浆填料匀浆的注意事项:➯ 选择合适的匀浆容器,容器选择惰性的材质,浆液总体积不超过容器体积的2/3;➯ 建议在超声的同时进行搅拌匀浆,持续30分钟以上(部分易碎的填料不能超声)。04DAC柱管安装步骤倒入浆液后需要用异丙醇洗去管壁上残留的填料并润洗活塞,调节气压至最终装填压力,先从上端排出空气后再将匀浆液从下端压出,下端不再出液即完成装填,稳定30min后再用甲醇(正己烷)将残余的匀浆液置换出来即可。装填步骤的要点就在于确保正确的情况下尽可能快地完成所有操作以防止填料沉降带来的不利影响。月旭科技可以提供从25mm到800mm内径规格的DAC,根据您的需求进行定制化服务。

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2022.04.08

液相色谱,你问我答(十三)

问杂质捕集小柱是什么?色谱分离过程中,特别是在梯度洗脱或者仪器系统使用时间较久都较容易产生时有时无的色谱峰,我们俗称鬼峰 (Ghost peak)。出现鬼峰的原因有很多,但很多情况下是由流动相中的杂质和仪器系统不洁净引起。月旭科技研发的 Ghost-Buster Column杂质捕集小柱可以有效吸附去除系统中的杂质,从而防止杂质峰对目标峰的干扰。问杂质捕集小柱的工作原理是什么?市场上多款仪器上都有在线过滤装置,主要是针对固体颗粒物的拦截,但是对引起鬼峰的有机污染物却不能起到拦截效果。月旭科技经过精心研发,研制出一款对弱极性和非极性的有机杂质有强烈吸附,而不改变流动相成分(不含有离子对试剂)的填料,对仪器和流动相进行二次净化,有效的消除这类污染物,减少鬼峰出现的几率,延长色谱柱和仪器的寿命。问杂质捕集小柱的安装使用是什么样的?● 使用时将杂质捕集小柱安装在梯度混合器进样器之间。请确保小柱安装在进样器之前,如果安装在进祥器之后,会对样品有强烈的吸附作用。● 新柱请使用80%甲醇水冲洗Ghost-Buster Column杂质捕集小柱0.5mL/min流速20分钟后再连接设备使用。● 并不是所有的杂质都可以被Ghost-Buster Column杂质捕集小柱吸附。● 流动相中如果使用离子对试剂时,可能会吸附离子对试剂进而影响目标物的保留时间或者峰型。这一类的流动相条件,请根据色谱效果而定是否使用该小柱。● 杂质捕集小柱的寿命与色谱分析条件、流动相品牌及其纯度有关。如捕集效果变差后,建议及时更换,并不是连接上以后可以无限次使用。● Ghost-Buster Column杂质捕集小柱作为仪器的一个净化小部件。相当于仪器上的在线过滤器,只是在线过滤器只能过滤固体颗粒物,而它不仅仅过滤固体颗粒物,还能净化系统中的有机污染物,对仪器和色谱柱是更好的保护。● 使用缓冲盐流动相前后注意使用高比例的水进行过渡冲洗,避免缓冲盐析出,导致填料堵塞。● 当发现小柱捕集效果不太理想时,可尝试用1OO%乙腈冲洗小柱,小柱出口端不要连接入仪器。问在梯度系统中,杂质捕集小柱导致增加了混合滞后体积影响分离度效果怎么办?一般Ghost-Buster Column杂质捕集小柱是连接在混合器和进样器之间的,4.6×50mm规格的体积是400μL,对常规检测的影响不大,如果有影响,请将杂质捕集小柱连接到混合器或者切换阀前水相通道。问从梯度换成等度条件需要取下吗?不影响分离效果的情况下不需要取下,是因为在等度条件下流动相的洗脱能力都是一样,所以一般检测不到鬼峰,但是不代表流动相就没有污染物。产品信息

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2022.04.07

拖尾因子、对称因子、不对称因子三者间的关系

相信小伙伴们在日常测试中会发现,评价色谱峰的峰形对称性,有拖尾因子、对称因子、不对称因子三种参数。而目前使用的分析软件,ChemStation工作站中的对称因子,Empower工作站中的USP拖尾因子,Chameleon工作站中并没有对称因子参数,是以不对称度评价的。这三种参数的关系是什么,有什么区别,今天小编就和大家聊一下。理想条件下,色谱峰应该具有高斯型的特征:式中,χ等于(t-tR)/σ,t是时间,σ=W/4,y是峰高。色谱图中的真实峰通常会稍稍偏离对称的高斯峰形,通常会或多或少带一点拖尾。如下图所示:            拖尾因子:Tailing factor常用Tf表示,以峰高5%处计算。不对称因子:Asymmetry factor常用As表示,以峰高10%处计算。对称因子:Symmetry factor常用S表示,与不对称因子As互为倒数关系。As和Tf值的关系大概可以表达为:As≈1+1.5(Tf-1)所以一般来说As的值在一定程度上大于Tf的值。峰形随着不对称因子(As)和拖尾因子(Tf)而变化。当As或者Tf=1.0时,对应的是一个完美的对称色谱峰,在这种情况下,两个色谱峰可以很好地彼此分开。然而,随着峰拖尾的程度加重,它们之间的分离也变得糟糕。多数情况下峰拖尾的程度并不是很严重(Tf拖尾因子、对称因子和不对称因子规定范围探讨中国药典(CP)要求拖尾因子的范围是在0.95-1.05,是有一个适用前提的,即中国药典规定峰高法定量时拖尾因子应该在0.95-1.05之间,低于0.95为前延峰,高于1.05为拖尾峰。欧洲药典(EP)和英国药典(BP)规定进行有关物质或含量测定时,除另有规定外,色谱图中定量用对照品溶液的色谱峰对称因子应为0.8~1.5。美国药典(USP)中出现了对某些化合物拖尾因子要求不大于2.0。日本药典(JP)中没有具体规定拖尾因子的范围。从各国药典对拖尾因子范围的约束来看,拖尾因子并没有一个数值范围的确定标准,在实际的色谱实验中需要具体问题具体分析。

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2022.04.06

新品上市 | 生物药分析新利器,月旭新品来助力-文末有试用可领哦

冬去春来,寒冷的冬天已经过去,一场春雨提醒大家春天已经到来。伴随着2022年春天的来临,月旭科技又给各位带来新产品。月旭科技推出全新Blossmate® C4,Blossmate® Phenyl色谱柱,充分满足检测各类生物样品的需求,为广大客户提供准确性更高,出峰速度更快,更长的使用寿命,蛋白测量范围更广的色谱柱。产品特点及参数更高的准确性:大孔径(450Å)的多孔硅胶颗粒填料(3.5µm)可提高蛋白质分离度,同时兼容所有液相色谱仪;快速:与填充相同尺寸全多孔颗粒填料的色谱柱相比,分析时间更短;更长的使用寿命:稳定的多孔层填充床和2µm入口筛板可防止入口堵塞,从而延长色谱柱使用寿命;更广的测试范围:可测的蛋白质分子量12kDa-250kDa。

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2022.04.06

感冒灵颗粒中蒙花苷含量的测定

感冒灵颗粒是中药和西药的复方制剂,它的主要成分是三叉苦、金盏银盘、野菊花、岗梅、咖啡因、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、薄荷油。它主要的功效就是解热镇痛,可以用于感冒引起的头痛、发热、鼻塞、流涕、咽痛。本文采用月旭Ultimate® Plus C18色谱柱,对感冒灵颗粒中蒙花苷进行检测,结果能满足检测需求。色谱条件色谱柱:月旭Ultimate® Plus C18(4.6×250mm,5μm)。流动相:乙腈/水=24/76;检测波长:334nm;柱温: 30℃;流速:1.0mL/min;进样量:10μL。谱图和数据对照品溶液供试品溶液结论用月旭Ultimate® Plus C18(4.6×250mm,5μm),在此色谱条件下测定,能满足检测的要求。

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2022.04.02

6个月后,我们再相约

溶出仪每6个月就要做一次机械验证,实验室有n台溶出仪,一台要做9个项目,n个测试环节,万一通不过,还需要调整和维修,会不会觉得挺麻烦的?玻璃与金属的接触,好难拿捏呀,有没有既省事又方便的解决方案呢?有的,本文中,小编为各位小伙伴带来了不同的套餐,供君选择,溶出仪再多也不慌。溶机仪为什么要做机械验证为保证体外溶出度测试数据的准确性和重现性,确保溶出度方法开发、转移,样品检测中的一致性,国内药物溶出度机械验证指导原则指出,溶出度仪在安装、移动、维修后,应进行机械验证,至少每6个月需要进行一次验证。如果不做,会有什么后果呢溶出仪的机械要求如果不达标,对溶出度检测的结果会有直接影响,比如转轴垂直度要求是90.0°±0.5°,如果超出这个范围2~7°,溶出度检测的结果为增大2~25%,如下表所示。机械验证是做哪些项目《药物溶出度仪机械验证指导原则》中指出,需要验证的9个项目和需要用到的工具,以及技术要求,如下表所示:月旭的机械验证工具包月旭科技目前可以提供“标准款”和“全能款”两款机械验证工具包,满足客户的需求。月旭的机械验证工具包适用于哪些溶出仪?月旭科技的两款机械验证工具包可对以下型号的溶出仪进行机械验证,但不仅xian于以下型号,如有其它型号需要验证,欢迎咨询月旭当地销售人员:以上型号中,翻盖式和封闭式溶出仪建议采用全能款机械验证工具包。机械验证上门服务月旭科技还可以为您提供机械验证上门服务,如您委托我们进行长期服务(每6个月一次),还可享受长期机械验证服务的优惠哦。

