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使用 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱对生物制剂进行灵敏的高通量体积排阻色谱 (SEC) 分析 (PDF)
2022/11/25 11:15
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方案摘要：
产品配置单：
二手翻新安捷伦1260液相色谱仪
型号： 1260
产地： 美国
品牌： 安捷伦
¥20万
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方案详情：
蛋白质通常在暴露于应激条件下时发生聚集，例如 pH、 温度或浓度的变化。不同生产阶段均有可能发生聚集， 包括上游、下游或仅存储过程。体积排阻色谱 (SEC) 是 一种用于监测和表征单克隆抗体 (mAb) 和抗体药物偶联 物 (ADC) 聚集体的方法。然而，SEC 分离通常在相对较 低的流速下采用较长色谱柱进行，分析时间通常较长。 最近采用配备亚 2 µm 的超高性能液相色谱 (UHPLC) 来克 服这些难题，结果表明分析时间大大缩短。然而，当应 用非常细小的填料和较高流速时，热力和剪切力可能对 于温度或压力敏感的蛋白质至关重要 [1]。此外，使用水 性流动相对 ADC 进行 SEC 分析时得到了较差峰形，且聚 集体和单体之间的分离度不合格。这些问题可能是疏水 性细胞毒性药物和固定相之间的非特异性相互作用引起 的。为解决这个问题并改善峰形，我们向 SEC 流动相中 添加了多种有机改性剂。然而，这些有机改性剂可能会 破坏蛋白质并缩短色谱柱的使用寿命。 安捷伦对 SEC 进行了多次改进，以提高所得信息的质 量。其中，所开发的短柱长 (150 mm) 小孔径 (4.6 mm) 色 谱柱与独特的亲水性聚合物涂层相结合，具有最佳孔隙 体积和孔径。这些开发成果可确保色谱峰获得良好分 离且峰形尖锐，而无需向水性流动相添加任何有机改 性剂。本应用简报展示了应用短柱长小孔径的 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱对 mAb 和 ADC 实现了快速的高通 量 SEC 分析。本研究还展示了这款色谱柱在这些分子定 量分析方面的应用。
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