标准溶液配制都有哪些规定?　　  标准溶液的浓度精度直接影响分析结果的精度。因此，制备标准溶液在方法、仪器使用、测量器具和试剂等方面有严格的要求。国家标准GB/T601-2016《化学试剂的标准滴定液的制备》对上述各方面的要求作出了一般规定，即在制备分析(容量分析)用标准溶液时，必须满足以下要求：　　  1、配制标准的溶液用水，至少应符合GB/T计682中三级水的规格。　　  2、使用的试剂纯度必须在分析纯度以上，标定使用的标准试剂必须是容量分析作业中使用的标准试剂。　　  3、使用的分析天平和重量必须定期检定。　　  4、使用的DDT管、容量瓶和移动管必须定期校正，校正方法按照JJG196-2006《基本玻璃测量仪》的规定进行。　　  5、准备标准溶液的温度系指20℃时的浓度。　　  6、标定标准溶液时，平行试验不得少于8次，两人各做4次平行测试，测试结果的重复性应符合GB/TT601-2016中规定的要求，浓度值取4位有效数字。　　  7、必要时，可采用比较法验证部分标准规定的溶液浓度。　　  8、调制浓度等于或低于0.02mol/L的标准溶液时，在使用前将浓度高的标准溶液煮沸，冷却纯水稀释，必要时重新标定。　　  (1)配制溶液的蒸馏水一定要达到规定标准，防止水中杂质影响实验结果。　　  (2)称量要准，特别是在配制标准溶液时，称取标准物质的量要准确到小数点后第四位，称取的试剂要毫无损失地转移到容量瓶内，定容要准确。作为检查员，必须学会理解标准要求。例如，标准上写着正确的称呼和正确的称呼0.0001g、0.001g的要求，同时，在称呼过程中尽量减少中间变的容器。　　  (3)如果是固体试剂，好直接称为在烧杯中溶解，用少量的多次方法将试剂完全无损地移动到容量瓶中。有些可以直接溶解。例如，在标定NaOH标准溶液时称量的邻苯二甲酸氢钾将直接用减量法或增量法称为碘瓶，以确保标准物的准确性。在配制甲醇、杂醇油等标准溶液时，可以直接称为容量瓶中的标准物，并进行准确的定量。　　  (4)配制标准溶液时，需要干燥的试剂或基准物(根据标准中的具体要求)一定要进行烘干后方可使用，而且要在烘干后尽快使用。　　  (5)自制的配制用水可以用电导率测定：用充分洗净的小烧杯接取水样，用电导率仪测定其电导率，电导率在2X10-6S/cm以下的为纯水。　　  标准溶液配制 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

　　细胞培养中血清的缺点及质量标准您知道吗?　　细胞培养中使用血清的缺点：　　血清成分复杂，虽含许多对细胞有利成分，也含有对细胞有害的成分，使血清有几个明显的缺点：　　1、对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。　　2、血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。　　3、取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性。　　4、动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致。　　5、血清的使用使得实验和生产的标准化困难，其中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成。　　6、大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。　　血清的质量标准：　　血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求：　　1、牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或。并应具备适当的监测系统。　　2、有些还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。　　3、证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。　　4、血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。　　5、无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些要求无细菌噬菌体污染。　　6、对细胞有良好的支持繁殖作用。　　血清的质量标准：　　血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求：　　1、牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或。并应具备适当的监测系统。　　2、有些还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。　　3、证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。　　4、血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。　　5、无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些要求无细菌噬菌体污染。　　6、对细胞有良好的支持繁殖作用。　　细胞培养中使用血清的缺点以及质量标准 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒由上海古朵供应，上海古朵生物专业经营进口分装和原装标准品|对照品、国产/进口elisa试剂盒，国产/进口血清，生化试剂，培养基等科研生化试剂等。免费提供产品报价、实验原理、产品用途以及中英文说明书。我司多年为各大院校，各类医院，生物工程医药实验室以及其他行业科研消费者提供全面、周到的采购，上海古朵欢迎您的来电订购!  名称：人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒  英文名：Human Homocysteic acid,Hcy ELISA Kit  供应商：上海古朵  参数规格：48T/96T  样本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。  产品特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。  产品用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。  种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。  人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒说明书 常见问题以及解决方法：  1、试剂的选择：选择优良试剂大家都是知道的，但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻;  2、加样中可能遇到的问题：在做血清或是血浆用于检测试剂的时候，会碰到血清血浆不好分离的情况，这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时，然后在进行离心处理;  3、洗板时容易造成误差： 因为洗板是人工洗的，所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的，这个时候带有主观色彩，所以多清洗几次，还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动;  4、显色问题： 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长，都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候，要先查看显色剂本身的情况;  5、终止反应：在加终止剂的时候由于倾倒速度快，差生气泡，造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒;  6、读板：读板的时候首先应该保证板的清洁干净;  7、严格按照说明书操作。  试剂盒组成：  封板膜:2片(48)/2片(96)  说明书:1份  密封袋:1个  标准品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存  酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存  样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存  显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存  显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存  终止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存  浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存  使用说明：  1.试剂盒保存：-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。  2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。  3.中、英文说明书可能会有不*之处，请以英文说明书为准。  4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。  人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。

  怎么区分所购的ELISA试剂盒价格能否测手中的样本呢?  现在ELISA试剂盒价格查看的样本中，除了细胞上清外，还有比较大的一部分是血清和血浆样本。关于ELISA试剂盒客户来说，在试验中或许用到不一样的样本，怎么区分所购的ELISA试剂盒能否测手中的样本呢?古朵技术小编详解如下：  关于常见的细胞上清，咱们都知道，培养细胞进程中，无分外状况一般是10%的牛血清参与培养基中，经过培养后，细胞的吸收耗费，zui后细胞上清中蛋白含量会很少，并且关于一般牛血清出产的厂家来说，在出产进程中现已去除了，所以对一般ELISA而言，不会影响抗体抗原的。  1、如厂家没有供应专门用于血清血浆样本的缓冲液，那么只要用已知浓度的待测政策蛋白参与所测种属的血清作为样本加样和用已知浓度的待测政策蛋白参与PBS缓冲液中一起查看对比，ELISA试剂盒即可知道该试剂盒是不是能够直接用来测血清血浆样本。  2、如厂家没有供应专门用于血清血浆样本的缓冲液，仅仅有一个抽象的或共同的稀释液，那么只要用已知浓度的待测政策蛋白参与所测种属的血清直接加样和用已知浓度的待测政策蛋白参与厂家供应的共同的缓冲液中一起查看，也可得出该试剂盒是不是可直接用来查看血清血浆样本。  3、如ELISA试剂盒价格厂家供应专门用于血清血浆样本的缓冲液，可用已知浓度的待测政策蛋白参与所测种属的血清直接加样和用缓冲液按说明书分别加样，也可得出成果。  ELISA试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  如何避免血清中产生沉淀呢?  血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。  如何避免血清中产生沉淀按如下操作可避免沉淀的产生：  (1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。  (2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。  (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。  (4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。  (5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。  (6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。  血清上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  古朵分享|牛血清白蛋白的提取方法及用途?  CAS：9048-46-8，又称第五组分，牛血清白蛋白(BSA)，是一种常用的PCR扩增增强剂和稳定剂，能够起到稳定扩增酶、降低PCR抑制物的作用，常见于核酸检测试剂中，广泛应用于生物学诸多学科及医、药学各领域。  牛血清白蛋白(BSA)在动物细胞无血清培养中，起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白(BSA)在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot和制备ELISA板中的封闭试剂。牛血清白蛋白(BSA)在生化研究、遗传工程和医药研究，一般作为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，也可用作医药保健食品、调味品。  牛血清中白蛋白(BSA)的制备方法很多，包括盐析法、有机溶剂沉淀法和热激法提取等，但目前的制备方法所得的牛血清白蛋白(BSA)收率或纯度都比较低，存在脂肪酸、蛋白酶、核酸酶以及内毒素等杂质，限制了牛血清白蛋白(BSA)的进一步应用，因此，一种高纯度从牛血清中分离白蛋白的方法十分关键。  CN105017412B公开的制备牛血清白蛋白(BSA)的方法，克服了现有技术的不足，能够从牛血中提取出高纯度、高收率的牛血清白蛋白(BSA)，且不含小分子物质以及只含较低浓度的内毒素。包括以下步骤：  首先向牛血清中加入生理盐水或PBS溶液将牛血清稀释;再向稀释后的牛血清中加入适量硫酸铵，2~8℃静置30min以上，离心收集上清液;  第二步，向上清液中加入2~3倍体积的PBS溶液，混匀后进行疏水层析，使用PBS溶液洗脱，收集洗脱液;  第三步，将洗脱液进行分子筛层析，收集不含盐和其它小分子的蛋白峰;所述层析填料为G10-G75葡聚糖;  第四步，使用阴离子交换层析进一步纯化牛血清白蛋白(BSA)，通过0.1~1.5M浓度氯化钠进行梯度洗脱，收集精纯的牛血清白蛋白(BSA);  后，经过对病原微生物进行灭活、分子筛层析、超滤浓缩、过滤除菌得到纯度高于99.5%的牛血清白蛋白(BSA)。  这种方法大程度地去除血浆中的杂质，有效提高了牛血清白蛋白(BSA)的纯度，对于其在生化研究、遗传工程和医药研究的应用具有重要价值。  牛血清白蛋白 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。