参数原理

2022.04.02

月旭科技-专家讲座系列之制备色谱的特征

月旭科技的专家系列讲座已经连续开展三期了,因为其突出的专业性和实用性,受到了广大用户的关注和喜爱。我们第四期的专家讲座,再次邀请到了大家呼声很高的张维冰教授。4月7日(下周四),张维冰教授将与大家分享主题为《制备色谱的特征》的相关内容。本次专家讲座共分为三个环节:1. 《制备色谱的特征》主题讲座;2. 线上征集内容解答;3. 在线提问互动答疑环节。为解决大家的实际问题,提高大家的参与度,本次讲座还开启了答疑问题内容征集。在文末,通过留言的形式,将您有关制备或制备实验中的相关问题,写下来。对于大家普遍关注或具有典型性的问题,张维冰教授将会在第四期的专家讲座中,为大家详细解答。01主讲人简介现为华东理工大学特聘教授,南昌大学、齐齐哈尔大学讲座教授。月旭科技分离纯化技术中心总工。主要从事包括色谱、毛细管电泳的理论与实践研究工作。张维冰教授师承张玉奎院士,于1999年在中国科学院大连化学物理研究所获理学博士学位,并在台湾中兴大学进行博士后研究工作,后赴德国Max Planck Institute for Dynamics of Complex Technical Systems作访问学者。已发表学术论文600余篇,著作七部,申请及授权专利百余项。负责或参加完成国家自然科学基金 、“973”、“863”及国家“攻关”、“支撑计划”等项目多项。02讲座主题《制备色谱的特征》内容摘要1.制备色谱的简介;2.制备LC与分析LC比较;3.制备色谱分类;4.制备LC的上样。03讲座时间2022年4月7日(下周四)14:00

企业动态

2022.04.01

全面解析光化学衍生及应用,记得收藏噢!

WelView光化学衍生器是月旭科技推出的一款高效、便捷、耐用、方便的光化学衍生设备,在黄曲霉检测及磺胺类药物检测方面起了重要的作用。用了那么久的仪器,你知道它的原理吗?今天我们来解密光化学衍生的原理,一起来看看吧。光化学反应类别柱后化学衍生反应主要以荧光分析为主,也有以电化学检测的分析方法。光化学反应的主要类别如下:分子内能量转移、碰撞能量转移、淬灭、光致离子化、异构化、直接反应、分子间分解。光化学反应主要类别见下图:光化学反应类别图A general classifications of photochemical reactions光化学荧光反应原理自然界中大多数有机物分子因为含有N、O、S等杂原子,系间窜越(S1-T1或T1-S0)量子产率大。或者因为分子中原子不共平面而缺乏刚性,从而成为非荧光物质或天然弱荧光物质,难以直接用荧光检测器进行分析。荧光分析法因其灵敏度高、选择性好,比一般的紫外检测的灵敏度高出三个数量级,检测线可达10-6mg/L,甚至10-9mg/L。光化学荧光分析法的建立,大大拓宽荧光分析法的应用范围。它作为一种基于光化学衍生反应的荧光分析法,是利用物质在特殊的光化学反应体系中大量吸收光子,从而诱发一系列如上图所示的光化学反应。在恒定的实验条件下,光化学反应产物的荧光强度与待测反应物的浓度有定量关系,通过测定光化学反应产物的荧光强度可间接测定待测反应物的浓度,从而达到定性定量分析的目的。光化学衍生方法是基于待测物质在特殊的光化学反应体系吸收紫外光辐射从而引起物质的性质或者结构发生变化,形成荧光增强的现象,使得待测物的荧光性质发生改变来提高荧光分析的灵敏度的一种方法。光化学衍生器广泛应用于液相色谱检测分析,使用时置于色谱柱和检测器之间,进行柱后连续光化学衍生反应提高荧光、紫外、电化学检测和化学发光检测器的灵敏度和响应的选择性。光化学衍生器示意图光化学衍生的优点(1)安装简单,灵敏度高光化学衍生器使用时置于色谱柱和检测器之间,进行柱后连续光化学衍生反应。安装方便,无需专用工具。(2)实验操作简单,容易控制光子作为衍生剂的加入是通过紫外灯光源的开关决定的,和化学衍生相比,不需要准备和存储化学试剂,也不需要考虑试剂的降解、使用期限和处置等问题。(3)操作安全,降低成本有些化学试剂具有毒性,而光化学衍生只需要控制光源开关,不需要接触有毒试剂。且不需要额外添加泵、反应器、加热器等,这样也zui大限度地降低可能干扰测定的因素。光化学衍生器除应用于黄曲霉毒素检测外, 还可以应用于大量的巴比妥酸盐、氨基酸、多肽、维生素和磺胺类药物分析。应用举例✓绿茶中黄曲霉检测色谱柱:Ultimate® XB-C18 (4.6×150mm,5μm);流动相:甲醇:水=45:55;流速:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:20μL;检测波长:Ex=360nm,Em=420nm。参考文献:《光化学衍生技术在离子色谱中的应用》浙江大学

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2022.04.01

wan能的HT2800T气相自动进样器官宣上市啦!

等了三个预告片,今天跟大家官宣一个好消息,由意大利知名仪器厂商HTA公司研发的全新一代气相色谱自动进样器——HT2800T上市啦~~~HT2800T是一款集液体进样、顶空进样、固相微萃取进样于一体的气相色谱进样器,它不仅体积小巧,可以轻松实现双塔进样,快速模式切换,快速拆装,还具有顶空瓶泄漏检测以及创新的RFID SyringeID技术,能够识别注射器,防止安装注射器时发生错误,为您的实验结果保驾护航。01简单易用对于常规分析,HT2800T可以“一键”操作。在放入样品后,只需要输入样品编号,按下START按钮一键启动。全彩触控屏幕让系统操作方便快速、简单便捷、人机交互界面更友好。02兼容性强HT2800T可兼容市面上各品牌气相色谱仪和气质联用仪,轻松实现双塔进样,旋转塔使得进样口可以被维护, 也可使样品远离热源,样品架安装位置远离GC柱温箱,避免样品瓶中的样品处于高温辐照而可能产生的降解和浓缩。可与面上常见的国内外品牌联用,如安捷伦6890/7820/7890、岛津GC14/17/2010/2014/2030;赛默飞Trace1300/1310/Trace Ultra;PE590;丹妮8610/8500;瓦里安3800/430/3900和福立9720等。另外,HTA可以为任何气相仪器做适配套件!035+5快速模式切换及拆装不同进样模式间切换仅需5min,无论您在进行顶空模式、液体进样模式还是SPME模式,无论是分流还是不分流。不同气相色谱仪之间转移仅需5min,没有众多管路的拆装,没有笨重的进样塔需要转移,也没有复杂的对齐操作。真正为您节省时间,提高您的实验效率!04高效,智能HT2800T能zui大限度地提升GC的工作效率,她安装了6位孵化炉,zui优化了顶空进样和SPME进样的前处理时间。得益于我们专业的研发团队将一系列的专利和技术应用在HT2800T中,使用户得到超凡体验。05HT2800T详细技术参数规格参数维保:维护位设计,系统完整性检查(选配,专利技术)控制方式:LAN,TTL目标照明:具有条码扫描:选配顶空/固相微萃取样品数量:42(20mL)可选6和10mL  液体进样数量:121(2mL)尺寸:330×640×320mm(W×H×D)重量: 10kg电源: 100-240±10%V;50-60Hz;150W预处理(顶空/固相微萃取)孵化炉样品位:6孵化温度:室温;40-170℃孵化时间:0-999min摇晃方式:轨道式摇晃速度:可调摇晃周期:开/关 0-9.9min顶空进样(HS)注射器体积:2.5mL(标配),1mL(选配)清洗方式:载气冲洗(接入口1/8  zui大压力1bar)样品瓶检漏:有装样进样进样针温度:室温;40–150℃进样体积:步进0.01mL样品平衡:15进样速度:0.1–100mL/min其他可调参数:进样速度,进样间隔,平衡时间,进样前后间隔时间,富集。固相微萃取进样(SPME)萃取模式:液体/顶空纤维类型:10mm,20mm萃取纤维清洗温度:210-300°C清洗系统:惰性气体冲洗 (入口尺寸: 1/8; zui大压力: 1bar)液体进样进样(Liquid)进样针体积:0.5,1,5,10,25,50 and 100μLSyringeID (专利技术):选配装样样品体积:步进0.1μL气体体积:步进0.1μL装样速度:1-100μL/sec粘度延迟:0-15s气泡消除:zui多15次抽吸排气进样进样速度:1-100μL/sec进样针深度:可调整进样前后延迟:0-99s清洗类型:进样前、进样后溶剂容量:6×10mL模式:单次/两次

