花生油中 8 种抗氧化剂的分析方法
AF10133
应用及技术服务部
摘要:本实验采用固相萃取结合高效液相色谱的方法,建立了花生油中 8 种抗氧化剂(PG、TBHQ、
NDGA、BHA、Ionox-100、OG、BHT、DG)的检测方法。样品经乙腈提取,Cleanert S C18-N 固相萃取柱净化,Venusil XBP C18(L)色谱柱(4.6 × 250 mm,5 µm,150 Å)分离,0.5%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,外标法进行定量。结果表明,8 种抗氧化剂添加量分别为 PG: 171
mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA: 121 mg/kg、BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg 时,回收率在 89%~106%之间,变异系数小于 6.0%,能够满足检测要求。
关键词:抗氧化剂;Venusil XBP C18(L)色谱柱;Cleanert S C18-N
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前言
食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化反应不仅会使食品中的油脂变质,而且还会使食品退色、变色和破坏维生素等,从而降低食品的感官质量和营养价值,甚至产生有害物质,引起食物中毒。
由于合成抗氧化剂化学性质稳定,价格比较优惠且有较好的效果,在预防脂质氧化的方法中,往往被优先考虑,一般使用的合成抗氧化剂有 BHA、BHT、TBHQ 等。
然而由于这些抗氧化剂不是食品成分之一,而且在食品工业中存在很多违规操作, 抗氧化剂的添加往往超出规定的标准,越来越多的研究表明:人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用,有害人们的身心健康,因此对食品中合成抗氧化剂的测定显得尤为重要。
本实验建立了高效液相色谱法检测花生油中 8 种抗氧化剂的方法。
实验部分
仪器、试剂与材料主要仪器设备
高效液相色谱仪(紫外检测器);博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置。
试剂材料
乙腈、甲醇为色谱纯;实验用水为超纯水,8种抗氧化剂标准品及化学式,CAS号见表1;
表1.食品中8种抗氧化剂中文与英文名称、CAS号
序号 | 中文名称 | 英文名称 | 英文简称 | CAS 号 |
1 | 没食子酸丙酯 | Propyl gallate | PG | 121-79-9 |
2 | 叔丁基对苯二酚 | Tert-butylhydroquinone | TBHQ | 1948-33-0 |
3 | 去甲二氢愈创木酸 | Nordihydroguaiaretic acid | NDGA | 500-38-9 |
4 | 叔丁基对羟基茴香醚 | Butylhydroxyanisole | BHA | 25013-16-5 |
5 | 2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚 | 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol | Ionox-100 | 489-01-0 |
6 | 没食子酸辛酯 | Octyl gallate | OG | 1034-01-1 |
7 | 2,6-二叔丁基对甲基苯酚 | Butylated hydroxytoluene | BHT | 128-37-0 |
8 | 没食子酸十二酯 | Dodecyl gallate | DG | 1166-52-5 |
一次性无菌注射器;Nylon 针式过滤器 (0.22 µm,直径 13 mm) ;
Cleanert S C18-N 固相萃取柱:2000 mg/12 mL
样品制备样品提取
称 1 g 样品至 50 mL 离心管中,加 10 mL 乙腈,震荡 2 min,超声 10 min,3000 r/min
离心 5 min,收集上清液至鸡心瓶中,再加 10 mL 乙腈萃取,震荡 2 min,超声 1 min,
3000 r/min 离心 5 min 合并上清液。样品净化
先将小柱用 5 mL 甲醇,5 mL 乙腈活化平衡,然后将待净化液上 SPE 柱,收集流出液,再用 10 mL 乙腈︰甲醇=2︰1(V/V)进行洗脱,并收集洗脱液,40℃蒸干,用1 mL 乙腈溶解残留物,过 0.22 µm Nylon 针式过滤器后待测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
实验条件
液相条件
色谱柱:Venusil XBP C18(L),5 µm,150 Å,4.6 × 250 mm
流动相:A: 0.5%甲酸水溶液;B:甲醇; 流 速:1 mL/min
柱 温:35℃ 进样量:5 µL
检测波长:280 nm
流动相梯度见表2
表2.流动相梯度
时间/min | A/% | B/% |
0 | 40 | 60 |
15 | 30 | 70 |
25 | 0 | 100 |
30 | 0 | 100 |
31 | 40 | 60 |
35 | 40 | 60 |
结果与讨论
实验结果
由表 3 可知,采用固相萃取结合液相色谱法检测食品中 8 种抗氧化剂,花生油基质加标回收率 89% ~ 106%,变异系数小于 6.0%,能够满足检测标准要求。
表 3. 花生油中 8 种抗氧化剂加标回收实验结果
物质名称 | 保留时间/min | 添加水平/mg/kg | 回收率 /% | CV /% |
PG | 4.430 | 171 | 93.8 | 4.3 |
TBHQ | 6.058 | 135 | 100.6 | 2.5 |
NDGA | 11.447 | 121 | 95.5 | 5.8 |
BHA | 13.078 | 213 | 105.0 | 3.0 |
Ionox-100 | 17.806 | 141 | 105.2 | 2.8 |
OG | 20.920 | 95 | 93.5 | 4.2 |
BHT | 26.506 | 151 | 101.3 | 2.7 |
DG | 26.804 | 135 | 89.5 | 4.3 |
图1. 8种抗氧化剂标准溶液液相色谱图(标准浓度:PG: 171 µg/mL、TBHQ: 135 µg/mL、NDGA: 121
µg/mL、BHA: 213 µg/mL、Ionox-100: 141 µg/mL、OG: 95 µg/mL、BHT: 151 µg/mL、DG: 135 µg/mL)
图3花生油基质加标液相色谱图(加标浓度:PG: 171 mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA: 121 mg/kg、
BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg)
图4. 乙腈提取后氮气吹干油样残留(左:1 g油样;右:净化后油样残留)
结论
本实验建立了花生油中 8 种抗氧化剂的检测方法,并结合高效液相色谱对花生油
中 8 种抗氧化剂含量进行测定。对加标量为 PG: 171 mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA:
121 mg/kg、BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg 的花生油样品,回收率在 89% ~ 106%之间,变异系数小于 6.0%,符合实验要求。
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
Venusil XBP C18(L) | 5 µm,150 Å,4.6 × 250 mm | 1 支 | VX952505-L |
Cleanert S C18-N | 2000 mg/12 mL | 20 支/包 | S18200012N |
Qdaura®卓睿全自动固相萃取系统 | 4 通道 | 1 台 | SPE-40 |
15 位氮吹仪 | 15 位 | 1 台 | NV15-M |
保护柱套 | 适用于4.6 × 10 mm 和2.1× 10 mm | 1 支 | SH-100 |
直联式保护柱芯 | 5 µm,150 Å;4.6 × 10 mm | 4 支/包 | VX950105-LS |
1.5 mL 样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 mL 样品瓶盖 | 9 mm 中心孔蓝盖,红色橡胶/米色 PTFE 隔垫45°Shore A; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
Nylon 针式过滤器 | 单膜,13 mm,0.22 µm | 200/pk | AS021320 |
一次性注射器 | 2 mL 无针头 | 100 支/包 | LZSQ-2ML |
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