鲎系海产动物，生物学分类上属节肢动物门肢口纲剑尾目。在其血液中含有一种特殊的变形细胞（amoebocyte）。这种变形细胞中含有能被内毒素激活的C因子、B因子、前凝固蛋白，因此，内毒素检测LT法（鲎变形细胞溶解物试验）的机理即是内毒素通过激活C因子、B因子、前凝固酶，而使可凝固蛋白变成凝固蛋白（肉眼可见的凝胶），从而可以半定量及定量地测知内毒素的含量（图1）。  日本学者在对可凝固蛋白氨基酸顺序研究的基础上，发现内毒素激活的凝固酶的作用点为可凝固蛋白的第18（Arg）和19（Ghr）间的肽健，以及第46（Arg）和47 （G1y）间的肽键，而裂解为A链、B链及C肽。且在切断部位的羧基端氨基酸的结构均为-G1y-Arg，提出此酶的作用有特异性（图2）。产色基质内毒素检测法即是据此原理而设计的。  一般地讲，内毒素与鲎试剂的反应是非常特异的，因此，LT法的假阳性极少。从革法兰氏阳性菌分离出的肽聚糖虽亦能凝固鲎试剂，但其活性比内毒素低1000~ 400000倍。 近来发现一种新的合成抗癌剂羧甲基（1→3）-β-D-葡聚糖亦能与鲎试剂起反应。其反应原理是：鲎试剂中含有一种称为G因子的物质，此抗癌剂能激活鲎试剂中的G因子，而活化的G因子又依次激活前凝固酶、可凝固蛋白，从而形成凝胶（图2）。至此凝血酶、凝血激酶，Poly I:CPo1yA:U、核糖核酸酶、胰蛋白酶等，亦可凝固鲎试剂而引起假阳性反应。但用氯仿处理此等物质（浸取3～4小时）可以除去这些物质，从而可避免发生假阳性反应。 哺乳类动物血浆中含一种酯酶，它对内毒素有降解及脱毒的作用，故用LT法检测血浆中的内毒素易受此种物质的影响，而造成假阴性结果。为了避免此等因素的影响，在试验前血浆需经过特殊处理。目前共有下述四种方法处理血浆，即稀释加热法、酸化值液、氯仿浸取法及凝胶过滤法。我们及其它的一些工作者认为稀释加热法简便易行，效果较好。 在鲎血液中，还有一种称之为抗LPS因子（Anti - LPS - factor，ALF）的蛋白物质，分子量约为15KDa，为一种鲎血抗凝剂，对LPS介导的LT反应有直接的抑制作用。ALF可抑制LPS对LT反应的初始.阶段。因此在制备鲎试剂时，应将此物质清除。氯仿浸取法可有效去ALF。除去ALF及加入Ca++ （o.o2M）可改善鲎试剂的质量，提高敏感性约100倍。

内毒素为革兰氏阴性细菌及其它一些微生物如衣原体、立克次氏体、螺旋体、单核细胞增多李斯特菌等胞壁中的类脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)成分。内毒素对机体有极为广泛的作用，可影响到机体几乎每一个器官、系统及生物功能。内毒素对机体有多种毒害作用，如热原性，致死作用，白细胞减少及增多，斯氏反应，弥漫性血管内凝血(DIC)，骨髓坏死，胚胎骨质耗损，血压下降，血小板凝聚，补体激活，Hageman因子激活，诱导血浆原激活剂，促进前列腺素的合或，抑制糖原异生的关键酶，骨骼肌加速释放氨基酸等等。因此，临床上革兰氏阴性菌感染或脓毒症时，如并发毒血症和内毒素休克，可有许多病理现象出现。最终可因心、肾、肺、肝等功能的衰竭而发生死亡。 由于很小剂量的内毒素即能引起极广泛的生物作用及病理作用，因此，加强对内毒素检测的研究，便成为临床、公共卫生、药检系统等领域的重要课题之一。在临床上，加强对革兰氏阴性菌感染或革兰氏阴性菌菌血症、脓毒症时血清中内毒素检测，有利于及时发现内毒素休克的发生，以迅速采取果断的治疗。在公共卫生及药检系统等方面，对水源、食品、饮料、各种药物及生物制品进行内毒素检测，可严格控制水源水、食品、饮料、各种药物、生物制品中的内毒素含量，以将其控制在可接受的法定水平以下，有利于保证人民的身体健康。  鲎试验法 LT法又称鲎变形细胞溶解物试验（Limulus amoebocyte lysate，LAL），是目前检测内毒素最敏感的方法。它比RT法敏感10～100倍以上，可测出微量的内毒素(0.01～1 ng/m1 ) ，用微量光电法及其它的改进方法可测到微微克（Pg/ml）的水平。而在RT法中敏感性高的家兔需注射1.5ng/kg才能引起发热，而敏感性低的却需注射0.5-10ug/ kg才能引起发热。 LT法可广泛地用于革兰氏阴性菌感染的快速诊断，对患者的血液、尿液及脑脊液可进行直接的检查。此法亦可用于检查各种注射剂内是否有内毒素污染。近十多年来，随着各种先进的手段（如同位素标记技术，新频光电技术、免疫电泳技术等）应用于LT领域，使LT法得到了许多改进，敏感性又日益提高。 总之，从目前来看，LT法为检测内毒素的最好方法。其主要优点就是敏感性高，假阳性少，耗费的试剂量少，且设备简单，实验时间短，适用于临床、卫生事业及药检系统大规模地进行。如能解决好鲎试剂、内毒素及操作程序的标化问题，则LT法将是检测内毒素的最好方法。

鲎试剂细菌内毒素检测法是利用鲎试剂与组菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒紊含量是否符合规定的一种方法。该法具有快速、简便、重复性好、可进行标准化并且一次可以完成多批供试品检测等优点。  经卫生部批准，该法用于四种大输液(5%和10%萄萄糖注射液、氮化钠注射液、注射用水)的热原检查，在全国试行取得了满意结果[1]。近年来国内药检工作者将该法用于其它药物注射剂等的细菌内毒素检查，取得了一些进展。 马守江等采用鲎试验法检测50%葡萄糖、1%普鲁卡因、复方氯化钠、葡萄糖氯化钠、甲硝唑等5种注射液的细菌内毒素。研究结果表明:复方氯化钠、葡萄糖化钠对鲎试验无干扰，50%葡萄糖、1%普鲁卡因、甲硝唑3种注射液对鲎试验有不同程度的抑制作用，将后三种注射液分别稀释10、10、5倍可消除鲎两国试验的抑制。采用上述方法对5种100批注射液细菌内毒素检测，并与家兔法对照，适法的阳性检出率分别为8%和1%，未出现家兔法阳性而鲎试验法阴性的结果[2]。 由于普鲁卡因可干扰鲎试剂凝集反应，张卫星等采用双向超滤技术，将2%普鲁卡因与内毒素分离后检测细菌内毒素，既可消除干扰，又可避免稀释方法使检测灵敏度下降的缺点；通过对12批2%普鲁卡因注射液检测，与家兔法对照取得了一致结果，临床应用也未发现热原反应[3]。 郭红等用鲎试验法测定单硫酸卡那霉素的细菌内毒素，结果表明：经处理的药品对鲎试验无明显抑制作用，通过对84批单硫酸卡那霉素检测，并与家兔法相对照，初步认为:鲎试验法用于单硫酸卡那霉素内毒素检测是可行的，有可能取代家兔法而用于热原控制[4]。 王晶等将鲎试验法用于注射用对氨基水杨酸钠半成品的热原检查，试验方法为：取检品1%溶液0.2ml与0.1ml无热原生理盐水，加至鲎试剂安瓿中混匀；恒温37℃水浴保温1小时观察结果；通过一年来47批产品检验，与家兔法对照结果均一致[5]。 郭红等用鲎试验法检测青霉素细菌内毒素研究证明青霉素不干扰细菌内毒素的致热作用；用该法对100批青霉素G钾和100批青霉素G钠分别进行检测，与经典家兔法对照取得了一致结果，证明了鲎试验法的可行性[6]。 张卫星等用鲎试验法直接检测注射用氨苄青霉素钠的热原。研究表明:注射用氨苄青霉素浓度大于20mg/ ml时对鲎试验有抑制作用；采用10mg/ml氨苄青霉钠与灵敏度为1EU/ml的鲎试剂进行试验，经对10批检品检测，与临床效果相吻合[7]。林黎明等采用加25%葡萄糖注射液溶解并加热破坏氨苄青霉素钠以消除干扰的方法测定内毒素限量，成功地将鲎试验法用于30例静滴氨苄青霉素钠致药热的原因分析[8]。 许新涛等研究了对中药茵栀黄注射液采取鲎试验法检测热原的可行性。试验表明:由于吐温对鲎试验有抑制作用，含吐温一80茵栀黄注射液不宜采用鲎法检测热原；不含吐温的该药用鲎试验法检浏内毒素需稀释4倍。认为在兔法把关的前提下，鲎法作为茵栀黄(不含吐温—80)注射液热原初筛是可行的。研究者用鲎法控制该药热原24批次，与家兔法对照，总果一致，未出现假阴性结果[10]。 华君等用鲎试验法检测输液器具污染情况，分别用灵敏度1EU/ml和10EU/ml的鲎试剂检测49批输液器；结果表明采用灵敏度10mU/ml的鲎试剂对内毒霉的检出率略高于85版中国药典家兔法，用于检控输液器具的内毒素是可行的[10]。 采用鲎试验法检测药物注射剂等的细菌内毒素具有许多优点，但作为试管内的生化反应，不能反映热原质引起哺乳动物的致热反应过程，并且抗生素、中药等对鲎试验有干扰。近年来药检工作者采用稀释法、超滤法等部分克服了鲎试验法的局限性，使其应用范围日益扩大。 参考文献[1] 中国药学年鉴编委会编.中国药学年鉴(1991).人民卫生出版社,1991.62[2] 马守江等.中国药学杂志,1992,2T(12):741[3] 张卫星等.药学情报通讯,1991,9(4):45[4] 郭红等.药物分析杂志,1990,10(6):369[5] 王晶等.药学情报通讯,1988,6(3):42[6] 郭红等.药物分析杂志,1990,10(6):369[7] 张卫星等.中国医院药学杂志,1990,10(7):312[8] 林黎明等.药半通报,1987,22:430[9] 许新涛等.中草药,1991,22(6):286[10] 华君等.中国医院药学杂志,1987,7(9):411

