改良Lillie-Mayer苏木素染色使用说明书@学校专用资料

　   改良Lillie-Mayer苏木素染色使用说明书@学校专用资料

　　中文名称：改良Lillie-Mayer苏木素染色液

　　规格：100ml|500ml

　　用途：常规组织切片HE染色

　　注意事项：苏木素染色中leagene推荐采用该试剂。无氧化膜，细胞核染色质着色深而细微，临床上常替代Harris苏木素染色液，染色时间一般3-5分钟。

　　储存条件：室温，2个月

　　简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学z常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易不带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

　　改良Lillie-Mayer苏木素染色液无毒，无氧化膜，细胞核染色质着色深而细微，临床上常替代Harris苏木素染色液。对细胞核染色很清晰，不着染胞质和纤维成分，属进行性染色，故染色后可以不用盐酸乙醇分化，染色时间约5～8min，如果是充分氧化后可染色3～5min。常用于糖原等特染、酶组化和免疫组化等染色后复染细胞核作对照染色，尤其适用于经过特殊染色后不能经酸处理时对细胞核的复染。在特殊染色中，常不天青石蓝B液联合染色，使细胞核染色后不被后续的酸性染料所褪色。

　　染色原理：

　　1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易不带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

　　2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色不染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，不胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

　　3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织不色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核不细胞浆染色的分明。

　　4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

　　使用方法：

　　(一)石蜡切片染色

　　1、切片脱蜡至水

　　①二甲苯作用2次，每次5～10min。

　　②(可选)无水乙醇作用2次，每次3～5min。

　　③95%的乙醇3～5min

　　④90%的乙醇3～5min

　　⑤80%的乙醇3～5min

　　⑥自来水或蒸馏水冲洗1～3min

　　2、染色

　　①改良Lillie-Mayer苏木素染色液染色5～8min

　　②自来水或蒸馏水冲洗5～10s

　　③(可选)盐酸乙醇分化2～5s

　　④自来水冲洗20～30s

　　⑤(可选)蓝化液返蓝20～40s

　　⑥自来水冲洗30～60s

　　⑦伊红染色液染色3～5min

　　⑧自来水冲洗1～5s

　　3、脱水、透明、封固

　　①80%乙醇10～20s

　　②90%乙醇10～20s

　　③95%乙醇作用2次，每次1～2min。

　　④无水乙醇作用2次，每次2～3min。

　　⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。

　　⑥中性树脂封片。

　　染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅丌一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

　　(二)冰冻切片染色

　　1、乙mi-乙醇混合固定液5～10s

　　2、自来水冲洗2～5s

　　3、改良Lillie-Mayer苏木素染色液滴染1～2min(可加热至50℃)。

　　4、自来水冲洗2～5s

　　5、(可选)盐酸乙醇分化2～5s

　　6、自来水冲洗2～5s

　　7、(可选)蓝化液返蓝2～5s

　　8、自来水冲洗5～10s

　　9、伊红染色液染色2～5s

　　10、自来水冲洗1～2s

　　11、80%的乙醇1～2s

　　12、95%的乙醇1～2s

　　13、无水乙醇2～5s

　　14、苯酚二甲苯(1:3)2～5s

　　15、二甲苯透明3次，每次2～5s。

　　16、中性树脂封片

　　染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

　　(三)细胞染色

　　1、4%多聚甲醛固定10～20min。

　　2、自来水冲洗2次，每次2min。

　　3、蒸馏水冲洗2次，每次2min。

　　4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。

　　染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。