  古朵新闻| 酶联免疫吸附(ELISA)实验  实验方法原理：  本法首-先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。  这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位，因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用，而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之类的抗原测定。我们用在霍乱肠毒素的测定。HbSAg及HbS的测定。  实验材料：血清 血浆 体液  试剂、试剂盒：碳酸盐包被缓冲液 抗体球蛋白 吐温 柠檬酸 硫酸仪器、耗材：酶标比色计 96孔板 移液枪 离心管 离心管盒  实验步骤：  一、包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至适浓度(1～10 ug /ml)，每凹孔加0.3 ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱。  二、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次，每次5分钟。  三、每凹孔加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃作用1～2小时。  四、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次，每次5分钟。  五、加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液，37℃作用1～2小时或由预试实验确定作用时间。  六、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次，每次5分钟。  七、加入0.2ml底物溶液于每个凹孔(OPD或OT)，室温作用30分钟(另作一空白对照，0.4 ml底物加0.1 ml终止剂)。  八、加终止剂：每凹孔加2M H2SO4或2 M柠檬酸0.05 ml。  九、观察记录结果：目测或用酶标比色计测定(OPD用492nm)OD值。  注意事项：  1.可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成为不溶形式，这是进行酶标记测定的基本条件。许多物质可作为固相载体，如纤维素、交联右旋糖苷、琼脂糖珠、聚丙烯、聚苯乙-烯、聚乙-烯及聚氯乙-烯等等。但在ELISA中-常用的是聚苯乙-烯或聚氯乙-烯微量反应板及塑料管。  2.包被所用的抗原必须是可溶性的，而且要求是优质和稳定的制剂，纯度和免疫原性要高。如果不纯，由于抗原中所含杂质就会竞争固相载体上的有限位置，降低敏感性和特异性。此外还应考虑到制备包被抗原不应破坏其免疫学活性。  3.对某些抗原必须进行提纯，如病毒的组织培养和鸡胚培养物以及病毒接种动物的脏器等，它们当中存在着许多非抗原的蛋白质，必须设法除去，常用梯度超速离心或亲和层析法提纯，不经提纯是不能使用的。  4.用-适稀释度抗原，包被固相载体不仅经济，而且可以克服前带现象。可通过棋盘滴定法进行测定，但用单项滴定法为简便，其方法是将抗原进行一系列稀释包被微量反应板，再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤，再加酶结合物进行反应，经孵育洗涤后，加底物溶液显色，终止反应后分别测定OD值，选择OD值≥1.0的那个抗原稀释度为适包被浓度。一般总是要选择那个OD值稍大于1.0，而不选择小于1.0的抗原浓度。阴性参考血清OD值要求  5.抗原包被固相载体除浓度外，对时间、温度、PH均有关系。温度高(如37℃、45℃、或56℃)，包被时间可缩短，温度低可延长包被时间。但为了方便起见，通常采用4℃包被过夜，可使抗原吸附得加完全且均匀。在用聚苯乙-烯或聚乙-烯微量反应板或塑料管作固相载体时，在碱性条件下(如0.1 mol/L、PH9.6碳酸盐缓冲液稀释抗原)4℃包被过夜较为合适。但在某些试验中，如用LPS或毒素蛋白包被时，用PH 7.2-7.4 PBS稀释才是满意的。包被特异蛋白质的浓度为1-10 ug/ml，而对某些病原微生物抗原以5-20 ug/ml较为合适，但均应通过滴定。   酶联免疫吸附 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针

　　实验技术| DEAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体　　DEAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体：该法提取IgG简便，既可小量提取，也可大量制备。　　1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE32或DE52)50g，置于1000ml烧杯中，先以蒸馏水漂浮除去细颗粒，再经酸碱处理后，用0.01～0.05mol/L，pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干，或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤，收集湿纤维素，以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DEAE纤维素，经过充分搅拌，置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次，即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便，既可小量提取，也可大量制备。　　2.Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)　　【材料和试剂】　　(1)DE32或DE52纤维素。　　(2)HCl;NaOH;0.01～0.05mol/L，pH8.0 PB;0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。　　(3)待纯化标本：杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。　　(4)1.5×50cm 层析柱;透析袋;紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。　　【操作步骤】　　(1)DE52纤维素的处理：DE52经酸、碱处理，0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。　　(2)装柱：将层析柱固定于滴定架上，柱底垫一圆形尼龙纱，出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中，待DE52自然沉降3～5cm高时，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或松开出水口螺旋夹，控制流速1～2ml/min，同时连续加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后，柱面放一圆形滤纸片。　　(3)平衡：松开出水口螺旋夹，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速为15滴/min，待流出液与洗脱液之pH值达到一致时，停止平衡。　　(4)待提取样品的准备：将蛋白装入透析袋里，置4℃冰箱，对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析过夜。　　(5)加样、洗脱与收集：用吸管吸去柱面液体，以毛细吸管沿柱壁加入样品，样品体积相当于柱床体积的1%～2%，蛋白浓度为50～70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内，并用少量洗脱液清洗柱壁;待液体进入柱床后，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl洗脱，控制流速为14～16滴/min。分部收集器收集，紫外监测，或人工收集，以紫外分光光度计分别测定每管280nm OD值，描绘洗脱液峰。　　(6)浓缩：将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并，装入透析袋，以PEG浓缩至所需体积。　　3.Tris-PO4离子交换层析法　　该法在上述方法的基础上稍加改良，即通过梯度洗脱，可用于血清中IgG和IgM的提取。　　【材料和试剂】　　(1)DE32或DE52纤维素。　　(2)待纯化标本：杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。　　(3)1.5×50cm 层析柱;透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。　　(4)梯度洗脱液包括：0.005 mol/L，pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L，pH5.1 Tris-PO4。　　【操作步骤】　　(1)蛋白标本对0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4透析。　　(2)DE52装柱，并以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4平衡。　　(3)加样，以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4洗脱，紫外监测直至洗脱液280nm OD回到基线。这一步骤可除去血清中其他蛋白。　　(4)以350ml 0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4洗脱，这一步骤可用于纯化血清IgG和IgM。　　(5)以125ml 0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L，pH5.1 Tris-PO4梯度洗脱，总量收集250ml;重复步骤(5)。　　(6)根据280nm峰值合并蛋白峰，透析浓缩和保存同上。　　用过的DE52可用0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl梯度洗脱回收。再用蒸馏水洗至中性，加入0.02%叠氮钠于4℃保存备用。　　EAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  大鼠促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒检测原理  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被促甲状腺激素(TSH)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的促甲状腺激素(TSH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。  样品收集、处理及保存方法  1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。  2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。  3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。  4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。  5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。  自备物品  1. 酶标仪(450nm)  2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL  3. 37℃恒温箱  大鼠促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒操作注意事项  1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。  2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封(低温干燥)保存。  3. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。  4. 所有液体组分使用前充分摇匀。  注：标准品用标准品稀释液倍比稀释为：4800、2400、1200、600、300、150μIU/L  试剂的准备  20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20 稀释，即1 份的20×洗涤缓冲液加19 份的蒸馏水。  洗板方法  1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5 次。  2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。  操作步骤  1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。  2. 设置标准品孔和样本孔。标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;待测样本孔先加样本10μL，再加样本稀释液40μL;空白孔不加。  3. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。  4. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次(也可用洗板机洗板)。  5. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。  6. 每孔加入终止液50μL，15min 内，在450nm 波长处测定各孔的OD 值。  大鼠促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒结果判断  绘制标准曲线：在Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。  试剂盒性能  1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值，大于等于0.9900。  2. 灵敏度：zui低检测浓度小于1.0μIU/L。  3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。  4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。  5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。  6. 有效期：6 个月  试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  ELISA检测试剂盒试验恪守哪中心原理  ELISA检测试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。  ELISA检测试剂盒可以用于：(1)检测大分子抗原和特异性抗体等;(2)具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。  ELISA检测试剂盒实验中的血清需采用血管收集血液，室温血液自然凝固30分钟，1000xg离心15分钟左右，收集上清，分装后，标好号，-20°C或-80°C保存。运输是用干冰。  把ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。对于一个旨在分离CD4阳性T的试剂盒来说，操作流程主要有以下几步。首先，将样品与anti-CD4抗体包被的磁珠共同孵育，使抗体与CD4+T结合。然后洗去不需要的非目标(即不表达CD4的)，留下磁珠-抗体-复合物。将上述复合物与能结合anti-CD4抗体的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗体-二抗复合物。我们可以用磁铁去除这种磁珠-抗体-二抗复合物，而所有的CD4+细胞留在上清中。zui后，只需将上清转移就可以进行下游研究了。  ELISA检测试剂盒试验有必要恪守以下3个中心原理：  (1)抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并坚持其免疫学活性;  (2)抗原或抗体可通过共价键与酶衔接构成酶结合物，而此种酶结合物仍能坚持其免疫学和酶学活性;  (3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可依据参加底物的色彩反响来断定是否有免疫反响的存在，并且色彩反响的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，ELISA检测试剂盒可依据已知浓度的抗原或抗体的色彩反响的深浅制作规范曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。  ELISA检测试剂盒免费代测注意事项  1.从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。  2.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差  3.建议所有标准品、样本都做双份检测。  4.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.  5.为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。  6.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。  7.底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。  ELISA检测试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承「一切为了满足客户的需求 " 的经营宗旨; 牢固树立「以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量 " 的方针。