一、鲎试剂在细菌内毒素检查法中的正确使用内毒素检查法结果准确与否与所用鲎试剂的灵敏度相关性很大[1]，而鲎试剂的灵敏度与它的正确使用又密切相关。所以，一定要严格执行鲎试剂的质量标准，规范使用鲎试剂。  （一）保证所使用鲎试剂的质量鲎试剂的质量主要表现在其灵敏度、自凝时间与成胶状态三个方面:灵敏度稳定；自凝时间不低于24h[2]；具有一定的缓冲能力与合适的pH；反应后即形成坚实凝胶，将成胶安瓿翻转180°而不会被破坏。而质量稍差的鲎试剂存放一定时间后（如半年）其灵敏度可能发生变化，而灵敏度的改变会使测定结果所反映的供试品中内毒素的允许限值发生变化[3]。因此，需选择具有国家颁发的批准文号，质量稳定的鲎试剂。（二）对鲎试剂灵敏度进行监测性复核由于不同厂家鲎试剂质量不尽相同，即便是相同厂家不同批号的鲎试剂也有差异，这便导致鲎试剂灵敏度复核值与标示值不尽一致，因此鲎试剂的复核值对检测结果有显著影响[4]。每使用新批号鲎试剂时应复核其灵敏度；对留样鲎试剂自生产之日起，每6个月进行一次灵敏度检测，其灵敏度在有效期内应符合规定。有研究表明，鲎试剂的灵敏度在符合标准规定及适当的贮存条件下，3年内其灵敏度变化不大，是稳定的。建议可适当延长其有效期[5，6]。因此，对鲎试剂灵敏度进行监测性复核有利于确保实验的准确性，同时可以最大程度地使用鲎试剂。（三）使用过程正确操作选择合适的操作方法与顺序，在鲎试剂的使用过程中尤为重要。在操作过程中要注意以下几点:实验室要求洁净、无尘埃流通；检验人员同时注意卫生的保持。在整个使用操作过程中应防止微生物的污染，例如空气的流动，人员的口沫、汗液污染等。 鲎试剂开启、溶解和配制时应尽量避免将安瓿外瓶壁脏物、瓶壁碎片、砂轮锯屑等异物混入鲎试剂中，避免鲎试剂外损。 鲎试剂中含有多种蛋白质，用力振摇会产生气泡，一旦起泡难以消除，而影响检测的准确性，所以在整个操作过程中都要轻力以避免因过分震动而引起的误差。 量取和加样反应物时，一定要加到试管底部接近鲎试液而不接触鲎试液的管壁处。 生成凝胶的最适pH值为6~-8，对于氯化钠注射液、葡萄糖注射液（5%，10%）等注射液，不需考虑供试液的pH值，而检查其他制剂时，尤其是一些本身缓冲能力较强或偏酸、碱的供试品，应考虑供试品的pH值[5]。 使用时要严格控制温度和时间。当鲎试剂一加入内毒素及样品混合液中时反应已开始，并在一定的温度范围内，反应温度越高，反应速率越大；保温时间的增长，也会提高鲎试剂的灵敏度，增加假阳性的发生[7]，导致较大误差。因此，要注意控制温度的变化和保温时间。 保持实验器具的洁净。每次检验完毕，应及时将玻璃器具允分清洗后于250℃干热灭菌处理，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，十烤至少1h[8]。也可用其他经确证不十扰细菌内毒素的检查的适宜方法。对于塑料、橡胶等不耐热器材可用30%双氧水浸泡4h，用无热原水冲洗，70℃干燥备用。 【参考文献】[1] 梁苹,蔡红.鲎试剂灵敏度对细菌内毒素限量检查的影响.华西药学杂志,1999,14(3):204-204.[2] 卫生部.部标准《鲎试剂》修订稿. WS1-364(B-123)-91.[3]张红霞,陈慧,马金刚.影响鲎试剂灵敏度测定结果因素的分析.中国药师,2007,10(8):825-826.[4] 程义琳,吴蕙玲.鲎试剂灵敏度对检测结果的影响.中国药师,2005,8(4): 344-345.[5] 陈引秀.鲎试剂灵敏度稳定性的考察.海峡药学,2004,16(3): 83-84.[6] 金华.鲎试剂灵敏度稳定性观察.医学理论与实践，2004，17(1):84-84.[7]黄冬,房判石.鲎试剂法检测细菌内毒素假阳性原因浅析.首都医药,2002,9(5): 53-54.[8]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范.北京:中国医药科技.

一、细菌内毒素的结构细菌内毒素又为脂多糖（LPS），与蛋白质及磷脂等一起构成革兰阴性菌的外膜，LPS的分子结构可以分为3个区域：O-特异性多糖链（也称为О-抗原），核心多糖以及类脂A（LipidA）。其中，O-特异性多糖链突出于膜外5-10nm，在菌体表面呈游离状态，其基部与核心多糖相连。 核心多糖由内核和外核构成，内核的内侧端以2-酮-3脱氧辛酸与类脂A相连。后者位于脂多糖的最内侧，并且嵌入细菌外膜双层磷脂分子的外叶。类脂A是LPS结构中最保守的成分，不存在种属特异性，是LPS的主要生物活性成分。 每个细菌表面分布的LPS分子数量不定，约占细菌外膜结构的25%，外膜总表面积的75%。LPS单体的分子量多为5000-25000，由于LPS是由亲水性的多糖和亲脂性的类脂共同构成的一种两性大分子，此亲水基团和疏水基团在空间结构上位于分子的两端，因此，LPS在极性溶剂和非极性溶剂中均能形成多聚体，在电镜下呈清晰的微胶粒样。 单体LPS首先与血浆中的脂多糖蛋白（LBP）结合形成复合物，然后再与CD结合才能产生生物学效应，而多聚体的LPS不能与CD结合发挥生物活性。  二、LPS的致热性危害LPS进入机体后，刺激产生内生致热原细胞（主要是单核巨噬细胞等）使其释放内源性致热原[如白介素-1(IL-1)，白介素-2，肿瘤坏死因子(TNF)，干扰素及多种促炎性细胞因子]，这些内源性致热原作为基本信息分子以不同的途径将发热信号传入体温调节中枢，使体温调定点上移，通过传出途径调节效应器对全身产热和散热做出反应，使产热大于散热，体温升高。 LPS致发热高度在一定范围内与剂量呈正相关，并且有明显的潜伏期，人静脉注射2ng/kg剂量时发热潜伏期可长达 90min。由于LPS对热具有稳定性，所以一般灭菌方法不能将LPS彻底破坏，不易清除。

2022年度细菌内毒素LGC能力验证 细菌内毒素LGC能力验证结果与分析   目的：通过参加LGC国际能力验证，提高细菌内毒素的检测能力。  方法：USP使用药典光度法-动态显色法，对分析物（PT-PH-11）进行定量检测分析。  结论：细菌内毒素检测的结果为0.146 EU/mL。通过结果的反馈，此次能力验证取得了满意的结果（Z=0.22）。科德角国际实验室参加了由英国LGC组织的2022年第PH081轮次第11号细菌内毒素溶液检测能力验证，并取得了满意的结果。 一、仪器与材料 01  仪器Pyros® eXpress细菌内毒素定量检测软件 PKF型细菌内毒素定量检测系统（PKF96-0E-2772） ESCO超净工作台（ACB-4E1-CN） 涡旋振荡仪（Genie Vortex-2） 电动分液仪（P50490H）02 分析物由LGC提供，西林瓶装无色透明溶液（PT-PH-11）。03 试剂耗材动态显色法鲎试剂CG1500（显色法鲎试剂2042103；葡聚糖抑制缓冲液1207080） 内毒素工作标准品（EC010/249034） 无热原水（WP1001/AF29588343） 无热原稀释试管（TB240/104-21） 无热原反应试管（TK100/009-22） 二、方法01 动态显色法动态显色法标准曲线系列浓度：1、0.1、0.01、0.001 EU/mL，n=3；阴性对照：无热原水，n=3；分析物初步考察稀释倍数：5、25、50、100、500、1000，n=2；分析物加标浓度：0.1 EU/mL，n=2。分析物按照LGC说明进行储存、分析前处理操作。 三、结果与讨论01 结果由附表1可知，确定细菌内毒素检测最终提交结果为0.146 EU/mL。附表1 LGC能力验证细菌内毒素检测结果02 反馈LGC将此次能力验证结果在2022年7月6日返回，详细结果见附表2。由附表2可知，本实验此次能力验证按照USP药典方法，采用光度法-动态显色法检测，结果为0.146 EU/mL，Z值为0.22，为满意结果。 附表2 能力验证总结03 结论细菌内毒素持续受到广泛关注，因此，提升细菌内毒素的检测能力尤为重要。科德角国际实验室通过参加LGC组织的2022年第PH081轮次第11号细菌内毒素溶液检测能力验证，取得了满意的结果（Z=0.22）。科德角国际实验室积极参与能力验证，提供专业的检测能力，保障检测数据有效可靠。

