文献速递|Origins高分辨率潜水电泳仪助力罕见肿瘤患者诊疗-------微卫星分析（microsatellite analysis）【SN Comprehensive Clinical Medicine】Intracranial Intracerebral Schwannoma: a Case Report and Review of the Literature案例报告：颅内脑神经鞘瘤颅内神经鞘瘤相对罕见，约占所有颅内肿瘤的8%，而脑实质内神经鞘瘤则是一种更为罕见的实体瘤，约占全部颅内神经鞘癌的1%。在回顾相关文献后，本文讨论了一名74岁女性的诊疗过程。患者有3周的头晕和恶心病史，且磁共振成像显示右侧颞部肿块伴局灶性水肿，结合组织病理学检查和免疫组织化学等辅助诊断，最终确诊为胶质母细胞瘤或转移瘤，对其进行整体全切，且患者术后恢复顺利。此外，研究人员有必要进一步分析该案例，以增强罕对见肿瘤的了解，用以改善患者的预后。期刊：SN Comprehensive Clinical Medicine发表年份：2023年样本：脑实质内神经鞘瘤患者应用：微卫星分析（microsatellite analysis）文中使用Origins高分辨率潜水电泳仪结合Spreadex gel EL800预制胶，进行22号染色体上4个微卫星位点检测，结果显示4个微卫星标记中至少有3个（D22S445、D22S684、D22S268）在肿瘤组织中存在杂合等位基因缺失（见下图）。基于PCR的微卫星分析结果图起源于Schwann细胞的神经鞘瘤通常会形成外周神经的髓鞘，见于颅神经和外周神经。然而，脑实质内神经鞘瘤是罕见的，故而引起了人们对其起源的猜测。已有各种理论对其进行解释，分为发育理论和非发育理论。发育理论认为，扭曲的胚胎发生是脑实质中Schwann细胞异常灶的来源，这可能涉及到发育的间充质基底细胞转化为Schwann细胞，多电位间充质因子分化，神经嵴细胞异位迁移，或有髓神经纤维错位等多方因素。相反，非发育理论认为，脑内Schwann细胞起源于实质小动脉的血管周围神经丛。神经鞘瘤患者常携带编码肿瘤抑制蛋白merlin的NF2基因常染色体显性突变。该蛋白的基因位于染色体22q.12.2上，靠近微卫星标记D22S268。通过微卫星分析和FISH，证明案例患者的肿瘤中存在22号染色体的体细胞杂合缺失，可能导致肿瘤的发展。总之，脑实质内神经鞘瘤是神经鞘瘤的一种罕见变体，以其脑内位置和非典型表现为特征。这些肿瘤的起源仍处于研究阶段，精准诊断需结合组织病理学特征和其他辅助诊断技术。虽然手术切除瘤体是首选的治疗方法，通常也会带来良好预后。然而，临床科研人员更需要进一步阐明这种罕见实体瘤的潜在机制，并寻找最佳治疗策略。原文：Henia, Mohamed, et al. "Intracranial Intracerebral Schwannoma: a Case Report and Review of the Literature." SN Comprehensive Clinical Medicine 5.1 (2023): 289.Origins高分辨率潜水电泳来自瑞士Elchrom Scientific公司，集成了整体的温度控制系统，即通过半导体元件和自动温度控制系统，精准控制电泳过程中的温度。同时整合循环泵系统，确保整个电泳区域温度和pH值恒定，形成均匀的、线性电场，这使得该设备具有高分辨率和高重复性，可广泛用于植物、微生物物种的分群和鉴定，以及疾病相关基因的研究等。环亚生物科技有限公司为该产品在中国区的独家代理商，自2011年成立以来，诚挚为国内用户提供专业安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，期待您的来电垂询。▼更多 Origins 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市松江区莘砖公路518号9幢502室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

近十年来，溶解微针阵列 （Dissolving microneedle arrays，dMNAs）用于透皮接种疫苗已取得极大发展。与传统的肌肉注射和皮下注射相比，dMNAs可诱导相似或更高水平的免疫反应，同时溶解在微针中的抗原疫苗更稳定，无需冷链运输，可自行完成接种，减少医疗系统压力。目前，dMNAs主要通过抗原和构成微针的聚合物混合，浇筑模型后离心的方式制备。然而，该制备过程中的微针阵列背板中，存在大量的抗原残留，成本的增加限制了dMNAs技术的应用。荷兰莱顿大学莱顿药物研究中心的一个研究团队于2021年在《International Journal of Pharmaceutics》杂志发表了一篇名为《Engineering of an automated nano-droplet dispensing system for fabrication of antigen-loaded dissolving microneedle arrays》的文章。在该研究中，研究团队使用自动纳升分液技术开发了一种新的dMNA制备工艺，不但保留了原有dMNA的优势，而且极大提升了抗原使用效率，大大降低了透皮接种疫苗成本。实验流程与结果1. 微针聚合物材料筛选以聚乙烯吡咯烷酮/聚乙二醇（PVP/PEG）、聚乙烯醇（PVA）、透明质酸 （HA）、羧甲基纤维素 （CMC）和明胶作为微针聚合物的候选材料，利用传统离心法制备dMNA，根据制备dMNA的热稳定性、脆性、粘度等因素筛选最为合适的聚合物候选材料。测试结果表明，除部分配方不适合制备微针（如 3.25% （w/v）的 PVP/PEG会导致微针过脆而断裂，50% （w/v） PVA的粘度太高无法浇筑在模具上）外，其余均进入后续实验。2. 离体人体皮肤的渗透实验和溶解实验利用离体人体皮肤，测试上述不同配方制备的dMNAs穿透效果和溶解效果。渗透实验结果表明，所有选定的dMNAs在人体腹部皮肤中都显示出优异的渗透效率，即使穿透效果最低的40% （w/v） 明胶 dMNAs，其穿透效果也达到了91.7,%，表明一个9微针的阵列中至少有8个针可以穿透皮肤。溶解实验结果表明，在透皮5分钟后，不同材质的dMNAs溶解效率有较大差别，其中溶解效果最好的是6.5% （w/v） PVP/PEG。溶解的越充分，疫苗利用率越高，因此选用该材料作为后续微针制备的标准配方。3. 利用纳升分液技术制备微针在选定聚合物候选材料后，研究团队搭建了一套全自动纳米分液装置，其核心部件——德国Biofluidix公司的Pipejet全自动纳升分液器。Pipejet可以转移小至2nL的液滴，将其加入14nl的微针腔体内。该系统以Pipejet为核心，配套质控相机、真空室、XYZ移动平台等设备搭建完成。（图1）图1 用于 dMNAs 制备的自动系统示意图（a）Pipejet纳升分液器，（b）点样器支架，（c）数码显微镜相机，（d）铝棒，（e）线性平台，（f）真空室，（g）真空泵，（h） 将PDMS模具放置在真空室的顶部（分配器和载物台均由软件Python操作）微针制备过程：1）将聚合物溶液浇筑在构建好的微针模具中，制成具有空腔的微针；2）将代替抗原的荧光标记卵清蛋白通过Pipejet加入微针空腔；3）利用离心和负压排除空气，制成微针。4. 效果测试离体人体的皮肤测试效果表明，新方法制备的微针在穿透率和溶解效率上，与已有方法即全程离心法制备的微针相似（图2）。但是，新方法的抗原只存在在微针处，且2nl抗原就可制备一个dMNAs，对比全程离心法需要90ul抗原，大大节省了抗原成本。图2.荧光标记的卵清蛋白负载微针的显微镜图像（a） 在皮肤穿透前含有 AF647 标记卵清蛋白的微针，（b） 100% 的皮肤穿透效率 （n = 4）， 表明微针具有足够的锋利度和机械强度，卵清蛋白的成功递送可从（c）穿透皮肤的荧光中显示，（d） 5 分钟和 （e） 15 分钟溶解后剩余微针的明场显微镜图像，f）溶解15分钟后剩余微针的荧光显微镜图像综上所述，纳升分液自动化制备的微针，其效果与传统离心法相似，但大大降低了抗原损耗和成本，可进入更大范围的工业推广。更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2021.120473Biofluidix是全球领先的研发制造高精度生物芯片点样和分液系统的生产厂家，不仅有体系化的点样分液平台，也提供模块化的皮升、纳升和微升分液装置，能够兼容第三方设备，实现精准点样和分液。广泛应用与生物、材料、航空、航天等多个领域。环亚生物科技有限公司作为德国Biofluidix公司在中国区的独家代理商，一直为国内用户提供专业的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往的支持越来越多的Biofluidix用户。▼更多 Biofluidix 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市松江区莘砖公路518号9幢502室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

文献速递|全自动DNA片段回收仪Blue Pippin助力废水中病原微生物监测【Frontiers in Public Health】Analysis of metatranscriptomic methods to enable wastewater-based biosurveillance of all infectious diseases宏转录组分析法实现废水中所有病原微生物监测新冠肺炎大流行期间，在不增加卫生保健系统负担下，通过检测废水中的病原微生物，可快速筛查大量人群，以监测病毒的变异和传播。目前的检测方法多是针对于一种或几种病原体的靶向检测，无法实现多种病原体的同时检测。因此，在废水监测传染病领域中亟需引入新技术，全面监测多种病原微生物的流行情况，在后疫情时代实现更有效的传染病监测和跟踪。期刊：Frontiers in Public Health发表年份：2023年样本：废水文库类型：宏转录组文库（200- 600 bp）宏转录组文库富集和精准回收：Sage Science公司Blue Pippin全自动DNA片段回收仪测序仪：Illumina NextSeq 500/550美国哥伦布巴特尔纪念研究所，依据俄亥俄州现有的冠状病毒废水监测网络（OCWMN），研究测试了多种靶向和非靶向的基因组测序分析方法，进行废水中病原微生物监测，以寻找最有效的方法，对传染病的发展趋势、已知病原体的爆发情况以及社区中正在上升的潜在新病原体或变种的检测和跟踪。文章建立了一套基于废水中微生物宏转录组的病原体监测分析方法。具体实施步骤：连续6周，OCWMN每周从10个位点获取RNA提取物，将其构建为相应宏转录组文库，之后在Illumina NextSeq和MinION测序仪上对总RNA进行测序，以鉴定存在的病原体种类。MinION长读长测序可以有效降低变异检测的复杂性。最后，测试了一种靶向杂交方法与废水RNA样品的兼容性。在宏转录组测序中，研究人员对比了磁珠法和Blue Pippin筛选和纯化目标DNA片段，实验结果表明使用磁珠法耗时长，效果差，并不能有效去除接头、引物等非目标片段。而使用Blue Pippin全自动DNA电泳回收仪，可自动化完成测序片段精准回收（200-600bp），完全去除杂带，使得测序结果聚焦目标区域，显著提升数据质量。基于废水的人类病原微生物监测，能够在疾病大流行之前对其进行监测和早期检测，从而能够快速做出反应，抑制致命细菌或病毒的传播。传统的宏基因组测序（如鸟枪宏基因组学或16S扩增子测序）无法检测样本中存在的RNA病毒，如SARS-CoV-2。现有的宏转录组分析方法能够检测真核生物、细菌和病毒病原体，可证明哪些基因正在表达。但现有的非靶向方法不能对具有小基因组的未知病原体以合理的成本进行大规模检测。因此，废水中病毒的监测仍然需要靶向测序，或在测序前进行病毒浓缩，去除所有细菌和真核细胞。此外，废水由完整细胞和细胞碎片组成。如果过滤和浓缩方法对病毒的富集程度不够，则无法通过非靶向测序进行一致的检测。本研究的数据提供了一个基线评估，证明废水是传染病流行病学的丰富资源，并确定了技术差距和潜在的解决方案，使公共卫生实验室能够使用这些资源来监测其地区的传染病流行情况。原文Spurbeck, Rachel R et al. “Analysis of metatranscriptomic methods to enable wastewater-based biosurveillance of all infectious diseases.” Frontiers in public health vol. 11 1145275. 22 Mar. 2023,美国Sage Science是全球领先的全自动DNA脉冲场电泳回收仪的生产厂家，拥有美国技术专利，各个型号产品可以高效完成不同长度范围的DNA片段的精准回收，广泛用于二代测序、三代测序以及多种分子生物学相关领域。环亚生物科技有限公司作为美国Sage Science公司在中国区的独家代理商，自2011年以来将Sage Science的产品线引入国内，一直为国内用户提供专业的全自动核酸片段回收仪的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往的支持越来越多的Sage Science用户。▼更多 Blue Pippin 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市松江区莘砖公路518号9幢502室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

神经组织工程（Neural tissue engineering ，NTE）是近些年新兴的一门学科，主要研究神经系统的修复和再生，其重要应用为构建具有良好组织相容性的仿生三维支架。这种支架能够提供细胞生长、粘附和分化环境，并促进神经组织功能的改善和修复。因此，研究人员需要开发并选择理想的、能够用于这类支架的神经组织工程材料。目前，天然或人工生物聚合材料，如聚乳酸（PLA）、聚己内酯（PCL），Filaflex（FF）、Flexdym（FD）和明胶甲基丙烯酸酯水凝胶（GelMA），凭借其优秀的生物组织相容性、机械性能，均有望应用于NTE中。西班牙格拉纳达大学组织工程系一个研究团队于今年在《 Polymers 》杂质发表了一篇名为《Comparison of Printable Biomaterials for Use in Neural Tissue Engineering: An In Vitro Characterization and In Vivo Biocompatibility Assessment》的文章。在该文章中，作者从打印性、机械性能、体外细胞与材料相互作用分析以及体内组织相容性四个角度，系统地比较了上述五种聚合物材料在NTE应用方面的优劣性，为将来相关生物材料开发提供了新的依据。实验流程：1. 生物材料制备采购即用型PLA、PCL， FF、FD长纤维，制备GelMA水凝胶溶液。2. 打印3D生物支架使用西班牙Regemat 3D公司的REG4Life生物3D打印机，将步骤1中的材料，打印成预先设计的4种不同类型的3D结构，用于后续测试（图1）。图1 待检测的3D支架和实验方案：使用REG4Life生物3D打印机制备4种不同结构的3D聚合物支架，分别用于印刷性测试、机械测试、体外细胞-生物材料相互作用分析和体内组织相容性实验3. 系统测试根据实验方案，从4个方面验证不同聚合物材料打印的3D生物支架性能（图1）。实验结果1. 打印性这五种生物材料都具有很好的打印效果，相比之下，PLA、FF和FD支架比PCL有更高的保真度和分辨率。而GelMA由于膨胀，导致打印的孔径比预先设定的值小（图2）。图2 a） PLA、（b） PCL、（c） FF、（d） FD 和 （e） GelMA 的打印效果图2. 机械性能拉伸实验结果表明，所有材料都满足NTE需求，不过在具体参数中各有优劣。在刚度方面，PLA较硬（325.89±30.33 MPa），而FD和GelMA较软（分别为0.41±0.02 MPa和0.09±0.02 MPa）。在形变能力方面，FD的材料更柔软，而PLA材料的形变能力最差。3. 体外细胞-生物材料相互作用分析通过比对生物材料和细胞体外共培养72h和7d后的细胞存活率等指标，作者发现在细胞培养72小时和7天后，接种PCL、FF和FD支架的细胞显代谢活性示出明显高于接种PLA和GelMA的细胞（p 4. 生物相容性实验生物材料皮下植入成年大鼠体内，10天后评估免疫原性反应。免疫组化结果证实了生物材料周围的局部宿主炎症反应，但没有核浸润或存在浆细胞介导的反应。 结论：受限于实验周期等因素，对于生物降解等指标还需进一步研究，但无论是机械性能还是细胞-生物材料组织相容性，REG4Life生物3D打印机所打印的4种生物材料都可以应用在NTE中，对NTE材料的开发具有很好的借鉴意义。更多资讯请访问文献全文链接：https:// doi.org/10.3390/polym16101426环亚生物科技有限公司作为西班牙REGEMAT 3D公司生物3D打印系列产品在中国区的独家代理商，一直为国内用户提供专业的生物3D打印系统的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往地支持越来越多的REGEMAT 3D用户。▼更多 Regemat 3D 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市松江区莘砖公路518号9幢502室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

