古朵生物:院校用植物基因组DNA快速提取(50次)
古朵生物
2022/11/02 13:49
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古朵生物:院校用植物基因组DNA快速提取(50次)
概述:
本方法可用于植物细胞DNA的快速提取,可提取107细胞,其质量能够满足各种分子生物学要求。
植物基因组DNA快速提取组成:
1.溶液A 1.2ml RNase A 10mg/ml。-20℃保存
2.溶液B 60ml
3.溶液C 180ml
4.溶液D 3ml Resin用时充分混匀
5.溶液E 50ml洗液(用前加入75ml无水/酒精,充分混匀)
6.溶液F 25ml TE buffer
植物基因组DNA快速提取步骤:
1.组织≤0.1g,液氮研磨,加入0.3ml溶液B,反复混匀,室温5min。
2.加入0.8ml溶液C,溶液A 20μl,充分混匀,室温放置20min。
3.≥8000rpm离心3min。
4.取上清,加入50ul溶液D,室温放置5min,≥8000rpm离心1min,弃上清。
5.加入800μl溶液C,混匀,≥8000rpm离心1min,弃上清。
6.加入1ml溶液E,混匀,≥8000rpm离心30-60s,弃上清。
7.重复步骤6。
8.≥12000rpm,离心30-60s,吸干上清,室温敞开盖晾干约5-10min。
9.取溶液F 200-300μl,混匀,40-50℃水浴3-5min。
10.≥12000rpm离心30-60s,取上清,即为DNA。
注:
1.组织若多,可适当加大溶液B和溶液D的用量,其它成份不变。
2.混匀一定要温和,否则DNA大分子将被打断,而部分降解。
3.适用新鲜组织、嫩组织,尽可能去除叶脉、叶柄。
4.液氮研磨一定要保证组织在研磨过程中形如干粉状。
5.用户可依实验需要,适当调整溶液F加入量,溶液F越少,DNA浓度越高,但产量略有损失,若想大限度提高产量,可重复步骤9、10。两次所得DNA可合在一处。
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