由于鲎试剂凝集系统中存在着G因子反应旁路，可以被β-葡聚糖激活产生细菌内毒素检查的“假阳性”，通常采用生物方法消除于扰。 USP、EP及JP在最新修订的统一的细菌内毒素检查法中就对鲎试剂的使用作了注释：除内毒素外，鲎试剂也与某些β-葡聚糖反应。一些经过处理而制备的鲎试剂不与β-葡聚糖反应，含有β-葡聚糖的样品必须使用特异性鲎试剂检查。  不同的特异性鲎试剂有不同的特点。无G因子鲎试剂是将普通鲎试剂中存在的G因子，以亲和层析方法分离去除，即使被测样品中存在真菌多糖（非内毒素），也不能产生活化的G因子，旁路反应被阻断，使成为对内毒素具有特异性。另一种特异性鲎试剂是采用一种特殊试剂，只除去抗LPS因子，而保留抗G因子，以达到即增加了对内毒素的敏感性，又削弱了真菌多糖活性G因子的能力。 此外，1990年Tsuchiya M报道[1]，由于真菌多糖与普通鲎试剂反应形成凝胶，有一个特定浓度范围（10-3~ 10-6 mg/ml），大于或小于这个浓度都不能成胶，故在制备普通鲎试剂的基础上，加入过量的真菌多糖1mg/ml），可阻止G因子的活化，即“封闭”了旁路，达到制备特异鲎试剂的目的。复方丹参注射液、清开灵注射液﹑参麦注射液则是通过加入(1-3)-β-D葡聚糖来消除干扰的[2]。 为了避免β-葡聚糖的干扰，叶良君建议在日常工作中，应尽量用特异性鲎试剂代替普通鲎试剂进行含糖大输液及其他大输液细菌内毒素的检查，如果使用的是普通鲎试剂，应该在排除干扰的情况下结论；同时，应该完善药典中葡萄糖原料的质量标准，β-葡聚糖的含量控制应纳入检测范围，在生产中最好使用定点厂家的合格葡萄糖原料。 应当注意，由于不同厂家生产的鲎试剂其特异性也不同，有时甚至相差很远，因此一旦出现内毒素阳性时，应在排除葡聚糖干扰后再慎下结论以免误判。 参考文献：[1] Tsuehiya M．Development of all endotoxin·speetle limuhs ameboeyte lysate test bloekingβ-glUCan-mediated pathway by earboxymethylated curdlsn and its appli- cation[J]．Jpn J Baaed，1990，45(6)：903-906[2] 陈吉生，杨泽民.5种中草药注射剂细菌内毒紊检查方法的研究[J]．中国 药房，2001，12(5)：311-314

内毒素对组织细胞的选择性不强，不同革兰氏阴性细菌的内毒素，引起的病理变化和临床症状大致相同。  ①发热反应：内毒素作为外源性致热原（即热原质）作用于粒细胞和单核细胞等，使之释放内源性致热原，引起发热。 ②糖代谢紊乱：先发生高血糖，转而为低血糖，大量糖元消耗，可能与肾上腺素大量分泌有关。 ③血管舒缩机能紊乱：内毒素激活了血管活性物质（5-羟色胺、激肽释放酶与激肽）的释放。末梢血管扩张，通透性增高，静脉回流减少，心脏输出量减低，导致低血压并可发生休克。因重要器官（肾、心、肝、肺与脑）供血不足而缺氧，有机酸积聚而导致代谢性酸中毒。 ④弥漫性血管内凝血：内毒素能活化凝血系统的Ⅻ因子，当凝血作用开始后，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，造成DIC；由于血小板与纤维蛋白原大量消耗，以及内毒素活化胞浆素原为胞浆素，分解纤维蛋白，进而产生出血倾向。 ⑤施瓦兹曼现象：可能是由内毒素引起DIC的一种特殊形式。将内毒素注入动物皮内，次日再以内毒素静脉注射，数小时后次注射的局部皮肤出现坏死。如果二次均为静脉注射内毒素，就可出现DIC.现认为次剂量的内毒素封闭了单核吞噬细胞系统，以至不能消除第二次注入的内毒素，故发生这种反应。亦可用炭粒代替次内毒素剂量以阻断单核吞噬细胞系统，或以肾上腺皮质类因醇处理，也可得同样结果。

一、家兔检测法1923年Seibert提出用家兔检测热原方法，1942年美国药典首先将家兔法作为药品的热原检查，为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。 目前，对于热原的概念国内外仍未有完全统一的认识。但综合国内外文献报道，普遍认为热原的本质就是细菌内毒素的脂多糖。WHO 文件中同样提到，药品中的热原就是指细菌内毒素，至少在药检范围内控制内毒素就是控制热原。严格地讲，不是每一种热原都具有脂多糖( lipoplysaccharide，LPS)的结构，在药品生产质量管理规范条件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是:不存在细菌内毒素意味着不存在热原。多年来研究表明，热原进入人体血液循环系统后，并不直接引起发热和其他毒性反应，但它可使细胞释放内源性热原物质。这种内源性热原可直接作用于中枢神经系统，刺激体温中枢，引起机体发热。 最早作为热原检测法的家兔检测法也就成为人们检测内毒素的最早方法。此方法即将一定量的被检标本静脉注入家兔体内，观察其注射后的发热情况，以决定所检标本中有无热原存在。 家兔检测法为一种定性检测内毒素的方法，应用历史较久。但随着社会的进步、科技的发展，制药工业飞速前进，新药品种不断增加，临床用药要求越来越高，家兔法局限性日益突出。如家兔对内毒素在反应上有个体差异，敏感度不高，不能定量检测内毒素等等，因此家兔检测法现在已经很少使用。二、GC/MS检测方法气相色谱和质谱联用法是上个世纪出现的一种内毒素检测方法。此法主要依据细菌内毒素的主要毒性部分类脂A水解时产生一种3-羟基脂肪酸的物质。这种物质是内毒素所特有的，并不存在于其他自然界的物质当中。每分子的类脂A含有4摩尔的3-羟基脂肪酸，类脂A的平均分子量为8000。通过对这种特异性3-羟基脂肪酸的检测，可以定量检测内毒素的含量。由于仪器的限制，气质联用的方法很难成为常规的细菌内毒素检测方法。目前只应用于科研，对空气的质量检测等方面。三、鲎试剂检测方法我国药典收载的细菌内毒素检测方法为鲎试验法，包括2种方法，即凝胶法和光度测定法，后者又包括浊度法和显色基质法。当各种检测法得到的检测结果不一致时，以凝胶法的检测结果为准。  鲎试验法有定性和定量之分，其按试验方法还可进一步分为凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色法和终点显色法。 免责声明：本文节选自：《细菌内毒素检测中问题的研究》，文章作者：岳丽娜。如有侵权，请联系删除，谢谢！

细菌内毒素检查法(定量检测)之光度测定法试验应在特定的仪器中进行，温度一般为37℃±1℃。为保证浊度和显色试验的有效性，应预先进行标准曲线的可靠性试验以及供试品溶液的干扰试验。当试验环境中发生了任何可能影响检测结果的改变时，试验的有效性应重新检测。 1.标准曲线的制备用标准内毒素配成溶液并制成至少3个浓度的稀释液(稀释度不得大于10)，最低浓度不得低于所用鲎试剂的标示检测限。每一稀释步骤的混匀时间同凝胶法，每一浓度至少做3支平行管。同时要求做2支阴性对照。当阴性对照在设定的时间内不发生反应，将全部数据进行线性回归分析。根据线性回归分析，标准曲线的相关系数(r)的绝对值应该大于或等于0.980.试验方有效。否则须重新试验。 2.细菌内毒素检查法(定量检测)之光度测定法：按“光度法的干扰试验”中的操作步骤进行检测。 使用溶液C生成的标准曲线来计算溶液A的每一平行管的内毒素浓度。 选择标准线中点或一个靠近中点的内毒素浓度。制备溶液A、B、C和D。供试品和鲎试剂的加样量、供试品和鲎试剂的比例以及保温时间等，参照所用仪器和试剂的有关说明进行。每种溶液至少做2个平行管。 细菌内毒素检查法-试验须符合以下三个条件方为有效： 系列溶液C的结果要符合“光度技术预试验”下“标准曲线的可靠性试验”中的要求。 用溶液B中的内毒素浓度减去溶液A中的内毒素浓度后，计算出的内毒素的回收率要在50%-200%的范围内。 溶液D(阴性对照)在规定的反应时间内未检测出内毒素。 若供试品溶液所在平行管的平均内毒素浓度乘以稀释倍数和浓度后，小于规定的内毒素限值，判供试品符合规定。若大于规定的内毒素限值，判供试品不符合规定。

一、加热灭活对由于蛋白质或酶的修饰而表现的抑制作用或导致鲎试剂变化的药物本身是蛋白酶类，可通过加热灭活处理来消除干扰，或使用超过滤薄膜法去除。如将血浆1：10稀释，70 ~80℃加热5 min可破坏血浆蛋白酶抑制物，而且内毒素没有明显的损失，另外还可将血清样品在沸水中加热2~3 min再稀释至少10倍。  二、样品稀释王欣放等[1]采用不同厂家的鲎试剂对不同厂家的3批注射用对氨基水杨酸钠分别进行干扰试验。结果，将样品稀释至7.5 mg/ml以下时可消除干扰作用，使用灵敏度为0.125 EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查时结果均符合规定。 王超华等[2]对大蒜注射液细菌内毒素检查法的结果表明，将供试品10倍稀释后可消除干扰。 吴文飞[3]对3种无菌冲洗剂细菌内毒素的检查方法进行了探讨，其中硫酸新霉素灭菌溶液在pH 3.2~3.8时，4倍稀释后无干扰。 应注意，有些样品如碳酸氢钠注射液因碱性较强且主要成分碳酸氢钠含量较高，因此单纯稀释是不能排除干扰的，必须经过调节药品的pH处理后再稀释，才能排除干扰[4]。  三、容器材质选用内毒素稀释管应该是高质量硼硅酸盐玻璃材质，以避免内毒素吸附于试管壁。不可使用塑料用具，因其伴随很多未知的干扰因素。同时避免使用聚丙烯试管，因为由聚丙烯材料制成的窗口对内毒素的吸附也被公认为是干扰内毒素检查方法的因素之一。因此，任何聚丙烯材料的试验器材不可用于试验中，但有实验证明由聚丙烯材料制成的加样头，与实验溶液的短暂接触对内毒素的回收没有影响。 参考文献：[1] 王欣放.注射用对氨基水杨酸钠的细菌内毒素检查方法[J]．中国药业,2008,17(6):38-39[2] 王超华.大蒜注射液细菌内毒素检查法的探讨[J]．西北药学杂志，2007,22 (2):75[3] 吴文飞.3种无菌冲洗剂细菌内毒索检查方法初探[J].中国药房,2007,18 (16)；1262-1264[4] 徐富墙,李万玉,赵语.碳酸氢钠注射液进行细菌内毒索检查的研究[J].中国药房,2000,ll(2)：65-67 免责声明：本文节选自：《凝胶法细菌内毒素检查的干扰因素及消除》，文章作者：何进。如有侵权，请联系删除，谢谢！