　　  (一)国产ELISA试剂盒液体型试剂　　  1.液体单试剂　　  2.液体双试剂　　  如今市场上的生化查看试剂盒首要以液体双试剂为主，与其它类型试剂比照具有液体试剂和双试剂的利益：行进了抗烦扰反应的才干、使测定科学合理、安稳功用优异。　　  ELISA试剂盒所谓粉剂型及片剂型试剂，就是将试剂的各组分用球磨技术粉碎成粉剂或混合后压成片剂，运用前再参与的溶液复溶成液体试剂。　　  迅速反应试剂盒首要是为了习气生化剖析的技术行进，缩短反应时间，行进工作效率。如今恳求这种迅速反应的试剂用户不多。　　  这是跟着方法学的改进，特别是免疫技术的行进，运用特异性抗体参与反应的新式试剂。　　  这类型试剂首要是用于三点双项同测结束法、三点双项同测连续监测法和三点双项同测结束速率法测定的试剂盒。　　  古朵生物国产ELISA试剂盒首要装入试剂瓶，瓶上充分运用编码技术，然后根据编码发起分配、运用及换贮存。　　  ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

　　古朵技术方向| 酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(Folin-酚比色法)　　简介：酸性磷酸酶 (acid phosphatase , ACP) 分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。酸性磷酸酶是一个蛋白家族。　　检测原理是以磷酸苯二钠作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，通过Folin-酚(又称福林酚)显色，于分光光度计680nm处检测吸光度，以酶促反应时间为横坐标以产物生成量为纵坐标绘制进程曲线。曲线的起始部分在某一段时间内呈直线。该试剂盒主要用于组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。　　组成：　　试剂(A):Phenol(10mM) 1ml　　试剂(B):样品稀释液 100ml　　试剂(C):ACP assay buffer 15ml　　试剂(D):ACP终止液 100ml　　试剂(E):Folin-酚显色液 15ml　　使用说明书 1份　　自备材料：蒸馏水;离心管或试管;水浴锅;比色杯;分光光度计　　操作步骤(仅供参考)：　　1、准备样品：　　① 血浆、 血清和尿液样品: 血浆、 血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，用于酸性磷酸酯酶的检测。　　②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，离心取上清，-20℃冻存，用于酸性磷酸酯酶的检测。　　③植物样品：取适量的植物组织加入少量生理盐水或PBS，充分捣碎或研磨，静置，用纱布或滤纸过滤，留取上请液并测量体积，-20℃冻存，用于酸性磷酸酯酶的检测。　　④高活性样品：如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶，可以使用样品稀释液稀释10-20倍。　　2、稀释标准品　　加入物 1 2 3 4 5　　phenol(10mM)(ul) 50 100 150 200 250　　蒸馏水(ul) 450 400 350 300 250　　phenol浓度(mM) 0.04 0.08 0.12 0.16 0.2　　3、ACP加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管、对照管(选做)，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。　　4、ACP检测：分光光度计，空白管调零，比色杯光径1.0cm，检测680nm处吸光度。　　计算：根据测得的各待测样品的吸光度，于标准曲线上查出相应的酚含量，乘以稀释倍数后，换算为”nmol/ml·min”的活性单位。组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%　　注意事项：　　1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。　　2、建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。　　3、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。　　4、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用ACP Assay buffer稀释样品后重新测定。　　5、待测样品中酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min。　　6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。　　有效期：6个月有效期。　　酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  抗核糖核蛋白抗体(RNPAb)ELISA kit检测方法  elisa试剂盒的系统可以说是现在使用多的检测方法，而且采用抗核糖核蛋白抗体(RNPAb)ELISA kit技术手段很多，对于花板，假阳性，全显色，全部显色，显色比空缺还低，这些都起到了至关重要的作用，一定要多注意，那么elisa检测系统稳定，这些实验过程都要注意。  采用抗核糖核蛋白抗体(RNPAb)ELISA kitELISA的主要常用类型及步骤：  ★ 间接法测抗体  间接法是检测抗体常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体(二抗)以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：  ◎ 将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原，洗涤除去未结合的抗原及杂质。  ◎ 加稀释的样本，保温反应。样本中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，样本中的其他成份在洗涤过程中被洗去。  ◎ 加酶标抗抗体，固相免疫复合物中的抗体与酶标抗抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与样本中受检抗体的量正相关。  ◎ 加底物显色。  ◎ 竞争法测抗原。  抗核糖核蛋白抗体(RNPAb)ELISA kit 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  标签：ELISA试剂盒 古朵生物 检测试剂盒    问题序号可能原因解决方法  >>显色淡，灵敏度偏低1 试剂盒未充分平衡试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)  2 样品不适合做ELISA检测样品一般选择培养上清、血清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)  3 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥防止板过于干燥  4 包被抗体遭到破坏操作温和，移液枪不能碰到孔底  5 样本和抗体孵育条件不合适按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育。  6 洗涤浸泡时间过长按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间;  7 偶联HRP试剂污染弃去试剂  8 错误的稀释偶联HRP试剂弃去试剂  9 TMB底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间确定合适的孵育时间：人为判定-gao浓度的标准品出现深蓝色;S4-5有淡蓝色;机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65  10 样本浓度过高或存在基质效应建议做不同稀释倍数，确认样本jia稀释倍数。  11 酶标仪滤光片设置有问题或者波长选择不对确认仪器设置及选择正确的波长检测。  12 酶标板不适合做ELISA不能使用细胞培养板，建议使用ELISA高吸附力板子。  >>背景深，全部呈有色(通常的Elisa背景值OD  2 底物污染，未避光保存，出现颜色弃去底物  3 样品稀释液污染弃去稀释液  4 吸头重复使用，未洗净或消毒不彻底吸头尽可能一次性使用  5 不正确的孵育时间，温度(尤其是底物孵育的时间)wei常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。完全按照说明书要求。  6 偶联抗体(streptavidin-HRP)浓度过高按照说明书调整到jia的浓度  7 ELISA板子不正确的贮存酶标板贮存于2-8 ℃;使用结合力低点的Elisa板  8 没有正确封闭在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间  9 样本溶血严重建议使用非溶血或轻微溶血样本，严重溶血样本会导致背景偏高。  >>重复性不佳，高CV值1 样品不均一加样前充分混匀样品，取样确保移液位置一致;  2 包被板表面遭到破坏洗板加样时尽量小心，避免破坏板的包被表面  3 孔与孔之间的交叉污染孵育后取下盖子小心操作，避免孔与孔的污染;封板膜不能重复使用  4 加样量不一致样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴  5 边缘效应(外周孔显色较中心孔深)孵育时尽量100 rpm旋转混匀  6 微量加样不准确保证微量加样的准确性和均一性  7 不正确的洗涤洗液准确配制;充分洗涤，静置15秒，确定每一步的洗涤  >>出现白板，阳性对照不显色1 显色液变质更换新的显色液  2 洗涤液配制有误请按说明书所示稀释倍数配制  3 未加酶结合物而认为已加入注意不要漏加  4 终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用每次加液前均应看清标签  5 标准品稀释方法错误/或标准品有问题请按照说明书所示配置说明书，注意单位和稀释倍数  6 不同试剂盒或不同批号的试剂混用建议使用同批次试剂盒。不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂。  不正常的标准曲线1 错误的方法重悬标准品 加入正确量的溶液重悬标准品，重悬充分  2 标准品稀释错误 按照说明书要求稀释标准品  3 标准品污染 使用一次性的灭菌吸头， 标准品贮存于2-8 ℃  4 错误的倍比稀释步骤 按照说明书倍比稀释标准品  5 波长选择错误TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而 前者比色波长为450nm，后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。  6 标准品混用 不同批号试剂勿混用  7 试剂盒在运输途中时间太长，温度太高，标准品失活 尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温  8 ELISA未终止而直接检测450nm和620nmTMB显色需终止后检测，否则会出现620nm比450nm读数高的现象。(数值仍有梯度规律)样品或标准品OD超出正常范围1 错误的样品或标准品的稀释 完全按照说明书稀释。  2 偶联抗体浓度过高 按照说明书调整到jia的浓度  3 TMB底物孵育时间过长 调整到合适的孵育时间  4 样品或标准品污染 避免污染  5 错误的孵育时间或温度 完全按照说明书  6 孵育时未加盖导致溶液挥发和污染 贴封片或加盖  标曲很好，但是样本无法计算到数值1 标曲选择不合适选择合适的标曲拟合;  2 样本含量很低，低于灵敏度无法被检测到尝试浓缩样本或使用高敏ELISA试剂盒检测  3样本含量很高，超过标曲建议进行预实验摸索稀释倍数，确保样本OD值落在标曲范围内  标曲高浓度间无明显趋势1如OD值靠谱，但是仅无梯度，则显色过度TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。  2仅作单波长检测。由于参考波长读取非特异性检测，如指纹、划痕、水渍等，对结果也有影响。建议终结果以双波长为准确。  古朵生物|ELISA实验显性淡、灵敏度低技术资料详解 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。