轮状病毒，一种双链无包膜的RNA病毒，主要引起5岁以下儿童严重腹泻甚至死亡。目前，对该病毒感染尚无有效疗法，多采用疫苗接种以预防和控制感染、降低重症死亡率。活疫苗在防治方面取得进步，然而环境性肠病、营养不良、肠道微生物组等诸多因素的影响，疫苗效果仍存在较大差异。因此，需要不断探索和改进，开发一款效果更佳、毒副作用更小的灭活疫苗。北京大学协和医学院的一个研究团队于2023年在《Hum Vaccin Immunother》杂质发表了《Immunogenicity of inactivated rotavirus in rhesus monkey, and assessment of immunologic mechanisms》。在该文中，作者从云南省一例腹泻患儿的粪便中提取出轮状病毒并传代培养，连续培养16代后配制成1280、640和320 EU/mL三个浓度，通过离子交换层析、凝胶过滤等方法不断纯化浓缩，最后甲醛灭活为浓度98%的灭活轮状病毒，在此基础上制成灭活疫苗。将该疫苗接种在24只恒河猴中，分为2剂次免疫组和3剂次免疫组，每组内又分成四个亚组即对照组(0 EU)、160 EU、320 EU和640 EU。对免疫前和免疫后不同时间点，采集恒河猴的外周血进行抗体滴度检测、ELISpot实验和PBMC基因谱分析。同时， 利用法国Innopsys公司的Innoscan 300（现新型号InnoScan710）芯片扫描仪，检测灭活疫苗的免疫应答引起的细胞因子反应。对恒河猴血清不同时间点的检测，研究人员发现不同免疫方案(2剂次和3剂次)的体液免疫结果中：1剂次IRV免疫后血清中和抗体、IgG抗体和IgA抗体滴度均较低.第2次注射后，3种抗体测定值都升高。而3剂次都接种的免疫组的免疫效果优于2剂次免疫组。该结果说明，中和抗体、IgG和IgA水平与IRV免疫剂量相关，尤其是血清IgA抗体水平。Innoscan 300分析细胞因子微阵列芯片的实验结果表明，与免疫前的血液样本相比，血清中TNFα水平下调了0.67倍、IL-6上调了1.21倍、IL-5上调了1.25倍、IL-4下调了0.67倍、IL-1β上调了1.02倍、IL-16下调了0.69倍、IL-15下调了0.87倍、IL-12p70上调了5.22倍、IFN-γ上调了1.93倍、GM-CSF下调了0.82倍（见图1）。结合后续的GO分析和pathway分析，该结果说明，恒河猴首次免疫后5天，血清中IL-12p70和IFN-γ表达升高，IL-4和IL-16表达降低。IRV免疫可以刺激IL-12的表达和分泌，与轮状病毒感染的效果相似。此外，轮状病毒灭活疫苗免疫还能刺激活化T细胞增殖，激活CD4+ T细胞向Th0细胞分化，促进Th0细胞向Th1细胞分化，并分泌IFN-γ。分泌的细胞因子可直接对抗病毒，协助B细胞、CD8+ T淋巴细胞和巨噬细胞一起参与机体的免疫应答。图1 通过IFN-γ ELISPOT检测和细胞因子阵列对轮状病毒灭活疫苗接种后的细胞免疫分析(a)最后一次免疫接种后第2周猴IFN-γ应答情况;(b)血浆细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-5、IL-4、IL-1β、IL-16、IL-15、IL-12p70、IFN-γ和GM-CSF)通过innoscan 300定量分析(*:p基于上述结果，作者得出结论——轮状病毒灭活疫苗免疫可诱导恒河猴产生体液和细胞免疫应答。中和抗体、IgG和IgA抗体水平与免疫剂量有关，尤其是血清IgA抗体。在恒河猴中进行的免疫原性评价结果为今后的临床试验提供了参考依据。更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1080/21645515.2023.2189598Innopsys 成立于1999年。总部位于法国，一直致力于生物医学领域相关仪器和软件的自主研发和生产。Innoscan系列扫描仪，采用先进的共聚焦PMT检测器和多激光扫描光路，可以同时进行多通道荧光检测。不仅有效降低了荧光光漂白现象以及信号损失，还可以有效缩短扫描时间。在基因组和蛋白组表达，基因突变，SNP检测，CGH，细菌病毒检测，肿瘤特异性标志筛查，病理组织筛查等方面都有非常广泛的应用。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为Innoscan大中华区代理商，负责Innoscan产品大中华区的营销和售后支持。▼更多 Innopsys 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市松江区莘砖公路518号9幢502室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

由南京农业大学前沿交叉研究院主办，Oxford Nanopore Technologie、宝诚生物、环亚生物和墨卓生物联合承办的“纳米孔测序技术应用专题学术研讨会-南京站”，于2024年6月21日在南农翰苑宾馆顺利举行，吸引相关人士踊跃参与。本次研讨会到场一百多位嘉宾，众高校教授与公司技术大咖共同探讨三代纳米孔测序最新技术，以及上下游相关产品联合使用的解决方案。会上，环亚生物资深产品经理滕鹏为与会者作了《长片段文库制备助力三代测序应用》的专题报告，介绍了Sage Science全自动DNA片段回收仪助力ONT纳米孔测序中长片段分选回收的解决方案，引起众多专家学者的兴趣和探讨。《长片段文库制备助力三代测序应用》滕鹏 资深产品经理 Sage Science长片段分选产品应用专家纳米孔测序技术具有超长读长的技术优势，在基因组组装、RNA直接测序、病原菌监测以及疾病变异与致病机理方面，具有重要的应用价值。滕鹏经理为现场的各位专家学者带来了Sage Science全自动DNA片段回收仪，该设备能够实现特定长度片段的筛选与收集，更好地富集特定长片段或传统方法难以回收的长片段，以充分发挥纳米孔长读长测序的性能。滕经理详细介绍了该平台的回收原理、产品特点和最新技术动态等，并分享了与纳米孔测序联用的最新客户案例，重点内容包括长片段回收的重要性、HLS-CATCH应用、病原菌和疾病检测解决方案等。 专家学者了解Sage Science长片段分选设备前期回顾—厦门站：2024年5月24日，由厦门大学药学院主办，Oxford NanoporeTechnologie、宝诚生物、环亚生物和墨卓生物联合承办的“纳米孔测序技术应用专题学术研讨会-厦门站”。《长片段文库制备助力三代测序应用》滕鹏 资深产品经理 Sage Science长片段分选产品应用专家 专家学者了解Sage Science长片段分选设备美国Sage Science是全球领先的全自动DNA脉冲场电泳回收仪的生产厂家，拥有美国技术专利，各个型号产品可以高效完成不同长度范围的DNA片段的精准回收，广泛用于二代测序、三代测序以及多种分子生物学相关领域。环亚生物科技有限公司作为美国Sage Science公司在中国区的独家代理商，自2011年以来将Sage Science的产品线引入国内，一直为国内用户提供专业的全自动核酸片段回收仪的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往的支持越来越多的Sage Science用户。▼更多产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市松江区莘砖公路518号9幢502室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

软组织肉瘤（soft-tissue sarcoma ，STS），是一种高发在结缔组织的恶性肿瘤，遗传异质性复杂、隐匿性强、局部复发率高、转移率高，多采用放化疗结合特定靶点和生物标志物的靶向治疗改善其预后和疗效。软组织肉瘤肿瘤生物学的关键特征之一是细胞周期S期的无序提前。S期激酶相关蛋白-2（Skp2）是S期提前的关键调节因子，其高表达与软组织肉瘤的预后较差有关。已有研究发现， Skp2蛋白的稳定性和活性与肿瘤的发展有关。Skp2在细胞内部的转运过程决定其亚细胞定位和功能开启，但目前负责Skp2核质转运的蛋白质尚未明确。染色体凝聚调节蛋白1（RCC1）在调控细胞有丝分裂和蛋白质核质转运方面扮演着关键角色，其高表达与肿瘤细胞周期进展的提前和增殖能力的提升正相关，但它是否参与调节Skp2的核质转运，以及这一过程如何影响软组织肉瘤的发展仍有待研究。福州大学的吕鹏、卢钟磊等人通过敲低（knockdown）RCC1的方法对RCC1与Skp2的关系，及其在软组织肉瘤细胞周期和进展中的功能进行研究，成果以“Targeting RCC1 to block the human soft-tissue sarcoma by disrupting nucleo-cytoplasmic trafficking of Skp2”为题，于2024年4月发表在《Cell Death and Disease》杂志上。研究发现， Skp2是RCC1在STS中的下游靶标，RCC1 可以直接与 Skp2 结合，并可能作为STS 细胞中Skp2 核胞质转运的货物蛋白。通过诱导Skp2的细胞质滞留和稳定，以促进STS细胞的细胞周期转变和增殖。RCC1的敲低显著抑制了STS细胞的周期进展、增殖和迁移，抑制体内STS的生长，从而在STS中发挥抑癌作用。同时，靶向抑制RCC1可以恢复对免疫疗法和化疗的敏感性。因此，RCC1可能是改善临床STS治疗的一个有希望的靶点，可能具有与一线抗癌药物联合治疗的潜力。本研究采用德国innoME公司的zenCELL owl活细胞动态成像及分析系统，动态监测SW872和 HTC75两种STS细胞系在RCC1敲低后的增殖变化过程（图1和图2）。图1 SW872细胞在RCC1敲低后的生长状态图2 HTC75细胞在RCC1敲低后的生长状态德国InnoME公司自主研发和生产的zenCELL owl活细胞动态成像及分析系统，基于非标记、非侵入方法，原位记录细胞实时生长和定量的分析数据。zenCELL owl体积小巧，耐温耐湿，可在细胞培养箱内长时间连续工作；通过24个显微成像镜头，对24个视野进行连续的动态监测和图像获取。zenCELL owl为用户提供高质量图像、视频、统计学曲线和定量数据，实现细胞增殖／增殖抑制、细胞培养质控／培养优化、迁移／侵袭等诸多活细胞动态过程的监测。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，不断把国外顶级的创新产品引入中国。环亚生物具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为zenCELL owl大中华区独家代理商，负责zenCELL owl产品大中华区的营销和售后支持。更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1038/s41419-024-06629-2▼更多产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

文献速递|M2生物芯片点样仪助力抗体共价偶联过程及流动特性研究【Preparative Biochemistry & Biotechnology】Study on covalent coupling process and flow characteristics of antibody on the surface of immunoassay microfluidic chip抗体在免疫分析微流控芯片上偶联特性以及流动特性分析微流控芯片集成了样品反应、处理和分离整个过程，与传统检测方式相比，具有体积小、试剂消耗少、检测时间短、操作方便等诸多特点。因此，被广泛应用在分子诊断和即时检测(POCT)领域。微流控芯片的免疫检测反应是一个动态过程，需要将反应物持续运送到固相载体表面。目前，大多研究集中在免疫反应的底物上，而对反应物的流量以及流速等特性的研究十分有限。如何结合微流控芯片内部结构得到最佳流速的免疫检测，成为芯片表面修饰技术急需解决的问题之一。本文研究了几种聚苯乙烯亚基表面修饰的工艺，用于阐明抗体固定与流速对免疫反应效果的影响。抗体采用共价结合的方式进行固定，基于酶联免疫吸附原理进行荧光定量检测及免疫应答过程的评估。另外，以降钙素原为例，系统地研究了抗体共价偶联过程和流动特性对免疫检测结果的影响，为免疫检测微流控芯片的结构设计提供理论基础。作者单位：清华大学精密/超精密制造装备与控制重点实验室，清华大学天津先进装备研究院期刊：Preparative Biochemistry & Biotechnology 发表年份：2021年样本：蛋白抗体芯片类型：自制微流控芯片芯片点样仪：M2公司iTWO 200生物芯片点样仪芯片设计和免疫反应原理如图1所示：使用德国M2生物芯片点样仪将标记物(荧光微球)点印在反应区，特异性抗体点印在测试区(仅与感兴趣的抗原结合)，非特异性抗体点印在对照区(只与标记物或抗原结合)。当含有抗原的血液流经反应区时，抗原在反应区与标记物结合，通过检测区后，标记抗原被特异性抗体捕获，形成“抗体-抗原-抗体免疫复合物”，从而产生荧光，当血液流入控制区域时非特异性抗体捕获未结合的标记抗体。最后使用荧光定量分析仪进行荧光信号分析。结果显示：对血液中降钙素原检测过程中，研究人员发现平均流速约为0.2 mm/s时免疫反应信号最强；与氨基和醛基修饰相比，环氧基修饰的芯片抗体免疫效率最高，对于小分子基团修饰的芯片，引入聚L -赖氨酸可以增加抗体的固定数量。原文链接：https://doi.org/10.1080/10826068.2021.1958344M2-Automation成立于2003年，总部位于德国柏林，是一家创新技术开发公司，专注于微量/超微量、非接触式自动化移液和生物芯片点样技术。仪器准确性、精确性高，重复性好，全程自动化点样，同时可根据客户需求进行定制。▼更多产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

文献速递：Pippin HT全自动大片段DNA脉冲场电泳回收仪联合Pacbio和ONT，用于长读长测序优势研究Utility of long-read sequencing for All of Us【Nature Communications】长读长测序对AoU计划的效用期刊：Nature Communications（IF：16.6）发表年份：2024年1月物种：人文库类型：基因组测序文库文库富集和精准回收：Sage Science公司Pippin HT全自动大片段DNA脉冲场电泳回收仪基因组测序：Pacbio Sequel IIe / ONT PromethION三代测序仪“All of Us（AoU）”计划对超过一百万名来自不同种族背景的美国人，进行基因组测序，以改善个性化医疗服务。最近的一项技术试验即HapMap项目，研究人员对其一小部分样本和代表八个数据集的两个AoU对照样本，比较了传统短读长测序和长读长测序的性能差异。结果揭示，在复杂医学相关基因的测序准确率，尤其是基因覆盖度和致病变异体的鉴定方面，这两种技术具有显著差异。在大型群体分析项目中，如果利用低覆盖度测序的优势，需要一定程度增加样本数量。而长读长测序技术，特别是PacBio的HiFi测序技术，在检测小型和大型变异方面都产生了准确的结果。同时，研究者提出了一个基于云的流程，通过大规模优化单核苷酸变异（SNV）、插入/删除（indel）和结构变异（SV）的数据调用，优化长读长测序结果的分析。这些研究成果可极大优化并加快整个 AoU项目进程。文中在长读长测序实验流程中，使用Pippin HT全自动大片段DNA脉冲场电泳回收仪精准回收15-22kb的目标片段，然后按照Pacbio和ONT建库流程建库后上机测序。结论相比于短读长测序技术，长读长测序技术在识别单核苷酸变异（SNVs）和结构变异（SVs）方面展示出更高的准确性，尤其适用于分析那些复杂、重复的医学相关基因。原文Mahmoud, M., Huang, Y., Garimella, K. et al. Utility of long-read sequencing for All of Us. Nat Commun 15, 837 (2024). 美国Sage Science是全球领先的全自动DNA脉冲场电泳回收仪的生产厂家，拥有美国技术专利，各个型号产品可以高效完成不同长度范围的DNA片段的精准回收，广泛用于二代测序、三代测序以及多种分子生物学相关领域。环亚生物科技有限公司作为美国Sage Science公司在中国区的独家代理商，自2011年以来将Sage Science的产品线引入国内，一直为国内用户提供专业的全自动核酸片段回收仪的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往的支持越来越多的Sage Science用户。▼更多Sage Science产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

