QDa II质谱应用：提升精度，简化阿托伐他汀杂质检测

   

阿托伐他汀是全球范围内使用最广泛的处方药之一，用于控制高胆固醇血症等疾病、降低心血管疾病风险，是数百万患者的首选药物。然而，该药物中可能存在的微量毒性杂质会威胁到患者的安全，这就要求我们在药物生产过程中对杂质控制保持高度警惕。      

     

     

这种分析方法与Empower CDS软件相辅相成，使杂质分析过程更加简便、高效，确保数据合规性、完整性。

与《European Pharmacopoeia》相关专栏提出的方法不同，本分析方法考虑到四氢呋喃（THF）具有毒性和不稳定性，没有使用THF作为流动相的一部分，而是在水性流动相中加入醋酸铵缓冲液，在有机流动相中加入甲酸，以降低整个样品运行过程中的pH值并改善峰形。

本方法比《European Pharmacopoeia》专栏方法缩短了约60分钟，每次进样使用的溶剂量不到10%。

尽管大多数文献方法都选择了C18色谱柱，但事实证明CSH苯基己基色谱柱是提高阿托伐他汀化合物与相关杂质C分离度的更优选择。色谱柱温度设置为30 ℃，以削弱原料药的峰尾现象。

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实验结果

     

     

     

高灵敏度与精确度

     

准确测定已知杂质相对于原料药的浓度，且对三种不同的未知杂质也均分别进行了定量，相对浓度为0.11%、0.14%和1.15%。  

图1.加标阿托伐他汀样品（25 μg/mL）的PDA色谱图。

通过使用分流阀，杂质A和C可以在MS TIC色谱图中更清晰地显示出来。

 

图2.MS TIC色谱图使用分流阀定量分析杂质A [m/z 541.1] 和杂质C [m/z 557.1]。

 

图3.阿托伐他汀原料药在0.01-5.0 μg/mL浓度范围内的校准曲线。

对选定的阿托伐他汀相关杂质进行了线性和灵敏度评估。所有情况下的R2值均超过0.998，残差率均小于16.3%。所有校准反应均为线性（1/X 加权）。

 

表1.杂质A、C和I的校准结果摘要。

尽管注入的原料药浓度可高达75 μg/mL，但在随后的空白进样中没有出现携带现象。

 

图4.杂质A在0.01-1.0 μg/mL浓度范围内的校准曲线。

相比PDA曲线，MS TIC色谱图更清晰地显示了另外一种未知杂质 - 未知杂质4的存在。且通过叠加空白样品，表明MS TIC色谱图中的未标记峰并非API样品独有。

 

图5.加标（0.12%）阿托伐他汀原料药样品（75 μg/mL）的叠加PDA色谱图（A）和MS TIC色谱图（B）。

• 使用ACQUITY QDa II质谱检测器可以轻松获得色谱图中每个峰的质谱：

图6.阿托伐他汀和阿托伐他汀相关杂质在1 μg/mL浓度下的质谱图。

• 源内碎片分析帮助确定未知杂质结构：

对未知杂质2的m/z 451.2前体离子施加50 V锥孔电压，可产生m/z 422的碎片（图 7A）。这种碎片模式与去氟阿托伐他汀和相关杂质H相匹配。m/z 422后出现的m/z 380碎片表明该化合物更有可能是相关杂质H。

 

图7.未知杂质2(A)和未知杂质3(B)的质谱图，图中各部分下方显示了可能的杂质剖面和碎片模式。

 

图8.阿托伐他汀杂质A在制备样品15天后的质谱比较。

若采用传统紫外色谱法，则会观察到杂质A的相对含量似乎有所增加，得出错误结论。然而这种差异并不是杂质A的浓度变化导致，而是因为随着原料药的降解，一种与杂质A发生共洗脱的化合物的量增加。

 

图9.加标（0.12%）阿托伐他汀原料药样品（75 μg/mL）的紫外色谱图与MS TIC图像对比。

     

     

可重复性与稳定性

     

基本所有杂质%RSD都小于9%。  

 

表2.加标（0.12%）阿托伐他汀原料药样品（75 μg/mL）的[254 nm，4.8 mm]PDA痕量中定量峰的相对面积百分比，连续重复n=10次。

     

       

Empower CDS数据报告功能

       

 

图10.Empower CDS生成的数据报告示例，用于分析添加了0.12%杂质A、C和I以及其他未知杂质的75 μg/mL阿托伐他汀样品。