在讨论无菌取样的原因和采集方法之前，必须要理解“无菌的”的这一术语， “无菌”一般用于取样中，意味着取样过程中，避免操作引起污染。一个无菌样品的采集，应该通过这样一种方式，即：在收集过程中，本身应避免污染，然后放入消毒容器中。无菌样品的采集基本是为了支持、针对工厂的卫生条件状况的检查结果。检验前的准备工作1．包装无菌取样的工具：拥有正确的采取产品或加工过程的无菌取样器械工具是至关重要的。除非使用合适的采集工具，否则样品的完整性会被怀疑，甚至样品毫无意义。为了避免没有合适的取样工具，建议建立一个无菌取样的分析清单，来收集取样工具。如果可能盛样品的容器在最初进入加工区之前应当被预先标识，像样品号、取样日期、取样人等。这样可以使在不同的工厂条件下的样品取样更为方便一些。附加样品号码一般在样品采集中被正式确定下来，因此不用预先标明。人员的工具设施，象工作服、发网或消毒处理过的清洁的鞋靴必须具备有助于证明采集者没有污染到食物产品或样品。2．生产线样品 In-Line Samples：生产线样品一般是指原材料，原料生产用水、包装材料或其他任何使用在生产线的材料。生产线样品的采集一般用来确定细菌污染源是否来自于原材料或加工序中的某些地方。3．环境样品：环境样品用细菌拭子，（注：细菌拭子样品不能给出/测出微生物的定时结果，因为样品非常小，显著微生物会经常丢失），棉拭子的取样部位一般来自于食品接触面，地板喷溅物。墙壁、顶部管道和检验中考察的其他潜在污染源程序，并且记录可能的联系，在环境样品来源和食物产品的污染方面，可以使样品具有意义，并且是提倡这样做的，例如：地面喷溅水：工人从有地面污水的地方走过后又回到加工区域吗？墙壁：墙壁上面和在制品上面有昆害虫吗？天花板：冷凝物或喷漆有无掉落到产品上或被发现与产品相接触？4．某些准备干冰：（有的称为 gel backs）如果使样品在贮运过程中保持冷却，一些种类的制冷剂是必需的。检查观看干冰袋子是否有接触，如果泄漏可能污染样品，你也可以用湿冰，湿冰可以由工厂提供，然而取样前必须清楚这一点，如果想保持样品冷冻，干冰应在检验前获得。盒子或制冷皿：检验员需要贮藏、运输他们的样品，如果样品不需冷冻，那么用一个盒子即可，但如果样品需要冷却，一个标准的制冷皿或保温箱是必须使用的，一般来讲制冷皿随带着一个塑料袋，样品可以放还袋子里，制冷剂象干冰，等可以放置在袋外，这样样品被冰污染的可能性就被避免了。灭菌容器：从塑料袋到灭菌的加仑漆桶，可以用于有锐利边面的产品如蟹、虾等。取样工具：取样工具包括：茶匙、角匙、尖嘴钳、fovceps tongs 量筒和烧杯，工具的类型一般由取样产品来决定。所有取样设施和容器的灭菌日期应当被检查、灭菌时间应当在仪器设施的标签和包装上标明，一些仪器设施可以在当地实验室灭菌处理或购买灭菌仪器，在当地实验室灭菌的仪器设施一般可以保持至少两个月，过期后设施必须重新灭菌。灭菌手套：灭菌手套在采样中并非必须启用，如果一个产品在样品收集过程中必须被接触，那么最好让工厂生产线的工人来做（加工处理产品的工人），将样品放入收集容器中，既然工人在生产过程中处理接触产品，那么我们就不能认为他们对产品又有附加的污染。当用手套时必须用一种避免污染的方式戴上，手套的大小必须适合工作的需要。无菌棉拭子：一般用于拭取仪器设施和工厂环境区域，使用棉拭子一般有一个正确的程序，打开棉拭子剥掉表皮，然后必须小心的放在试管头上，注意不要沾染棉拭子的外端；下一步擦拭要取样的部位，像案板头或顶部管道，然后从试管头上小心翼翼地将拭子放入——将其全部堆入直到试管中部。灭菌全包装袋：袋子必须购买灭菌的，使用时只需撕掉封头，用提供的地方张开袋子，将样品放入，然后将袋子顶端卷起，用线绳扎实牢；底部应当折叠两次，以便线绳不会穿透塑料袋，导致样品泄露。当样品收集时，样品采集时的条件例如产品的温度、地点等，连同扦样样品号唛头，一并记录入检验员的注释说明中，取样的样品可以从样品号、采集日期、附加样品号，最初调查人和其他鉴别信息事区分。当采集无菌样品时，一条最重要的规则是：千万别污染样品。这需要样品采集人非常小心地采集所有附加样品，确保不违反这条规则。