细胞迁移作为基本的生物学过程，在机体的生长发育、体内平衡和疾病发生发展中起着重要作用。异常的细胞迁移可导致相关功能意外中断，并与畸形、自身免疫性疾病和癌症转移等疾病关联。因此，长时间连续跟踪和观察细胞集体的迁移运动及各种细胞的形态变化，有效识别和分析异常的细胞行为，助力于疾病研究和治疗。然而单个细胞具有多样性和动态性形状，目前对细胞集体的连续追踪和识别仍然是巨大挑战。细胞追踪方法早期专为特定应用而设计，如对圆形细胞量身定制，或进行荧光标记，一定程度上限制了应用类型或影响活细胞的内在行为。随着计算机科学和生物图像信息学的不断发展，细胞追踪方法取得了很大进步。华东理工大学万永菁教授和南京大学龙亿涛教授联合开发了一种基于深度学习的细胞跟踪算法HFM-Tracker（Hybrid Feature Matching Tracker），准确捕获图像序列中的动态细胞行为。研究成果以“HFM-Tracker: a cell tracking algorithm based on hybrid feature matching”为题于2024年3月发表在英国皇家化学学会期刊《Analyst》上。该文入选“《Analyst》2024热门文章（Analyst HOT Articles 2024）”和“150 周年论文集：电化学和电分析方法（150th Anniversary Collection: Electrochemistry and Electroanalytical Approaches）”。本研究采用德国innoME公司的zenCELL owl活细胞动态成像及分析系统，对培养的MCF-7细胞（人类乳腺癌细胞系）进行实时动态的图像采集，每隔10分钟采集一次，每组图像采集144幅延时图像（2588×1942像素），总记录时间为24小时。从采集到的图像中选择70幅用于HFM-Tracker算法深度学习的训练、验证和测试等整个开发过程（图1和图2）。图1 HFM-Tracker算法流程示意图（zenCELL owl获取追踪细胞的图像）图2 HFM-Tracker算法追踪结果（zenCELL owl获取追踪细胞的延时图像）HFM-Tracker算法在细胞检测和追踪方面皆表现优越，实现了75%的多目标追踪准确性（Multiple Object Tracking Accuracy，已考虑轨迹丢失、假阳性检测、漏检 和轨迹错误四个方面的误差）和65%的IDF1评分（多目标跟踪对象的身份准确性指标，已考虑检测和关联准确性）。HFM-Tracker算法提供了细胞形态和迁移特征的定量分析，有助于理解复杂多样的细胞迁移过程。另外，在迁移相关的生物过程中，如何阐明异常细胞行为间的复杂相互作用，该算法也可以起到重要作用，进而在生化和临床领域发挥潜力。德国InnoME公司自主研发和生产的zenCELL owl活细胞动态成像及分析系统，基于非标记、非侵入方法，原位记录细胞实时生长和定量的分析数据。zenCELL owl体积小巧，耐温耐湿，可在细胞培养箱内长时间连续工作；通过24个显微成像镜头，对24个视野进行连续的动态监测和图像获取。zenCELL owl为用户提供高质量图像、视频、统计学曲线和定量数据，实现细胞增殖／增殖抑制、细胞培养质控／培养优化、迁移／侵袭等诸多活细胞动态过程的监测。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，不断把国外顶级的创新产品引入中国。环亚生物具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为zenCELL owl大中华区独家代理商，负责zenCELL owl产品大中华区的营销和售后支持。更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1039/d4an00199k▼更zenCELL owl详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

近年来，3D肿瘤模型已成为癌症生物学、药物开发和医学研究的新工具。常见的3D肿瘤模型包括肿瘤球、类器官、微流体装置等。肿瘤球和类器官是最常用的两种模型，基于不同的细胞来源和制备方案，模拟肿瘤微环境如结构组织、细胞分层、营养和氧气梯度等特征。然而，这些方法仍存在不足，比如构建初期的肿瘤模型，其细胞密度明显低于天然组织，无法真实模拟肿瘤细胞与基质细胞的相互作用；多需要等待几天甚至几周，后期模型的细胞密度才能与天然组织相当，增加了研究周期。美国印第安纳州的西拉斐特普渡大学机械工程学院于2023年在《Materials Today Advances》发表该文章，研究开发了一种新的3D肿瘤模型构建方法。利用该方法能够快速制备3D肿瘤模型，细胞密度和生理特性与自然组织类似，同时还可调整墨水成分及打印条件构建不同类型的肿瘤模型。实验方法：1.墨水制备将肿瘤细胞与一种含有I 型大鼠尾胶原蛋白和聚（N-异丙基丙烯酰胺-共甲基丙烯酸甲酯）的互渗透聚合物油墨混合，构成含有肿瘤细胞的墨水。再将肿瘤基质组织最主要成分的癌症相关成纤维细胞（ cancer-associated fibroblasts ，CAFs）用同样方法制成含有CAFs的墨水。2.喷墨打印德国Biofluidix公司的纳升级压电式点样器Pipejet安装在载物台控制器上，将上述两种墨水用Pipejet点样器以线阵列的方式点印在玻璃孔板中并在37℃固化。固化完成后加入细胞培养基进行培养。（图1）图1 喷墨打印过程的示意图以及组织压缩应力假设机理3.组织学观察取不同时间点的肿瘤模型做免疫荧光染色，通过共聚焦显微镜观察不同时间点肿瘤模型的变化。实验结果常规肿瘤球形成验证已有研究表明，相比于肿瘤细胞，CAF细胞的收缩性更强，因此预期加入培养基后，CAF细胞将收缩得更为紧密，而肿瘤细胞包裹在其周围。最终形成基质细胞在内、肿瘤细胞在外侧的结构（图1）。在实际实验中，如预期所示，随着时间变化，逐渐形成CAF细胞为致密核心，肿瘤细胞将其完全包裹的肿瘤球（图2，A），且在接下来两个月内持续稳定存在（图2，D）。图2 喷墨打印快速形成肿瘤球（A）主动收缩，0–24 小时延时图像（红色通道：肿瘤细胞，绿色通道：CAF细胞）;（B）量化体积应变;（C）细胞密度和胶原浓度的定量;（D）肿瘤球在1天-2个月不同时期的明场和荧光图像（比例尺：500μm）。通过分析延时图像中细胞占用的面积，可以计算出肿瘤球的体积以及响应的细胞密度（图2 ，B-C）。结果显示，在培养24小时后，3D 类肿瘤细胞密度已达到 108个细胞每平方厘米，接近天然组织中肿瘤的细胞密度。说明这种方法可以快速形成类似天然组织细胞密度的肿瘤球。其他类型肿瘤球形成验证在上述实验基础上，作者改变打印方式、调整打印温度等，又成功构建了具有3D腔体形状的肿瘤球，以及肿瘤细胞在内侧、CAF细胞在外侧的肿瘤球。实验结论利用Pipejet喷墨打印方法制备的肿瘤球，可在短时间内形成类似天然组织的细胞密度，大大提升实验效率，还可推广到其他不同类型的细胞和肿瘤球模型，有广泛的应用空间。更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1016/j.mtadv.2023.100408Biofluidix是全球领先的研发制造高精度生物芯片点样和分液系统的生产厂家，不仅有体系化的点样分液平台，也提供模块化的皮升、纳升和微升分液装置，能够兼容第三方设备，实现精准点样和分液。广泛应用与生物、材料、航空、航天等多个领域。环亚生物科技有限公司作为德国Biofluidix公司在中国区的独家代理商，一直为国内用户提供专业的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往的支持越来越多的Biofluidix用户。▼更多 Biofluidix 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种全身性的自身免疫性疾病,以炎症细胞浸润和滑膜细胞增生为特征。该疾病导致软骨和骨骼损伤、关节畸形甚至残疾，但现有治疗药物的毒性高、传递效率低，无法有效阻止其发展，因此仍以控制病情、减少致残率和改善患者的生活质量为主。铁死亡是一种铁依赖性的新型细胞程序性死亡方式。在肿瘤、RA等炎症微环境中，过氧化氢(H2O2)富集，可通过Fe2+介导的费托反应催化生成高毒性的•OH。•OH诱导细胞内脂质过氧化，继而损伤浸润的炎症细胞和增殖的成纤维细胞样滑膜细胞，因此在RA治疗中铁死亡具有很大的研究潜力。2023年12月来自江苏大学药学院及附属医院的研究团队在《Materials Today Bio》上发表一种治疗RA的新方法：用工程巨噬细胞作为载体，递送Fe3O4和柳氮磺胺吡啶（sulfasalazine，SSZ），用于RA的铁死亡和光热疗法。Fe3O4是一种磁性纳米材料，可以通过外加磁场实现对巨噬细胞的定向操控。SSZ是一种常用的抗风湿药物，具有抗炎和免疫调节作用。研究者利用巨噬细胞固有的炎症趋化性和对纳米颗粒的保护作用，将Fe3O4和SSZ有效运送到RA组织中，在近红外光（NIR）照射下产生热量，破坏巨噬细胞，释放Fe3O4纳米颗粒和SSZ，诱导细胞铁死亡。铁死亡和光热效应有效地破坏了驻留的炎症细胞和增殖的滑膜，对RA有明显的治疗作用（如Fig 1所示）。Fig 1.  巨噬细胞介导的RA铁死亡和光热治疗药物递送示意图文章中使用荧光染料FITC和DOX标记Fe3O4纳米颗粒（NPs）与巨噬细胞共孵育，使用Orflo Technologies公司的快速流式细胞仪Moxi Go II，定量分析巨噬细胞对FITC标记Fe3O4的摄取时间和浓度摸索（Fig 2），在4h和40μg/mL为最佳孵育时间和浓度；定量分析DOX标记Fe3O4 NPs的细胞摄取情况（Fig 3）。结果显示，DOX标记的Fe3O4 NPs在巨噬细胞中的摄取能力强于对游离DOX的摄取。Fig 2. (c) Fe3O4-FITC孵育不同时间(0.5、1、2、4 h)后巨噬细胞的流式分析(d) FITC浓度为10、20、40、80μg/mL时，Fe3O4-FITC孵育后巨噬细胞的流式分析Fig 3 (a)培养4小时后，巨噬细胞内化游离DOX或Fe3O4-DOX NPs的流式检测(b)流式细胞术定量分析游离DOX和Fe3O4-DOX的平均荧光强度综上所述，本文开发了一种新的基于巨噬细胞的靶向纳米颗粒递送平台，Fe3O4-SZZ能被巨噬细胞有效吸收，增加SZZ负载能力，为炎症药物递送提供了一种策略，也证明了铁死亡和光热治疗联合治疗在RA治疗方面的巨大潜力。Moxi GO II快速流式细胞仪Moxi GO II快速流式细胞仪，采用库尔特原理进行细胞计数和粒径测量，同时采用488nm激光光源，结合两个PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根据需要更换），进行细胞活率、细胞凋亡、转染效率、活性氧簇、线粒体膜电位等常规流式检测。仪器设计小巧轻便，无需预热，开机即用，预设程序，触屏操控，运行后10秒即可给出测试结果，使用后也无需清洁维护。无论是经验丰富的流式专家，还是初试身手的实验小白，Moxi Go II都可以助您轻松完成实验。美国Orflo Technologies公司是一家非常专业的细胞分析仪器研发和制造企业，拥有多项专利技术，产品以库尔特原理的高精细胞计数仪和超快流式细胞仪为主。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，不断把国外顶级的创新产品引入中国。环亚生物具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。作为Orflo Technologies中国地区独家代理，环亚生物科技有限公司全权负责Orflo Technologies产品在中国地区的推广、销售，为广大用户提供专业的技术咨询和产品服务。文献全文网页链接：https://doi.org/10.1016/j.mtbio.2023.100925▼更多 Moxi Go II 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

Arrayjet是一家领先的喷墨式液体处理方案供应商，2016年Arrayjet公司开发了一种独特的治疗性抗体筛选方法，即ArrayPlexTM药物筛选平台，对功能性抗体进行高通量筛选，该过程基于Arrayjet独特的生物喷墨打印技术速度快和通量高的特点，每10天制备约200万个样品点，既不需要表征抗体，也不需要表征靶标，用以研究配体与靶标的相互作用、发现抗体-药物偶联物、制备抗体库等等。该平台除了在抗体和裂解物文库之间进行筛选，还可兼容其他的样品类型，例如小分子文库、蛋白文库、核酸文库等。目前，ArrayPlexTM药物筛选平台已被美国生物技术公司Immunome, Inc.选中，扩展其内部高通量筛选的工具，Immunome使用患者B细胞产生的大量杂交瘤抗体文库，对其进行筛选，以发现癌症靶向治疗的新方法。目前，针对数百种癌症组织裂解物，ArrayJet已经筛选到数十万种相关抗体，同时也在不断完善检测方法，来推进发现癌症潜在治疗靶点的进程。抗体筛选流程（具体如图1）：步骤1点印捕获样本(例如：组织、细胞裂解物)--使用Arrayjet Mercury仪器点印到功能化玻璃载玻片上进行固定。步骤2点印待测样本(例如：抗体或杂交瘤抗体文库)--通过Arrayjet Mercury仪器进行微阵列点上点样，未结合的待测样品可通过清洗去除。步骤3信号检测--通过荧光标记的检测抗体对待测样本进行识别，同时和对照组相比消除假阳性结果，阳性抗体后续进一步表征。Arrayjet位于英国爱丁堡，专注于提供生物芯片应用领域的解决方案及服务。自2000年公司成立即致力于开发新型生物样品喷点方案–喷墨式液体处理平台，该系统于2006年上市，目前用户遍布全球27个国家。Mercury系列产品采用独特的飞行喷墨点样技术实现行业第一的快速、非接触式微量液体处理。同时上万种不同样品可以进行快速点样，专利的上样模块配合高通量的点样喷头保障您的点样操作快速、无污染，更低的上样体积可有效减少样品损失，使您的珍贵样品物尽其用。▼更多 ArrayJet 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

