【飞诺美色谱】液相色谱串联质谱法测定血浆中6种儿茶酚胺类物质

Keywords: Catecholamine, LC-MS/MS, Solid-phase extraction,

Plasma

前言

嗜铬细胞瘤及副神经节瘤（PPGL）是一种能够引起内分泌

性高血压的少见神经内分泌肿瘤，在普通高血压门诊中患病率为

0.2% - 0.6%，在儿童高血压患者中为1.7%。PPGL患者的主要临床

表现为儿茶酚胺（catecholamine，CA）类物质分泌增多，进一步

导致高血压及心、脑、肾血管并发症和代谢性改变，在经准确诊

断后，可通过手术治疗，属于一种可治愈的继发性高血压。

CA是一类含有儿茶酚和胺基的神经类物质，是人体内重要的

神经递质和激素，包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺

（DA）。CA在儿茶酚-O-甲基转移酶（COMT）的作用下生成变肾

上腺素类物质（metanephrines，MNs），主要包括甲氧基肾上腺

素(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)和3-甲氧酪胺(3-MT)。在《嗜

铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗的专家共识（2020）》中，推

荐：诊断PPGL的实验室检查首选血浆游离或尿液甲氧基肾上腺素

(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN) 浓度测定；建议：可同时检测血

或尿NE、E、DA及其他代谢产物3-MT等浓度以帮助诊断。并且，

鉴于质谱法灵敏度高、专属性强、稳定性好等特点，专家共识中

推荐首选使用LC-MS/MS法测定MNs。

本方法基于SCIEX 液相色谱串联质谱系统，采用同位素内标校

正法，建立了一次处理，同时准确检测血浆中6种儿茶酚胺类物质

的定量方法。各化合物信息如下。

RUO-MKT-02-13152-ZH-A p 1

The Power of Precision

For Research Use Only. Not for use in Diagnostic Procedures.

Clinical Research

SCIEX液相色谱串联质谱法测定血浆中6种儿茶酚胺类物质

Determination of 6 Catecholamines in Human Plasma

Samples by SCIEX Liquid Chromatography-Tandem Mass

Spectrometry

张元媛，胡凤梅，黄超，崔敬文，李国庆

Zhang Yuanyuan, Hu Fengmei, Huang Chao, Cui Jingwen, Li Guoqing

实验部分

样品前处理

本实验采用SPE固相萃取法对血浆中6种儿茶酚胺类进行处理。

色谱条件

色谱柱：Kinetex F5（2.6 μm, 3.0×100 mm）；

流动相：A含甲酸的水溶液，B含甲酸的甲醇，梯度洗脱；

流速：0.4 mL/min；

柱温：40 ℃；

质谱条件

电离方式：电喷雾离子源，正离子；

检测方式：多反应监测 (MRM)；

中文名英文名CAS编号分子式

结果与讨论

在本实验条件下，各化合物得到有效分离，典型色谱图如图1。

标准曲线

以水为替代基质，制作标准工作曲线。各待测物典型标准曲

线结果如下表。

加标回收率

取混合人血浆样本，分为4组，向其中三组加入不同浓度的6

种儿茶酚胺混合标准溶液，制备低、中、高三组血浆加标样本，

以随行标曲测定4组血浆样本中各化合物浓度。按下述公式计算加

标回收率。

加标回收率=(实测加标后样本浓度-实测加标前样本浓度)/理论

加标浓度

各化合物在各自加标水平下加标回收率结果如下图所示。各

待测物的加标回收率在92.2%-112.1%之间，符合相关要求。

*单位：ng/ml；本实验条件下，统一配置标准曲线范围如表所示，具体曲线范

围可根据真实需求调整。

*单位：ng/ml；本实验条件下，统一配置标准曲线范围如表所示，具体曲线范围可根据真实需求调整。

加标回收率

取混合人血浆样本，分为4 组，向其中三组加入不同浓度的6 种儿茶酚胺混合标液，制备低、中、高三组血浆加标样本，以随行标曲测定4 组血浆样本中各化合物浓按下述公式计算加标回收率。

加标回收率=(实测加标后样本浓度-实测加标前样本浓度)/理论加标浓度

各化合物在各自加标水平下加标回收率结果如下图所示。各待测物的加标回收92.2%-112.1%之间，符合相关要求。

图2 6 种儿茶酚胺类物质低、中、高浓度水平加标回收率

精密度

取混合人血浆样本，分为3 组，向其中加入不同浓度的6 种儿茶酚胺混合标准溶制备低、中、高三组血浆加标样本（QC）。各浓度4 样本分析，连续测定3 天。根日的标准曲线，计算QC 样本浓度。根据QC 的RSD%对方法的日内与日间精密度进察。结果下图所示。各化合物的日内和日间精密度分别为0.7-6.0%和2.9-9.4%，符合0.0%

精密度

取混合人血浆样本，分为3组，向其中加入不同浓度的6种

儿茶酚胺混合标准溶液，制备低、中、高三组血浆加标样本

（QC）。各浓度4样本分析，连续测定3天。根据当日的标准曲

线，计算QC样本浓度。根据QC的RSD%对方法的日内与日间精密

度进行考察。结果下图所示。各化合物的日内和日间精密度分别

为0.7-6.0%和2.9-9.4%，符合相关相关要求。

结果与讨论

在本实验条件下，各化合物得到有效分离，典型色谱图如图1。

总结

本实验在SCIEX 液质连用平台上，搭建了一针进样，6 种儿茶酚胺类化合物同时定量

检测方法。实验采用SPE 法进行样本前处理，同位素内标校准，对血浆中6 种儿茶酚胺

类化合物定量分析。方法线性良好，加标回收，日内、日间精密度满足相关要求。可用于

临床实际样本的检测。