基于cielo和naica系统，多重PCR荧光染料该怎么选呢

什么是多重PCR？

多重PCR(multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR)也称复合PCR，它是在同一PCR反应体系中加入一对以上引物，各对引物分别结合在模板相对应位置，最终扩增出一条以上目的DNA片段(图1)，其反应原理、反应试剂和操作过程与一般PCR相同。

▲ 图1:多重PCR反应示意图（图源网络，侵删）

荧光定量PCR可以实现多重PCR吗？

当然是可以的，荧光定量PCR除了常规的单基因定量外，也是可以实现多个基因的同时检测。单基因检测我们一般使用染料法，通过染料分子与双链DNA的结合来进行PCR反应的实时监测，但是这种结合是非特异的，我们无法区分同一个PCR反应体系中的多个目的DNA片段，因此需要采用另一种方式来同时进行多基因的检测，也就是探针法。

▲ 图2:染料法和探针法的检测原理（图源网络，侵删）

探针法通过与模板特异性结合的探针解决了特异性的问题，同时不同的探针可以标记不同的荧光基团，通过对不同探针之间的识别，从而实现对多个基因的同时检测和定量。但是这又带来一个问题，就是在针对不同基因设计探针时该如何选择荧光基团呢？

在选择荧光基团时首先要考虑一个问题，您要使用的仪器所配置的荧光通道是怎样的，这里就以Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统和Stilla naica^® 6色微滴芯片式数字PCR系统为例来进行说明。

▲ 图:多重检测示意图（图源网络，侵删）

Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统共有6个荧光通道，最多可同时检测6个基因。为什么能同时检测这么多基因呢，这里就要科普一个小知识了，那就是荧光是怎么产生的。当激发光照射到荧光基团上时，荧光基团就会发出发射光，也就是我们需要的荧光信号，对于不同的荧光基团，其接收的激发光和发射的发射光波长都是不一样的，因此需要根据机器的特性进行选择。对于Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统，只要使用的荧光基团在6个通道的激发和发射波长的范围内，都支持使用。其次，Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统的荧光检测通道的设计之初，就是要覆盖市面上大多数的荧光基团类型，所以基本不需要担心探针适配性问题。

▲ 图4:Azure Cielo™ 6实时荧光定量PCR系统的荧光检测通道

naica^® 6色微滴芯片式数字PCR系统荧光探针的选择与Azure Cielo™ 6相似，对于naica^® 6色微滴芯片式数字PCR系统而言，其同样配置有6个荧光检测通道，6个通道的波长范围也基本覆盖了市面上大部分的荧光基团，无需担心适配性和选择问题。

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naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统

法国Stilla Technologies公司naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。