【Microorganisms】Spatial and Temporal Variability in Prevalence Rates of Members of the Borrelia burgdorferi Species Complex in Ixodes ricinus Ticks in Urban, Agricultural and Sylvatic Habitats in Slovakia在斯洛伐克城市、农业和洞穴栖息地中，蓖麻硬蜱对伯氏疏螺旋体复合体感染率的时空特异性莱姆病(Lyme borreliosis ，LB)是欧洲最常见的蜱传人类感染性疾病，近几十年来发病率不断上升。该病以蜱为媒介，由伯氏疏螺旋体(Bbsl)所致的自然疫源性疾病。在欧洲全域，特别是斯洛伐克，已观察到大量的蓖麻硬蜱种群，成为病原体伯氏疏螺旋体(Bbsl)复合体的主要媒介。了解感染性疾病的传播途径对实施有效的控制措施至关重要。本研究聚焦于斯洛伐克，从代表城市/郊区、自然和农业栖息地的三个地点寻找感染伯氏疏螺旋体(Bbsl)的蓖麻硬蜱种群，调查Bbsl的感染率及其物种多样性的时空特异性。在布拉迪斯拉发镇(城市/郊区栖息地)、小喀尔巴阡山脉(自然栖息地)和斯洛伐克东部农业栖息地，通过拖拽植被采集蓖麻硬蜱若虫和成虫。用聚合酶链式反应检测蜱体内是否存在疏螺旋体，并用限制性片段长度多态性（RFLP）鉴定Bbsl种群。用反向线性印迹法（Reverse Line Blotting ，RLB）鉴定共感染蜱中的伯氏疏螺旋体类型，从而获得不同环境中蓖麻硬蜱携带伯氏疏螺旋体的真实情况。期刊：Microorganisms发表年份：2023年样本：蓖麻硬蜱（Ixodes ricinus Ticks）应用：限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism ，RFLP）文中使用限制性片段长度多态性（RFLP）分析鉴定Bbsl种群类型，具体通过Origins高分辨率潜水电泳仪结合Spreadex gel EL300 mini预制胶，以核酸片段分布图谱确定Bbsl种群及亚种。不同环境类型中，蓖麻硬蜱若虫和成虫对伯氏疏螺旋体的感染率在探索的栖息地中，蜱虫感染伯氏疏螺旋体在空间和时间上存在显著差异。总感染率最低的是城市/郊区栖息地，而自然和农业栖息地的感染率较高。RFLP在每个环境类型中检测到6种Bbsl，包括B. burgdorferi sensu stricto (s.s.)， B. afzelii， B. garinii， B. valaisiana，B. lusitaniae 和 B. spielmanii。其中，共感染占总感染数量的3%。通过RLB和测序鉴定出B. kurtenbachii与B. burgdorferi s.s，B. garinii 和B. valaisiana存在共感染的情况。这是首次在斯洛伐克和欧洲的蓖麻硬蜱调研中发现B.kurtenbachii。同时在若虫和成虫之间、不同年份之间以及不同生物环境类型之间，发现了Bbsl物种比例的变化。在城市栖息地相对距离较短的地点之间，Bbsl物种的流行模式和比例也存在空间差异。伯氏疏螺旋体感染率和分布的时空特异性可能与当地环境条件和脊椎动物宿主谱有关。由于存在对人类致病的伯氏疏螺旋体类型，所有探索的地点都可以被列为具有高流行病学风险的地区。原文：Kazimírová, Mária, et al. "Spatial and Temporal Variability in Prevalence Rates of Members of the Borrelia burgdorferi Species Complex in Ixodes ricinus Ticks in Urban, Agricultural and Sylvatic Habitats in Slovakia." Microorganisms 11.7 (2023): 1666.Origins高分辨率潜水电泳来自奥地利AL-Labortechnik公司，集成了整体的温度控制系统，即通过半导体元件和自动温度控制系统，精准控制电泳过程中的温度。同时整合循环泵系统，确保整个电泳区域温度和pH值恒定，形成均匀的、线性电场，这使得该设备具有高分辨率和高重复性，可广泛用于植物、微生物物种的分群和鉴定，以及疾病相关基因的研究等。环亚生物科技有限公司为该产品在中国区的独家代理商，自2011年成立以来，诚挚为国内用户提供专业安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，期待您的来电垂询。▼更多 Origins 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

在这个科技日新月异的时代，生物医学领域正以前所未有的速度发展。2024年，我们有幸参加一年一度的CISILE中国科仪展，一个汇聚全球顶尖科技与创新的平台。CISILE 2024吸引了来自世界各地的科研机构、生物技术公司和医疗器械制造商，为您提供一个国际化的交流与合作机会。【环亚生物】作为全国性总代理商，以产品营销为核心，持续不断地引进国际上创新的科研仪器设备，配备专业的产品管理团队和全国渠道销售团队。【产品亮点】在2024年的CISILE中国科仪展上，我们公司代理的法国Innopsys激光共聚焦荧光定量组织切片正式亮相、这一突破性的产品将为生物医学研究带来里程碑性的改变。【功能用途】1.组织切片扫描：脑组织切片、肿瘤组织切片等组织切片多重荧光染色扫描2.生物芯片扫描：基因芯片、蛋白芯片、糖芯片、细胞芯片、组织芯片等生物芯片扫描【产品优势】1.4荧光通道同时扫描：四组独立的激光器（375nm、488nm、561nm、640nm）和PMT检测器，用于荧光玻片多重扫描2.激光共聚焦扫描：有效消除背景荧光，提高信噪比3.整片一次扫描，无需拼接：激光共聚焦逐点扫描技术，无区域分割、无后期拼接，整体一次成像，图片高度还原用于精准的分析定量4.逐点扫描，无需阴影校正：逐点扫描技术保证每一点的亮度保持一致，无需阴影校正5.扫描速度快：17分钟完成18*18mm面积的四色扫描6.扫描通量高：可选高通量型号（内置自动载片架），一次完成1-24张玻片扫描今后我们诚挚邀请您与我们一同探讨合作的可能性，共同开拓市场，实现共赢。 会议展出的仪器：Blue pippin 全自动DNA脉冲场回收仪DNA片段分选回收领域的标配设备和金标准脉冲场分选回收大片段DNA二代测序文库制备用于三代测序长片段文库制备，也可用于常规分子生物学PCR片段、酶切片段回收超万篇学术文献引用Ocus 便携式数字病理切片扫描仪目前全球最小巧的玻片扫描系统扫描速度快、成像清晰、色彩还原好系统极致优化，无线操控，安全稳定Innoquant激光共聚焦荧光定量组织切片扫描仪快速、高效：4组独立检测通道无需阴影校正：激光光源和PMT检测器图像高清：激光共聚焦，自动对焦和定焦无需拼接：激光逐点扫描，无区域分割精准定量分析：适配各种分析软件智能成像：人工操作少，软件简洁zenCELL owl 活细胞动态成像及分析系统在培养箱内，对细胞进行长时间非侵入式实时监测24组镜头和光源，同步监测、分组对比、平行分析呈现图片、视频、数据曲线用于细胞毒理、药化、划痕迁移、类器官、3D培养等的活细胞动态监测Blotcycler 全自动蛋白质印迹杂交系统自动化完成抗体孵育、洗膜的过程，下一步即可进行曝光检测清洗更干净，降低背景，提高了信噪比和相对灵敏度Orflo 快速流式细胞仪库尔特原理，配合荧光方法，对细胞进行快速、精准的计数和粒径测量多维度的数据结果：细胞计数+细胞粒径+细胞活性分析+流式分析支持高上样量，数据更有代表性，操作简单，10秒出结果▼更产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com ▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

【Frontiers in Cellular Neuroscience】Inhibition of phospholipase D promotes neurological function recovery and reduces neuroinflammation after spinal cord injury in mice抑制磷脂酶D可促进小鼠脊髓损伤后神经功能恢复，减轻神经炎症反应脊髓损伤(SCI)是一种严重的致残性疾病，神经炎症的过度活化是继发性脊髓损伤的主要病理特征之一，其中磷脂代谢在炎症调节中起关键作用。磷脂酶D (Phospholipase D, PLD)是一种重要的脂质信号分子，参与多种生理过程，包括炎症调节，但是PLD在SCI中的具体作用机制仍不清楚。作者单位：中国康复科学研究所、北京市神经损伤与康复重点实验室期刊：Frontiers in Cellular Neuroscience发表年份：2024年样本：小鼠脊髓组织芯片类型：Raybiotech protein microarray 芯片扫描仪：Innopsys公司InnoScan 300（新型号InnoScan 710）激光共聚焦荧光芯片扫描仪为了进一步研究PLD在SCI中的作用，研究人员使用细胞因子芯片对假手术组、脊髓损伤组和脊髓损伤7天并给与PLD抑制剂FIPI组进行分析，首先提取脊髓组织蛋白，并滴加到细胞因子微阵列芯片上，4℃ 孵育过夜，然后对载玻片进行清洗，随后加入一抗室温孵育2小时，再进行清洗，并加入Cy3 标记的链霉亲和素在室温下避光孵育1小时，清洗后使用法国Innopsys的InnoScan 300（新型号InnoScan 710）荧光扫描仪进行荧光信号分析，其中共检测了200种不同的细胞因子表达水平。结果：SCI和SCI+FIPI组中有71种细胞因子表达存在差异，炎症相关因子在SCI+FIPI组表达显著下调，包括肿瘤坏死因子以及炎症相关信号通路（TNF信号通路和NF-κB信号通路）。这表明FIPI在蛋白水平上对脊髓损伤具有一定的抗炎作用。原文Ke H, Bai F, Li Z, Zhu Y, Zhang C, Li Y, Talifu Z, Pan Y, Liu W, Xu X, Gao F, Yang D, Du L, Yu Y and Li J (2024) Inhibition of phospholipase D promotes neurological function recovery and reduces neuroinflammation after spinal cord injury in mice. Front. Cell. Neurosci. 18:1352630. doi: 10.3389/fncel.2024.1352630Innopsys 成立于1999年。总部位于法国，一直致力于生物医学领域相关仪器和软件的自主研发和生产。Innoscan系列扫描仪，采用先进的共聚焦PMT检测器和多激光扫描光路，可以同时进行多通道荧光检测。不仅有效降低了荧光光漂白现象以及信号损失，还可以有效缩短扫描时间。在基因组和蛋白组表达，基因突变，SNP检测，CGH，细菌病毒检测，肿瘤特异性标志筛查，病理组织筛查等方面都有非常广泛的应用。 环亚生物，生命科学产品全国性代理商，具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为Innoscan大中华区代理商，负责Innoscan产品大中华区的营销和售后支持。▼更多 Innopsys 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

病毒准种（Viral quasispecies）是指遗传物质高度相似但不完全相同的异质性病毒群体。早期，病毒准种研究由单个病毒模板的Sanger测序完成，但通量低（仅限于几十种病毒）、成本高，不适合大量病毒的同时测序。进入二代测序，该研究依然面临读长短（150-600bp），无法对病毒准种的跨基因连锁进行有效分析。而PacBio和纳米孔测序因为固有的错误和PCR过程中引入的错误，尤其是PCR过程的重组嵌合体多被误认是体内病毒重组产生，大大降低了病毒准种的评估准确性。为了解决这类问题，研究人员在第一轮cDNA PCR扩增的引物加入6-12nt的唯一分子标识符（unique molecular identifiers ，UMIs），标记不同来源的病毒，用以消除后续分析PCR和测序产生的错误。然而单个UMI（sUMI）不能保证在PCR过程中始终识别模板转换（如重组）产物。因此在cDNA另一条链上加入第二个UMI，比较不同UMI组合的频率及家族之间的UMI序列（dUMI），可识别出代表PCR期间“重组”分子的Reads。但是dUMI也存在一些问题，如去除文库中多余引物的纯化步骤造成样本损失，导致dUMI的准确度可能和sUMI并无太大差别。因此，迫切需要找到一种有效的测序方法，提高病毒准种识别和鉴定的准确性。华盛顿大学医学与公共卫生学院微生物学的一个研究团队于2023年在《 Virus Evolution 》发表一篇“Optimized SMRT-UMI protocol produces highly accurate sequence datasets from diverse populations – application to HIV-1 quasispecies”文章聚焦于解决上述问题。在该项研究中，基于PacBio滚环测序方法，通过比较sUMI和dUMI方法、全自动DNA片段回收和磁珠回收，以及不同PCR循环数等因素对于文库制备的影响，开发了一种适合病毒准种测序分析的建库方法。实验方法：1.cDNA合成构建含有UMI-1的引物（图1A），用该引物反转录样本中的RNA生成cDNA（图1B,1 ）。2.巢式PCR第一轮扩增对于sUMI样本，用上一步cDNA直接第一轮PCR扩增；对于dUMI样本，先用一轮PCR引入另一条UMI-2序列，磁珠纯化后完成第一轮PCR扩增（图1B,2-5）。3.样本回收利用美国Sage Science公司的Blue Pippin全自动DNA片段回收仪和磁珠法分别回收PCR特定片段长度的产物（图1B,6 ）。4.巢式PCR第二轮扩增将回收后的PCR产物再次扩增延伸后，磁珠纯化去除多余引物（图1B,7-8 ）。5.制备待测环状DNA分子将 SMRTbell 条形码接头连接到 PCR 产物的末端，以形成环状分子以供测序（图1B,9 ）。6.测序分析PacBio SMRT测序并完成生信分析（图1C），识别具有同样UMI的环状共有序列 （CCS），最终得到病毒准种的结果（图1D）。图1 实验整体流程 其中Blue Pippin用于纯化第一次PCR产物实验结果不同PCR产物纯化的方法对于实验效果的影响在巢式PCR第一轮扩增后，分别比较Sage Science公司Blue Pippin和磁珠法纯化扩增产物以及未纯化产物，发现Blue Pippin 纯化更有效地去除较小片段的 PCR 杂带，而且产物得率远高于磁珠法。（图2）图2 根据纯化方法和PCR循环数对产物进行凝胶电泳和分析。Blue Pippin纯化的条带更粗，且没有杂带，说明回收得率更高，纯化效果更好不仅如此，在巢式PCR第二轮扩增中，比较不同纯化方法、PCR循环次数对PCR产生重组DNA比例的影响，发现Blue Pippin纯化的样本中，重组DNA杂带的比例明显少于磁珠法纯化样本以及未纯化样本。说明Blue Pippin纯化效果优于磁珠法（图3）。此外，同样利用Blue Pippin纯化样本，如果PCR循环数越少，纯化样本中重组DNA杂带的比例也越低。因此，同样样本体系，通过Blue Pippin可减少PCR循环数并提升文库质量。图3 每个sUMI家族的重组读长比例，按PCR中的平均模板输入分组，其中每个点代表一个单独的sUMI家族，按纯化方法和总PCR循环数着色。（Blue Pippin纯化样本的测序实验结果说明，相对于磁珠和未纯化样本，Blue Pippin纯化能够有效减少PCR中重组杂带的产生）UMI标记方法的优化改进通过比较sUMI和dUMI测序结果，作者设定了一个sUMI的检测阈值线——同一个 sUMI 族中，如果任何位置的最小一致性小于70%，则判定该序列存在重组或者其他错误（称为 0.7 判定原则）。利用这一判定原则，作者筛选了sUMI测序结果并与dUMI的测序结果进行比较。结果发现绝大部分判定为正确序列的dUMI都能通过0.7 sUMI判定原则。说明这一标准不但有足够的准确性，而且避免了dUMI中由于需要额外的纯化步骤造成的样本损失等弊端。原文链接：https://doi.org/10.1101/2023.02.23.529831总结使用Blue Pippin纯化PCR产物，使用0.7sUMI判定标准，可以有效提高病毒准种测序结果准确性，并避免dUMI带来的得率减少等其他弊端。是一种可行的检测方法。环亚生物科技有限公司作为美国Sage Science公司DNA片段回收系列产品在中国区的独家代理商，自2011年以来将Sage Science的产品线引入国内，一直为国内用户提供专业的全自动核酸片段回收系统的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往地支持越来越多的Sage Science用户。▼更多 Blue Pippin 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