  PBS缓冲液的作用您了解嘛？  PBS缓冲液，是生物化学研究中使用为广泛的一种缓冲液，主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。由于Na2HPO4和KH2PO4有二级解离，缓冲的pH值范围很广，而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。如有需要PBS还可以补加1 mmol/L CaCl2和0.5 mmol/L MgCl2，以提供二价阳离子。  作用  PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。  原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在适条件下参与生物反应，所以使用PBS是不错之选。  PBS也不是的，有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高，就需要在平衡缓冲液中加入多的成分，维持佳的条件保证生物活性物质保持其完整的特性。  PBS缓冲液 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨；牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

　　  标签：生物素标记抗体 古朵生物 蛋白 生物试剂　　  古朵教您如何正确使用生物素标记抗体及蛋白?　　  生物素是一个分子量只有244.31Da的小分子，经活化后可与蛋白、抗体等生物大分子结合，不仅可以很好地保持大分子的生物活性，而且与亲和素结合使用时具有多级放大作用，使其广泛应用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究。　　  那么如何使用生物素标记抗体或蛋白呢?下面古朵生物给大家分享一下。　　  工具/原料　　  1.10ul，50ul，200ul，1000ul可调移液器　　  2. 恒温箱(37℃)　　  3. 离心机(离心力可达到12,000×g)　　  4. 生物素标记试剂盒(Cata.No:EBLK0002, Elabscience)　　  古朵生物详解实验前准备　　  1.仔细阅读使用说明书。　　  2.计算待使用NH2-Reactive Biotin的量。　　  3.提前20min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温(注：不需要用到的NH2-Reactive Biotin继续放置冰箱中)。　　  4.溶解NH2-Reactive Biotin：加入30ulDMF至NH2-ReactiveBiotin瓶中，静置10min，待其充分溶解，此时生物素的浓度为10mM。　　  操作步骤：(本操作步骤按照1mg的量进行标记)　　  1.取1mg待标记抗体于Filtration tube中，并加入相应体积的Labeling Buffer，使抗体的终浓度为2mg/ml，12,000 x g离心10min。(注：①Filtration tube的大体积为0.5ml②待标记抗体浓度低时，可先超滤离心一次)　　  2. 加入13.3ul NH2-Reactive Biotin 和适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀。放入37℃恒温箱中避光温育30min。12,000 x g离心10min。　　  3. 加入适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀，12,000 x g离心10min。　　  4. 操作3重复一次。　　  5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中，轻轻吹打。将滤芯倒转放置于另一个离心管中，6,000 x g离心10min。　　  6. 收集离心管中的溶液，即为生物素标记的抗体。　　  古朵教您如何正确使用生物素标记抗体及蛋白? 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。

  古朵生物| 三组织切片染色操作步骤  1、Giemsa工作液的配制： 按试剂(A): 试剂(B) =1:9配制Giemsa stain工作液，即取1份的Giemsa stain储存液(10×)加入到9份的磷酸盐缓冲液中，充分混匀，即为Giemsa stain工作液。配制后的Giemsa stain工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。  2、新鲜组织立即置于Regaud固定液固定2天，期间应换1次固定液。  3、3%的重铬酸jia固定1天。  4、流水冲洗16个小时或过夜。  5、按照常规脱水、包埋。  6、切片，厚度约为5μm。  7、常规脱蜡至水。  8、蒸馏水清洗2次，每次约1min。  9、置于含有Giemsa stain工作液的染缸内，浸染18～24h。  10、蒸馏水稍微清洗。  11、0.1～0.5%的乙酸洗1～2min。  12、自来水稍微冲洗。  13、用无水乙醇迅速脱水3次，每次5～10s。  14、二jia苯透明。  15、中性树脂封固。  染色结果：  细胞核蓝色至紫色  细胞质淡蓝色  嗜铬细胞胞质黄绿色  结缔组织淡红色  注意事项：  1、 血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，以免影响染色结果。  2、 涂片染色中Giemsa染色后，请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。  3、 如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液的浓度。  4、 Giemsa涂片染色和组织切片染色中，pH值对染色有一定影响，载玻片应清洁无酸 碱污染以免影响染色结果。  5、染色液在稀释后液面应有金属光泽，表示染液有染色作用，否则染色液可能失效。 6、 Giemsa组织切片染色中，染色后需用大量0.1～0.5%的乙酸急速冲洗，避免浮面 沉淀 物污染切片后难以洗脱。  7、0.1～0.5%的冰乙酸分化，常用于Giemsa组织切片染色，如有必要亦可用于细胞涂片，但其浓度应适量下调。0.5%的冰乙酸分化切片时，切片呈粉红色即可终止。  8、Giemsa组织切片染色中，无水乙醇脱水要迅速，否则切片易褪色。  9、Giemsa涂片染色和组织切片染色中，如需急速获得结果，可以按Giemsa stain储存液：磷酸盐缓冲液(1×) =1：1配制，即取吉姆萨储存液(10×)1份、磷酸盐缓冲液(1×)1份，充分混匀，即为快速吉姆萨染色工作液，将染色液滴加于细胞涂片或组织切片上，加热染色，20～30s后重新加染色液，反复5～10次，其余步骤同上。  10、染色液可重复使用，但不能多次重复，若有沉淀物应过滤后使用。  11、Regaud固定液：按3%重铬酸jia水溶液：甲醛=4:1配制，临用前混匀，1～2天后失效。  12、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 13、使用场所应通风，并远离火源。  有效期： 24个月有效甲基绿。  三组织切片染色操作步骤 古朵既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。产品涵盖有机试剂、无机试剂和生 化试剂，标准物质、天然植物提取物及中药标准品，核酸、酶、缓冲剂、显色底物，医药中间体、原料药、催化剂、高纯溶剂、特种高分子材料及实验室常用耗材。 品种类超过2万种，广泛应用于细胞药理、药剂、分子生物学等科研领域。