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2022.03.31

牛初乳粉中IgG蛋白的分离纯化及检测方法

免疫球蛋白G,即抗体,是免疫系统用来识别和中和病原菌和病毒等异物的Y型大蛋白,在生物学上十分重要。Protein G可以结合哺乳动物IgG,与其蛋白结构上的Fc片段进行特异性识别。因此可以选用月旭Welchrom® Protein G Tanrose 4FF(5mL,00081-12012)来分离纯化牛初乳粉中的IgG蛋白、Welchrom® BC-10重力柱(8.3mL,00051-32022)提高纯度,并采用月旭Xtimate® SEC-300(7.8×300mm,5μm)进行色谱检测分析实验结果。01分离纯化实验步骤(1)牛初乳样品预处理① 去除脂肪及酪蛋白:A. 取3g牛初乳粉溶于20mM PB中,漩涡震荡混匀充分溶解,定容至30mL ,浓度为1g/mL。(可滴加少许消泡剂,约4μL/mL)B.用6M HCl调pH至4.5,37℃ 水浴35min,9000r/min 离心20min,弃沉淀,保留上清。② 去β-乳球蛋白:将上述上清用10M NaOH回调pH至7.0,9000r/min 离心20min,弃沉淀,保留上清。③ 去除小分子杂蛋白及脱盐浓缩样品:将上述上清倒入30kDa超滤管中,8000r/min 离心10min,收集截留液。④ 除微生物杂质:将截留液过0.45μm滤膜,准备上样。(2)Protein G 4FF亲和纯化(280nm)(3)SDS-PAGE电泳测定纯度① 10×电泳缓冲液配置(1L):② 上样:按4:1=样品:5×Loading Buffer 的比例加入上样缓冲液混匀,沸水浴5-10min,据样品情况选择上样量,Marker 5μL/孔,浓缩胶80V 20min,分离胶120V 60min电泳。③ 染色及脱色:用染色液染色30min,用蒸馏水清洗后,查看结果。(4)BC-10重力柱脱盐(8.3mL)02 检测分析实验步骤液相色谱检测03 目标蛋白冻干保存①超滤浓缩 → ②-20℃预冻干 → ③-80℃真空冻干 → ④冻干样品复溶纯度色谱检测 → 蛋白冻干-20密封保存。04 结果如图05 结论采用月旭Welchrom® PreCot Protein G 4FF(5mL,00081-12012)与月旭Welchrom® BC-10重力柱(8.3mL,00051-32022)两种层析柱进行二次层析,可以使样品纯度达到97%,再经30kD超滤管进行浓缩可进一步提升样品纯度,经月旭Xtimate® SEC-300(7.8×300mm,5μm)色谱检测纯度达到99.86%。

参数原理

2022.03.31

您见过这么Cute的顶空进样器吗?

HT2800T是一款体积小巧、兼容性强、方便拆装的三合一气相自动进样器进样器,它可以满足您对气相色谱顶空进样、液体进样、固相微萃取进样等不同的应用需求。HT2800T自动进样器具有顶空进样完整性检查及样品瓶泄漏检查,确保实验数据的稳定可靠。HT2800T的顶空进样注射器,相比于市面上常见的产品,具有更出色的性能,能承受更宽的温度范围,更长的使用寿命,更好的重现性,以及相对更友好的价格。

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2022.03.29

ji致精简,颠fu想象的气相进样器!

HT2800T是一款集液体进样、顶空进样、固相微萃取进样于一体的气相色谱仪自动进样器,不同应用模式之间切换仅需5min即可轻松搞定,多功能合一更节约您的实验室采购和使用成本。您记忆中的顶空进样器是什么样的呢?体积庞大的顶空的孵化炉,又长又粗的顶空传输管路,HT2800T提供了一种非常友好的顶空进样方式,进样器无需载气,只是在样品切换时使用到,不需要O形圈或密封圈,不需要磁性或特殊盖片,因为样品瓶的转移是有效的和可靠的,因此节约了大量的耗材成本和分析时间。颠覆您的印象,小巧的机身,灵活的应用模式切换,以及完美的兼容性,让您拥有更佳的气相色谱使用体验。三合一气相色谱仪自动进样器HT2800T更多特点,留意月旭科技公众号及视频号,下次揭晓~

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2022.03.28

What?又是方法重现性!(上篇)

在方法开发工作中,经常会碰到验证时方法无法重现的情况,而这种时候,很多人会把这个“错”归到色谱柱上。确实,有极少数的“超敏体质”项目,会对色谱柱的内环境极度敏感导致无法重现。但大部分无法重现却是其他原因造成的,今天,我们就来说一说这些其他原因。使用期间的色谱柱变化,俗称色谱柱改性1这种问题经常出现在使用检测过其他项目的色谱柱进行方法开发,再换色谱柱进行重现时发生。这种情况是因为,有些特殊物质(可能是样品中的微量杂质或强保留物质)会吸附在填料上无法洗脱下来,这种情况就会对色谱柱造成改性。在检某些特定成分时,会影响成份的保留能力,导致更换色谱柱后无法重现分离效果。避免这种情况zui好的办法就是方法确定后马上用新色谱柱进行结果重现。如新柱无法重现结果,就有很大的可能是旧柱子被改性引起的。2有时,使用没有测过其他项目的色谱柱进行方法开发,后面重现的时候,也会发生更换柱子无法重现的情况。这是因为,方法开发过程中会使用到很多的不同条件及不同前处理方法处理的样品,这种情况,也可能使色谱柱改性。因此,哪怕是用没做过其他项目的色谱柱进行方法开发的,方法确定后,也需用全新的色谱柱进行重现。3色谱柱使用极限条件(如高pH值,高温,低pH值等),导致色谱柱受损,在这种色谱柱上开发的方法,在更换新柱时,也经常会出现无法重现的情况。高pH值会引起硅胶溶解,色谱柱塌陷;低pH值会导致键合相容易脱落,高温会导致填料塌陷,板结等情况,使色谱柱的保留能力发生变化。因此,使用这种条件的方法,方法确定后,一定要用新的色谱柱进行重现。4色谱柱使用过含离子对试剂的条件,离子对试剂会使色谱柱改性,无法完全冲洗干净,因此,使用过离子对试剂的色谱柱建议专柱专用。具体的原因,我们将在下篇继续为您解答!未完待续~

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2022.03.28

速看!月旭科技又引进新产品啦!

继HT4000A,HT1500L之后,月旭科技再次与意大利知名自动化仪器设计生产商HTA公司达成协议,引进三合一气相色谱仪自动进样器HT2800T,成为HTA在大中华地区重要合作伙伴。HT2800T集液体进样、顶空进样(HS)、固相微萃取(SPME)进样于一体,5min轻松实现不同模式切换,5min轻松实现自动进样器不同气相色谱仪主机上的转移拆装,便捷、高效。5+5,模式切换就是这么简单,快来抢先了解一下。三合一气相色谱仪自动进样器HT2800T更多特点,留意月旭科技公众号及视频号,明日揭晓~

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2022.03.25

热点专题讲座 | 月旭科技中药配方颗粒分析解决方案

近日全国的疫情防控形势变得复杂严峻,多地也升级了疫情防控措施。在疫情防控期间,不少老师已经减少外出,居家办公。月旭科技也为各位老师准备了线上专题讲座,将通过月旭科技视频号进行直播,感兴趣的你,不要错过哦!讲座主题《月旭科技中药配方颗粒分析解决方案》讲座内容1.中药配方颗粒背景介绍2.中药配方颗粒中色谱柱的选型3.中药配方颗粒常见问题及基本对策讲座时间2022年3月25日(周五)14:00主讲人简介