蜱传脑炎，是一种由蜱传脑炎病毒（tick-borne encephalitis virus，TBEV）引起的，经蜱虫传播的传染病，呈现各种神经系统病症，目前尚无特效疗法。其诊断主要依赖于TBEV抗体检测，如酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent ascept， ELISA）和免疫荧光试验（immunofluorescence assay， IFA）。然而，蜱传脑炎病毒所属的正黄病毒属内有很多病毒都存在高度交叉反应，导致TBEV抗体检测的结果有偏差，例如检测中出现西尼罗河病毒（ West Nile virus ，WNV）的假阳性结果。因此急需找到一种高灵敏性和强特异性检测TBEV的方法。来自荷兰国家公共卫生与环境研究所传染病控制中心的团队，于2024年2月在《Viruses 》上发表了这篇文章。该研究利用蛋白微阵列芯片技术，改进了检测TBEV的方法。TBEV病毒所属的正黄病毒属，其序列相对保守，是一个含有约11000个碱基的正链RNA病毒，有3个结构蛋白：C，prM和E蛋白，以及7种非结构蛋白：NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5。E蛋白包含EDI、EDII和EDIII三个结构域（图1 ）。作者在之前的研究中，使用重组NS1（rNS1）蛋白检测基于NS1多重蛋白微阵列中的抗正黄病毒IgG。通过多重微阵列方法，使用少量样本体积（例如 10 μL 血清）就能快速、高通量同时检测针对多种病毒蛋白的抗体。本文，作者进一步优化，在NS1抗原旁边添加了EDIII抗原，提高了检测TBEV IgG的灵敏度和特异性。图1 正黄病毒属基因组与实验中构建的EDIII/rNS1基因载体示意图实验方法1.制备蛋白微阵列芯片将TBEV、WNV、ZIKV（寨卡病毒）、USUV（乌苏图病毒）、JEV（日本脑炎病毒）、EDNV（登革热病毒）的EDIII和NS1蛋白，利用英国Arrayjet公司的Marathon系列生物芯片点样仪（新型号Mercury系列）制备成蛋白微阵列芯片。2.血清样本与蛋白微阵列芯片杂交孵育感染过或疑似感染过DENV、ZIKV、WNV、USUV、TBEV的患者血清，阴性血清分别与蛋白微阵列芯片杂交孵育，并用芯片扫描仪获取杂交结果。3.蚀斑减少中和试验（Plaque Reduction Neutralization Test ，PRNT）将上述血清与病毒混合后孵育，然后加入预先形成的A549单层细胞中，观察并计数斑块形成情况。同时与蛋白微阵列芯片杂交结果比较。实验结果NS1蛋白微阵列芯片结果呈现属内高度交叉反应在NS1的蛋白微阵列芯片杂交结果中，所有的阴性血清都无免疫特异反应。来自感染过或疑似感染过上述病毒的患者血清杂交实验中，大部分血清都和相关抗原出现了免疫阳性结果，而且这些患者血清同时与属内其他病毒出现了阳性反应，这与此前报道的正黄病毒属内有很多病毒都存在高度交叉相一致。免疫学检测金标准--PRNT的实验结果显示，NS1蛋白微阵列结果中出现的阳性结果在PRNT中都为阳性。在20例TBEV的患者血清实验中，除了蛋白微阵列芯片已经确认的7例之外，还有8份血清也呈现阳性。说明单独检测NS1抗原存在假阴性结果，因此基于NS1抗原的蛋白微阵列流程需要进一步优化。TBEV EDIII的蛋白微阵列实验结果为了提高蛋白微阵列检测的灵敏性和特异性，使用EDIII阳性血清（来自接种TBEV疫苗志愿者）和上述血清再次与EDIII蛋白微阵列芯片杂交。结果显示，之前的20份TBEV患者血清 EDIII杂交结果与PRNT结果完全一致——15份血清为阳性，5份为阴性。而这些血清样本对WNV、DENV、ZIKV、USUV 和 JEV 的IgG反应水平则比较低。这说明EDIII的确存在属内交叉反应，但TBEV的反应水平则远高于其他病毒。实验结论正黄病毒属内病毒在血清学检测中的确存在高度交叉性，PRNT实验验证了这一结论。通过在蛋白微阵列芯片中联合使用TBEV NS1和EDIII抗原蛋白，可以提高TBEV检测的灵敏性和特异性，有助于在感染早期快速发现TBEV感染，争取治疗的窗口期。更多内容请阅读原文：https://doi.org/10.3390/v16020286Arrayjet位于英国爱丁堡，专注于提供生物芯片应用领域的解决方案及服务。自2000年公司成立即致力于开发新型生物样品喷点方案–喷墨式液体处理平台，该系统于2006年上市，目前用户遍布全球27个国家。Mercury系列产品采用独特的飞行喷墨点样技术实现行业第一的快速、非接触式微量液体处理。同时上万种不同样品可以进行快速点样，专利的上样模块配合高通量的点样喷头保障您的点样操作快速、无污染，更低的上样体积可有效减少样品损失，使您的珍贵样品物尽其用。▼更多 Arrayjet 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

近十年，肿瘤微环境作为肿瘤研究领域的分支之一，在很多方面取得了进展，其重要原因在于肿瘤样本组织具有与生物复杂性相关的显著空间异质性。而肿瘤微环境研究可以揭示其中奥秘。 多重免疫荧光染色作为肿瘤微环境研究的重要手段之一，可以同时显示多种生物标志物，实现识别细胞类型，以及研究信号通路和绘制肿瘤微环境中复杂的细胞互作图谱。尽管近年出现几种新技术，但在生物标志物发现和诊断领域工作的研究人员和临床医生仍然面临技术瓶颈：1）组织微阵列技术的使用受到肿瘤异质性限制，2）新型多维度空间生物学技术成本高昂。在此背景下，Innopsys 开发了 InnoQuant荧光全玻片扫描仪，其具有经过优化的独特光学设计，可提供高质量免疫荧光染色图片，有助于高内涵数据的生成和分析。实际案例：NSCLC多重组织成像的案例研究实验目的：研究非小细胞肺癌(NSCLC)中癌症组织中的免疫浸润非小细胞肺癌(NSCLC)约占所有肺癌的85%。目前，使用靶向肿瘤特定分子特征的治疗药物已成为标准方案。因此，研究肿瘤组织样本，以此来表征免疫细胞和免疫检查点有助于个体化的靶向治疗。实验方法：1.利用多重免疫组织化学(mIHC)在单一组织切片上同时染色多种免疫标志物1)PD-L1是一种免疫检查点标志物，在髓系细胞和肿瘤细胞中表达，并作为癌症免疫治疗的潜在靶点，本实验中作为肿瘤细胞标志物。2)颗粒酶B (Granzyme B，GrB)是一种丝氨酸蛋白酶颗粒酶，主要存在于自然杀伤细胞(NK细胞)和细胞毒性T细胞的颗粒中，本实验中作为NK细胞标志物。3)CD8存在于T细胞中，本实验中作为细胞毒性T细胞标志物。4)使用Cell Signaling 公司mIHC荧光抗体进行非小细胞肺癌样本染色，具体如下: FITC标记PD-L1，AF594标记CD8，Cy5标记GrB。2.利用InnoQuant扫描红色切片1)利用GrB标记物鉴定NK细胞：采用640 nm激发波长产生Cy5信号，通过680/42 BP滤波器采集其发射信号。2)利用CD8标记物鉴定T细胞：采用561nm激发波长产生AF594信号，通过593/40 BP滤波器采集其发射信号。3.QuPath软件分析利用QuPath的深度学习功能，分别识别NK细胞和CD8+ T细胞。采用Delauney聚类特征2D法鉴定NK细胞簇和CD8+ T细胞簇。分析3个相邻NK或CD8+ T细胞所包围的三角形面积与 肿瘤区域边界到NK或CD8+ T细胞中心距离之间的关系。实验结果:1.样本扫描总体情况：冷冻切片厚度:5μm。冷冻切片总面积:97 mm2。4个荧光通道扫描时间:10分钟。ROI面积:2 mm2（图1）。图1:NSCLC组织切片全图，mIHC染色，InnoQuant扫描，后续分析ROI用黄色圈出2．自然杀伤(NK)细胞簇分析图2中黄色标记区域为肿瘤细胞区域，蓝色标记NK细胞分布在肿瘤细胞区域内部和外部。图中大部分NK细胞集中在肿瘤细胞区域周围，部分NK细胞在肿瘤细胞区域内。图2:肿瘤细胞区域微环境中NK细胞簇的ROI和细节（肿瘤细胞区域用黄色标出，NK细胞呈蓝色；图片由InnoQuant获取，QuPath分析）三个NK细胞间面积（μm2）被定义为由三个相邻NK细胞围成的三角形面积。最近肿瘤区域边界距离（μm）表示NK细胞质心到最近肿瘤细胞区域边界的距离。如距离为正，则NK细胞位于肿瘤细胞区域外部，如距离为负，则NK细胞位于肿瘤细胞区域内部。对距肿瘤细胞区域不同距离的相邻三个NK细胞间面积的分析表明，绝大部分相邻NK细胞形成的三角形面积都在600μm2以下，且与肿瘤细胞区域边界的距离都在±12μm的范围内。面积越小，证明NK细胞密度越高，而且都集中分布在肿瘤区域周围。正如图2中所看到的，NK细胞的分布受到肿瘤细胞区域的影响，绝大部分NK细胞都围绕着肿瘤细胞区域（图3）。图3:NK细胞密度与肿瘤细胞区域的关系。左：细胞围成的三角形面积与细胞和肿瘤边界之间距离的火山图。纵轴：3个相邻NK细胞围城的三角形面积。横轴：NK细胞中心与肿瘤边界的距离。右：分布在肿瘤细胞区域附近的NK细胞数量，按不同距离进行分类3．CD8+ T细胞簇分析图4中黄色标记区域为肿瘤细胞区域，品红色标记CD8+ T细胞分布在肿瘤细胞区域内部和外部。图中大部分CD8+ T细胞集中在肿瘤细胞区域周围，部分CD8+ T细胞在肿瘤细胞区域内。图4:肿瘤细胞区域微环境中CD8+ T细胞簇的ROI和细节（肿瘤细胞区域用黄色标出，CD8+ T细胞呈品红色；图片由InnoQuant获取，QuPath分析）三个CD8+ T细胞间面积（μm2）被定义为由相邻三个CD8+ T细胞围成的三角形面积。最近肿瘤区域边界距离（μm）表示CD8+ T细胞质心到最近肿瘤细胞区域边界的距离。如距离为正，则CD8+ T细胞位于肿瘤细胞区域外部。如距离为负，则CD8+ T细胞位于肿瘤细胞区域内部。对距肿瘤细胞区域不同距离的相邻三个 CD8+ T 细胞间面积的分析表明，绝大部分相邻CD8+ T细胞形成的三角形面积都在600μm2以下，且与肿瘤细胞区域边界的距离都在±12um的范围内。面积越小，证明CD8+ T细胞密度越高，而且都集中分布在肿瘤区域周围。说明正如图4中所看到的，CD8+ T细胞的分布受到肿瘤细胞区域的影响，绝大部分CD8+ T细胞都围绕着肿瘤细胞区域（图5）。图5: CD8+ T细胞密度与肿瘤细胞区域的关系。左：细胞围成的三角形面积与细胞和肿瘤边界之间距离的火山图。纵轴：3个相邻CD8+ T细胞围城的三角形面积。横轴：CD8+ T细胞中心与肿瘤边界的距离。右：分布在肿瘤细胞区域附近的CD8+ T细胞数量，按不同距离进行分类实验结论：无论是NK细胞还是CD8+ T细胞，都受到肿瘤区域的影响，集中分布在肿瘤细胞区域内外，不断浸润肿瘤组织。利用全组织扫描成像并结合深度学习算法，可以识别不同免疫细胞以及分析其与肿瘤区域的距离。本案例证明了InnoQuant提供的整张扫描图像可以在第三方分析软件中生成相关数据。图像质量高，可以得到如细胞计数和邻近分析等统计学分析，以更好地了解患者的特定病理生理状况。这些空间和定量的数据可用于进一步预测免疫肿瘤领域的治疗反应。Innopsys 成立于1999年。总部位于法国，一直致力于生物医学领域相关仪器和软件的自主研发和生产。InnoQuant组织切片/生物芯片扫描仪，采用先进的共聚焦PMT检测器和多激光扫描光路，可以同时进行多通道荧光检测。不仅扫描结果清晰，而且无需后续拼接和阴影校正处理，在组织切片和生物芯片扫描领域都有广泛应用。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为InnoQuant大中华区代理商，负责InnoQuant产品大中华区的营销和售后支持。▼更多 InnoQuant 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

外周血单个核细胞（Periphery blood mononuclear cell，PBMC）是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞，单核细胞，浆细胞等（如图1）。在机体免疫系统中，PBMC细胞扮演着重要角色，不仅参与免疫应答和免疫调节，还是抗体药物研发、感染性疾病、恶性血液疾病、疫苗开发以及移植免疫等领域的研究原材料。图1. PBMC细胞的组成外周血中，除了PBMC外，还有无核的血小板、成熟的红细胞、多核的粒细胞等，其体积、形态和比重均不相同。因此，可用密度梯度离心法将各种细胞与PBMC分离开，如Ficoll密度梯度离心法，离心后比重较大的红细胞和粒细胞沉于管底，PBMC漂浮于分离液表面（如图2）。图2. PBMC细胞的分离PBMC的质量非常关键，直接决定下游的实验研究或治疗方案如何推进。但是受限于技术方法，分离出来的PBMC难以避免会混有其他细胞，如红细胞等。因此，对PBMC样本进行精确的细胞计数、精准的细胞活率检测，以确定细胞的质量尤为重要。PBMC样本的特殊性：1.样本通常来自患者，数量有限，用尽可能少的检测次数获取到最真实的浓度数据；2.红细胞与PBMC大小相近，难以通过肉眼区分；因此常规的计数方法对此类样本均无法满足要求。采用血球计数板的显微镜下人工计数方式，通常计数几十个细胞，继而推断整个样本浓度，其计数体系非常小，影响统计学准确性，同时细胞活率的判定依赖台盼蓝染色，人为主观因素导致低准确性和低重复性。基于图像法的自动细胞计数仪，通过自动化消除了一些不可靠性，但其原理与依赖图像的血球计数方式相同，仍然存在低准确性和低重复性的问题。为解决这种复杂细胞悬液的计数问题，需要加大计数体系，即计数更多的细胞，并避免对图像的依赖。美国Orflo Technologies 公司的Moxi系列库尔特细胞分析系统就是解决这一困难的利器，三个型号设备（Moxi Z，Moxi V和Moxi Go II）均采用细胞计数和体积测量行业的金标准——库尔特原理，同时结合专利的微流控技术，对细胞样本进行精准计数和体积测量。Moxi V和Moxi Go II还增加了流式荧光检测模块，实现对细胞样本的荧光活率检测及常规流式分析。设备一次运行，可在几秒内完成数万个细胞的计数及荧光检测，计数体系大，不依赖图像，对细胞样本进行绝对计数和三维立体的体积测量，具备更高的准确性和重复性。如图3所示，是Moxi库尔特细胞分析系统进行PBMC计数的结果，一次计数18000多个事件，包括细胞和碎片。通过体积门控设置，将图3: PBMC检测结果Moxi V和Moxi Go II在细胞计数和体积测量的基础上增加了流式荧光检测通道，预设有PBMC检测程序，实现一键调用，10秒即可完成细胞计数、体积检测及活率检测，同时可提供红细胞污染数据（图4）。图4:PMMC预设程序检测结果页面Moxi 系列产品采用库尔特原理进行细胞计数和粒径测量，其中高端型号配备流式荧光检测通道，可进行细胞活率、细胞凋亡、转染效率、活性氧簇、线粒体膜电位等常规流式检测。仪器设计小巧轻便，无需预热，开机即用，预设程序，触屏操控，运行后10秒即可给出测试结果，使用后也无需清洁维护。无论是经验丰富的实验高手，还是初试身手的实验小白，Moxi系统都可以助您轻松完成实验。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，不断把国外顶级的创新产品引入中国。环亚生物具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为Orflo Technologies大中华区独家代理商，负责Orflo Technologies产品大中华区的营销和售后支持。▼更多 Moxi系列 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