  古朵详述、酶联免疫吸附剂测定ELISA的相关问题  1 如何洗板?  文献说“手工洗板时每次加入洗涤液后，应静置15-30s，不要将一个酶标孔中的洗涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。”  想问的是：“甩去洗涤液”中如何“甩去”?如果整块板一起甩不会导致交叉污染吗?请内行详细指点一下。  2 标本为动物脑匀浆，需要稀释吗?稀释多少倍合适呢?  1.我经常这么干没有遇到交叉污染的问题，就是整块板翻转，洗涤液倒入下水道以后，维持孔朝下底朝天的样子往下甩动板，跟瓶子里的后一点水想倒出来的动作差不多.我一般觉得是往下甩，避免左右晃动比较好.不过你如果担心污染，不甩也没有关系，直接扣在吸水纸上吸干也是可以的，但是甩几下，省很多纸啊.重点是洗涤液倒干净之前不要把板翻回来正面.但是倒干净也不等于完全干掉，只要液体少到无法流淌就可以了，如果真干了的话，抗体抗原的结合可能失效.  倒掉样本时候需要小心，之后的洗涤步骤其实不容易污染.  2.动物脑匀浆我没有做过.提醒你跟试剂生产商确定好是否能够测这种样本.我曾经遇到过ELISA试剂对含人血清的样本发生非特异性反应的倒霉情况，问了生产商才知他们根本没有测试过人血清。  如果生产商测试过动物脑匀浆的话，应该也能够告诉你恰当的稀释倍数。  第二个办法是从文献中找先例，沿用别人优化过的试验方案。  否则的话，你需要先做一个稀释试验，使用几个你确定为阳性的样本(不要次就用上你珍贵的实验样品)，稀释4X，10X，100X三个倍数应该够了(我做过的几个ELISA试剂对血清样本的建议倍数是4倍比较常见)，加上未稀释的你就有四个浓度梯度。关于稀释的注意事项你如果不清楚再问吧。  既然如此，你就应该跟生产商要制作匀浆的实验方法啦，跟着他们的办法做为保险。如果是大公司，两个工作日之内一定会有回复，有时候网站上就能找到这种信息。  酶联免疫吸附 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

    您知道小鼠I型胶原(Col I)ELISA试剂盒检测原理吗?    检测原理    试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被I型胶原(Col I)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的I型胶原(Col I)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测吸光度(OD 值)，计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法    1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。    2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。    3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。    4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。    5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。    自备物品    1. 酶标仪(450nm)    2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL    3. 37℃恒温箱    试剂盒操作注意事项    1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的    浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。    2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封(低温干燥)保存。    3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5 倍，zui终结果乘以5 才是样本实际浓度。    4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。    5. 所有液体组分使用前充分摇匀。    小鼠(Mouse)I型胶原(Col I)ELISA检测试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

　　如何快速测定ELISA试剂盒，试剂盒清洗试验原理有哪些?　　如何快速检测ELISA试剂盒：　　ELISA试剂盒由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，ELISA试剂盒均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体，利用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原，因而免疫测定的使用规模极广，在临床查验中可用于测定：　　1) 体液中的各种蛋白质，包括含量很少的蛋白质如甲胎蛋白等。　　2) 激素，包括小分子量的甾体激素等。　　3) 抗生素和药物。　　4) 病原体抗原，HBsAg、HBeAg等。　　5) 另外，也可利用纯化的抗原检测标本中的抗体，例如抗-HBs等。　　5.符号的免疫测定　　ELISA试剂盒如上所述，免疫测定是一种很敏感的测定办法，抗原抗体反响后直接测定构成的沉积或浊度，敏感度可达5~10μg/ml，但在临床查验中，某些待测物在标本中的含量远低于这一水平，因而要寻觅增加敏感度的办法。符号的免疫测定是将检测试剂中的抗原或抗体用可微量测定的物质加以符号，经过测定符号物来进步敏感度。在放射免疫测定和中，ELISA试剂盒符号物分别为放射性核素和酶，zui后用测定放射性和酶生机来计算待检物的量，敏感度可比直接测定沉积物进步数百至数千倍。在符号免疫测定中，一般参加过量的符号试剂以确保与待测物*反响。以符号抗体(Ab ※)检测抗原(Ag)为例，反响式如下：　　Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※　　在反响产品中有与Ag结合的Ab※和游离和Ab※ ，如不将两者别离而测定符号物，测得的成果将为两者之和。因而，游离符号物与结合符号物的别离是符号免疫测定中的重要进程。可采用多种手段，固相载体是其中之一。如将抗原或抗体包被在固相载体上，然后再与符号的抗原或抗体直接反响，结合的符号物被固定在载体上，而游离的符号物留于溶液中。这样能够经过洗刷将游离的Ab※除掉，结合符号物的测定可在固相上进行。IgM抗体一般为保护性抗体具有免疫性。因而IgM抗体的测定，对某些流行症如甲型肝炎有较高的临床确诊价值。　　1.3 抗原抗体反响　　1.3.1 可逆性　　抗原与抗体结合构成抗原抗体复合物的进程是一种动态平衡，其反响式为：　　Ag+Ab→Ag·Ab　　抗体的亲和力(affinity)是抗原抗体间的固有结合力，能够用平衡常数K表明：　　K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]　　ELISA试剂盒高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上十分适合，两者结合结实，不易解离。解离后的抗原或抗体均能坚持原有的结构和活性，ELISA试剂盒因而可用亲和层析法来提纯抗原或抗体。在抗血清中，特异性的IgG抗体仅占总IgG中的极小部分。用亲和层析法提取的特异性抗体，称为亲和层析纯抗体，使用于免疫测定中可得到更好的效果。试剂盒清洗试验原理：　　古朵生物 ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物su标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。　　自备材料　　1. 蒸馏水。　　2. 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。　　3. 振荡器及磁力搅拌器等。　　安全性　　1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。　　2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。　　3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。　　ELISA试剂盒操作注意事项　　1. 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。　　2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。　　3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。　　4. 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。　　5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。　　6. 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。　　7. 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。　　8. 加入ELISA试剂盒的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。　　9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。　　ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

　　古朵生物| 三组织切片染色操作步骤　　1、Giemsa工作液的配制： 按试剂(A): 试剂(B) =1:9配制Giemsa stain工作液，即取1份的Giemsa stain储存液(10×)加入到9份的磷酸盐缓冲液中，充分混匀，即为Giemsa stain工作液。配制后的Giemsa stain工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。　　2、新鲜组织立即置于Regaud固定液固定2天，期间应更换1次固定液。　　3、3%的重铬酸jia固定1天。　　4、流水冲洗16个小时或过夜。　　5、按照常规脱水、包埋。　　6、切片，厚度约为5μm。　　7、常规脱蜡至水。　　8、蒸馏水清洗2次，每次约1min。　　9、置于含有Giemsa stain工作液的染缸内，浸染18～24h。　　10、蒸馏水稍微清洗。　　11、0.1～0.5%的乙酸洗1～2min。　　12、自来水稍微冲洗。　　13、用无水乙醇迅速脱水3次，每次5～10s。　　14、二jia苯透明。　　15、中性树脂封固。　　染色结果：　　细胞核蓝色至紫色　　细胞质淡蓝色　　嗜铬细胞胞质黄绿色　　结缔组织淡红色　　注意事项：　　1、 血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，以免影响染色结果。　　2、 涂片染色中Giemsa染色后，请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。　　3、 如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液的浓度。　　4、 Giemsa涂片染色和组织切片染色中，pH值对染色有一定影响，载玻片应清洁无酸 碱污染以免影响染色结果。　　5、染色液在稀释后液面应有金属光泽，表示染液有染色作用，否则染色液可能失效。 6、 Giemsa组织切片染色中，染色后需用大量0.1～0.5%的乙酸急速冲洗，避免浮面 沉淀 物污染切片后难以洗脱。　　7、0.1～0.5%的冰乙酸分化，常用于Giemsa组织切片染色，如有必要亦可用于细胞涂片，但其浓度应适量下调。0.5%的冰乙酸分化切片时，切片呈粉红色即可终止。　　8、Giemsa组织切片染色中，无水乙醇脱水要迅速，否则切片易褪色。　　9、Giemsa涂片染色和组织切片染色中，如需急速获得结果，可以按Giemsa stain储存液：磷酸盐缓冲液(1×) =1：1配制，即取吉姆萨储存液(10×)1份、磷酸盐缓冲液(1×)1份，充分混匀，即为快速吉姆萨染色工作液，将染色液滴加于细胞涂片或组织切片上，加热染色，20～30s后重新加染色液，反复5～10次，其余步骤同上。　　10、染色液可重复使用，但不能多次重复，若有沉淀物应过滤后使用。　　11、Regaud固定液：按3%重铬酸jia水溶液：甲醛=4:1配制，临用前混匀，1～2天后失效。　　12、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 13、使用场所应通风，并远离火源。　　有效期： 24个月有效甲基绿。　　三组织切片染色操作步骤 古朵既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。产品涵盖有机试剂、无机试剂和生 化试剂，标准物质、天然植物提取物及中药标准品，核酸、酶、缓冲剂、显色底物，医药中间体、原料药、催化剂、高纯溶剂、特种高分子材料及实验室常用耗材。 品种类超过2万种，广泛应用于细胞药理、药剂、分子生物学等科研领域。