细菌内毒素定量检查法由于检测灵敏度高，检测范围宽、结果准确、应用面广，而被许多国家药典如USP23、EP98、JP13等所收载采纳，目前不仅限于药学领域，而且在医学、微生物学、临床疾病诊断、食品等各个方面更是飞速发展。一、细菌内毒素测定在药品领域的应用细菌内毒素定量检查法在药品领域的应用主要在其药品制剂的生产过程中的中控阶段和最终成品中的污染细菌内毒素监测，如放射药物、非肠道类药物、注射类药物、流行性感冒疫苗，抗生素等。中国药典(2000版)，共收载了69个品种的药品进行内毒素检测。这也是应用范围最广的一个领域，尤其是随着制药工业的不断发展，许多新的药物被不断研制开发出来，而且传统的热原家兔法已不能满足其快速检验的要求，而对于这类新药需采用细菌内毒素定量法检测更为恰当。如某些有色药物及我国特有的中草注射剂等。同时细菌内毒素定量检查法也是国际上一个主要发展方向，目前国外采用细菌内毒素定量法用于制剂生产的中控阶段和最终产品的检验已十分普遍，约占到70%以上。  二、细菌内毒素测定在医疗用具方面的应用医疗用具:即指医疗上所使用的一次性输液、输血用具、人造器官、机体内使用医疗无菌制品等。其中对这些用具中的外源性污染内毒素的检测目前在国内外都十分重视，尤其是在输液、输血、机体内制品用具内的内毒素检测。以前对于这类用具中的热原性物质监控一般大都是采用传统的热原家兔法来进行检测，但费时、费力、干扰因素多，测定结果的重现性差，无法满足检验的实际要求，因此已很少使用。目前国内外已逐渐转向以细菌内毒素检查法来进行快速检验。三、内毒素检测在水及食品检验中的应用当饮用水及食品被内毒素污染后，往往会引发机体的各种不良反应，严重时还将引起机体的生理性恶变，因此有效地预防和监控饮用水源及食品中的污染物质是十分重要的。  四、内毒素检测在环境监测中的应用人畜居室空气中的内毒素含量对肺部疾病的影响日益受到人们的重视，目前欧洲一些国家的研究人员已开展这方面的研究工作，并且取得了一些经验。另外，海洋环境等中的内毒素测定也日益受到人们的重视。 免责声明：本文节选自：《细菌内毒素检测中问题的研究》，文章作者：岳丽娜。如有侵权，请联系删除，谢谢！

一、鲎试剂灵敏度的复核为了保证检查细菌内毒素结果的准确性，用于实验的鲎试剂应首先核对灵敏度。因为实际工作中，发现鲎试剂均符合药典规定标准前提下，由于生产厂家不同，部分鲎试剂的实测灵敏度与标示值有差异而导致检测同一检品时，用相同标示值的鲎试剂，出现不同结果。鲎试剂灵敏度的复核是使用该鲎试剂的前提。中国药典(2000版)在灵敏度复核项下规定,只有当实测值λc在0.5λ~2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批试剂的灵敏度，同时要求所用鲎试剂的灵敏度须小于供试品的内毒素限值，因此灵敏度的准确与否直接关系到判断结果的正误，应尽量选用测定值与标示值一致(λc =λb)的鲎试剂。有报道，用符合药典规定的灵敏度标示值相同的鲎试剂检测同一检品，结果因鲎试剂实测值与标示值间存在差异而出现了两种完全不同的结果。因而先核对灵敏度可避免因鲎试剂本身造成的判断失误。  二、供试品的稀释在取样品时，要熟悉中国药典的内容，不能直接取大输液原液0.1ml进行检查，这是排除干扰因素的简单有效的方法。因药典已明确规定实验中鲎试剂的灵敏度不超过0.5EU/ml，根据供试品的稀释公式: 供试品稀释倍数=L/λ L:供试品的内毒素限量 λ:鲎试剂灵敏度的标示值(EU/ml)。 故检测大输液均应稀释后才能进行实验，如选用更高灵敏度的鲎试剂，则应增加样品的稀释倍数。稀释用的细菌内毒素检查用水药典作了规定。在4h内不得与鲎试剂产生凝集反应。如果直接用供试品原液实验，就会使供试品的内毒素要求提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml 以下，这样，根据目前大输液的生产和贮藏条件，有些就会达不到，鲎法检出的阳性率会提高，兔法复核的机遇也将增多，势必会浪费人力物力。 以前细菌内毒素的限值是按照热原检查法所需的家兔剂量计算的，由于家兔剂量往往高于人用最大剂量的几倍甚至几十倍，势必造成对产品内毒素要求过于严格，使很多合格产品被判为不合格产品或使药品生产成本增加，所以在USP和EP中，相继采用人用最大剂量来计算药品细菌内毒素的限值。如注射用头孢噻肟钠按中国药典(1995版)规定的热原剂量计算其细菌内毒素限值，与USP的限值要求相差4倍，而用最大剂量计算则两者十分接近。  三、混合液的pH值供试液与益试剂混合液的pH值对鲎实验的影响较大，根据国内外资料的报道，实验的最适pH为6.25~7.25才能形成最佳凝胶。鲎试剂本身具有一定的缓冲能力。但pH值过大或过小均可抑制鲎试剂与细菌内毒素的反应，其原因可能是pH值过大或过小均可破坏极微量的内毒素。四、保温温度温度对鲎试剂的灵敏度影响很大，保温温度在25~40℃之间，随着温度的升高，鲎试剂的灵敏度亦增大，在40~46℃之间，温度对益试剂的灵敏度无明显影响，达到49℃或更高温度时，则会破坏鲎试剂。故应严格按照药典的要求，温度控制在(37士1)℃之间，才可获得理想的结果。五、振动的影响鲎试剂与细菌内毒素形成的凝胶受到振动后易变形而误判为阴性。因此，在鲎实验过程中，不宜进行容易引起试管振动的实验操作，实验用的试管架的眼孔直径应与安瓿或试管直径相接近，避免安瓿或试管左右晃动。水浴箱要放置在固定不易受到振动的地方，保温过程中不可随时取出观察。  六、所用器皿的影响所用器皿均应彻底洗净和灭菌，实验用器皿均应充分洗涤并冲洗干净，特别是接触酸碱或用洗衣粉、洗液等洗涤后，更应冲洗干净，以免残留物破坏极微量的内毒素。灭菌应按药典中的有关方法处理，防止引入外源性内毒素。如有条件的话可用合格的细菌内毒素快检盒。  免责声明：本文节选自：《细菌内毒素检测中问题的研究》，文章作者：岳丽娜。如有侵权，请联系删除，谢谢！

鲎试剂含有凝血原和由微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝血原，是由海洋鲎变形细胞分解物制成的无菌冻干产品。它能准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素，是从海洋节肢动物鲎变形细胞分解物蓝血中提取并低温冻干的生化试剂。目前，鲎试剂广泛应用于制药、临床和科研领域，用于细菌内毒素和真菌葡聚糖的检测。目前使用的鲎试剂分为美国鲎试剂和东方鲎试剂。  鲎体内有罕见的血液流动，这血是淡蓝色的。这种淡蓝色的血液遇到细菌会凝固，含铜量很高。利用鲎血的这种特殊反应，经处理可制成一种特殊的检验试剂——“鲎试剂”。鲎变形细胞分解物可以用于检测制药和食品工业中的毒素污染，能准确、快速地检测人体内部组织是否由细菌感染引起。 鲎试剂的研究可以追溯到20世纪80年代左右，但直到1956年美国约大学动物学家发表的一篇论文《鲎的一种细菌性疾病》之后，人们才发现鲎血的实际医学价值。1965年，专家制备了不含血液的鲎试剂(LAL), 1968年正式命名为鲎试验。鲎试剂经氯仿处理去除抗脂多糖因子，并加入适量二价钙镁离子，主要成分为鲎血细胞裂解液，含C、B、G因子。鲎血用作试剂，然后滴入注射液中。如果试剂立即凝固或变色，说明注射液中含有使人发热、休克甚至死亡的细菌内毒素。因此，科学家认为，淡蓝色血液的鲎变形细胞分解物在医学研究中发挥着独特的作用。 另外，虽然鲎的肉、卵均可食用，我们呼吁相关部门和民间共同加强该“活化石”生物的保护，因为鲎为国家二级保护动物。鲎试剂是从海洋节肢动物鲎变形细胞分解物的蓝血中提取的生化试剂，它专门用于真菌(1,3)-β-D-葡聚糖检测和细菌内毒素检测。鲎试验具有简便、快速、灵敏、准确的特点，是目前世界上检测内毒素的理想方法，因此被欧美药典和中国药典指定为法定的内毒素检查方法，并被世界各国所采用。目前能生产鲎试剂的国家主要有美国、日本、中国等。  但由于我国在该领域的研究基础薄弱，鲎试剂各分支的质量、灵敏度、稳定性和均一性;各种内毒素标准品和鲎试剂标准品都有其缺点，与国际同类品种差距较大。近年来，随着鲎试验动力学理论的阐明和内毒素定量分析技术的发展，为在药品质量控制领域拓展鲎试验提供了理论依据和研究手段。