化学试剂变质的原因和措施1试剂变质的原因引发和促使化学试剂发生变化的原因，大致可归纳如下。1、挥发2、 升华3、 潮解4、风化5、浓缩和析晶6、水解7、分解8、氧化和还原9、非氧化——还原反应10、 聚合和缩合11、 光化学反应12、霉变2如何预防化学试剂变质a. 密封这是最普遍通用的方法。试剂瓶的材料和密封程度应根据试剂性质而定。如：强腐蚀的“三酸”和液溴，可用带磨口玻璃的试剂瓶，或是有塑料衬垫的螺旋盖的玻璃瓶，氢氟酸则应密封贮藏在银制或塑料制容器内，等等。密封适用于易挥发、升华、潮解、稀释、风化、水解和氧化还原、霉变的所有化学试剂对于极易 分解产生气体的试剂，远慕提醒，一般不完全密封，要适当留有余地，否则可能使容器破裂。除了一般密封外，可再加蜡封，或用自制硝罗酊封口，如：三氯化铝、五氧化二磷等。b.隔离能和空气、水作用的试剂，如：很活泼的金属和非金属应隔离存放在对试剂相对而言稳定的液体或惰气之中，钾、钠、钙浸没在机油中，黄磷则浸没在水中贮放。这种隔离方法也称液封法，前者叫油封，后者叫水封。远慕提醒，水封存也可使某些容易挥发的试剂减少损耗。如：在装有液态溴、二硫化碳的试剂中加一薄层水，就能大大减少挥发损失和空气污染。实验室中无机、有机试剂种类繁多，性质各异，应注意合理分类存放。有机物、无机物分开，普通药品和危险的分开，氧化剂和易燃物、还原剂分解、易挥发性酸和碱分开。做到这几个分开，一可避免药品间的不良影响，二则即使有意外事故发生，也能免除药品的相互作用，而产生更大的隐患。c. 避光通常采用遮光性能较好的深棕色试剂瓶。将试剂放在暗处或遮光的专用试剂柜中。也可用照相纸的黑色厚纸包裹试剂瓶，如：浓硝酸、碘化钾、碘化钠、氯化汞的贮存就是如此d. 低温普通挥发性试剂常放置在阴冷处，如：浓硝酸、浓盐酸、氨水等。某些特殊的生化试剂则要贮放在水箱或冰箱之中，如：酶试剂等。e. 通风尽管装化学试剂的容器一般都处于密封状态，但也难免有跑、冒、漏、泄发生，在夏季高温天气，更易形成爆炸性混合气体，因此，贮藏室必须通风良好，应安装专用排风扇，并经常开启，使空气流通。f. 适时这是根据某些试剂的特性，特别是一些极易变质失效的试剂应采取适当措施，应做到适时配制、适时使用和及时处理。如：极易氧化的氢硫酸溶液、氯水、溴水、碘水最好适时制备及时使用；做银镜反应的硝酸银溶液、氨水、乙醛溶液配好后，应及时使用才不致影响效果；硫酸亚铁溶液配好后应加些还原铁粉才能使其不被氧化；淀粉、蔗糖、蛋白质的溶液在使用后应及时清洗试剂瓶，以防霉变。

纯水存放要求01.超纯水取水后很容易遭到环境污染，所以使用前取水(即取即用)方式时最合适的。只有把超纯水与环境接触的时间缩到极短，才能够获得纯度极高的超纯水。02.在配置高纯度的化学试剂时，尽量不要使用长时间储桶中存放的超纯水，因为储桶经长时间使用后，会因杂质、微生物的污染而造成水质的劣化，超纯水像这种水，在使用时已经不再是超纯水。03.纯水储桶最好安装空气过滤器，防止环境因素造成的污染。04.储水桶请勿放置在日光直射处，水温上升，容易造成微生物繁殖。特别是半透明储水桶，也会因为日光通透而造成藻类繁殖。05.超纯水取水时一定要将初期的出水放掉，以获得稳定的水质。06.取水时让超纯水顺着容器侧壁流入，尽量不要让气泡产生，可降低空气污染。07.请不要在终端滤器后再连接软管，使用直接取水的方式才能获得纯度高的超纯水。08.长时间不用纯水时，应将压力储水桶中的RO水全部放掉以防止污染。09.超纯水机若长时间不使用，再次使用时应把初期纯水充分放掉以确保水质。10.原则上，纯水机应至少每7~10天通水一次，以防止微生物污染。超纯水使用要点1.即取即用2.排掉前端初期水3.取水时避免产生气泡