【Cell】Spatially coordinated heterochromatinization of long synaptic genes in fragile X syndrome脆性X综合征中长突触基因的空间协调异染色质化脆性X综合征（FXS）是由FMR1基因5’UTR区中CGG短串联重复序列（STR）的扩增引起的。在这类重复扩增疾病中，短串联重复序列（STR）的不稳定性会导致转录沉默。对于FXS，CGG重复次数达突变长度（mutation-length，ML）后，会通过局部DNA甲基化抑制FMR1基因表达。作者在FXS患者衍生的iPSC、iPSC衍生的神经祖细胞、EBV转化的淋巴母细胞和具有突变长度CGG扩增的脑组织中，常染色体上发现了Mb级H3K9me3结构域，并且X染色体上的FMR1基因也有同种结构。H3K9me3结构域通过染色体间相互作用连接，并分为染色体拓扑结构域（topologically associated domain，简称TAD） 严重错误折叠和成环，它们存在于S末期复制的长突触基因中，复制应激诱导的断裂双链中，以及易发生逐步体细胞不稳定性的STR中。将突变长度（mutation-length，ML）CGG转换成突变前长度（premutation length， PL）的CRISPR工程，可逆转X染色体和多个常染色体上的H3K9me3重折叠TADs区域，并恢复基因表达。H3K9me3结构域也可以出现在正常长度的iPSC中，这表明它们之间联系不局限于FXS。研究结果揭示了易受不稳定性影响的基因座之间的Mb级异染色质化和反式相互作用。期刊：Cell发表年份：2023年样本：诱导性多能干细胞（iPSC）测序类型：Targeted long-read sequencingTargeted long-read sequencing文库富集和精准回收：Sage Science公司Blue Pippin全自动DNA电泳回收仪测序仪：Nanopore PromethION 三代测序仪该研究利用 Nanopore 纳米孔测序、Mb级 Hi-C、CRISPR 和单细胞 Oligopaint FISH 成像等技术，发现脆性 X 染色体综合征（FXS）患者的常染色体上也存在 CGG 域的 DNA 甲基化，提出空间协调转录沉默模型，为 FXS 疾病的分子机制探究开辟新方向。与正常情况对比，具有ML CGG扩增的FXS患者衍生的细胞系和脑组织更容易在常染色体和X染色体上产生Mb级H3K9me3结构域。H3K9me3结构域在S期结束时复制，以反式相互作用，并产生TADs、亚TAD以及环等不同类型严重Mb级错误折叠。它们与长突触基因，复制应激诱导的双链断裂，以及易受逐步体细胞不稳定性影响的STR紧密相关。通过将ML CGG转化为PM CGG，可以逆转X染色体和多个常染色体上H3K9me3信号；此时TAD被重折叠，反式相互作用不受限制，基因表达恢复。研究结果揭示了BREACHes（beacons of repeat expansion anchoredby contacting heterochromatin，通过接触异染色质锚定的重复扩增信标）——连接Mb级H3K9me3结构域、顺式中严重的染色质错误折叠、长程染色体间相互作用和重复基因组的不稳定性。文中通过CRISPR-Cas9靶向剪切FMR1基因座5’UTR区中CGG短串联重复序列后，使用Blue Pippin全自动DNA电泳回收仪，选用“0.75DF 3-10 kb Marker S1”试剂盒，精准回收5-12 kb Cas9-cut DNA，构建靶向长读长文库，并在MinION测序仪上进行了长读长测序。原文Malachowski, Thomas, et al. "Spatially coordinated heterochromatinization of long synaptic genes in fragile X syndrome." Cell 186.26 (2023): 5840-5858.美国Sage Science是全球领先的全自动DNA脉冲场电泳回收仪的生产厂家，拥有美国技术专利，各个型号产品可以高效完成不同长度范围的DNA片段的精准回收，广泛用于二代测序、三代测序以及多种分子生物学相关领域。环亚生物科技有限公司作为美国Sage Science公司在中国区的独家代理商，自2011年以来将Sage Science的产品线引入国内，一直为国内用户提供专业的全自动核酸片段回收仪的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往的支持越来越多的Sage Science用户。▼更多产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

骨关节炎osteoarthritis (OA)是一种常见的骨科疾病，高发于老年群体。该病尚无有效的治疗方法，只能通过减轻炎症和疼痛、手术矫正、人工关节置换等方式缓解和控制。虽然OA的治疗思路不断突破，比如利用年轻捐助者的软骨作为修复关节的干细胞来源，进行细胞增殖并分化成软骨细胞来修复半月板等，但对OA的治疗仍无显著进展。本文来自墨西哥国立医学研究所的一个团队，于2023年发表在《applied sciences》9月的期刊。该文章中，作者利用绵羊模型和生物3D打印技术探索OA治疗的新方法。实验方法1.间充质干细胞（MSC）制备：选取3只绵羊皮下注射粒细胞集落刺激因子，刺激其干细胞增殖。在干细胞达到预定水平后，抽取动物的血液通过密度梯度离心和流式细胞分选的方法收集间充质干细胞。2.软骨支架3D打印：聚乳酸作为原料，使用REGEMAT 3D公司的Bio V1 生物3D打印系统打印了两种不同的软骨支架结构（图1）。图1.软骨支架3D打印。（A） REGEMAT 3D生物打印系统（B） 打印过程的侧视图（C） 软骨支架（D） 种植体组件的轮廓（E） 侧向植入模型（F） 外关节植入物和内关节植入物的模型3.支架植入：将3D打印并与MSC孵育好的支架植入绵羊的不同位置，包括绵羊胸肋区域皮肤下方1厘米处（仅植入带有细胞的支架）即侧向植入组和通过关节切开术放置在关节外部和内部的位置（分别植入带有细胞和没有细胞的支架即关节内和关节外植入组，然后在动物体内培育3个月或者6个月。4.免疫荧光验证：将植入动物体内培养的支架取出，利用免疫荧光染色的方法验证骨相关标志物（RUNX2 和 OPN）和软骨相关标志物（COL2A1、Aggrecan 和 SOX9）的表达水平，并与正常动物组织表达水平相比较。实验结果通过免疫荧光染色发现，关节内植入物上普遍存在软骨标志物（SOX9、Aggrecan 和 COL2A1）的表达，与作为正常软骨组织的阳性对照相比，表达水平都有显著升高，说明 MSC确实对软骨形成有促进作用。图2. 侧向植入支架在3个月后的免疫荧光进行表征（细胞核用DAPI染色;红色标记表示不同软骨标记物-COL2A1、Aggrecan 和 SOX9）另一方面，与关节外的植入物相比，在关节内的植入物中各类代表因子的水平也有显著上升。而且关节内具有软骨发育最合适的环境，细胞可以转移和分泌影响周围细胞的特定外泌体和微囊泡；也可能因损伤刺激后，间充质干细胞可以直接在天然软骨细胞中分化有益于受伤组织的修复。总结作者对不同时间点和不同植入位置的支架做了详细的实验分析，证实植入物中预分化的 MSC 是否存在，是 3 个月和 6 个月时骨特异性标志物表达的决定因素。此外，关节微环境有助于在软骨植入物上软骨的分化生长，而植入物的植入时间也有可能影响软骨发育的情况。这为未来OA的治疗提供了新的思路。更多资讯请访问文献全文链接：https:// doi.org/10.3390/app131810177环亚生物科技有限公司作为西班牙REGEMAT 3D公司生物3D打印系列产品在中国区的独家代理商，一直为国内用户提供专业的生物3D打印系统的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往地支持越来越多的REGEMAT 3D用户。▼更多 Regamet 3D 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

免疫检查点（Immune Checkpoint）是一类免疫抑制分子，免疫检查点阻断疗法通过抑制程序性死亡受体及其配体结合,从而提高宿主免疫系统对肿瘤细胞的攻击性。尤其是免疫检查点阻断(ICB)抑制剂的发现，极大改善了癌症患者的预后。基于液体活检的生物标志物体外诊断方法，可以使ICB治疗尽可能延缓肿瘤的进展、延长患者生存期并提高患者生活质量。与目前临床基于化学发光和吸光度法的酶联免疫吸附检测（ELISA）相比，荧光免疫法（FIA）不依赖于酶活性或底物浓度，具有更好的灵敏度，然而荧光团的低量子产率，有限的光稳定性和强自身荧光背景等因素制约，难以进一步被临床广泛应用。近年纳米技术的发展，促使具有表面等离子体共振的金属纳米结构，可通过金属荧光增强效应（MEF）有效放大荧光信号，以达到高敏诊断，同时长波近红外荧光(NIRF)具有较低的自身荧光干扰，明显提高检测结果的灵敏度和信噪比。因此，高灵敏度、高通量、能同时检测多种生物标志物的体外诊断方法，对于推动肿瘤患者的诊断、治疗和预后尤为重要。近期，来自华南肿瘤国家重点实验室，广东省鼻咽癌诊疗重点实验室以及中山大学肿瘤防治中心的杨江教授报道了一种基于生物传感器，用于高敏检测可溶性免疫检查点预测分子sICAM-1（细胞间黏附分子-1）和sPD-L1（细胞程序性死亡-配体1）的文章，题目为“A near-infrared fluorescence-enhancing plasmonic biosensing microarray identifies soluble PD-L1 and ICAM-1 as predictive checkpoint biomarkers for cancer immunotherapy”于2023年8月发表在国际生物传感器权威杂志Biosensors and Bioelectronics上。该研究团队合成了一种基于金纳米岛状结构（AuNIS）的增强近红外荧光微阵列免疫分析 (eFMIA)生物传感器，具有丰富的纳米间隙，可将结构对称的IRDye78荧光分子的近红外荧光放大200倍以上。此外，利用M2非接触式压电驱动的生物打印技术（该打印技术具有分辨率高、打印速度快、高生物活性、材料浪费低等优势），多项性能优于传统的FIA和ELISA。eFMIA能检测肿瘤患者队列中sICAM-1和sPD-L1的标志物差异水平，发现相较于部分缓解（PR）的病人队列，疾病进展（PD）队列中存在sPD-L1高表达，sICAM-1低表达（见图1）。图1:NIF增强等离子体微阵列检测示意图作者使用德国M2-Automation公司的iTWO-200非接触式点样仪进行多孔板微阵列制备，过程中使用压电式皮升级PDMD喷头，其具有良好的定位精度和点样准确性，设置环境湿度为60%，温度为25℃，体积为180 pL /滴，每个点重复5次，同时，液滴的大小和飞行轨迹使用集成的频闪仪实时进行跟踪。样品点印在纳米金结构包被的孔板上，然后使用生物素标记（IRDye78）的抗体进行检测，荧光强度使用AzureSpot软件进行NIFR检测以及液滴点印稳定性分析（见图2）。图2：非接触式PDMD喷头在AuNIS上制备具有NIRF增强的可控和可重复的微阵列(A)PDMD点印过程示意图以及利用NIRF进行免疫检测的工作原理 (B)不同条件下合成的Au结构之间间隙距离的量化：SEM（扫描电子显微镜）、Binary（二进制图像）(C)各种条件下合成的AuNIS归一化间隙分布，使用gamma分布函数对直方图进行拟合(D)累积分布概况。(E)非接触式PDMD点印稳定性评估 (n=10)，单位pl(F)喷点体积分布统计(G) 头部质控相机对点印的2 × 3阵列质控图(H)组内及组间点间距统计(1)组内及组间荧光强度统计(n=10)。(J)字母“SYSUCC”图案的定制化点印阵列为了进一步利用eFMIA检测肿瘤相关的生物标志物，作者培养了两种人鼻咽癌细胞系S26和C666-1，首先通过RT-qPCR对ICAM-1和编码PD-L1的CD274 mRNA表达进行测定，发现在C666-1细胞中mRNA和蛋白表达均高于S26细胞。此外，ICAM-1和PD-L1在人血浆、血清以及PBS中无显著差异。众所周知，PD-L1在肿瘤细胞中以膜结合的形式抑制T细胞的免疫活性。为了检测鼻咽癌细胞是否会释放PD-L1，作者在C666-1细胞培养上清液中发现分泌的PD-L1，且分泌水平随时间和C666-1细胞数量的增加而增加。从临床角度而言，识别低丰度或微量变化的生物标志物具有重大的临床意义。因此，作者招募了28名接受抗PD -1 ICB治疗的癌症患者，在第一次给药前1天采集血清进行eFMIA测定。结果显示，治疗前血清sPD-L1水平PD患者显著高于PR患者(0.42 vs 0.18 ng /mL)，相反，PR患者血清sICAM-1水平高于对照组PD患者 (0.92 vs. 0.60 ng /mL)（见图3）。图3：检测鼻咽癌细胞和病人血清中的可溶性ICAM-1和PD-L1(A) 检测两种鼻咽癌细胞系S26和C666-1中ICAM1和CD274 mRNA的表达(B)鼻咽癌细胞中ICAM-1和PD-L1在S26和C666-1细胞系中的表达水平 (C) 1.6 nM ICAM-1和2.0 nM PD-L1的NIRF信号强度，PD-L1在PBS、20%人血浆和20%人血清中水平均增加(D)不同C666-1细胞对应PD-L1的分泌水平，样本来自接受抗pd -1 ICB治疗的前癌症患者(n=28)的血清(E) PD-L1和(F) ICAM-1水平检测，根据内参标准归一化法进行NIRF相对平均强度计算研究者基于金属荧光增强MEF效应，成功制备了可用于检测肿瘤患者外周血液样本中生物标志物的生物传感器，具有高灵敏度、高稳定性、高通量的优势，能同时检测多种标志物，且标志物之间相互干扰小。基于此，该传感器有望帮助临床医生决策和患者分层，来预测ICB治疗的疗效。原文链接：https://doi.org/10.1016/j.bios.2023.115633M2-Automation成立于2003年，总部位于德国柏林，是一家创新技术开发公司，专注于微量/超微量、非接触式自动化移液和生物芯片点样技术。仪器准确性、精确性高，重复性好，全程自动化点样，同时可根据客户需求进行定制。▼更多 M2 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