一、鲎变形细胞溶解物(limulus amocbocyte lysate,LAL)试验内毒素的检测常用家兔热原法和LAL试验（简称为“鲎试验”)法。家兔热原法是检测内毒素的第一种标准方法，鲎试验法则是目前最常用的内毒素检测方法。我国药典收载的细菌内毒素检测方法为鲎试验法，包括2种方法，即凝胶法和光度测定法，后者又包括浊度法和显色基质法。当各种检测法得到的检测结果不一致时，以凝胶法的检测结果为准。检测过程中应防止内毒素污染。鲎试验法检测须使用鲎试剂。鲎试剂是从海洋节肢动物鲎的血液中提取其变形细胞溶解物、再经低温冷冻干燥制成的一种生物试剂，其因能与内毒素和(1,3)-β-D-葡聚糖反应形成凝胶而被广泛用于检测食品、水源、药品、医疗器械以及动物和人体体液等不同样本中的内毒素。鲎的血液和淋巴液中有一种有核的变形细胞，这种细胞胞浆内有大量的致密颗粒，内含凝固酶、C-因子、B-因子和凝固蛋白原等。内毒素与鲎试剂接触后可激活C-因子，激活的C-因子又可激活B-因子或由(1,3)-β-D-葡聚糖激活G-因子，激活的B-或G-因子可再激活凝固酶原，使之转变为凝固酶，继而使可溶性的凝固蛋白原转变成凝固蛋白，由此使鲎试剂变为凝胶状态[1,2-3]。凝固酶对鲎三肽有酰氨酶活性，可使硝基苯胺游离而发生生色反应。鲎试验法有定性和定量之分，其按试验方法还可进一步分为凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色法和终点显色法。  凝胶法系应用鲎试剂可与内毒素发生凝集反应的原理来定性或半定量检测内毒素的一种鲎试验法，检测时鲎试剂须以除热原水（内毒素检查用水）复溶后使用，通过观察有无凝胶形成作为检测终点。凝胶法检测操作简便、经济，不需使用专用检测设备。 动态浊度法、终点浊度法、动态显色法和终点显色法都是内毒素的定量检测方法。动态浊度法和终点浊度法都属浊度法。浊度法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化来检测内毒素含量的鲎试验法，其中动态浊度法检测反应混合物浊度升高至某一预先设定的吸光度时所需的时间或浊度升高的速率。 动态显色法和终点显色法都属显色基质法。显色基质法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物游离出生色团的多少来检测内毒素含量的鲎试验法，根据产物色度计算内毒素水平，又被称为比色法。 动态浊度法和动态显色法检测都须有带温育系统的动态光度测定仪器及其配套软件。动态浊度法和动态显色法检测操作简便、线性范围宽。终点显色法检测须有配套的酶标仪或可见分光光度仪。 就定量检测而言，比较同一个体内毒素水平的变化较比较不同个体或不同方法检测到的内毒素水平的差异更有意义。内毒素可被捕获在血凝块中，因此选用血浆样本检测内毒素较选用血清样本检测更好〔检测时建议使用低浓度肝素)。检测时应防止环境内毒素的污染。 定性鲎试验法主要用于药品、医疗器械等样本的内毒素监测。定量鲎试验法主要用于临床患者的内毒素检测，为其临床诊治提供参考。一项研究显示，对血液透析患者的内毒素检测，动态浊度法的检测结果较显色基质法更为准确[4]。 (1,3)-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的主要组分，鲎试剂中含有对其敏感的G-因子和会转变并形成凝胶的凝固蛋白原。使用鲎试剂检测(1,3)β-D-葡聚糖的试验被称为G-试验，临床上用于侵袭性真菌感染的早期诊断。  二、替代检测方法鲎是珍稀动物，保护力度越来越大。因此，研发鲎试验的替代方法成为当务之急。替代方法主要有蛋白染色法、荧光偏振法、同位素标记法和酶联免疫测定法等。不过，这些替代方法的临床应用价值仍待进一步研究或确认，目前临床上应用最多的依然是鲎试验法。  参考文献[1]Su W, Ding X. Methods of endotoxin detection [J].J Lab Autom,2015,20(4): 354-364.[2]Munford RS.Endotoxemia-menace , marker, or mistake? [J].J Leukoc Biol, 2016,100(4):687-698.[3]Gnauck A,Lentle RG, Kruger MC.Chasing a ghost?-Issues with the determination of circulating levels of endotoxin in human blood [J].Crit Rev Clin Lab Sci, 2016,53(3): 197-215.[4]Wong J,Davies N, Jeraj H, et al. A comparative study of blood endotoxin detection in hacmodialysis patients [J/OL].J Inflamm(Lond),2016,13:24[2018-10-06].doi:10.1 186/s12950-016-0132-5. 免责声明：文章来源：上海医药 2018年 第39卷 第21期 （11月上），本文节选自：《细菌内毒素检测方法及其临床应用》，文章作者：沈银忠。如有侵权，请联系删除，谢谢！

内毒素是细菌生长或死亡时释放出来的，环境中存在着大量的内毒素。当内毒素通过消化道等途径进入机体后并无危害，少量内毒素经注射等方式进入血液后亦可被肝脏巨噬细胞灭活，不会造成机体损害。但内毒素大量进入血液，作为外源性致热源作用于机体，则可使机体释放内源性致热源，进而引起发热。内毒素大量进入并集聚于血液中还可引起不同程度的内毒素血症。   内毒素血症由细菌释放出大量内毒素至血液或输入大量内毒素污染的液体所引起，在感染、严重创伤、肝功能障碍和免疫力下降等状态时均可发生内毒素血症并使机体出现一系列的病理生理学改变[2]:①发热﹔②引起组胺、5-羟色胺、前列腺素﹑激肽等血管活性物质释放,导致微循环扩张，静脉回流血量减少，血压下降，组织灌流不足、缺氧和酸中毒等:③激活补体:④激活凝血和纤溶系统，产生出血倾向和 DIC；⑤直接或间接损害肝脏，引起糖和蛋白代谢改变:⑥激活巨噬细胞、单核细胞和内皮细胞活性。内毒素血症的临床表现包括发热、白细胞增多或减少、出血倾向、心力衰竭、肾功能减退、肝脏损伤、神经系统症状、多器官功能衰竭、DIC和休克等。   自19世纪发现脂多糖是一种能够引发致命性休克的革兰阴性菌细胞壁毒素以来，人们一直在研究内毒素在脓毒血症发病中所起的作用。严重感染、脓毒血症和多器官功能衰竭时，血浆脂多糖水平升高，但病毒感染时不升高，局灶性感染或轻微感染时一般也不升高。脂多糖不仅是脓毒性休克的诱发因素，且与动脉粥样硬化、酒精性肝病、自身免疫性疾病、代谢综合征、肾损伤、器官移植排异反应、创伤性脑损伤、肥胖、多器官功能衰竭、抑郁症、慢性疲劳、人获得性免疫缺陷病毒感染和2型糖尿病等多种疾病的发生有关，临床上发现这些疾病患者血浆、血清或组织中的内毒素水平升高[3-4]。  有研究显示，慢性肾衰竭、包括血液透析患者可出现持续的血内毒素水平升高，同时伴随血促炎细胞因子如α-肿瘤坏死因子等水平升高[2]。内毒素水平升高可能与肾衰竭患者接受血液透析时液体改道导致的肠道通透性改变有关，此会导致内毒素转位。血液透析后，这类患者的内毒素水平显著下降。  参考文献[1]Su W, Ding X. Methods of endotoxin detection [J].J Lab Autom,2015,20(4): 354-364.[2]Cohen J.The detection and interpretation of endotoxaemia[J].Intensive Care Med,2000,26(Supp1 1): S51-S56.[3]Munford RS.Endotoxemia-menace , marker, or mistake? [J].J Leukoc Biol, 2016,100(4):687-698.[4]Gnauck A,Lentle RG, Kruger MC.Chasing a ghost?-Issues with the determination of circulating levels of endotoxin in human blood [J].Crit Rev Clin Lab Sci, 2016,53(3): 197-215. 免责声明：文章来源：上海医药 2018年 第39卷 第21期 （11月上），本文节选自：《细菌内毒素检测方法及其临床应用》，文章作者：沈银忠。如有侵权，请联系删除，谢谢！