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2022.03.25

影响凝胶过滤分离效果的主要因素

今天主要介绍下影响其分离效果的主要因素:01流速流速对分离效果的影响较大,所以在洗脱分离蛋白质样品时保持合适而恒定的流速非常重要。凝胶色谱系统中洗脱流速主要取决于凝胶柱的内径和高度、凝胶种类、颗粒大小以及分离类型等。一般在开始正式洗脱之前,先要进行预备试验以确定合适的流速。较缓的流速可使蛋白样品与凝胶基质充分平衡,达到理想的分离效果,但是流速过低会造成样品在凝胶床内的横向扩散增大,使峰宽变宽,降低分辨率。此外,还延长了洗脱时间,降低工作效率。高流速易引起洗脱峰的重叠,使本来可分开的组分重合,而且会增大柱压,影响分离效果。一般凝胶的线性流速控制在2-10cm/h。商品凝胶出厂时,商家提供的一些流速参数可供使用者参考。在一般实验中通常用蠕动泵调节流速,没有条件的可通过控制一定的高度压差来控制流速。在实验中通常使用体积流速 (mL/min),有时为了实验需要,还需将体积流速转换成线性流速(cm/h),其转换公式如下:02加样体积加样体积 (Vs)也可对蛋白样品的分离效果造成较大的影响。体积过大,会造成平台洗脱峰或相邻峰的重叠,影响分离效果;加样过少,目的蛋白组分的收集量少、稀释倍数增大、浓度低,降低实验效率。03样品浓度样品进样前应高度浓缩,但是浓度不可过大,否则会影响分离效果。蛋白质浓度应小于70mg/mL,一般在10-20mg/mL。必要时,需进行样品浓度系列试验,以确定zui佳值。过低的样品浓度可造成某一蛋白组分的过度稀释,影响收集;而浓度过高时会使流动相不稳定,造成洗脱峰的变形或重叠。此外,样品浓度还和分离纯化的类型有关,进行蛋白组别分离或脱盐除杂时,由于目的蛋白和杂质的分子量差异较大,故可适当提高样品浓度,而进行分子量差异较小的分级分离或分析性实验时,样品浓度尽量要低一些。04离子强度样品洗脱液中含有一定离子强度的盐溶液可防止蛋白质与蛋白质之间或蛋白质与凝胶介质之间的相互作用,排除蛋白质与流动相或与凝胶介质相互作用的干扰。一些不带电荷的中性蛋白在纯水中可实现有效分离,而在分离一些带电荷的蛋白质样品时特别要注意这一影响,一定要调整洗脱液的离子强度,排除离子吸附等干扰。例如,Tandex因含有羧基基团,呈弱酸性,所以在用该类凝胶进行色谱操作时常使用一定离子强度的盐溶液 (一般高于0.05)作为洗脱液,这样就可以避免Tandex与碱性蛋白发生吸附。在分离纯化蛋白质时一般使用20-100mmol/L NaCl作为盐溶液。但应注意如果盐浓度过高,会引起凝胶柱床体积的变化。05pH由于在凝胶过滤色谱中所用的平衡液和洗脱液一致,故在整个操作中pH不发生变化,选用具有一定缓冲能力的缓冲液即可达到控制pH的目的。维持洗脱液一定的pH,一方面是考虑蛋白质样品的稳定性和溶解性,需尽量避开靠近蛋白样品等电点的pH范围,以防蛋白质沉淀。另一方面,平衡、洗脱中pH的变化会造成凝胶床体积的变化,影响分离纯化的效率和效果。所以在确定pH时要考虑蛋白质样品性质和凝胶所能耐受的pH范围这两方面的因素。pH一般控制在6-8,磷酸盐和Tris-HCl缓冲液的使用较多。生产商家提供的一些凝胶所适合使用的pH范围可供参考。06分子形状溶质的大小和分子量主要取决于分子形状,洗脱液中所溶解的蛋白质具有各种不同的分子形状 (如球蛋白、微不对称球蛋白、含纤维杆状蛋白和变性后的弯曲结构等),而在理想的凝胶过滤色谱中,蛋白质为球形分子,在柱内的保留时间仅与其分子大小和凝胶孔径大小之间的差别有关,所以不同形状的蛋白质分子对分离也有不同程度的影响。在测定一些非球形蛋白质分子量的实验过程中,通常在样品中加入高浓度的变性剂 (如8mol/L尿素),使各蛋白组分发生卷曲后,分子形状趋于一致。07其他因素除以上因素之外,操作温度、凝胶颗粒的种类和直径、柱子的长度和内径等都对蛋白质样品的分离效果有影响。在操作过程中保持合适的温度对分离非常重要,操作温度要 控 制 在凝胶的zui适用范围内,否则会影响到凝胶分级范围、排阻极限的准确性和柱床体积的变化。月旭科技凝胶过滤填料:

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2022.03.24

这次,我们给专家“提点问题”!

专家讲座Expert lecture月旭科技的专家系列讲座已经连续开展三期了,因为其突出的专业性和实用性,受到了广大用户的关注和喜爱。我们第四期的专家讲座,再次邀请到了大家呼声很高的张维冰教授,这次张教授为我们带来的主题是《中压制备色谱的特征》。我们为了提高大家的参与度,真正让您的问题得到专家的解答,这次让我们一起来向张教授“提点问题”。1参与方式在文末,通过留言的形式,将您有关制备或制备实验中的相关问题,写下来。对于大家普遍关注或具有典型性的问题,我们会在第四期的专家讲座中,由张维冰教授为大家详细解答。2参与福利如果您提出的问题,能被选入到《中压制备色谱的特征》讲座的正式内容中,我们还将为您送上一份月旭科技的防护大礼包。赶紧在文末留言,写出您遇到的问题吧!3专家介绍现为华东理工大学特聘教授,南昌大学、齐齐哈尔大学讲座教授。月旭科技分离纯化技术中心总工。主要从事包括色谱、毛细管电泳的理论与实践研究工作。张维冰教授师承张玉奎院士,于1999年在中国科学院大连化学物理研究所获理学博士学位,并在台湾中兴大学进行博士后研究工作,后赴德国Max Planck Institute for Dynamics of Complex Technical Systems作访问学者。已发表学术论文600余篇,著作七部,申请及授权专利百余项。负责或参加完成国家自然科学基金 、“973”、“863”及国家“攻关”、“支撑计划”等项目多项。