癌症是人类健康面临的重要难题，其中一个重要原因是肿瘤细胞的耐药性。而耐药性很大程度上是癌症异质性引起的，即细胞基因突变产生众多肿瘤细胞亚群，这些细胞亚群拥有多样化的突变谱及强大的持续增殖和突变能力，因此表现为癌症治疗过程中各种各样的耐药现象。为了研究肿瘤耐药机制，需要建立有效的实验模型。目前动物或者人类患者的宏观模型，最接近真实情况，但外在影响因素较多且难以把控，很难明确真正的效率、作用机理和因果关系。因此，建立一种有效的微观模型势在必行。本文来自阿姆斯特丹大学，于2023年发表在《scientific reports》杂志。该团队建立了一套新的分析贴壁 2D 细胞培养物和 3D 类器官培养物中的克隆群体动态的方法。在未来有望用于肿瘤细胞亚群分化等方面的研究。实验方法：1.标记细胞：将目标细胞系用慢病毒本体荧光标签（lentiviral gene ontology (LeGO)）标记。为了确保标签定位在细胞核中，利用基因编辑技术将这些标签与组蛋白H2B或核定位信号NLS融合。实验中用到四个细胞系，即结直肠癌细胞系RKO和LS180、人骨肉瘤上皮细胞系U2OS和人表皮角质形成细胞系HACAT。2.生成多克隆群落：使用德国Biofluidix公司的压电式皮升分液喷头SiJet，将细胞悬液喷点在预填充0.5%琼脂糖的24孔细胞培养板/类器官培养装置中（琼脂糖防止细胞液滴蒸发，同时防止细胞在贴壁过程中因布朗运动或微电流产生移动）。待细胞完全贴壁后，更换为常规培养基。通过控制SiJet每次喷出的液体体积，保证每个细胞群落有2-10个荧光标记细胞，但因LeGO-NLS标签是随机的，因此每个群落的细胞组合颜色不尽相同 （图1，a）图1 贴壁细胞群落制备（a）实验流程，荧光标记细胞系制备→用SiJet皮升分液器分液制备细胞群落→不同时间段拍摄照片，采集数据（b） SiJet皮升细胞群落制备对细胞存活率的影响：control组中的每个数据点代表至少 10 个细胞的平均存活率； SiJet组中，每个数据点代表一个细胞群落3.图像分析：不同时间点荧光显微镜采集细胞群落图像，统计并分析细胞的数目、存活率等指标。实验结果：1.与常规方法制备的细胞群落相比，SiJet点样喷头制备的皮升细胞群落，通过后期优化实验或算法消除，其细胞存活率较高没有受到喷头机械性的影响（图1，b）2.不同的细胞群落有完全不同的细胞克隆生长速度，标准差（代表细胞克隆大小异质性）也与群落生长速度相关。此外，细胞克隆组成动力学也会随着时间而变化，会导致显性克隆出现以及其他克隆的减少或消失。（图2）图2 克隆生长动力学（a） 在指定时间点选定菌落的代表性图像，比例尺：200μm； （b）指定细胞系菌落的相对生长。每个数据点表示实验第 6 天单个菌落中的细胞数相对于实验第一天细胞数的倍数；（c） （b）中细胞克隆大小的标准偏差，代表克隆生长的异质性；（d）选定的单个克隆中可视化大小随时间的变化。同心圆代表时间，最早的时间点绘制在每个图的核心3.不同克隆群体的 Herfindahl-Hirschman （H-H） 指数结果证明：用SiJet点样喷头制备皮升细胞群落，追踪二维菌落的各种克隆特性方面的可行性，揭示了所选四种癌细胞系的克隆动力学差异。4.用SiJet点样喷头制备的类器官与常规方法培养的类器官在活力、细胞生存率等方面并没有显著差异，可作为现有类器官研究的替代方法。结论SiJet点样喷头制备的皮升细胞群落和类器官，具有体系小，存活率高，通量高，初始仅有数个单或多克隆细胞，可对各类细胞实验的条件进行精准控制，成为未来开展肿瘤细胞亚群研究的一个潜在方法。更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1038/s41598-023-42849-wBiofluidix是全球领先的研发制造高精度生物芯片点样和分液系统的生产厂家，不仅有体系化的点样分液平台，也提供模块化的皮升、纳升和微升分液装置，能够兼容第三方设备，实现精准点样和分液。广泛应用与生物、材料、航空、航天等多个领域。环亚生物科技有限公司作为德国Biofluidix公司在中国区的独家代理商，一直为国内用户提供专业的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往的支持越来越多的Biofluidix用户。▼更多 Regemat 3D 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

免疫荧光染色技术广泛用于样本中待测标志物的含量分析，待测标志物在细胞内或细胞外的分布以及不同标志物之间的相互作用，在细胞水平和组织水平进行实验论证，有效衔接微观分子水平到宏观动物整体水平之间的研究工作。在切片免疫荧光染色实验中，扫描成像是其中关键一环，高清的图像更利于后续的空间结构分析和精准的定量分析。因此，选择合适的切片扫描设备尤为重要。现有主要两大类，一类是以共聚焦显微镜为代表的设备，其成像效果佳，可有效去除背景荧光，但是操作复杂，使用门槛高，没有足够的经验很难拍出高质量的图片。另一类设备是玻片扫描仪，相对于共聚焦显微镜，操作简单易上手，然而主流的荧光切片扫描仪多是宽场成像（非共聚焦成像），图片的背景荧光强、图片质量差，无法精准定位和定量。同时，这两类设备存在一些共性问题：易脱焦-扫描仪不能判断最佳的聚焦位置，尤其面对平整度较差的样本时更突出（图1）。此外还需要后期拼接——受限于工作机制，需要将整个样本分割成小块区域，逐个扫描之后再拼接完成，一定程度上导致图像在接缝处失真。由于CCD是采用面成像的工作原理，成像区域的中央和四周光强不一致，反映在图像上为中央明亮，周围暗淡，仍需要后期进行阴影校正。（图2）图1（左）平整度较差的样本，扫描完成的图像四周出现明显脱焦 （右）传统扫描仪扫描后的图片，需要后期拼接和阴影校正，影响图片质量在此背景下，法国Innopsys公司推出了InnoQuant荧光玻片扫描仪。这款设备利用激光共聚焦成像，逐点成像、整片一次扫描的技术，给免疫荧光染色技术带来了新的变革。InnoQuant的优点1.自动对焦InnoQuant内置三种对焦模式：定焦（Fixed focus）、Autofocus by surface和Autofocus by content。除了定焦模式采用固定不变的焦距之外，另外两种模式可以根据样本的内部结构或者玻片自身的平整度，识别出最佳的聚焦平面，避免脱焦。2.逐点扫描，无需拼接，无需阴影校正不用于其他设备的多个分割区域扫描再拼接的方法，InnoQuant采用逐点扫描，一次成像的方式，将整个样本最真实地保存下来，无需任何后续拼接和加工。此外，逐点扫描保证采集样本信息时所有的激发光都保持同一水平，不存在因光强不一致导致的结果失真，无需阴影校正，保证后续分析结果准确。(图2)图2 （A）传统扫片原理（左）与InnoQuant扫片原理（右） （B）百合花切片扫描结果比较：传统扫片装置（左）与InnoQuant扫描结果（右）3.4色同时扫描InnoQuant内置4组独立激光光源和PMT检测器，每个PMT最多可安装7个滤光片，不但兼容常用荧光染料，还可根据用户需求定制。此外，4个检测通道可同时工作，一张4荧光染料标记的标准玻片（26mm*76mm），在17min内完成扫描，而共聚焦显微镜则需要数个小时，InnoQuant扫描速度更快。总结作为一款最新推出产品，InnoQuant凭借其独特的工作原理，强有力的硬件配置，已成为满足广大科研工作者免疫荧光染色的强有力的助手。Innopsys 成立于1999年。总部位于法国，一直致力于生物医学领域相关仪器和软件的自主研发和生产。InnoQuant组织切片/生物芯片扫描仪，采用先进的共聚焦PMT检测器和多激光扫描光路，可以同时进行多通道荧光检测。不仅扫描结果清晰，而且无需后续拼接和阴影校正处理，在组织切片和生物芯片扫描领域都有广泛应用。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为InnoQuant大中华区代理商，负责InnoQuant产品大中华区的营销和售后支持。▼更多 InnoQuant 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

骨骼肌由多个单核成肌细胞融合而成，该过程受成肌细胞增殖和分化的影响。鉴于蛋白质是大多数生物过程的执行者，因此在蛋白质水平上进行调控因子和机制的研究，成为理解骨骼肌发育的重要基础。常见的蛋白质组学研究方法如聚丙烯酰胺凝胶电泳、质谱分析技术、无标记蛋白质组学技术等，皆在成本、分辨率和灵敏度上有一定局限性。与其相比，蛋白质芯片和抗体芯片技术，利用抗体阵列结合和识别生物样本中大量待测蛋白质，不仅具有高灵敏度和高特异性的特点，还可以大大减少样本的消耗，为蛋白质组学分析提供了高通量的技术手段。家禽中的鸡作为肌肉研究的理想模式生物，其相关的抗体阵列十分有限，因此，有必要建立高通量的鸡肌肉抗体阵列对骨骼肌的生长发育进行探索。已有研究表明能量代谢可影响骨骼肌的生长，能量代谢包括物质代谢和能量产生，两者相互协调。其中线粒体复合物可抑制肌管形成和肌细胞生成素表达，而糖酵解代谢产物乳酸可以重塑细胞代谢谱，促进成肌细胞增殖和分化，但是目前能量调节对骨骼肌的具体调节机制还不清楚。文章题目为“Chicken muscle antibody array reveals the regulations of LDHA on myoblast differentiation through energy metabolism”于2023年10月发表在International Journal of Biological Macromolecules杂志，作者来自于广东省农用动物基因组学与分子育种重点实验室和农业部鸡遗传育种与繁殖重点实验室。在这项研究中，作者开发并使用了由5263种单抗组成的鸡肌肉蛋白抗体微阵列，对鸡原代骨骼肌母细胞的增殖和分化进行研究。首先从小鼠腹水中收集纯化的蛋白免疫抗体，使用英国ArrayJet公司的生物芯片点样仪Marathon（新型号Mercury 100）点印在硝化纤维素膜包被的玻璃片上，每个样品10nl。随后用生物素标记蛋白样品混合物（提取自成肌细胞和肌小管）对玻片进行孵育，完成后用链霉亲和素杂交，最后使用荧光芯片扫描仪检测Cy3荧光信号。其中(荧光信号强度-背景)/背景信号>2.5的阵列点被定义为阳性点（见图1）。芯片筛选结果发现：在糖酵解过程中起重要作用的乳酸脱氢酶(LDHA)，在成肌细胞的增殖到分化过程中显著上调。因此，作者对LDHA在肌肉形成中的能量代谢调节作用做了进一步的研究和验证。研究表明，LDHA可促进糖酵解和三羧酸（TCA）循环，通过增强柠檬酸（NADH）循环抑制电子传递链（ETC）氧化磷酸化，进而提供促成肌细胞分化的中间代谢物。此外，LDHA也促进了糖酵解过程中Akt磷酸化，激活PI3K-Akt通路诱导肌细胞分化。因此作者发现了LDHA在调节骨骼肌生成中的新机制，即通过调节细胞辅酶Ⅰ（NAD+）水平进而影响成肌细胞分化和线粒体功能。图1：鸡肌肉抗体阵列的构建（A）鸡肌肉抗体阵列构建工作流程概述.（B）部分样品的SDS-PAGE蛋白丰度分析，银染显色(左)，用Image J分析每个样品每个条带的蛋白丰度(右)，所有单条带的丰度值不超过每个蛋白总丰度值的30%。Lane1 -9代表:100日龄兴化鸡(XH)骨骼肌，100日龄隐性白普利茅斯岩鸡骨骼肌，1日龄XH骨骼肌，18胚龄XH骨骼肌.（C）3只免疫小鼠的血清抗体采用SAS-PAGE和银染进行分析，结果显示小鼠1具有最强的免疫应答和最高的抗体多样性。Lane1-3表示小鼠1血清分别稀释1000倍、2000倍、5000倍；Lane 5-7表示:小鼠2血清分别稀释1000倍、2000倍、5000倍；Lane9-11表示:小鼠3血清分别稀释1000倍、2000倍、5000倍.（D）ELISA评估三种免疫小鼠的血清抗体效价.（E）Elisa对随机选取的188株细胞株上清液进行价态测定.作者通过首个家鸡肌肉的抗体阵列，对成肌细胞发生过程中涉及的蛋白谱进行生物信息学分析，发现了能量代谢在增殖到分化转变中的关键作用。能量代谢相关蛋白LDHA进一步被证实通过调节骨骼肌的糖酵解和线粒体能量代谢过程，影响成肌细胞的增殖和分化。原文链接：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.127629Arrayjet位于英国爱丁堡，专注于提供生物芯片应用领域的解决方案及服务。自2000年公司成立即致力于开发新型生物样品喷点方案–喷墨式液体处理平台，该系统于2006年上市，目前用户遍布全球27个国家。Mercury系列产品采用独特的飞行喷墨点样技术实现行业第一的快速、非接触式微量液体处理。同时上万种不同样品可以进行快速点样，专利的上样模块配合高通量的点样喷头保障您的点样操作快速、无污染，更低的上样体积可有效减少样品损失，使您的珍贵样品物尽其用。▼更多 ArrayJet 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

生产医疗设备的常见材料有机硅（聚二甲基硅氧烷，PDMS），可能是医疗器械相关感染这一普发问题的根源，因为PDMS的非生物表面容易发生微生物定植和生物膜发育，使得生物膜细菌能够共享营养物质和DNA，帮助细菌存活并增加抗生素耐受性。2023年10月发表于《Colloids and Surfaces B: Biointerfaces》的这篇文章，作者使用壳聚糖（chitosan）、表面活性素（Surfactin）、槐脂（Sophorolipids）和透明质酸（Hyaluronic acid）作为原材料，开发一种可以用于包被PDMS的新型抗菌材料，从而降低PDMS的表面细菌附着、繁殖形成生物膜，并最终减少医疗器械引起的感染。壳聚糖是一种被深入研究的抗菌聚合物，可破坏细菌细胞膜、抑制生长并杀死细菌；同时可形成亲水性聚合物三维网络的水凝胶，用于存储并随着时间逐渐释放生物活性物质。为了增强壳聚糖的抗菌作用，研究人员在壳聚糖中添加如抗生素、金属、酶、带电有机化合物、抗菌肽和生物表面活性剂等成分。在本文中作者尝试了三种材料——表面活性素（Surfactin）、槐脂（Sophorolipids）和透明质酸（Hyaluronic acid），其中表面活性素和槐脂是表面活性剂，破坏细菌细胞膜的方式杀死细菌；透明质酸也有一定的抗菌作用。实验方法第一步，单独验证实验，表明槐脂的抗菌效果优于表面活性素，选择槐脂作为原材料与壳聚糖共同制作抗菌材料。第二步，壳聚糖的浓度影响抗菌效果，选择2%-2.5%的壳聚糖作为原材料。第三步，制作壳聚糖(Ch)、壳聚糖-槐脂复合物(ChSLs）、壳聚糖-透明质酸复合物(HA-Ch)、壳聚糖-槐脂-透明质酸复合物(HA-ChSLs），并利用西班牙REGEMAT 3D公司的Bio V1 3D生物打印机将上述候选物质在PDMS材料上打印成20mm*20mm，且具有1*1mm小孔的特殊结构，并进一步验证其抗菌活性。（图1）图1 利用REGEMAT 3D打印机打印图层。3D打印涂层示意图（左）。最终 3D 打印涂层效果（右）：20×20 mm区域，1×1mm孔径和 0.5 mm高度；比例尺：5mm实验结果：作者测试了材料的吸收光谱和疏水性等特性，进一步利用细菌培养的方式检测了4种材料的抗菌性。结果表明，壳聚糖-槐脂复合物(ChSLs)表现出了最强的抗菌效果，与对照组（PDMS无包被）相比，细菌抑制率达到61%（图2）。同时，各种材料具有优秀的生物组织相容性，可以作为潜在的生物材料。图2.不同生物材料样本对浮游在液体中（A）和附着在材料上（B）的金黄色葡萄球菌对的抑制作用。PDMS （对照组，C+）、Ch 涂层、ChSL涂层、HA-Ch 涂层和 HA-ChSL图层。B1-B5，附着的金黄色葡萄球菌的生物膜示意图；比例尺：30μm结论壳聚糖作为PDMS抗菌包被材料，在与槐脂加工后形成新的复合材料，具有更强的抗菌效果和优秀的组织相容性，成为潜在的生物医疗器械备选材料。更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1016/j.colsurfb.2023.113486环亚生物科技有限公司作为西班牙REGEMAT 3D公司生物3D打印系列产品在中国区的独家代理商，一直为国内用户提供专业的生物3D打印系统的安装测试、应用培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。环亚生物科技有限公司将一如既往地支持越来越多的REGEMAT 3D用户。▼更多 Regemat 3D 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