英文名称    beta 2 Defensin    中文名称    防御素β2抗体    别    名    BD 2; BD-2; BD2; beta 2; Beta defensin 2; Beta-defensin 2; Beta-defensin 4A; DEF B2; DEF B4; DEFB 102; DEFB 2; DEFB 4; DEFB102; DEFB2; DEFB4; DEFB4B; Defensin; Defensin beta 2; Defensin beta 4; DFB4A_HUMAN; HBD 2; hBD-2; HBD2; SAP 1; SAP1 antibody Skin antimicrobial peptide 1; Skin-antimicrobial peptide 1.    供应商      古朵生物研究领域    细胞生物  发育生物学  细胞膜蛋白      抗体来源    Rabbit    克隆类型    Polyclonal    交叉反应    Human,     产品应用    ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 防御素β2抗体（石蜡切片需做抗原修复） not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.    分 子 量    4kDa    细胞定位    分泌型蛋白     性    状    Lyophilized or Liquid    浓    度    1mg/1ml    免 疫 原    KLH conjugated synthetic peptide derived from human beta 2 Defensin    亚    型    IgG    纯化方法    affinity purified by Protein A    储 存 液    Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4    保存条件    Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.    防御素β2抗体产品介绍    background:Beta-defensins (also designated BD, and hBD in human) are small cationic peptides with broad-spectrum antimicrobial activity. Produced in mucosal epithelia and neutrophils of several species, Beta-defensins are developmentally regulated. Human b-defensin 2 is locally regulated by inflammation and is the first member of the b-defensin family that is locally inducible by inflammation. The murine homolog of human b-defensin 2, which is called b-defensin 3, is present in the respiratory system and in low levels in the epithelial cells of the intestine and lung. The unique murine b-defensin 2 (Defb2) is not expressed in airways of untreated mice, but is upregulated in the airways by lipopolysaccharide and may contribute to host defense at the mucosal surface of the airwaysFunction:Has antibacterial activity.Subcellular Location:Secreted.Tissue Specificity:Expressed in the skin and respiratory tract.Similarity:Belongs to the beta-defensin family. LAP/TAP subfamily.    

中文名称:莽草酸英文名称:Shikimic AcidCAS:138-59-0供应商：古朵生物分子式:C7H10O5分子量:174.15EINECS号:205-334-2植物来源：莽草酸存在于木兰科植物八角的干燥成熟果实中。用途：用作定量测定根部顶端部分莽草酸含量的标准品。也用作莽草酸激酶试验的底物。药理作用：莽草酸通过影响花生四烯酸代谢，抑制血小板聚集，抑制动、静脉血栓及脑血栓形成，具有有抗炎、镇痛作用，还可作为抗病毒和抗癌药物中间体,也具有预防禽流感药物“达菲”、“克流感”的作用。供货期：新批次现货供应，周期短，检验结果准确。注意事项：使用前仔细阅读本说明书，仅供科研使用，不得用于医学诊断。包装：20mg/50mg/100mg/1g/10g可根据您的需求提供产品的规格及纯度，按要求包装。用途：供实验室科研使用（含量测定/鉴别/药理实验）不得用于医学诊断我司提供以下服务：1.中药提取物的定制研发和生产，中药提取物代加工相关服务。2.中药高含量提取物的工业化高效分离及分离纯化生产3.天然产物原料药和中间体的生产，定制（包括合成，半合成）处理提示：1、购买后，请务必确认标签上的注意事项。2、做好预防颠倒，摔坏的措施和管理体制。3、在使用前再次确认标签上的注意事项。做好必要的安全对策。4、对没有标明其危险特性，有害特性的，也要慎重地进行操作。5、必须戴好防护用具，小心翼翼进行操作。6、请参照相关法规，文献，MSDS等信息，理解并掌握好试剂的特性，再进行安全操作。7、通常购买试剂时要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，要更加注意其保管和管理。8、万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。9、对于使用后的废弃物，不要或旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。