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2022.03.23

离子交换层析的缓冲液和盐

缓冲液的pH和浓度离子交换色谱通常至少会使用两种不同的缓冲液:一种用于蛋白质上样并洗去不吸附的杂质,称为起始缓冲液;另一种用于洗脱吸附在柱上的蛋白质,称为洗脱缓冲液。达到zui终pH和盐浓度的洗脱缓冲液称为极限缓冲液。这里又分为两种情况,在完成吸附后将目的蛋白洗脱下来有两种方法:一种是通过改变pH,使蛋白质的带电状态发生变化而不能结合在交换剂上,此方法会用到两种不同pH的起始和洗脱缓冲液;另一种是通过增加离子强度,虽然不改变蛋白质的带电状况,但高的离子强度会降低蛋白质与离子交换剂之间的静电引力,从而将蛋白质洗脱下来,此方法会用到两种pH相同而离子强度不同的缓冲液,通常极限缓冲液是向起始缓冲液中添加特定浓度的盐类而形成。为了保证目的蛋白在吸附阶段能结合到交换剂上,起始缓冲液的浓度一般比较低,介于0.01-0.05mol/L。但过低的起始浓度有可能造成蛋白质在离子交换剂上吸附过于牢固而给洗脱造成困难,同时也应当控制吸附阶段的时间。研究显示,将蛋白质吸附在离子交换柱上过夜再进行洗脱,比直接进行洗脱明显困难,这是由于长时间的吸附会引发蛋白质的构象缓慢发生改变,这种改变使之与交换剂结合更为牢固,并且这种构象变化一般都会造成蛋白质活性下降。合适的起始缓冲液浓度可以通过小样试验确定。在采用改变pH的方法洗脱时,洗脱缓冲液的缓冲成分种类往往与起始缓冲液相同,只是控制比例关系不同造成zui终pH不同。洗脱缓冲液在浓度方面并没有特殊的要求,常与起始缓冲液相同。在采用增加离子强度的方法洗脱时,所用洗脱缓冲液在缓冲物质种类、pH和浓度上往往都与起始缓冲液相同,通常是通过向起始缓冲液中添加特定浓度的其他种类盐 (如NaCl)来增加离子强度。所以,实际上无论是何种缓冲液,缓冲物质的浓度通常都不大,为了使其具有足够的缓冲能力,必须满足一定的条件。根据Henderson-Hasselbalch公式:当缓冲液的pH接近缓冲物质的pKa时,才具有良好的缓冲能力。zui大缓冲能力出现在pKa处,偏离pKa值1个pH单位缓冲能力将下降5倍。一般来说,缓冲液的有效pH范围约为pKa±2pH单位,而要获得足够强的缓冲能力,pHzui好在pKa±0.5pH单位之间。当弱酸(或弱碱)与对应的盐的物质的量之比接近1:1时,此缓冲体系的缓冲能力zui强。所以在选择缓冲液时,首先应根据起始缓冲液所需要的pH,选择pKa值与之接近的缓冲物质,使弱酸(或弱碱)与对应的盐的物质的量之比接近1。需要注意的是,缓冲物质的pKa值是会随温度变化的,在温度相差较大时会对溶液pH产生明显的影响。例如,在室温下配制出的Tris缓冲液比在冷藏室(4℃)中的低0.05个pH单位。离子对色谱行为的影响采用增加离子强度的方法洗脱蛋白质时,通常选用某种非缓冲盐类,zui常用的是NaCl,添加到起始缓冲液中,构成了洗脱缓冲液。在进行色谱分离时,洗脱缓冲液中的缓冲物质固然会影响到色谱效果,实际上非缓冲盐的种类和性质同样会影响到色谱时的分辨率和选择性,使用不同的非缓冲盐离子时,可能造成不同物质被洗脱的先后顺序发生变化,因此非缓冲盐的选择同样具有重要意义。在前面离子交换理论部分讨论过,价态高的离子与交换剂的结合力更强,所以一般情况下,多价离子是比一价离子更好的置换离子,它们能使蛋白质比较早被洗脱下来 (保留值小)。所以在阳离子交换剂上,蛋白质的保留值与置换离子的关系为:Ba2+<Ca2+<Mg2+<NH4+<K+<Na+<Li+,但也存在例外,比如对于溶菌酶来说,NH4+是比Mg2+更有效的置换离子。在选择置换离子时,应当考虑到多方面的因素,强的置换离子能有效缩短色谱时间,但往往也降低蛋白质回收率。一般情况下选择置换能力居中的盐离子较为合适,在洗脱与交换剂牢固结合的蛋白质时,选用强的置换离子具有优势。不但置换离子,洗脱盐中与功能基团带同种电荷而不参与离子交换过程的离子也会影响到蛋白质的色谱行为,原因也有多种。有些是因为离子与蛋白质发生作用导致的。此外,二价离子如Ca2+和Mg2+能与蛋白质分子中的酰胺基形成复合物而影响到其色谱行为。总之,离子对色谱行为的影响是多方面的,没有一定的规律。在首次进行色谱分离时,可优先选择比较通用的一些缓冲物质和盐类,在此基础上再进一步优化。添加剂在有些情况下,在进行离子交换时还会添加一些其他的化合物,其作用主要有:增加蛋白质的溶解度,提高色谱分辨率,保护待分离物质等。大多数蛋白质是溶于水的,但也有部分蛋白质疏水性比较强,在水中的溶解度很小,这使得色谱操作难于实现。具体例子是膜蛋白的分离。膜蛋白存在于生物膜中,其表面是疏水区,与生物膜中疏水性的脂质成分以疏水相互作用结合,这类蛋白在水中是不溶的或溶解度很低。向溶液中添加非离子型或兼性离子型去污剂可以使膜蛋白溶解并分散在水溶液中,便于色谱的进行。有机溶剂(如氯仿、甲醇等)也能增加疏水性蛋白质的溶解度,而且由于有机溶剂降低溶液的介电常数,使得蛋白质与交换剂之间的静电作用力更强,吸附更为牢固。某些情况下,添加特定的物质还能提高色谱时的分辨率。例如,在分离一些蛋白质时,添加甜菜碱或牛磺酸能减少蛋白聚集体的形成及其与交换剂的结合,从而提高了分辨率。有的中性聚合物如聚乙二醇(PEG)能与蛋白质竞争溶液中的水分子,这将增加蛋白质与离子交换剂的相互作用而提高分辨率。分离过程中有时还需添加酶抑制剂。例如在蛋白质分离过程中,样品体系中如果有蛋白酶存在,会造成目的蛋白被水解,使回收率下降,添加蛋白酶抑制剂能够有效保护目的蛋白。丝氨酸蛋白酶常用的抑制剂是苯甲磺酰氟,巯基蛋白酶常用的抑制剂是碘乙酰胺,金属蛋白酶可采用金属螯合剂作为抑制剂。

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2022.03.23

下周二开讲!不容错过的月旭科技热点专题讲座

近日全国的疫情防控形势变得复杂严峻,多地也升级了疫情防控措施。在疫情防控期间,不少老师已经减少外出,居家办公。月旭科技也为各位老师准备了线上专题讲座,将通过月旭科技视频号进行直播,感兴趣的你,不要错过哦!长期致力于食品、医药、环境及精细化学品(化妆品)等领域的色谱应用,拥有丰富的工作经验,擅长为各领域中色谱应用的疑难问题提供全面的解决方案。充分利用月旭公司的全面色谱产品和应用中心平台,帮助客户解决实际应用中遇到的问题,如色谱在产品生产工艺中对关键原材料的精制;在样品检测前处理中对目标物的富集和初步纯化,减少基体对目标物的干扰;在使用色谱仪等精密仪器检测时,快速优化并找到合适的色谱条件等。讲座主题《新型色谱材料在化妆品领域的应用》讲座内容1、新型色谱材料介绍;2、色谱在化妆品检测中的应用案例。

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2022.03.21

新颖与高端您更喜欢哪种?月旭科技小仪器出新啦!

做实验需要很多种仪器来为我们服务,它们可以极大地节省我们的时间并且比人手效果更好,时隔八个月,期待已久的月旭科技小仪器新品终于出现在各位老师面前了。本次我们主打着“新颖”与“高端”的理念,来向各位老师介绍下我们的新成员。超薄磁力搅拌器首先是“新颖”的超薄磁力搅拌器,何谓超薄?各位老师不妨看下我们的产品实物。这里也为各位老师详解下产品特点:● 仪器尺寸仅有110*180*14.5mm,仅仅比手机大一圈的尺寸,相较于常见的磁力搅拌器有着十分明显的体积优势,极大地节省实验室台面空间;● 使用TYPE-C口供电,也可以使用充电宝等随身设备充电,使用起来更为自由;● 采用触屏模式操控,操控方便且有趣;● 可切换顺/逆时针旋转模式,zui高可达1500转/分钟。如上可以看出,我们这个新产品是符合“新颖”这一人设,严格来讲应该叫“机设”的,不知道各位老师是否对它很感兴趣呢?磁力加热搅拌器说完了新颖的小仪器,也不得不提我们的第二位新成员磁力加热搅拌器,也就是传统的磁力搅拌器,毕竟有些高难度大量溶液也是需要老牌选手来应对的。这里是它的自我介绍:● 使用PID算法控温,精度高;● 旋钮与按键调节配合电子显示面板,使用方便,高端大气;● 采用半导体控制技术,具有断藕保护功能;● 直流无刷电机,性能稳定,噪音小,寿命久;● 陶瓷加热盘与不锈钢配件,耐高温,清洁方便,耐腐蚀。水浴氮吹仪zui后就是我们的水浴氮吹仪了,也是本次的大轴产品,让我们来欣赏一下。可能已经有细心的老师发现了它的不同之处,在固定样品管的架子上,它有着少见的旋钮与可移动金属配件,在这两个配件的帮助下,它可以将不同大小的离心管或者试管的中央对准氮吹针,这是目前市面上少见的产品设计,也解决了很多氮吹仪氮吹位置贴近管壁的难题,这款氮吹仪也jue对称得上“高端”之名。产品特点:● 实时温度时间显示面板;● 可调节设计,兼容各种尺寸管材,将其中央对准氮吹针;● 自由升降、独立可调的针型阀管,管控每个气针的流量;● 圆形转盘结构,可360°自由旋转,方便拿取样品;● 样品位标注数字编号,辅助标记记录样品;● 全部采用进口不锈钢零件,耐腐蚀;● 内置液位传感器,防干烧保护。这三款新产品都是实验室常见仪器了,相信各位老师的实验室都能用得到它们,如果您感兴趣的话,不妨看下如下产品订货信息。产品订货信息

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2022.03.21

聚焦3.15,保障餐桌安全,月旭在行动

“公平守正 安心消费”,这是2022年的3.15晚会的主题,平时“隐身”于市场里的问题被公之于众。磨拳霍霍打开电视,果不其然,看到那些被曝光的厂家和商品,依然是这个表情:看到这些触目惊心的画面,您的心是否又被惊到了。您以为的老坛酸菜,其实却是土坑酸菜!央视3·15晚会曝光湖南插旗菜业有限公司从外面收购“土坑酸菜”,且并不对卫生指标进行检测。土坑酸菜量大价低,所以得到了许多酱菜厂商的“青睐”。这类酸菜通常只需要三个月的时间,便可以“达到”售卖的标准。但是酸菜容易发黑变烂,生产厂家为防止酸菜腐烂,会加入过量的防腐剂以及以焦亚硫酸钠和二氧化硫为主要成分的护色剂。在土坑里腌制加上生产环节的不规范,很有可能导致酸菜受到重金属污染。您能想象到,酸辣美味的老坛酸菜面竟然是这样生产出来的吗?!月旭科技作为国内领xian的分析科学技术解决方案供应商,整理出对应实验分析方案供您参考,为守护您舌尖上的安全提供助力。酸菜中防腐剂的测定参考标准参考标准:《GB 5009.28-2016 食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》。色谱条件色谱柱:Blossmate® PSV C18 Plus(4.6×250mm,5μm)。流动相:20mM乙酸铵溶液(调pH6.70)-甲醇=93-7;检测波长:230nm;柱温:30℃;流速:1.0mL/min;进样量:5μL。谱图和数据结论○ 强大的抗污染能力,抵御复杂样品中的各种污染物。○ 经过1000针进样的严酷考验,满足您对长寿命色谱柱的需求。○ 5种防腐剂的检测。○ Blossmate® PSV C18 Plus色谱柱,满足您对防腐剂检测的所有要求!产品信息