　　ELISA检测试剂盒抗生素8号的使用方法 古朵　　ELISA检测试剂盒抗生素8号培养基英文名称： Antibiotic Agar NO.8　　产品规格： BR　　包装：250克　　级别：BR　　成分(g/L)　　酵母浸出粉：1.0　　硫酸铵：1.0　　葡萄糖：5.0　　磷酸盐：10.0　　抗生素8号培养基琼脂：15.0　　PH：5.9-6.1　　用法：取本品32克，加1000ml蒸馏水，摇匀静置10分钟后，加热煮沸至*溶解,分装经115℃30分钟灭菌后,备用。　　标准：中国药典2005年版　　性状：干燥粉末。易吸湿。　　用途：生化研究。用于去甲万古霉素效价测定　　保存：RT　　ELISA检测试剂盒 古朵既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。产品涵盖有机试剂、无机试剂和生 化试剂，标准物质、天然植物提取物及中药标准品，核酸、酶、缓冲剂、显色底物，医药中间体、原料药、催化剂、高纯溶剂、特种高分子材料及实验室常用耗材。 品种类超过2万种，广泛应用于细胞药理、药剂、分子生物学等科研领域。

　　植物脱氢酶(Plant dehydrogenase, pDHA) 试剂盒说明书　　植物脱氢酶试剂盒测定意义　　生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , DHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态，能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。　　植物脱氢酶试剂盒测定原理　　受氢体 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，即 TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后，其还原产物三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone，即 TF)呈现红色，在波长 485nm 处有最大吸收峰，测定其 485nm 吸光值，即得植物脱氢酶活性。　　需自备实验仪器及用品　　恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、研钵、滤纸、可见分光光度计、1mL 比色皿、冰、蒸馏水和乙酸乙酯(不允许快递，请用户自备)。　　植物脱氢酶试剂盒试剂的组成和配制　　试剂一：粉剂×2瓶，使用前加少量水溶解，定容至60mL，避光、4℃保存(尽量现配现用)。　　试剂二：液体 60mL×6，4℃保存。　　试剂三：乙酸乙酯，自备。　　植物脱氢酶试剂盒样品处理　　称取 0.5-1g 的植物组织，用双蒸水清洗 3-4 次，用滤纸吸干水分，备用。　　酶活单位定义：在 37℃时，每小时每克样品使反应体系 OD 值每增加 0.01 为一个酶活单位。　　计算公式：脱氢酶活性(U/g·h)=(OD485测定-OD485对照)÷0.01 ÷样品质量(g) ÷反应时间(h)。　　植物脱氢酶试剂盒注意事项　　1. 配制好的试剂一避光保存于 4℃，尽量在一周内使用，若出现红色，则不能使用。　　2. 试剂三易挥发，有毒，为了您的健康，请穿实验服，戴口罩，戴乳胶手套操作。　　3. 反应完成后立即冰浴以终止反应，并去除干净残留的反应液。　　4. 如果测定出来的吸光值较大，需把样品适当稀释再进行测定。　　5. 试剂盒 2-8℃保存。　　植物脱氢酶(Plant dehydrogenase, pDHA) 试剂盒说明书 古朵既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。产品涵盖有机试剂、无机试剂和生 化试剂，标准物质、天然植物提取物及中药标准品，核酸、酶、缓冲剂、显色底物，医药中间体、原料药、催化剂、高纯溶剂、特种高分子材料及实验室常用耗材。 品种类超过2万种，广泛应用于细胞药理、药剂、分子生物学等科研领域。

　　  标签：血清 胎牛血清 古朵生物　　  血清污染及过滤问题您知道吗?　　  1、问：怀疑购买的Gibco胚胎干细胞专用胎牛血清(Gibco ES专用胎牛血清)染菌，想用滤膜过滤一下，可否自己用0.22μm滤膜过滤?对血清性质有多大影响?有做过的么?　　  答：可以过滤的，血清当出厂时都是0.22μm或0.1μm过滤除菌。想证明有没有染菌不用过滤这么麻烦，只要放置于37℃过夜就可以了，如果有微生物污染会变浑浊的，如果还是澄清的就说明没有问题的。实验室中血清很难直接过滤，一般要加到培养基中再过滤。我们实验室制备培养基时，都使用滤膜过滤，一般而言如果制备1-2瓶培养基，一个滤膜及一支30ml注射器可以过滤50ml小牛血清。如果大量制备培养基也可以将血清加到培养基中，使用0.22微米的大滤膜一起过滤。　　  2、问：我怀疑我用的完全1640培养液被污染了，准备重新过滤消毒，过滤后是否需要补充胎牛血清?如需又如何补充?　　  答：完全1640培养液被污染了，如果是支原体的话，过滤没有作用，支原体可以通过滤膜。我们用1640液，都是配液后保留500ml，然后其他的分装100-200ml，现用现配因为血清比1640要贵，如果你想过滤的话，建议你加原比例血清，因为Gibco牛血清不会很容易通过滤膜。主要的还是找到可能污染的原因。　　  3、问：加好了Gibco牛血清双抗的培养基由于污染了再过滤后还能用吗?　　  答：建议不要用了。在加了双抗的情况下已经污染，那么细菌污染的可能性会较小了。一般的过滤除不能去除病毒或者部分真菌的污染的。　　  4、问：我准备把使用的完全1640培养液重新过滤一遍，不知道培养液中的血清成分是否能通过滤膜，过滤后是否还需要补充胎牛血清?如需又如何补充?　　  答：可以透过，但是随着液体量的增多会很慢，如果不加压会比较麻烦，还有好用低蛋白吸附的，不然损失是比较大的。浅谈血清污染和过滤的问题　　  血清污染及过滤问题您知道吗? 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。上海古朵生物公司中“古朵”取自good的音译，寓意是质量好，品牌好，服务好!欢迎新老客户洽谈!