经调查研究表明[1]，确保药品安全的常见检验项目是药品注射剂的热原检查，其中。胛法检查热原最常见，其能保证用药安全、充分发挥药效，但仍有不经济适宜、耗时长等缺点，临床应用具有局限性，因此细菌内毒素检查法（BET法）顺势出现，具有经济实惠、快速准确等优势，在药品注射剂及其原料中应用较广泛，逐步将传统检查方式代替，且该项检查法最早由美国学者突出，经30多年的完善及发展，在环境保护、医药卫生中应用，因此本文检索近年来医学、药学方面的资料，提出药品检验中应用细菌内毒素检查法的应用进展。一、BET法的方法研究（一）动态浊度法经研究显示，该项方式应用于细菌内毒素检查，可使用不同检测波长研究，一般情况下，借助动态仪检查时，选择405-660mm波长较适宜，切实比较血清、水解蛋白无注射液浓度，不同波长下、内毒素含量有明显差异，所得结果与BET法的结果基本一致[2]。Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统双重检测波长：405nm和660nm （二）终点法、凝胶法及光度测定法部分研究表明，该项方式对有色药品中微量细菌内毒素的水平进行有效监测，对多次高压灭菌的细菌内毒素实行检查，获得最终检验结果，具有可行性。其次，目前常见的细菌内毒素检查方式有:凝胶法、光度测定法，其能将影响试验结果的外因彻底消除，避免内毒素标准品影响检查结果，应用广泛。二、BET法在药品检验中的应用研究（一）化学药品2005年颁布的《中国药典》提出，借助BET法对73个品种的热原药品、原料药进行检查，常见注射制剂有卡铂原料、氨基酸原料、三磷酸腺苷二钠注射液及脱氧核糖核酸等，药厂对注射制剂进行实际制备时，从原料到成品实行多道程序，完成热原监测流程，其中较常见的抗肿瘤原料药物是卡铂，一般情况下，此药物并未要求实行细菌内毒素、热原等检查，规定采用家兔热原检查注射制剂，经研究表明，采用BET法降卡铂原料药稀释到一定浓度，配合凝胶限量法试验并未对最终检查结果有直接影响，通过建立卡铂BET法可获得良好的准确价值。其次，部分学者研究表明，BET法用于缬氨酸、脯氨酸、亮氨酸及异亮氨酸等氨基酸原料发现，借助现有的标准验证可获得良好效果，且16倍稀释下，相关制剂并未干扰氨基酸，效果较理想[3]。（二）硫酸阿托品、盐酸丁卡因注射液此药物是常见的非选择性胆碱受体阻滞剂，其在原质量标准中无热原检查，若将此药物的浓度稀释到0.25g/ml及更低浓度，外因并未干扰最终结果，将此药物的细菌内毒素限值具体规定为50EU/ml，可借助BET法实行检查。其次，盐酸丁卡因注射液是局部麻醉药，将此药物实行萃取操作后，充分发挥脂溶性机制，更利于切实开展细菌内毒素检查．经流行病学显示，此药物实验结果显示，此药在细菌内毒素中的水平值≤0.5EU/ml，表示对试液试验借助萃取法制备较理想，对此药品在细菌内毒素的污染程度能直观反映。 （三）亚甲蓝注射液、低分子量肝素钙经调查研究显示，此药物主要在氰化物、硝酸和亚硝酸盐中毒的解救应用较广泛，药物涉及细菌内毒素的具体值，对药品质量造成直接影响，有文献指出，目前定量检测此药、低分子量肝素钙的常见方式是动态比浊法，与凝胶法比较，若药品中，亚甲蓝注射液浓度是0.125 mg/nfll，不会对最终的检查结果有影响，且此药的细菌内毒素值在0.25EU/ml 以下，将低分子量肝素钙药物的浓度稀释到12.5IU/ml，也不会对最终的结果有直接影响，一般情况下，此药在细菌内毒素值在0. 01 IU/ml 以下，因此研究表明，上述两种用药可借助BET法检查。（四）抗凝剂此类药品一般在保养临床血液中应用较广泛，标准化管理管理、利于推动BET法检查流程切实开展，但研究发现，枸橼酸、枸橼酸钠是此药的常见成分，其极易严重干扰BET法检查流程，因此选择含有氢氧化钙的稀释，更能消除对细菌内毒素的干扰，可也借助生理盐水不断稀释到40倍，也能将干扰排除[4]。（五）中药注射剂、生物制品2008年国家药品标准中提出，含有中药成分的化学药注射剂，可采用BET法实行检查，部分文献提出，金叶败毒注射液、舒血宁注射液、灯盏花素注射液等是常见中药注射剂，且通过合理明确紫杉醇注射液中内毒素剂量，可避免外界因素感染检查结果，增强用药价值，通过半定量法对注射液细菌内毒素含量进行监测，利于推动BET法流程能顺利进行。其次，生物制品经有效稀释后，并未干扰最终的实验结果，一般情况下，细菌内毒素、热原检查结果呈正相关，如:利用凝胶限量法检测乙型脑炎减毒活疫苗时，稀释供试品到160倍，不会干扰试验结果，具有较高的临床应用价值[5]。综上所述:药品检验中应用BET法能尽早排除干扰细菌内毒素的因素，保证用药的安全性、合理性，切实满足患者用药需求，效果较理想。 【参考文献】[1]钮晓淑.酚磺乙胺注射液细菌内毒素检查方法的建立[J].中国药品标准,2020,21(3):202-205.[2]孙智培,何硕,胡翮.注射用卡络磺钠细菌内毒素检查方法研究[J].中国药品标准.2020,21(3):223-226.准.2020,21(3):223-226.[3]李雪梅,王瑶,胡宇驰,等．硫酸沙丁胺醇注射液细菌内毒素检查方法的建立研究[J].生命科学仪器,2020,18(3):88-91.[4]肖婧薇,王文佳.何华红,等.大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素检查方法考察[J].中国药业,2019,28(16):41-44.[5]刘建辉,唐先明,宋丽阳,等.盐酸克林霉素注射液细菌内毒素检查法的改进[J].哈尔滨商业大学学报（自然科学版),2019,35(4):388-391.（本文编辑:周丹）【收稿日期】2020-12-5  免责声明：本文作者：姚秀辉，来源：Special Hcalth Issue 1 January 2021，如有侵权，请联系删除。

鲎试剂法是热原检查的重要经典方法，与传统的家兔法相比，具有灵敏度高、重现性好、成本低、操作简便、易于掌握等特点，更便于基层检验推广使用。如何用鲎试剂法替代家兔法检查热原也因此成为人们比较关心的问题[1，2]。细菌内毒素检查法系利用鲎试剂与细菌内毒素在一定条件下的反应结果来判断供试品是否符合规定的一种体外检测方法。鲎试验结果准确与否与所用鲎试剂的灵敏度标示值相关性很大。所以，一定要严格执行鲎试剂的质量标准，尤其是鲎试剂灵敏度的复核尤为重要[3]。鲎试剂灵敏度复核实验试验器具、细菌内毒素标准品、检查用水、实验环境、温度、鲎试剂自身特性等因素的影响与制约，如果选择或操作不当，势必会影响实验结果，甚至导致实验失败。本文对导致鲎试剂灵敏度测试结果误差的几个常见因素予以分析，为鲎试验提供参考。1、鲎试剂自身质量不合格鲎试剂质量体现在灵敏度、自凝时间与成胶状态三个方面。1.1灵敏度鲎试剂的标示灵敏度即在药典检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度[4]。随存放时间、试验条件的不同，试剂在使用过程中的灵敏度也不尽相同。存放一定时间后(如半年)，质量稍差的试剂其灵敏度可能发生变化，而灵敏度的改变会使测定结果所反映的供试品中内毒素的允许限值发生变化。灵敏度偏低易产生“假阴性”，灵敏度偏高易产生”假阳性”。1.2自凝时间自凝时间指用无热原水或厂家所提供的内毒素检查用水将鲎试剂溶解，（37±1）℃放置后产生凝集所需的时间。24h不凝集的为质量优者，自凝时间不低于4h者为合格[5]。因为质量较优的鲎试剂本身不含内毒素或即使含有内毒素，其量也较少，不足以促发鲎试验生化反应。质量较差的鲎试剂自凝时间短，是因为试剂本身混有相当量的内毒素，这种鲎试剂是不能使用的。1.3成胶状态成胶状态即鲎试验反应终点时产生的凝胶状态。质量优者反应前具良好的流动性，反应后即形成坚实凝胶，将成胶安瓿翻转180度而不会被破坏。质量劣者，反应终点时生成的凝胶不牢固，易滑脱、破坏，有的甚至于反应终点时不能成胶。为防止因选择、购买不当而引起的检验误差，一方面，购入时要选择质量较稳定的鲎试剂，要求必须具有国家颁发的批准文号，一批新试剂应复核其灵敏度；对留样鲎试剂自生产之日起，每6个月进行一次灵敏度检测，其灵敏度18个月内应符合规定[6]；鲎试剂不应产生自身凝集作用，应具有一定的缓冲能力与合适的pH。我国现用的鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，本品含能被微量细菌内毒素激活的凝固酶原、凝固蛋白原，其灵敏度以细菌内毒素国家标准品或工作标准品测定，应为标示量的50%~200%[4]；另一方面，要适量购买，防止积压；贮藏要避光，严格控制温、湿度，避免防止因选购、贮藏不当、质量下降而引起的检验误差。2、细菌内毒素标准品本身效价不准确鲎试剂灵敏度检测中细菌内毒素标准品的效价亦是影响实验结果的重要因素。因此，选择合格的细菌内毒素标准品是必不可少的。细菌内毒素的化学成分是脂多糖的复合体，即脂多糖(LPS)是由O-特异性链-核心多糖-类脂A三部分组成，其中类脂A的酰氨键是构成不稳定的重要因素之一。故细菌内毒素标准品在运输或保管时易受气温影响而使效价衰减。为避免试验结果的错判，标准品的获得除应必须是由中国药品生物制品检定所统一发放外，对标准品的效价复核亦为重要。细菌内毒素工作标准品细菌内毒素标准品效价的测定方法如下:取4支样品(待标)及一支国家标准品，使用同一批号鲎试剂，每支样品按重量，标准品按单位，分别用内毒素检查用水稀释制备一系列2倍稀释度的内毒素溶液，与鲎试剂反应。当4支样品的反应终点的对数平均值的标准差小于0.365时，计算4支样品反应终点的几何平均值(∑logC/ n，以ng·ml-1表示)及标准品的反应终点值(以EU·ml-1表示)，按下式计算样品的效价:3、细菌内毒素检查用水的质量标准低细菌内毒素检查用水主要进行所用鲎试剂的溶解以及细菌内毒素标准品稀释，是实验过程中极为重要的一个环节。细菌内毒素检查用水的质量标准低会直接影响鲎试剂的检测结果。细菌内毒素检查用水是一种特殊的水，它不仅要求有严格的 pH（6.8 ~8.2），而且其内毒素含量必须小于0.015EU·ml-1，与鲎试剂在（37±1）℃条件下 24 h不产生凝集反应[4]。它不同于注射用水，不能用于代替使用。如有些生产单位或医疗单位生产注射用水，经过严格检查达不到现行版药典要求，这类注射用水是不可以使用的。因此，我们现用的细菌内毒素检查用水主要由鲎试剂生产厂家提供，质量较稳定。细菌内毒素检查用水4、实验器具不洁净玻璃试验管、稀释管﹑刻度管、铝盖盒等实验用具洗涤不彻底，也会影响下次的检验结果，使实验失败或造成误差。因此，每次检验完毕，玻璃器皿应及时用铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗3遍以上，控干后放入适宜的密闭容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱，250℃以上干热灭菌处理(待烤箱温度升至设定的温度后开始记时)[4]，也可用其他适宜的方法，并确证不干扰细菌内毒素的检查，试验操作过程应防止微生物的污染。塑料、橡胶等不耐热器材可用30%双氧水浸泡4h，用无热原水冲洗，70℃干燥备用。5、操作方法不当选择合适的操作方法与顺序，对鲎试剂灵敏度检测尤为重要。在操作过程中以下几点值得注意：①鲎试剂溶解和配制时应尽量避免将安瓿外瓶壁脏物、瓶壁碎片、砂轮锯屑等异物混入鲎试剂中，避免鲎试剂外损。②鲎试剂中含有多种蛋白质，用力振摇会产生气泡，一旦起泡难以消除，既而影响检测的准确性，所以在整个操作过程中都要避免因震动而引起的误差。③标准内毒素的配制和稀释时，采用材质好而光洁的玻璃器皿作为内毒素稀释管，各稀释管吸取内毒素稀释液时要充分摇匀，以稀释液洗吸管，避免吸附内毒素。④反应物的量取和加样时，标准内毒素液和样品液一定要加到试管底部接近鲎试液而不接触鲎试液的管壁处，样品加入后立即轻轻摇匀。⑤活化物质的影响：有的厂家生产的鲎试剂中未加活化物质，而加在溶解液中，故最好以配套的溶解液来溶解鲎试剂。⑥pH的影响：生成凝胶的最适pH为6 ~8，对于氯化钠注射液、葡萄糖注射液(5%，10%)等液体，由于鲎试剂本身的缓冲作用，可以不考虑供试液的pH，而检查其他制剂时，应考虑供试品的pH，尤其是一些本身缓冲能力较强或偏酸、碱的供试品。6、操作温度与操作时间的影响实验室温度和恒温水浴箱的温度，都是不容忽视的因素。37℃并不是最高反应温度，反应温度越高，反应速度越大。即使在室温下操作，内毒素和样品混合液不待进入37℃恒温反应器内反应已告开始，这样操作误差较大。操作温度较低，试管外壁易结露，同样会引起测定误差。因此，在鲎试验中要重视温度的变化，同时应注意保温时间，尤其夏天室温较高时，加样在冰水浴中进行可取得较好效果。另外，进行鲎试剂灵敏度复核实验时，实验室要求洁净、无尘埃流通；操作者应以严谨的科学态度严格执行操作规程，以确保检测结果真实可信。参考文献1潘东扬，汤秋华.灯盏细辛注射液细菌内毒素检查法的探讨[J]，中国药师，2006，9（9）:837-8382薛瑾，刘浩，吕怀哲，等.注射用盐酸头孢吡肟细菌内毒素检查法[J].中国药师，2006，9（9）:864-8663中国药典[S].2005年版.二部.附录85-884中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规程[M].北京:中国医药科技出版社，2005. 287-2975中国人民解放军医疗机构制剂规范[S].200年版.附录62-636中华人民共和国卫生部.部标准《鲎试剂》修订稿[S].WS1-364（B-123）-91( 2006-09-19收稿2006-12-13修回)免责声明：本文作者：张红霞 陈慧 马金刚，如有侵权，请联系网站删除，谢谢。