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2022.03.18

洗脱溶剂知多少

在SPE固相萃取产品中,洗脱液对整个过柱过程至关重要。月旭科技针对不同类型的柱子给出不同洗脱液的选择,为客户能够更好的选择合适的产品。在考察洗脱溶剂的选择可以从溶剂的极性指数、溶剂的选择以及洗脱强度入手。溶剂的极性指数越大,对极性化合物的溶剂能力越强。反相固相萃取柱洗脱液的选择在反相固相萃取中,一般选择目标化合物溶解度高的有机溶解剂作为洗脱溶液。根据目标化合物的机构及官能团,依据相似相溶原理,可以选择极性相似的洗脱溶剂。对于强极性的SPE柱,在洗脱时应选非极性强的溶剂。对于弱非极性SPE柱,在洗脱时应选非极性弱的溶剂。离子相固相萃取柱洗脱液的选择对于阴离子交换柱:满足下面一个条件都能将阴离子化合物从阴离子交换柱上洗脱下来。1.洗脱溶剂的PH高于吸附剂阴离子交换官能团的PKa两个单位;2.洗脱溶剂的PH低于目标物PKa两个单位;3.洗脱溶剂为高阴离子强度的缓冲液;4.洗脱液为高选择性的阴离子。对于阳离子交换柱:1.洗脱溶剂的PH低于吸附剂阴离子交换官能团的PKa(PH=PKa+lg[A-]/[HA]PKa越小,酸性越强,反之PKa越大,酸性越小)两个单位;2.洗脱溶剂的PH高于目标物PKa两个单位;3.洗脱溶剂为高阳离子强度的缓冲液;4.洗脱液为高选择性的阳离子。正相固相萃取柱洗脱液的选择在正相固相萃取柱中,洗脱剂的选择可以根据溶剂的洗脱强度来考虑。正相硅胶柱:甲醇、四氢呋喃、异丙醇、乙腈、异丙醇等。

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2022.03.17

超高效液相色谱串联质谱法测试20种全氟烷基类化合物测定

全氟烷基类化合物(PFAS)是一类人造化学物质,是指有机物分子中碳链上连接的氢原子被氟原子全部或部分取代后形成的含有C-F键的化合物。PFAS因其独特的情性、疏水疏油性、及良好的滑动性、拒污性等,自1940年以来被广泛应用于化工、纺织品、纸张和包装、涂料、建筑产品和医疗保健产品等工业和消费品领域。PFAS能够经受很强的热、光照、化学、微生物作用和高等脊椎动物的代谢而不降解,可以随食物链的传递在生物机体内富集和放大至相当高的浓度, PFAS具有诱发肝中毒、发育毒性、免疫毒性、内分泌干扰以及潜在致癌性等毒理效应。HPLC-MS/MS技术具有高的灵敏度选择性和重现性,是目前分析PFAS常用的方法。✓色谱条件色谱柱:Ultimate® UHPLC XB-C18(2.1×150mm,1.8μm)。流动相:A相:5mmol/L乙酸铵水溶液;B相:5mmol/L乙酸铵甲醇溶液;柱温:40℃;流速:0.3mL/min;进样体积:1μL;梯度洗脱程序见下表:✓质谱条件电离模式:ESI-;毛细管电压:1KV;脱溶剂气温度:350℃;脱溶剂气流速:900L/H;锥孔气流速:100L/H;离子源温度:100℃。✓谱图和数据(1)20种混标中各目标物定量离子图(2)20种混标中各目标物色谱结果叠加图全氟烷基化合物主要质谱参数:

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2022.03.16

凝胶柱的选择与凝胶的预处理

凝胶柱的选择WELCH /在选择凝胶柱时,从外观、质地结构和性能来讲,所选柱子要透明光滑,内径一致,耐压防腐,柱子物料须生物兼容,并有良好的物理化学抗性和稳定性。一般的柱材料多为玻璃或有机玻璃,在使用钢柱时,特别要注意防腐蚀。另外,柱子终端要有采集器和过滤网,柱底板要求耐压且不容易堵塞。死体积应小于0.001Vt,如果死体积过大,被分离组分可能会重新混合,导致洗脱峰出现拖尾现象,降低分辨率。底板过滤介质要求新,且带有能与凝胶融合的网孔,避免接触网孔和过滤介质的表面,因为指纹会使样品的分离程度下降。在装柱或重新装柱时,所有部位必须彻底清洗干净。凝胶柱的长度和内径主要取决于加样体积的多少和对分辨率的要求。凝胶柱的长度对分辨率的影响较大,长柱的分辨率要比短柱的高,但过长会引起柱内不均一、流速过慢,柱长度一般不超过100cm。同时,也要有适当的柱内径,内径过粗会产生蛋白样品较为严重的横向扩散现象,内径过细,靠近柱内壁的流速会大于中心的流速,产生“器壁效应”,影响分离速度和效果。通常使用的凝胶柱长度在25-70cm,内径在4-16mm,H/D(高径比)一般在 (25:1)-(100:1)之间。用于组别分离的凝胶柱,其H/D 可相对低一些;进行分级分离时H/D可在(30:1)-(100:1);而脱盐柱由于对分辨率的要求较低,一般用短柱,H/D大多在(5:1)-(25:1)之间。如果要分离的蛋白质分子量相差较大,可选用H/D=(15:1)-(50:1)的柱子,且柱体积要大于4-15倍的样品体积;如要分离的蛋白质分子量差异较小,则选用H/D=(20:1)-(100:1)的细柱,且柱体积要大于25-100倍的样品体积。在纯化蛋白质时,为了得到较好的分辨率,柱子的H/D 应在(20:1)-(40:1)。此外,选择柱子时还应考虑凝胶颗粒的大小。如填装小颗粒凝胶,适合使用较大直径的色谱柱;用粗颗粒填装时,则用较小直径的柱子。凝胶的预处理WELCH /市售凝胶一般呈干粉颗粒状(如 Tandex) 或水悬浮状 (如Tanrose CL)。一些不宜在脱水干燥状态下保存的凝胶 (如琼脂糖凝胶),应存放在含防腐剂的水溶液中,这些凝胶在使用前不需要进行溶胀处理。另外,多孔硅胶和多孔玻璃也不需要溶胀处理。为了尽量减少不同溶剂对柱床体积的影响,获得理想的分离效果,应将干胶缓慢倒入5-10倍干胶体积的洗脱液中充分溶胀。若溶胀不够,则达不到有效的分离,而且在使用过程中会引起凝胶柱破裂。根据蛋白质样品的分子量和分辨率要求选择好所用凝胶的类型后,再根据柱体积和凝胶的吸水性质估算出干胶的用量。由于凝胶在预处理和实验操作过程中有一定量的损失,所以在实际称取时应高于理论计算值的10%-20%。不同类型的凝胶所需的溶胀时间不同。一般型号较小、排阻极限较低的凝胶,其吸水量较低,溶胀所需时间较短,在20℃条件下需3-4h即可;型号较大、排阻极限较高的凝胶,其吸水量较大,故所需的溶胀时间也较长,在20℃左右需十几小时到几十小时。加热溶胀是常用的凝胶预处理方法,即把所称量的凝胶干粉溶在洗脱液中逐渐加热至接近沸腾。这种方法可大大缩短溶胀时间,一般在1-2h内即可完成,而且可起到溶胀、除气和杀菌的三重效果。在凝胶溶胀过程中要不断缓慢搅拌,但不能剧烈搅拌,因为这样容易引起凝胶颗粒的破碎,最终使细小颗粒堵塞凝胶柱而影响到流速和分离效果。此外,还应尽量避免在酸或碱中进行加热溶胀,以防破坏凝胶的网孔结构。待充分溶胀后,应将凝胶匀浆悬浮,看上清中是否有杂质或不均一的细小颗粒,如有则需反复倾倒去除,直至上清液不再浑浊为止。对溶胀后的凝胶进行除气泡是非常重要的,否则也会影响分离效果,一般可通过真空抽气或加热煮沸的方法排除气泡。由于凝胶价格昂贵,在使用过程中要尽量减少损失和浪费,剩余凝胶要保存好,以备后用。

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2022.03.15

光化学衍生智选WelView,多重服务从“心”出发!