　　新品推荐RT-02011 一步法RT-PCR试剂盒　　产品名称:一步法RT-PCR试剂盒　　英文名称:RT-PCR EasyTM I(One Step)　　产品规格:100 rxns 500 rxns　　产品货号:RT-02011　　保存说明:短期室温，长期2-8℃　　产品描述:一步法RT-PCR　　RNA模板浓度:RT-PCR EasyTM I (One Step)：0.1pg-1μg。　　　　一步法RT-PCR试剂盒 产品介绍　　Foregene One-Step RT-PCR Easy系列产品实现了从 RNA 到双链 DNA 的一体化反应，即逆转录和PCR扩增在同一个反应离心管、 同一个反应体系中完成， 简化了实验步骤、提高了实验效率、优化了实验方案。　　RT-PCR EasyTM I (One Step) 是 Foregene 公司特别研制的一步法 RT-PCR 试剂盒，实现了从 RT 到 PCR 的同一管中连续进行，操作简单、快捷，能有效的减少实验过程中的污染。2× RT-PCR Easy TM Mix 具有很强的耐受性、热稳定性、特异性扩增。　　一步法RT-PCR试剂盒 试剂盒应用　　♦ 高拷贝、低拷贝基因的快速检测。　　♦ 高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。　　一步法RT-PCR试剂盒 注意事项:　　♦ 一步法试剂盒使逆转录和 PCR 两种反应在同一管中进行，只需要加入模板 RNA、特异性 PCR 引物和RNase-Free ddH2O 即可。　　♦ 可以快速准确的对 RNA 进行实时定量分析。RT-qPCR EasyTM (One Step)试剂盒可以快速、的对病毒 RNA 或微量 RNA 进行定量分析。　　♦ 试剂盒使用独特的 Foregene 反转录试剂和 Foregene HotStar Taq DNAPolymerase 相结合， 并配合独特的反应体系， 有效提高反应的扩增效率和特异性。　　♦ 优化的反应体系使得反应具有更高的检测灵敏性， 更强的热稳定性， 更好的耐受性。　　试剂盒内容　　Store at -20°C　　♦ 2× RT-PCR EasyTM Mix：Foregene Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、Foregene HotStar Taq DNA Polymerase、dNTPs、Mg 2+ 、反应缓冲液、优化剂、稳定剂。　　♦ RNase-Free ddH2O：超纯水，用于RT-PCR反应。　　Foregene Reverse Transcriptase　　Foregene 逆转录酶能够提供、特异性强的逆转录反应。逆转录酶表现出很高的亲和力，并在 50°C 反应温度甚至 65°C 条件下仍然保持良好的逆转录活性，能够很好的逆转录其他逆转录酶不能处理的二级结构复杂的RNA。Foregene ReverseTranscriptase 灵敏度高，使用的RNA 量范围广泛(0.1pg≤RNA≤1μg) 。　　Foregene HotStar Taq DNA Polymerase　　提供了 PCR 的高度特异性扩增。反转录进行时，DNA 聚合酶是完全无效的，不妨碍反转录反应。后通过 PCR 反应程序，加热到 94°C，激活 DNA 聚合酶同时，失活逆转录酶。热启动过程消除了个循环时非特异性退火的引物和引物二聚体的形成，保证 PCR 扩增的高度特异性和可靠性。　　试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay)，简称ELISA，是实验室常用的检测方法。 酶是能够催化化学反应的特殊蛋白质，其催化效力超过目前所有人造催化剂。ELISA是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反应结合起来的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体以后，既不影响抗原抗体反应的特异性，也不改变酶本身的活性。因此ELISA具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批标本的检测，广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。  ELISA必须遵守以下3个核心原理：1)抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性;2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。在ELISA中酶起到很关键的作用，常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还能催化酶促反应，显示出生物放大作用。  ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。在实际应用方面可用于疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。按照待测物性质的不同，ELISA反应可以分为抗原检测反应及抗体检测反应。  而用ELISA检测抗体，已获得对多种传染病和寄生虫病的血清学诊断，亦开始广泛用于现场流行病学调查。在寄生虫病方面，它用于对疟原虫、阿米巴、利日曼原虫、锥虫、血吸虫、囊虫、弓浆虫、肺吸虫、肝吸虫、血丝虫、旋毛虫病等血清学诊断，这对人医和兽医都很重要。在病原微生物方面已用于检测链球菌、沙门氏菌、布氏杆菌、结核杆菌、麻疯杆菌、霍乱弧jun、淋球菌、假丝酵母菌等的抗体，还可用于和霍乱弧jun抗毒素的测定以及检测斑疹伤寒立克次氏体感染后的抗体作诊断，也可用于对立克次氏体的种属鉴别，还有用于检测鹦鹉热衣原体抗体的报导。ELISA也可应用于以下病毒抗体检测：流感病毒、腮腺炎病毒、麻诊、风疹、轮状病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒、腺病毒、肠道病毒、脑炎病毒、黄热病毒、狂犬病毒和脊髓灰质炎病毒等，其敏感性都超过目前常用的检测方法。此外，还可用于鉴定病毒型别，例如疱疹病毒。在免疫性疾病方面有试用作自身疫病抗体测定以及对过敏的诊断，例如检测各种过敏原的抗体、DNA抗体及甲状腺球蛋白抗体，红斑性痕疮抗体等等。在卫生学方面，可用于检测食品中葡萄球菌肠毒素及沙门氏菌毒素等等。  ELISA试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  蛋白质与国产ELISA试剂盒相互作用的研究  古朵生物 国产ELISA试剂盒与蛋白质是生命活动的执行者，细胞内的生理变化都是通过蛋白质来实现的。但是生命活动中各项功能和行为不是由单一的蛋白质来完成的，需要蛋白质与蛋白质，蛋白质与核酸之间的相互作用来实现的。蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。于是对于蛋白之间相互作用的研究也变的很重要，关于研究方法也是层出不穷。  在我们实验研究的过程中主要用到以下几种技术：  1.酵母双杂交(Y2H)  2.Pull-down技术  3.免疫共沉淀技术(Co-IP)  4.亚细胞共定位技术  5.噬菌体展示技术(PDT)  6.荧光共振能量转移技术(FRET)  7.双分子荧光互补技术(BIFC)  其中实验室比较常用的研究方法主要是前三种。这里对酵母双杂交技术略作介绍和评述。  原理：  酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立的。酵母的半乳糖苷酶基因的转录激活因子GL4有两个的结构域 ：N末端的DNA结合域(BD)和C末端的转录激活域(AD)。BD与DNA分子结合，AD激活下游基因的转录，国产ELISA试剂盒只有两者在空间上充分接近才能激活下游基因的转录。于是将要研究的两个蛋白分别与BD和AD融合，如果两个蛋白有相互作用则AD和BD在空间上会接近进而激活下游报告基因的转录。  操作步骤：  (1)首先构建已知蛋白的cDNA序列为诱饵，与DNA结合域融合(2)将待筛选的蛋白的cDNA序列与转录激活域融合，构建成文库质粒(3)将这两个质粒共转化到酵母细胞中(4)通过检测下游报告基因的表达筛选或确认蛋白相互作用。  优缺点：  优点：是可以在文库中可以高通量筛选与目的蛋白相互作用的蛋白缺点：是假阳性多，还需要其他方法相互印证，国产ELISA试剂盒不适用于所有的蛋白  国产ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  古朵阐述：肿瘤琼脂糖凝胶电泳标本的拍摄方法  1 材料  拍摄肿瘤电泳标本应具备的设备有照像机、近摄接圈、翻拍架、电源稳压器、紫外光灯箱、红滤色镜、快门线等。  1.1 照相机  照相机应具备超近距离拍摄的条件; 镜头要有较高的分辨力; 快门机构要有长时间曝光的B 门装置,并且要有能安装快门线的螺孔。一般多使用单镜头反光照相机。如果使用能够双倍伸长暗腔机构的相机则效果佳。  1.2 近摄接圈  若使用单镜头反光照相机拍摄,必须加用近摄接圈。只有加用近摄接圈,拍摄时才能使肿瘤电泳标本占满画面。在使用近摄接圈时,因增加了机身与镜头之间的距离,照相机自动收缩光圈的机构失效。因此拍摄时应先放大光圈,进行准确调焦,而后再将光圈调小到所需要的大小进行拍摄。肿瘤琼脂糖凝胶电泳标本 古朵  1.3 翻拍架  翻拍架的主要作用是固定照相机。在拍摄时,因曝光时间较长,照相机必须稳定在一定的位置上,否则就无法得到清晰的影像。因拍摄时的物距很短,使用翻拍架比使用三角架为方便。  1.4 电源稳压器  光源电压的波动,直接影响着光源的亮度稳定,光源亮度的稳定又直接影响着拍摄时曝光值的精度。因此,为保证肿瘤电泳标本拍摄时曝光的准确性,好使用一台稳定光源电压的电源稳压器。在每次实验结果的拍摄之前,必须先核实稳压电源输出电压的标准值。电压如不在标准值上,就应行调整,而后再进行拍摄。  1.5 紫外光灯箱  紫外光灯箱的作用是提供肿瘤电泳标本拍摄的紫外光源。因为琼脂糖上所记录的荧光标记条带,在通常可见光的透射下是看不到的,只有受紫外光线的激发时,荧光标记物在灯箱的暗环境下才能显示出清晰明亮的橙红色条带。  1.6 红滤色镜  琼脂糖上所记录的肿瘤标本条带,只有在透射的紫外光下观看才能获得佳的视觉效果。拍摄使用的全色胶片对蓝、紫色光以及紫外光的反应较为敏感。使用红滤色镜的主要作用是使肿瘤标本条带的橙红色光多地到达胶片感光面,拉大肿瘤标本条带与琼脂糖表面的密度差,使肿瘤标本的拍摄获得良好的效果。  1.7 快门线  因标本拍摄曝光时间较长,为了避免用手直接触动相机的快门使相机受到震动,快门的开启须用快门线来控制。  2 方法  操作时首先在相机的机身与镜头之间加上能使装载肿瘤标本的琼脂糖充满取景画面的近摄接圈,镜头前要加装上红滤色镜。装好GB21O黑白胶卷,再将照相机固定在翻拍架上。然后将紫外光灯箱的屏面向上,平放在翻拍架的平台上。再将肿瘤电泳的琼脂糖凝胶平放在紫外光灯箱的屏面上。后打开稳压电源的开关,即可进行拍摄。从拍摄的照片我们可以看到,胶片按比例记录亮度范围的能力得到了充分的发挥。大密度部分已经很浓重了,而琼脂糖凝胶与灯箱屏面的交接线很容易辨别。肿瘤标本条带部分的影调层次几乎没有受到任何损失,高光部分的亮度也得到了良好的体现。我们使用上述方法拍摄的肿瘤耐药基因MDR21 及其他DNA 琼脂糖凝胶肿瘤电泳标本,可见曝光准确、反差适宜、影调层次丰富、银盐颗粒微细、标本条带清晰。  3 讨论  在拍摄肿瘤电泳标本的过程中,一定要本着严谨科学的工作态度去操作。  3.1 照相机的定位要领  在固定相机与标本位置时,要注意镜头主光轴与标本平面的垂直,标本的中心要摆放在镜头主光轴的垂线上。否则将会产生以下两种现象:  因拍摄时镜头的物距超近,透视作用就必然明显。镜头的主光轴与标本的中心如果不够垂直,将会造成因透视作用产生的变形现象。如果镜头的主光轴与标本的中心不够垂直,标本四周各点到镜头前节点的距离就不相等。这样将会造成拍摄画面的局部焦点不实。拍摄画面的局部将会产生影像虚松现象。  3.2 光圈与快门的曝光组合  曝光时要兼顾到有足够的景深清晰范围和倒易律失效的问题: 因加近摄接圈拍摄体积很小的肿瘤标本,镜头的物距相当小,影像的景深范围就会受到很大的限制。为了保证拍摄影像有足够的清晰度,必须收缩一定的光圈级数来提高影像的影深范围加近摄接圈拍摄,因像距的增加,到达感光面的通光量就必然下降; 作为光源的紫外光灯箱的亮度也有局限; 还必须收缩一定的光圈级数来提高影像的清晰度。由于以上多种因素的制约,曝光的时间就必然要延长。如果曝光时间超过了倒易律的允许范围,拍摄画面的影调层次将会受到损失,影像的反差也会发生变化。  因此,既要保证影像的清晰度,又要保证画面的影调层次,光圈与快门的组合就显得尤为重要。我们拍摄曝光时的光圈一般控制在F4 至F5.6 之间,曝光时间采取B 门手工控制在2 秒左右(此曝光条件仅供参考)。  3.3 曝光时值的控制  只有把曝光的时值控制准确,胶片宽容度能按比例记录亮度范围的能力才能够得到充分的发挥。用手工控制快门的速度,就有一个曝光时值的精度问题需要解决。我们解决这个问题的办法很简单。用一个暗室定时钟,放在翻拍架的旁边。曝光时用眼睛看着定时钟的表盘,当快门揿动的同时,观察表盘上秒针所走时值刻度来计时。采用这种方法控制曝光时值较为准确。我们经过多次重复曝光实验,胶片经过标准  的条件冲洗,没有发现胶片密度有不一致的现象。  3.4 胶片的选用  拍摄时所用的胶片应选用感光度较高的全色胶片。因感光度高的胶片可提高曝光时快门速度、避免倒易律失效、保证画面影调层次的显现。全色胶片可保证标本条带橙红色光在胶片上的正确反应。我们使用GB210 乐凯黑白全色胶卷,拍摄效果均较满意。  因肿瘤标本条带是橙红色的,拍摄时镜头前还要加红滤色镜,所以禁忌使用感色范围狭窄的胶片(分色片、色盲片)。因此类胶片对红色光的反应迟钝,或不反应。  3.5 胶片的冲洗  胶片的冲洗我们选用了D-76 微粒显影液,显影药温20 ℃,显影时间7 分钟。在冲洗时尽量做到的定时定温,以此来保证胶片冲洗质量的稳定。总之,肿瘤电泳标本的拍摄质量,直接影响到实验研究的结果。为避免不可挽救的损失,在拍摄时对每一环节的操作都要做到准确无误,才能为科学实验提供高质量的肿瘤电泳照片。  肿瘤琼脂糖凝胶电泳标本 古朵 上海古朵生物科技有限公司，由具有资深行业背景和丰富市场经验的专业人士组成，致力于为生命科学研究领域提供产品，为广大科研工作者提供服务。既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。产品涵盖有机试剂、无机试剂和生化试剂，标准物质、天然植物提取物及中药标准品，核酸、酶、缓冲剂、显色底物，医药中间体、原料药、催化剂、高纯溶剂、特种高分子材料及实验室常用耗材。品种类超过2万种，广泛应用于细胞药理、药剂、分子生物学等科研领域。