Innoscan芯片扫描仪助力新防伪材料开发——固相纳米合成荧光防伪材料目前，由于信息泄露、安全密码或防伪措施被破解，每年造成的损失可达数万亿美元，而且严重威胁人类健康、社会公平和国家安全。以药品的假冒证书或者电子产品秘钥为例，如果出现漏洞就会造成巨大损失。而解决这类问题的一个有效手段就是设计安全性高的防伪标签，例如通过光学验证的荧光全息图。在这一方面，目前已经有很多团队在做相关研究，包括半导体量子点、有机染料和碳点（carbon dots ，CDs）在内的很多候选方案。其中CD因其稳定性、低毒性、广泛可用的前体等优势而特别突出。然而，大多数研究表面CD都是在溶液中发出荧光，固态则荧光淬灭。因此开发一种可以在固态情况下实现CD编辑，从而激发固态荧光 （solid-state fluorescence ，SSF）图案，并且通过物理不可克隆函数（physical unclonable functions ，PUF）将其信息形成有效的唯一的荧光全息图就成为一种值得期待的方法。来自德国马克斯·普朗克胶体与界面研究所，于2023年《Nature Nanotechnology》发表的这篇文章——一种新型的多合一纳米打印方法。该方法以CD为原材料合成SSF图案，并结合PUF加密技术，最终制成具有高防伪加密功能的荧光全息图。固相的CD合成制备因π-π堆积导致荧光淬灭，目前CD合成多通过液相的方法制备。而本研究中，CD前体材料包被的载玻片在毫秒级激光脉冲照射后合成CD，不但成功避免了荧光淬灭，还可以精准控制所合成的CD高度、位置、图案等参数，最终形成用来存储加密信息的SSF图案。这种技术，作者称为nanoFlash原位合成技术。nanoFlash原位合成SSF分为两个主要步骤（具体步骤见文末）验证nanoFlash合成效果：为了验证nanoFlash原位合成技术是否生成了预想的SSF图案，作者利用法国innopsys公司的innoscan-1100 AL生物芯片扫描仪读取了制成的SSF玻片。结果发现，nanoflash方法能够有效将CD前体通过脉冲激光转化生成CD，并最终得到想要的SSF图案。（图1）不仅如此，为了验证除了激光之外其他因素对CD合成的影响，作者也尝试了改变吸光层和CD前体的成分，并做了进一步实验。结果发现，不同的添加剂也会影响CD所发出的荧光。例如，作者发现在吸光层加入聚乙烯醇会导致所合成的CD红色激发光更强，而如果加入聚乙二醇则会淬灭红色激发光。图1 nanoFlash合成方法的原理和转移图案的表征 a，温度与时间是影响CD前体形成CD并产生不同荧光的关键因素；b，通过调节激光脉冲可以驱动CD前体形成不同微观图案的SSF；c，d，通过调节激光脉冲可以驱动CD前体形成不同高度的SSF；e，使用innoscan 1100AL的红绿蓝三色通道扫描制成的SSF图案通过改变合成参数，作者构建了一个具有100个单独图案的SSF库，即使在荧光相似的情况下，不同图案也有截然不同的纹理结构。（图2）图2 荧光接近但微观结构不同的SSF图案接下来，作者测试了这种方法合成SSF图案的加密能力。理论结果表明，一个利用PUF的方法，加密325*325像素的SSF图案的编码能力可以达到1063593，完全达到强PUF密码的标准。并且，利用innoscan 1100AL在不同分辨率（每像素 1、5 和 10 μm）扫描出的图案，所读取的信息始终识别，这表明在身份验证等类似安保措施中，具有很高的可靠性，防止信息被破译。结论：1.作者成功利用纳米激光脉冲，在固相（载玻片）上合成了CD，并通过预设的程序生成SSF图案。2.通过改变CD合成过程中的颜色、结构、位置等参数，可以精确生成各种不同的SSF图案，结合PUF等算法，保证一个325*325像素的SSF图案能够拥有足够的编码能力来达到防止破译的效果。更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1038/s41565-023-01405-3Innopsys 成立于1999年。总部位于法国，一直致力于生物医学领域相关仪器和软件的自主研发和生产。Innoscan系列扫描仪，采用先进的共聚焦PMT检测器和多激光扫描光路，可以同时进行多通道荧光检测。不仅有效降低了荧光光漂白现象以及信号损失，还可以有效缩短扫描时间。在基因组和蛋白组表达，基因突变，SNP检测，CGH，细菌病毒检测，肿瘤特异性标志筛查，病理组织筛查等方面都有非常广泛的应用。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为Innoscan大中华区代理商，负责Innoscan产品大中华区的营销和售后支持。nanoFlash原位合成SSF主要步骤：1.将CD前体溶液（在本次研究中，作者使用D-（+）-氨基葡萄糖盐酸盐）均匀覆盖在具有特殊吸光层的载玻片上，继而烘干机烘干，制备出了包被CD前体的载玻片。2.在包被CD前体的载玻片上，利用毫秒级的纳米激光器根据预先设计好的打印方案快速打印，使CD前体转化为可发出荧光的CD。具体原理是：激光脉冲具有很高能量，在到达吸光层后会迅速转变成热能，并使局部温度达到500℃以上。在这个温度条件下，CD前体会快速碳化并形成CD。作者通过调整激光的强度、位置、照射时间，就可以控制所合成的CD位置、厚度、宽度、激发荧光的颜色等参数，最终形成预设的、具有不同纹路、和高低落差的SSF图案（图1）。▼更多 Innoscan 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

头颈部鳞状细胞癌（Head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC）是一类发生在头颈部的恶性肿瘤，在全球癌症发病率中居第七位，每年约有89万新发和45万死亡。尽管HNSCC的流行病学、发病机制和新型抗癌疗法等研究均有较大进展，但预后较差，超过一半的患者会局部复发或转移，患者长期生存率低。因此，人们迫切需要开发新的治疗方案，即对单一或多种HNSCC综合治疗方法的探索。电离辐射（Ionizing radiation，IR）可诱导DNA双链断裂 （DNA double-strand break，DSB）。抑制DSB修复以增加癌细胞对放射治疗的敏感性，从而导致受照射的癌细胞死亡，同时保留正常组织。经过对小分子激酶抑制剂（Kinase inhibitors，KI）和电离辐射（Ionizing radiation，IR）联合给药的广泛研究，发现使用激酶抑制剂（KIs）特别是雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和DNA依赖性蛋白激酶（DNA-PK）抑制剂，可以增加HNSCC细胞对放射治疗的敏感性，因此KIs与电离辐射（IR）联合使用是一种有前景的治疗策略。德国埃尔朗根-纽伦堡大学的Nina Klieber等人重点研究了三种KI抑制剂与IR联合给药对癌细胞的抑制作用和对健康组织细胞的毒副作用。KI抑制剂分别为DNA-PK选择性抑制剂（DNA-PK-I）AZD7648、mTOR选择性抑制剂（mTOR-I）Sapanisertib、DNA-PK和mTOR双重抑制剂（dual DNA-PK-I / mTOR-I）CC-115，癌细胞为HPV阴性的HNSCC细胞系HSC4、CAL33以及HPV阳性的HNSCC细胞系UM-SCC-47、UD-SCC-2，健康组织细胞为成纤维细胞SBLF7、SBLF9和角质形成细胞HaCaT。文中采用德国innoME公司的zenCELL owl活细胞动态成像及分析系统，对癌细胞和健康组织细胞给药后的增殖和动态变化进行长时间监测，获取相应的监测图片和生长曲线等数据，并对癌细胞的“倍增时间”这一重要指标进行计算、评估，相关成果以“Different Impacts of DNA-PK and mTOR Kinase Inhibitors in Combination with Ionizing Radiation on HNSCC and Normal Tissue Cells”为题于2024年2月发表在《Cells》杂志上。研究人员使用zenCELL owl，对HNSCC和健康组织细胞在KI ± IR给药下的增殖状态进行实时长时间监测，获得了KI和IR的中期影响（图A）。为了进一步深入研究，研究人员使用zenCELL owl软件对获取的监测结果进行细胞计数和汇合度分析（仅扁平细胞（Flat cell）纳入计算范围），并据此拟合了细胞的生长曲线。与未给药的对照组相比，经过KI处理但未暴露于IR的HNSCC细胞（如CAL33）生长曲线出现了延迟，在CC-115给药处理下，增长放缓最少，在AZD7648下增长放缓最多；这种效应被额外的IR放大了数倍；与暴露于IR的细胞组相比，所有三个KI ± IR处理的细胞组的生长曲线都明显变平（图B）。经过以上生长曲线计算得到的倍增时间可用于评估癌细胞的长期增殖能力。相对于CAL33对照组细胞，所有三种联合给药方法都导致癌细胞的倍增时间显著增加（图C）。在其他HNSCC和正常组织细胞中也观察到上述类似现象，在 IR 暴露前添加KI均导致倍增时间增加。在IR暴露的细胞组中，12 组中有 11 组在KI给药后显示出更长的倍增时间。与未给药组相比，使用三种KI之一的单一疗法导致大多数细胞组的轻微生长迟缓（图D）。图. HNSCC和健康组织细胞在KI ± IR给药下的实时增殖和统计数据，（A）经IR ± 5μM AZD7648处理HNSCC CAL33细胞从接种到过度生长的实时监测图像，（B）经IR ± KI处理CAL33生长曲线（从数据点拟合指数增长方程），（C）基于上述指数生长方程，经KI ± IR处理CAL33的倍增时间（以小时为单位），（D）HSC4、UM-SCC-47和HaCaT的倍增时间（以小时为单位）研究人员还通过其他多种分析方法，包括细胞凋亡研究、细胞周期分析、实时集落形成实验和γH2AX及其下游mTOR蛋白p-S6的免疫组化染色等方法，来综合评估3种KI对HNSCC和正常组织细胞的影响。研究结果突出AZD7648作为放射增敏剂在晚期HPV阳性和阴性HNSCC中的潜力，提供了一种有效的治疗策略。然而，双重mTOR/DNA-PK抑制剂CC-115并未显示出比AZD7648和Sapanisertib两种选择性抑制剂更大的优势，表明其在KI与IR联合治疗中的应用可能受到限制。特别是，mTOR-I Sapanisertib仅在HPV阳性HNSCC中有益，因此不应用于HPV阴性。德国InnoME公司自主研发和生产的zenCELL owl活细胞动态成像及分析系统，基于非标记、非侵入方法，原位记录细胞实时生长和定量的分析数据。zenCELL owl体积小巧，耐温耐湿，可在细胞培养箱内长时间连续工作；通过24个显微成像镜头，对24个视野进行连续的动态监测和图像获取。zenCELL owl为用户提供高质量图像、视频、统计学曲线和定量数据，实现细胞增殖／增殖抑制、细胞培养质控／培养优化、迁移／侵袭等诸多活细胞动态过程的监测。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，不断把国外顶级的创新产品引入中国。环亚生物具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为zenCELL owl大中华区独家代理商，负责zenCELL owl产品大中华区的营销和售后支持。更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.3390/cells13040304▼更多 zenCELL owl 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼

目前，越来越多的研究证明肾单位的数量与肾脏疾病的易感性存在关联，但临床环境无法直接测量肾单位数量。近期已有研究使用单次活检的肾小球密度和全肾皮质体积，来估算肾单位数量和单个肾单位的肾小球滤过率。然而，估算的准确性以及样本量或活检位置如何影响估算值皆不清楚。来自华盛顿大学马林克罗特放射学研究所Kevin M. Bennett等人，通过同一肾脏的多次穿刺活检，以及MRI成像方法检测肾单位密度的三维空间分布，从而确定单肾活检准确性，进而预测同一肾脏多次活检估算得到的平均肾单位数。研究成果以“Estimating Nephron Number from Biopsies: Impact on Clinical Studies”为题于2022年1月发表在《Journal of the American Society of Nephrology》上。本研究中，肾脏组织穿刺活检的石蜡切片由芬兰Grundium公司的Ocus便携式数字病理切片显微扫描成像系统完成（图1所示）。扫描结果清晰显示了非硬化性肾小球（蓝色轮廓）和皮质区域（黑色轮廓）的区域，通过蓝色轮廓和黑色轮廓的横截面积可计算非硬化性肾小球的密度。结合MRI成像和其他对应的数据分析和计算方法，本研究展示了肾小球密度空间变异性对活检估算全肾肾单位数量的影响。最终结果表明：大量受试者或样本中，针刺活检一定程度上可以揭示人群之间的肾单位数量差异；单次针刺活检不能在个体水平上准确反映全肾的肾单位数量。未来仍需要开发新的技术用于直接测量个体水平的肾单位数量。图1 肾脏组织切片的扫描结果芬兰Grundium公司自主研发和生产了全球领先的便携式数字病理扫描显微成像系统--Ocus。设备具有双层可移动载物台，根据自动圈选的区域，结合专利的软件算法采取螺旋路径等非直线扫描模式，快速完成扫描。Ocus每个视野独立自动对焦，可有效避免切片厚薄不均导致的图像问题，且采集的图片自动无缝拼接生成超高清图片，不遗漏任何有价值的信息。Ocus的访问和操作均采用浏览器模式，通过有线、无线或自带热点的链接，无需安装额外的软件或app，通过手机、Pad或电脑即可实现仪器的访问和操控。环亚生物，生命科学产品全国性代理商，不断把国外顶级的创新产品引入国内。APG BIO具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。APG BIO作为Grundium大中华区独家代理商，负责Grundium产品大中华区的营销和售后支持。  更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1681/ASN.2021070998▼更多 OCUS 产品详情，请联系我们▼环亚生物科技有限公司地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室电话：021-54583565邮箱：info@apgbio.com网址：www.apgbio.com▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