光化学衍生(PhotoChemical Derivatization, PCD)分析法是基于光化学反应而建立的一类分析方法,以其独特的衍生方式与传统的荧光,化学发光,紫外-可见,电化学等检测方法相结合,提高了原有方法的灵敏度与选择性,极大地拓展了传统检测方法的应用范围,在药物、复杂生物样品,环境样品分析测定等方面得到广泛应用。接下来跟小编一起来了解下月旭科技自主研发并获得了多项专li的WelView光化学衍生器吧。仪器外观Welview光化学衍生器外观方正简洁,配有2.19寸超大显示屏,状态指示灯,蜂鸣报警,维护信息,故障提示等功能。是您光化学衍生实验的不er之选。仪器特点双紫外灯,能量更强,衍生效果更佳。超长衍生管路,衍生时间得到足够保障。更小衍生管内径,在保证良好的衍生效果的同时,防止峰展宽,峰形更尖锐对称。超长使用寿命:紫外灯可运行9000小时。2.19寸液晶显示屏,提示故障信息,维护信息,并发出蜂鸣报警。全封闭外壳,无紫外光泄露,保证实验人员的安全。典型应用:黄曲霉毒素检测色谱条件色谱柱:月旭Xtimate® C18 (4.6*150mm,5μm)。流动相:流动相A:水,流动相B:甲醇/乙腈=1/1,A:B=68:32;检测波长:激发波长360nm  发射波长 440nm;柱温:40℃;流速:1.0mL/min;进样量:50μL。高浓度对照品低浓度对照品黄曲霉毒素检测的一站式解决方案PN:01140-00031黄曲霉毒素总量免疫亲和柱(B1、B2、G1、G2)1mL,25支粮油、饲料、中药材、调味品等。PN:01140-00032 黄曲霉毒素总量免疫亲和(B1、B2、G1、G2)3mL,15支粮油、饲料、中药材、调味品等。PN:00826-A239M001ANWE黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混标1μg/mL于乙腈,1.1mL法国A2S。在黄曲霉毒素检测分析项目上,除了上述产品,月旭科技还可以为广大用户提供自主研发生产的Wisys5000高效液相色谱仪、固相萃取装置、各类色谱柱、滤膜、针头滤器、废液收集装置等实验室常用耗材及仪器。在黄曲霉毒素检测分析项目上,真正做到了从样品前处理到分析以及废液处理的一站式服务。典型应用:黄曲霉毒素检测产品独特的设计,功能更强大。一站式服务,无后顾之忧。售后服务良好,光化学衍生器更换配件仅收取配件成本,免收人工服务费。专业的技术指导,众多售前、售后工程师及时跟进。强大的应用支持,开发方法,筛选更有效的色谱柱。

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2022.03.11

IEC缓冲液的类型

在离子交换过程中保持pH的恒定是十分重要的,正如前面讨论过的,pH的改变会造成蛋白质带电荷数量和分布状况发生变化,从而直接影响到蛋白质是否能结合在交换剂上以及结合力的强弱。因此,在离子交换色谱中流动相必须使用缓冲液。缓冲液的种类很多,能够起缓冲作用的物质可分为两类:第yi类是由弱酸(或弱碱)及相应的盐构成的系统;第二类是兼性离子化合物。对于第yi类缓冲物质,在进行离子交换时,如果缓冲离子所带的电荷与离子交换剂上的功能基团相反,将参与离子交换过程,并可能对局部pH产生影响,因此应尽可能采用与功能基团带同种电荷的缓冲离子,即:使用阴离子交换剂时选择带正电荷的缓冲离子;使用阳离子交换剂时选择带负电荷的缓冲离子。当然这也并不是jue对的,比如磷酸盐缓冲液也经常在阴离子交换过程中被采用,但在这种情况下应特别注意在上样前充分平衡,确保色谱系统的pH和离子强度与起始缓冲液一致。第二类缓冲物质在阴、阳离子交换中均能采用。表1和表2分别列出了阳离子交换色谱和阴离子交换色谱时常用的缓冲液。在离子交换过程中虽然可以除去很多杂蛋白,起到纯化效果,但目的蛋白的洗脱峰中必然含有大量缓冲物质和盐的成分,这些成分的引入对于目的蛋白来说本身也是一种杂质。特别在色谱后需对洗脱峰进行冷冻干燥,以得到纯蛋白样品时,在冻干后的粉末中往往绝大部分是缓冲物质和盐。如果在冻干前进行脱盐或透析操作,虽然可以基本除去这些杂质,但也有可能造成蛋白活性的回收率下降。此时应优先考虑采用挥发性的缓冲物质,这样在冻干阶段可以将这部分杂质除去,常见的挥发性缓冲物质列于表3。◌ Q /SP/DEAE/CM Tanrose FF快流速琼脂糖基架离子交换介质◌ Q/SP Tanrose HP 高分辨率琼脂糖基架离子交换介质◌ Q/SP Tanrose XL 高载量琼脂糖基架离子交换介质◌ Q/SP Tanrose BB 大颗粒琼脂糖基架离子交换介质◌ DEAE/CM Tandex 葡聚糖基架离子交换介质

新品

2022.03.09

二月二开好头,初春新气相 | 毛细管柱买满即赠!

春风渐暖春天已经来了今天是农历二月二龙抬头 我们开个好头“剪”去旧的毛细管柱换个新气相“初春新气相”毛细管柱买赠活动拂面而来买满即赠配适耗材快来看看吧~01活动时间即日起-2022年3月31日02活动对象全体终端用户03具体活动内容月旭科技品牌全线气相毛细管柱实际成交总金额达5000元即可获赠气相色谱配件:0.53mm或0.32mm石墨垫两者任意组合10个+气相进样隔垫任选1包(赠品规格请查看下文)实际成交总金额达8000元即可获赠气相色谱配件+实验室耗材:0.53mm或0.32mm石墨垫两者任意组合10个+气相进样隔垫任选1包+透明样品瓶套装100pk+棕色样品瓶套装100pk;(赠品规格请查看下文)实际成交总金额达10000元即可获赠气相色谱配件+实验室耗材+可选礼品:0.53mm或0.32mm石墨垫两者任意组合10个+气相进样隔垫任选1包+透明样品瓶套装100pk+棕色样品瓶套装100pk+博柏利香水/YSL小金条口红任选其一;

新品

2022.03.08

离子交换理论(下篇)

其他作用力:疏水相互作用和氢键虽然蛋白质与离子交换剂发生结合主要依靠相反电荷之间的离子键,但实际上此过程中还可能存在其他的作用力,常见的就是疏水相互作用和氢键。疏水相互作用主要出现在使用带非极性骨架的离子交换剂时,例如离子交换树脂,特别是聚苯乙烯树脂,骨架带有较强的疏水性,能与蛋白质分子中的一些疏水性氨基酸残基通过疏水相互作用结合。虽然前面提到常规的离子交换树脂因其性质上的缺点在蛋白质分离中并不常用,但在现代HPLC中还是有部分介质是以树脂作为骨架的。氢键则主要出现在使用以亲水性高分子为骨架的离子交换剂时,例如使用较为广泛的以Tandex(月旭葡聚糖)或Tanrose(月旭琼脂糖)为基质的离子交换剂,骨架糖链中的羟基、羧基等基团能够与蛋白质分子中带亲水侧链的氨基酸残基之间形成氢键。当两种蛋白质在电性质方面很接近时,这些额外的作用力在分离时起着决定性的作用,据此往往可以实现分离。不过这些作用力对色谱行为产生的影响通常很难预测,不同的蛋白质往往相差很大,因此不具有通用性。离子交换动力学离子交换的发生及进行的程度即离子交换平衡取决于离子作用,而离子交换动力学则取决于离子交换剂的颗粒结构。离子交换剂的骨架是具有网孔状结构的颗粒状凝胶,而荷电功能基团均匀分布在凝胶颗粒的表面及网孔内部,蛋白质分子依据分子量的不同,不同程度地进入凝胶颗粒内部,将荷电功能基团上的反离子置换下来而自身结合到离子交换剂上。从动力学角度分析,整个过程可分为五个步骤:①蛋白质在溶液中经扩散作用到达凝胶颗粒表面,亲水性的凝胶和水分子发生氢键作用,从而在凝胶表面束缚了一层结合水构成水膜,水膜的厚度取决于凝胶的亲水性强弱、色谱时流速的快慢,亲水性越强,流速越慢,水膜越厚,反之水膜则越薄,蛋白质通过扩散穿过水膜到达凝胶表面的过程称为膜扩散,速度取决于水膜两侧蛋白质的浓度差; ②蛋白质分子进入凝胶颗粒网孔,并到达发生交换的位置,此过程称为粒子扩散,其速度取决于凝胶颗粒网孔大小 (交联度)、交换剂功能基团种类、蛋白质分子大小和带电荷数等多种因素;③蛋白质取代交换剂上的反离子而发生离子交换;④被置换下来的反离子扩散到达凝胶颗粒表面,也即粒子扩散,方向与步骤②相反;⑤反离子通过扩散穿过水膜到达溶液中,即膜扩散,方向与步骤①相反。根据电荷平衡的原则,一定时间内,一个带电蛋白质分子进入凝胶颗粒,就有与该蛋白质所带净电荷数相当数量的反离子扩散出凝胶颗粒。也就是说,蛋白质与反离子从电荷数量上看,膜扩散和粒子扩散的速率相同而方向相反。由此,上述五个步骤实际上就是膜扩散、粒子扩散和交换反应三个过程。其中交换反应通常速度比较快,而膜扩散和粒子扩散速度较慢,当溶液中蛋白质浓度较低时,膜扩散过程往往最慢,成为整个过程的限制性步骤;当溶液中蛋白质浓度较高时,粒子扩散过程往往最慢而成为整个过程的限制性步骤。月旭科技离子交换层析填料◌ Q /SP/DEAE/CM Tanrose FF快流速琼脂糖基架离子交换介质◌ Q/SP Tanrose HP 高分辨率琼脂糖基架离子交换介质◌ Q/SP Tanrose XL 高载量琼脂糖基架离子交换介质◌ Q/SP Tanrose BB 大颗粒琼脂糖基架离子交换介质◌ DEAE/CM Tandex 葡聚糖基架离子交换介质