科德角国际细菌内毒素检测实验室是一家专注于细菌内毒素检测服务的第三方检测机构，拥有多项创新型研究专利，凭借人才、技术、认证、检测等方面的资源优势，与多家国际著名认证机构进行广泛合作，始终为客户提供专业的一站式细菌内毒素检测服务。细菌内毒素检测服务科德角国际细菌内毒素检测实验室为客户提供新药、疫苗、胰岛素、生物制品、血液制品等细菌内毒素检测方法学建立、样品日常委托（送样）检测、细菌内毒素检测培训等服务，致力于打造优质、高效、便捷的细菌内毒素检测服务。细菌内毒素检测实验室资质中国食品药品检定研究院能力认证科德角国际细菌内毒素检测实验室于2020年11月20日通过中国食品药品检定研究院细菌内毒素光度法检测能力验证。2021年细菌内毒素检测实验室ILPQ国际能力认证证书科德角国际细菌内毒素检测实验室获得了2021年细菌内毒素检测实验室ILPQ国际能力认证证书。质量管理体系认证证书（中英文）科德角国际细菌内毒素检测实验室于2021年获得了由中国认可国际互认管理体系（MANAGEMENT SYSTEM CNAS C035-M）和国际认可论坛（IAF）双重认证的质量管理体系认证证书，实验室出具的检测结果可用于国际互认。目前，实验室已开展了疫苗、胰岛素、中药注射液、辅料（乳糖—水合物）等检测项目，项目均发表了核心期刊。今年，我司实验室已顺利完成了《中检院2022年第一批能力验证计划》。先进设备，精准分析Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统符合USP、EP、JP、ChP细菌内毒素检测标准。Pyros® eXpress软件其配备的Pyros® eXpress软件软件，严格遵循美国联邦法规21 CFR Part 11标准，检测结果报告可直接用于申报美国FDA认证，能大大满足药企的检测需求。严格的实验分区在环境安全控制上，各区域空间完全独立，试剂准备区、样本制备区、检测区等功能分区明确，保证了实验室洁净环境，切实做到避免交叉污染。服务流程送样放心、送检省心、检测安心，为您的检测之路保驾护航！科德角国际始终坚持质量优先，通过提高企业的质量管理和产品水平，不断提升细菌内毒素检验检测能力，为您提供更优质、高效、便捷的细菌内毒素检测服务。策划丨科德角国际·市场部编辑丨Carrie·Tse校对丨Zoe,HuanJia·Qin,Feng·He

为落实《中检院2022年第一批能力验证计划》，科德角国际积极响应，推动我司实验室检验检测能力工作，提升实验室人员的内毒素检测能力。中检院《2022年第一批能力验证计划》科德角国际实验室收到样品后，积极组织安排专人负责，第一时间开展实验室能力验证工作。实验操作细节实验操作细节实验操作细节实验操作细节按照能力验证计划作业指导书要求，应用PKF型细菌内毒素定量检测系统，使用动态浊度法，对待检样品进行了细菌内毒素含量的测定。PKF型细菌内毒素定量检测系统能力验证是对常规内毒素检测能力的考查手段，能客观真实反映实验室的检验检测能力和质量保证水平。今后，科德角国际将在能力验证实施过程中，不断总结经验，提高实验准确性，切实提高检验检测能力。策划丨科德角国际·市场部编辑丨Carrie·Tse校对丨Zoe·Yin,Feng

目前，市面上仅有两种新型的细菌内毒素检测方法，分别是重组鲎试剂(rCR)和重组C因子(rFC)。基因重组鲎试剂重组鲎试剂(rCR)和重组C因子(rFC) 检测方法的区别是什么？1 反应原理左侧为重组鲎试剂(rCR) 右侧为重组C因子(rFC)2 检测方法01 重组鲎试剂(rCR)使用动态显色法重组鲎试剂(rCR)不需要更换方法和设备，使用现有的细菌内毒素检测方法（动态显色法）和设备就能进行检测和分析。PKF型细菌内毒素定量检测系统02 重组C因子(rFC)使用终点荧光法重组C因子(rFC)以终点法定量测定荧光底物的单步酶促反应裂解产物来量化细菌内毒素，需要特定荧光酶标仪，经孵育后才可进行检测。3 复溶过程01 重组鲎试剂(rCR)只需单步复溶重组鲎试剂(rCR)只需单步复溶，检测试剂用量50μL，完成检测仅需15分钟，既节省了检测成本，又提高了检测效率。02 重组C因子(rFC)需预孵化重组C因子(rFC)则较为复杂。检测前，三种试剂酶溶液、缓冲液、底物溶解比例为 1:4:5，且必须经过预孵化步骤（过程不低于10分钟），检测试剂用量100μL，降低了检测效率，检测成本也大大增加。4 检测样品如图所示，适合性/一致性研究测试了多个成品、水、缓冲液等样品，得出重组鲎试剂(rCR)比重组C因子(rFC)有较低的不干扰稀释倍数。注：绿色的相对回收率表示有效的回收率，红色的回收率是无效的（超出可接受范围）基于以上数据得出结论，重组鲎试剂(rCR)适合于广泛的产品检测。可比性研究测试了多种来源的细菌内毒素和水样，证实应用重组鲎试剂(rCR)检测具有较好的相对回收率。5 总结新的内毒素检测方法已经是大势所趋。从检测原理、方法、前期准备、检测样品及检测时间等方面来看，重组鲎试剂(rCR)较重组C因子(rFC)具有以下优势：

3月18日上午，科兴中维生物技术有限公司崔总一行领导莅临我司进行交流指导。公司总裁兼首席执行官冯宇先生、资深技术总监范玉明老师、销售总监杨喆先生热情接待了来访贵宾。在交流过程中，冯总就公司的主要产品、业务进展、未来发展规划向崔总等人进行了介绍。期间，讨论了细菌内毒素检测相关方面的内容，重点阐述了公司基因重组鲎试剂产品的概况及优势。接着，资深技术总监范玉明老师就基因重组鲎试剂与重组C因子进行了优势对比。基因重组鲎试剂是一种基因工程技术合成的细菌内毒素定量检测试剂，它完全模拟了天然鲎试剂LAL的酶联反应，包含C因子、B因子、凝固酶原。反应机制：左侧为基因重组鲎试剂 右侧为重组C因子试剂从反应机制上看，rCR敏感度比rFC更高，rFC缺少了级联放大的两个环节（加速反应），只能通过荧光检测人为放大（减少了来源于自然反应的特异性），还有一个最能加速反映的环节如下图。1、凝血酶的活化是LAL信号放大的主要驱动力；2、B因子的活化是针对内毒素的特异性活化。崔总对我司产品基因重组鲎试剂在疫苗行业质量控制和安全评价方面的应用给予了充分的肯定，为未来进一步合作打下了坚实基础。随后，崔总一行参观了科德角国际第三方检测实验室及仓库的实验中心区域设置情况。崔总等人仔细询问了我司技术人员及设备的部署安排，对实验室的工作流程和相关细节进行指导，并对科德角国际取得的成绩进行了肯定。科德角国际感谢科兴中维生物技术有限公司对公司的大力支持，期待双方进一步合作，开启合作共赢新篇章。

