血浆中多肽药物的测定
应用及技术服务部
概述
多肽是由多个氨基酸通过肽键连接而形成的一类化合物,通常由10~100个氨基酸分子组成,其连接方式与蛋白质相同,相对分子质量低于10000。多肽普遍存在于生物体内,迄今在生物体内发现的多肽已达数万种,其广泛参与和调节机体内各系统、器官、组织和细胞的功能活动,在生命活动中发挥重要作用。
关键词
多肽;Peptide-1-MW;Luna Omega Palor C18;
LC-MS/MS
化合物信息
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX Triple QuadTM5500),配有电喷雾离子源(ESI);
孔正压装置(Agela Cleanert M96);
氮吹浓缩仪(Agela Cleanert V96)。
3.1.2试剂材料
96孔板:Peptide-1-MW
屈臣氏蒸馏水,甲醇、甲酸、乙酸铵、乙腈、氨水均为色谱级。
3.1.3样品基质
EDTA抗凝大牛血浆
3.2样品前处理方法
预处理:200 μL血浆加入200 μL 2%氨水水溶液,涡旋,待净化;
活化:96孔板依次使用 200 μL甲醇、200 μL水活化;
上样:加载预处理后的血浆至活化后微孔板;
淋洗:依次使用500 μL水、200 μL水淋洗微孔板;
洗脱:用100 μL洗脱液(2%甲酸 乙醇:水=3:1)洗脱2次,涡旋混合;
氮干复溶:37 ℃氮气干燥20 min后,加入150 μL水涡旋混合,待检测。
3.3仪器检测条件
3.3.1色谱条件
色谱柱: Luna Omega Polar C18(2.1×50 mm, 1.6 μm, 100 Å);P/N: 00B-4748-AN
流动相A相:0.1%甲酸5 mM乙酸铵水溶液;
流动相B相:0.1%甲酸乙腈溶液;
流 速:0.3 mL/min;
柱 温:40 ℃;
进样量:10 μL;
梯度程序见表2:
3.3.2质谱条件
离子源类型:电喷雾离子源(ESI+)
扫描方式:多反应监测正负离子模式(MRM)
喷雾针电压:5500 V
离子源温度:500 ℃
加热器(GS1):60 psi
辅助加热气(GS2):60 psi
气帘气(CUR):40 psi
碰撞气(CAD):10 psi
为获得较好的稳定和灵敏度,各化合物监测离
子对的去簇电压(DP)和碰撞电压(CE),目
标化合物定量离子对以及内标监测离子对等参
数均需经过系统优化。本案例参数仅供参考不
具备法律效力。
3.4结果与讨论
由表4可知,大部分肽类在该模式下的外标法回
收率均在80%~120%之内,相对标准偏差RSD小于10%
可以满足分析需求。
结论
本实验建立了血浆中小肽类药物的检测方法,特立帕肽的通常回收率在40%-60%之间,考虑到方法的普适性故选择此进行前处理。
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