参数原理

2022.03.04

离子交换理论(上篇)

离子交换作用离子交换剂由不溶性高分子基质、荷电功能基团和与功能基团电性相反的反离子组成,在水溶液中,与功能基团带相反电荷的离子 (包括缓冲液中的离子、蛋白质形成的离子)依靠静电引力能够吸附在其表面。这样,各种离子与离子交换剂结合时存在竞争关系。无机离子与交换剂的结合能力与离子所带电荷成正比,与该离子形成的水合离子半径成反比。也就是说,离子的价态越高,结合力越强,价态相同时,原子序数越高,结合力越强。在阳离子交换剂上,常见离子结合力强弱顺序为:Li+<Na+<K+ <Rb+ <Cs+Mg2+ <Ca2+ <Sr2+ < Ba2+Na+ <Ca2+ <Al3+ <Ti4+在阴离子交换剂上,结合力强弱顺序为:F- < Cl- <Br- <I-对于蛋白质这样带电荷的生物大分子,与离子交换剂的结合能力首先取决于溶液pH,它决定了蛋白质的带电状态,然后是蛋白质的色谱相关区域,也就是电荷在蛋白质表面的分布情况,这些在前面都已经提到。此外,还取决于溶液中离子的种类和离子强度。溶液中的无机离子和蛋白质竞争性的与交换剂结合,在起始条件下,溶液中离子强度较低,上样后由于蛋白质带电荷数较多,与交换剂之间结合能力更强,因此能取代离子而吸附到交换剂上;在进行洗脱时,往往通过提高溶液的离子强度,增加了离子的竞争性结合能力,使得蛋白质样品从交换剂上解吸,这就是离子交换色谱的本质。pH和离子强度I的影响pH和离子强度I是控制蛋白质离子交换行为、分辨率、回收率等的重要因素。pH决定了蛋白质以及离子交换剂的带电荷情况,因而是决定蛋白质是否发生吸附的最重要参数。在进行分离时,应当控制pH使得蛋白质和离子交换剂带相反的电荷,这里涉及两个方面。一方面,离子交换剂有一个工作pH范围,在此范围内能够确保离子交换剂带充足的电荷。通常,阳离子交换剂应用时有一个pH下限,低于此pH会有很大一部分离子交换基团失去负电荷而不再能结合阳离子;而阴离子交换剂应用时有一个pH上限,高于此pH会有很大一部分离子交换基团失去正电荷而不能再结合阴离子。另一方面,溶液的pH直接决定了蛋白质带电荷的种类和数量,选择适当的pH,能够保证目的蛋白分子与离子交换剂带相反电荷而被吸附,同时如果pH距离蛋白质的等电点过远,则造成蛋白质与离子交换剂结合过于牢固而不易洗脱。在选择操作pH时还需特别注意目的蛋白的pH稳定范围,若超出此范围会造成蛋白质活性丧失,导致回收率下降。特别是由于陶南效应,离子交换剂表面pH与溶液pH是不一致的。在阳离子交换剂表面的微环境中,H+被阳离子交换基团吸引而OH-离子被排斥,造成交换剂表面pH比周围缓冲液中低1个pH单位;而阴离子交换剂表面的微环境中,OH-被阴离子交换基团吸引而H+离子被排斥,造成交换剂表面pH比周围缓冲液中高1个pH单位。例如:某种蛋白质在pH=5时被阳离子交换剂吸附,实际上该蛋白质在交换剂表面是处在pH=4的环境中,若此蛋白质在此pH条件下不稳定就会失活。大多数蛋白质在pH=4以下稳定性都会下降而使回收率降低。由于溶液中的其他离子与蛋白质竞争结合到离子交换剂上,因此离子种类和离子强度I是影响蛋白质结合和洗脱的另一重要因素。在低的离子强度I条件下,蛋白质通过荷电基团结合至离子交换剂上带相反电荷的功能基团上;当竞争离子浓度即离子强度I逐渐升高时,蛋白质逐渐被置换下来。对于带有特定电荷数的蛋白质,需要多高的盐浓度才能将其从离子交换剂上洗脱下来,并没有一个固定的规律,需要从实验中摸索。绝大多数蛋白质在1mol/L的盐浓度下能够被洗脱,因此在探索条件阶段,人们常把洗脱盐的终浓度定为1mol/L。事实上在溶液中盐类还常扮演稳定蛋白质结构的角色,为防止蛋白质发生变性或沉淀,离子强度不宜太低。另外,离子的类型也是一个重要因素,不同离子从交换剂上将蛋白质置换下来的能力是不同的,并且离子类型还对分辨率和不同蛋白质的洗脱顺序会产生影响。月旭科技离子交换层析填料◌ Q /SP/DEAE/CM Tanrose FF快流速琼脂糖基架离子交换介质◌ Q/SP Tanrose HP 高分辨率琼脂糖基架离子交换介质◌ Q/SP Tanrose XL 高载量琼脂糖基架离子交换介质◌ Q/SP Tanrose BB 大颗粒琼脂糖基架离子交换介质◌ DEAE/CM Tandex 葡聚糖基架离子交换介质

参数原理

2022.03.03

新品上市 | 液态发酵食醋中对羟基苯甲酸酯类色谱检测预处理方法包

对羟基苯甲酸酯类作为食品防腐剂被广泛应用在各类食品中,其中对羟基苯甲酸甲酯(MP)、对羟基苯甲酸乙酯(EP)、对羟基苯甲酸丙酯(PP)和对羟基苯甲酸丁酯(BP)一直是国家食品安全检测抽查的重点项目,并且MP和EP在酱油和醋中的zui大添加限量(以对羟基苯甲酸计)均为250mg/kg。月旭科技之前已推出了酿造酱油和固态发酵食醋中对羟基苯甲酸酯色谱检测预处理方法包,此次针对液态发酵食醋,新研发推出了液态发酵食醋(如白醋、米醋等液态发酵工艺的食醋)中对羟基苯甲酸酯类色谱检测样品预处理方法包,其操作步骤相较前两种食品的方法包更为简单,但净化效果依旧很好,可实现从食醋样品中同时提取、分离、净化这4种对羟基苯甲酸酯类(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯),以用于气相色谱和液相色谱技术对这些防腐剂的检测。样品稀释液:将食醋样品溶解稀释以备上样;净化专用SPE柱:吸附食醋中的杂质;SPE淋洗液:将被SPE柱吸附的杂质淋洗出来;SPE洗脱液:将被SPE柱吸附的目标物洗脱下来;洗脱净化管:进一步吸附残留杂质并除水;萃取液:将洗脱收集液中的目标物萃取出来。1)食醋样品称量:准确称取5g食醋样品;2)稀释溶解:使用“样品稀释液”,稀释溶解食醋样品;3)净化:使用“净化专用SPE柱”,用“SPE淋洗液”和“SPE洗脱液”进行SPE操作,洗脱液收集在“洗脱净化管”内,然后氮吹浓缩;4)萃取:使用“萃取液”,类似于QuEChERS的操作,上清液收集后旋蒸蒸干;5)残留样品用溶剂复溶,过滤后上色谱检测。1) 气相色谱柱分析柱:WM-5色谱柱,柱长30m,内径0.32mm,膜厚0.25μm,月旭科技(货号:03902-32001);2)进样口:温度260℃,分流比1:10,进样量1μL;3)升温程序:4)检测器:氢火焰离子化检测器(FID),温度:280℃;5)载气:氮气,纯度≥99.999%,流速2.0mL/min;6)检测色谱图:1) 液相色谱柱分析柱:Ultimate® XB-C18色谱柱,4.6mm×250mm,5μm,月旭科技(货号:00201-31043);保护柱:Ultimate® XB-C18,4.6mm×10mm,5μm,月旭科技(货号:00808-04001)(配不锈钢保护柱柱套,月旭科技,货号:00808-01101);2)流动相:A相:含1%乙酸的40%乙腈水溶液;B相:含1%乙酸的乙腈;3)梯度洗脱程序:4) 流速:1.0mL/min;5) 检测波长:260nm;6) 柱温:35℃;7) 进样体积:1~20μL(视目标物浓度而定)。8) 检测色谱图:

新品

2022.03.01

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