  [古朵生物]一次性塑料培养皿如果选择呢？  培养皿是实验室微生物检测和培养重要的实验工具，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，目前常用的培养皿的主要有3.3高硼硅玻璃材质的玻璃培养皿和聚苯乙烯材质的一次性塑料培养皿。  玻璃培养皿塑料培养皿  1.一次性塑料培养皿的选择  1.1材质的选择  1.1.1玻璃培养皿：  优点：可重复使用，产品购买成本较低，废弃物较少。  缺点：需要洗刷、晾干、灭菌、搬运等工序，容易破损，劳动强度大，人工成本和能耗较高，隐性使用成本较高。  1.1.2一次性塑料培养皿：  优点：无菌产品，可降低实验人员劳动强度，减少企业人工成本，提高检验准确度。  缺点：产品显性成本较高，废弃物较多。  1.2一次性培养皿规格的选择  1.2.1目前常用的培养皿的规格主要有55cm（接触皿）、6cm、9cm等规格。  1.2.2由于微生物的繁殖、发育生长是与所供给的培养基(营养)有直接关系，尤其是作定量检验分析，对提供营养物的多少，有决定意义，所以从营养物的提供、菌落可计数面积、操作便利、使用成本等综合考量，目前9cm的培养皿应用的比较广泛。  1.3一次性培养皿质量的选择  1.3.1感官指标：上下皿表面应平整，无目视可见的污渍、凹坑、气泡、麻点、擦痕等缺陷；无色透明，其透明度应能保证清晰的观察到容器内物质。  1.3.2微生物指标：通过环氧乙烷灭菌或辐照灭菌后，按GB/T 14233.2医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物试验方法进行检验应无菌。采用环氧乙烷灭菌的应无环氧乙烷残留。  培养皿上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨；牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。

  古朵教您如何区分ELISA试剂盒是否造假  使用穿插试验即可区分ELISA试剂盒是否造假。  办法如下：  1)取出购买的试剂盒A的包被板两条。  2)一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。  3)另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。  4)后续操作依照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物。  5)试验完毕后，检测两条标准曲线，假设两条标准曲线共同则说明两个ELISA试剂盒检测的同一个目标而非A和B，即该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。  6)假设两条标准曲线不共同则说明两个ELISA试剂盒检测的不同目标，试剂盒A只能检测A，不能检测B，即该试剂盒为正常的ELISA试剂盒。  试验时请留心：  ① 在吹干样本之前，用甲醇清洗针头，避免杂质干扰。  ② 在吹样本时，针头应在液面上空，避免与样本接触，避免发作穿插污染。  ③ 样本吹干后应当即取下，避免吹的时间过长，影响毕竟检测效果。  ④ 不同的产品，吹干后样本的保质期不同，建议待样本回到室温后当即复溶。  ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。