在制药过程中，细菌内毒素的检测依赖于鲎血资源。随着注射剂、疫苗类、化学药品类等制剂品的需求不断增长，鲎血资源的使用率越来越高；同时，鲎试剂中含有B因子、C因子、G因子、凝固酶原，存在由1,3-β-D-葡聚糖激活G因子导致的假阳性结果。所以，建立一套不依赖鲎生物进行细菌内毒素检测的快捷、高效的补充替代方法尤为重要。作为新型的重组鲎试剂检测方法：重组鲎试剂(rCR)、重组C因子(rFC)则备受关注。一、重组鲎试剂(rCR)和重组C因子(rFC)的概念01 重组鲎试剂(rCR)重组鲎试剂(rCR)是一种基因工程技术合成的细菌内毒素定量检测试剂，该试剂不依赖鲎血资源，满足可持续发展的目标。重组鲎试剂它完全模拟了天然鲎试剂(LAL)的酶联反应，包含C因子、B因子、凝固酶原，是一种拥有与天然鲎试剂(LAL)相同酶联反应,同时又消除了与1,3-β-D-葡聚糖交叉反应造成假阳性结果的内毒素检测试剂。重组鲎试剂(rCR)（上图右侧）成功去除了天然鲎试剂（上图左侧）的G因子干扰02 重组C因子(rFC)重组C因子(rFC)是通过体外重组鲎凝血级联反应的第一个组分：C因子，激活的C因子直接剪切一个荧光底物，产生的信号被荧光酶标仪识别。相较于天然鲎试剂(LAL)，重组C因子法只有一种反应机制。反应机制：左侧为重组鲎试剂 右侧为重组C因子试剂二、天然鲎试剂(LAL)、重组鲎试剂(rCR)、重组C因子(rFC)对比情况作为新型的重组鲎试剂(rCR)、重组C因子(rFC)，与天然鲎试剂(LAL)进行细菌内毒素检测时又会有什么不同呢？01 重组鲎试剂(rCR)与天然鲎试剂(LAL)在检测内毒素上比较图1由图1所示，通过研究在显色底物存在下，使用三种重组酶原的多种组合，确定三种重组酶原是否能重建反应步骤。结果证实，当三种重组酶原同时存在时，内毒素才能激活蛋白酶活性，得出了重组鲎试剂(rCR)与天然鲎试剂(LAL)在检测内毒素上具有等效性。另外，研究证实了，三种重组酶原的蛋白酶活性大大增强，信号放大。02 天然鲎试剂(LAL)、重组鲎试剂(rCR)、重组C因子(rFC)对内毒素敏感度比较图2从反应机制上看，重组C因子(rFC)缺少了级联放大的两个环节（加速反应），只能通过荧光检测人为放大（减少了来源于自然反应的特异性）。如图2所示，凝血酶的活化是天然鲎试剂(LAL)信号放大的主要驱动力；B因子的活化是针对内毒素的特异性活化，由此可以得出，重组鲎试剂(rCR)敏感度比重组C因子(rFC)更高。03 重组鲎试剂(rCR)与天然鲎试剂(LAL)检测时间比较图3如图3所示，通过对一系列浓度RSE（细菌内毒素参考标准品）应用重组鲎试剂(rCR)和典型动态显色试剂检测得到的起始时间值，得出重组鲎试剂(rCR)较典型的动态显色试剂检测缩短了大约一半的时间。04 重组鲎试剂(rCR)与天然鲎试剂(LAL)批间一致性比较图4天然来源的天然鲎试剂(LAL)试剂具有固定的批次间变异性，而重组鲎试剂(rCR)表现出批次间的一致性。图4所示，六个单独批次的重组鲎试剂(rCR)的曲线标准趋于一致，证明重组鲎试剂(rCR)具有重复性和可预测性的性能。05 重组鲎试剂(rCR)与天然鲎试剂(LAL)对内毒素特异性比较图5图5的X-Y轴分别表示的是加标/不加标1,3-β-D葡聚糖的各批次重组鲎试剂(rCR)和系列标准浓度的反应。结果显示了添加1,3-β-D葡聚糖对应用重组鲎试剂(rCR)对内毒素的检测不存在干扰，各批次间相关性良好。06 重组鲎试剂(rCR)验证性能图6图7如图6、图7所示，应用重组鲎试剂(rCR)在0.005 -50--EU/mL内毒素范围内，在两批次、四个分析人员、三天内条件下，执行了24个性能验证实验。依据ICH Q2指南标准，结果显示各验证参数满足标准要求。07 重组鲎试剂(rCR)、重组C因子(rFC)、天然鲎试剂(LAL)针对检测样品的比较图8图9图10图8、图9、图10所示，适合性/一致性研究测试了多个成品、水、缓冲液等样品，得出重组鲎试剂(rCR)较然鲎试剂(LAL)具有相等或较低的不干扰稀释倍数(NID)。另外，Muroi 等人报告了使用重组鲎试剂(rCR)前身 PyroSmart 试剂检测药典118种肠外注射药物得出了相似的结果。基于以上数据得出结论，重组鲎试剂方法(rCR)适合于广泛的产品检测。可比性研究测试了多种来源的细菌内毒素和水样，证实应用重组鲎试剂(rCR)检测具有较好的相对回收率。08 重组鲎试剂(rCR)、天然鲎试剂(LAL)、重组C因子(rFC)方法对比图11如图11 所示，重组鲎试剂(rCR)优于重组C因子(rFC)。重组鲎试剂(rCR)检测过程不需要更换方法和设备，就能继续同样的工作流程。三、总结从天然鲎试剂(LAL)、重组鲎试剂(rCR)、重组C因子(rFC)对比情况来看，重组鲎试剂(rCR)较重组C因子(rFC)、天然鲎试剂(LAL)在细菌内毒素检测上具有较强的优势：相比重组C因子(rFC)内毒素检测方法，重组鲎试剂(rCR)可以产生级联放大反应，使得内毒素检测更加高效和灵敏。文章参考来源：PYROSMART NEXTGEN RECOMBINANT LAL REAGENT

近期，国内阳性病例持续多发，疫情形势严峻复杂，疫情防控依旧至关重要。据国家卫健委数据显示，截至2022年2月23日，全国新冠疫苗接种超31亿剂次！在这巨大的数字背后，是海洋里无数个鲎铸就了人类安全的防护伞。鲎（hòu），因其外形酷似马蹄状，故又名“马蹄蟹”，从地质历史时期古生代的泥盆纪起，至今已存活了4亿多年。正因其有着与生俱来的免疫防御系统，才有了鲎如此古老的存在，而这坚不可摧的先天性免疫防御系统又和其体内神奇的蓝色血液息息相关。正是这种特殊的蓝血提取制成的鲎试剂，变成了新药、疫苗，包括新冠病毒疫苗在内必不可少的检测试剂。目前，针对变异毒株的疫苗还在紧锣密鼓的研发中，提取鲎血液制成的细菌内毒素检测“鲎试剂”的需求缺口依旧很大。近几年，鲎种群的数量急剧下降，对鲎种群的保护已经到了刻不容缓的地步。若不及时遏制鲎种群资源下降问题，一旦鲎到了濒临阶段，全世界都将面临严峻的医疗卫生安全问题。2021年2月，新的《国家重点保护野生动物名录》正式将鲎列为国家二级重点保护野生动物。长期依赖鲎试剂进行细菌内毒素的医疗行业也因此受到了不小的冲击。为了减少对鲎的使用，同时满足生物制品、医药等行业的研制需求，新的细菌内毒素检测替代方法及试剂至关重要。基因重组鲎试剂(rCR)的出现有效解决了这些问题。该试剂不依赖天然鲎血，既保护了鲎资源，又满足可持续发展的目标，其价值不言而喻。基因重组鲎试基因重组鲎试剂(rCR)是一种基因工程技术合成的细菌内毒素定量检测试剂。它完全模拟了天然鲎试剂LAL的酶联反应，包含C因子、B因子、凝固酶原，且剔除了容易引起假阳性的G因子干扰。杜绝了由1,3-β-D-葡聚糖交叉反应造成的假阳性结果。图1 PSNG（上图右侧）成功去除了天然鲎试剂（上图左侧）的G因子干扰相比传统鲎试剂内毒素检测方法，基因重组鲎试剂(rCR)可以产生级联放大反应，使得内毒素检测更加高效、灵敏，完成实验仅需10-30分钟，灵敏度高达0.0005EU/mL。基因重组鲎试剂(rCR)不需要更换方法和设备，在现有的细菌内毒素检测方法（动态显色法）及设备上就能继续进行测试和分析。Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统在Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统及酶标仪上，基因重组鲎试剂(rCR)的使用量仅需50μL，既节约试剂又降低了实验成本。目前，基因重组鲎试剂(rCR)已被纳入了USP、EP、JP药典法规。未来，基因重组鲎试剂(rCR)将在全世界医疗安全卫生中扮演不可或缺的角色。同时，鲎种群资源也会得到更有利的生长环境。部分图片来源于网络

为加强疫情防控，筑牢疫情“防护墙”，科德角国际于3月2日，对一批进口细菌内毒素检测设备、试剂、耗材进行全覆盖、零死角的防疫消杀工作，切实降低病毒传播风险。本批货物经海关消杀后，所有从DHL中外运运输车卸下的货物，入库前都由科德角国际消杀工作人员进行第二轮人工喷洒消杀工作。确保不留死角，不留隐患，做到货物产品消杀工作全覆盖，有效防止和阻断病毒传播，以实际行动诠释企业担当，进一步为疫情防控营造安全环境。也希望国内的广大客户放心，在严格落实疫情防控的基础上，科德角国际美国ACC细菌内毒素检测试剂库存储备充足，现货供应稳定，可持续保障广大客户的需求，欢迎广大客户前来咨询订购！