中文名称:木糖醇英文名称:XylitolCAS:87-99-0供应商：古朵生物分子式:C5H12O5分子量:152.15EINECS号:201-788-0化学性质：外形似白糖略带甜味的斜方晶体（稳定型）或单斜晶体（亚稳型）。易溶于水，溶于乙醇及吡啶类溶剂。用途：用作食品甘味剂用途是一种具有营养价值的特殊甜味剂。溶于水吸热，食用时口感清凉，且不致龋，也适合糖尿病使用。用途：营养甜味剂，主要供糖尿病患者和作为防龋齿用甜味剂。保湿剂。供货期：新批次现货供应，周期短，检验结果准确。注意事项：使用前仔细阅读本说明书，仅供科研使用，不得用于医学诊断。包装：20mg/50mg/100mg/1g/10g可根据您的需求提供产品的规格及纯度，按要求包装。用途：供实验室科研使用（含量测定/鉴别/药理实验）不得用于医学诊断注意事项：检测/鉴别精确，稳定性强，为了防止产品含量降低，不宜暴露在空气中，应防潮、避光和抗氧化包装，保存应以提高物质稳定性为原则，尽可能在干燥、低温条件下储藏。该产品实验时必须在专业人士的指导监督下进行操作，严格按照相关法律法规正当处理使用后的废弃物，不要或旧的试剂。使用时要一次性用完，若不足或剩余要更加注意其保管和管理。操作前请参照相关法规、文献、MSDS等信息理解并掌握好试剂的特性，戴好防护用具再进行安全操作;该产品主要用于教学、科学研究、分析测试中。我们提供的试剂产品品质优良，都是通过严格的检测体系认证。处理提示：1、购买后，请务必确认标签上的注意事项。2、做好预防颠倒，摔坏的措施和管理体制。3、在使用前再次确认标签上的注意事项。做好必要的安全对策。4、对没有标明其危险特性，有害特性的，也要慎重地进行操作。5、必须戴好防护用具，小心翼翼进行操作。6、请参照相关法规，文献，MSDS等信息，理解并掌握好试剂的特性，再进行安全操作。7、通常购买试剂时要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，要更加注意其保管和管理。8、万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。9、对于使用后的废弃物，不要或旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。

检测核酸的方法是一种灵敏度较高的核酸检测方法。曾经有美国科研人员发现，核酸检测能够检测得出刚染上人类免疫缺陷病毒(HIV)的病患，而现有的标准检测还无法做到这点。核酸检测方法有哪些核酸检测目前多是通过取咽试子的方法，病毒感染口腔黏膜上皮以后会寄宿在口腔黏膜上皮，通过采咽拭子可以达到取样的目的。既不需要开刀，也不需要打针，只需要被检测者张开嘴，用一个像棉签一样的试子擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物，也可以通过鼻腔取鼻咽喉部的分泌物，然后放入专门的试管内，在1小时内送到专门的检测室进行检测。中国工程院院士钟南山曾经回应核酸检测的准确性，他表示，这个方法本身还是正确的，应该相信核酸的检测，但得看取材，平常绝大多数是取鼻的，还有咽的，要非常注意它的取样取得合适不合适。钟南山表示，假如培训很多采样的护士进行比较准确的取材，准确性应该很高，在这个意义上核酸的准确性是准确的。核酸检测相关知识：核酸检测是检测病毒的方法，它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测，可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染，以及推测是否具有传染性。季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份，从而判断被检测者是否属于感染者。新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了，只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分，可以尽早发现感染者，甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除，不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。

对照品（标准品）是执行药品质量标准的实物对照，是量值传递的重要载体，是用来检查药品质量的一种特殊的专用量具、测量药品质量的基准、确定药品真伪优劣的物质对照，也是作为校正测试仪器与方法的物质标准。对国家药品标准而言，它是国家颁发的一种药品计量、定性的标准物质。药品标准物质必须具备材料均匀、性能稳定、量值准确等条件，才能发挥其统一量值的作用。在药物研发当中，对照品（标准品）涉及量值溯源、产品定性、杂质控制等重要环节，其制备和标定情况与药品的质量研究、稳定性研究乃至药理毒理学研究中剂量的确定等临床前基础研究间存在密切关系，因此，药品对照品（标准品）的制备与标定是药品技术审评的一项重要内容。一般来讲，药品研发中标准物质的使用一般可参照如下原则：1、所用对照品（标准品）中检院已有发放提供（可参阅中国药典2010年版二部附录ⅩⅤ G），且使用方法相同时，应使用中检院提供的现行批号对照品（标准品），并提供其标签和使用说明书，说明其批号，不应使用其他来源的标准物质；使用方法与说明书使用方法不同时，如定性对照品用作定量用、效价测定用标准品用作理化测定法定量、UV法或容量法对照品用作色谱法定量等，应采用适当并经验证的方法重新标定，并提供标定方法和数据；若色谱法含量测定用对照品用作UV法或容量法，定量用对照品用作定性等，则可直接应用，不必重新标定。2. 中检院尚无对照品（标准品）供应时，可使用如下标准物质进行标准制订和其他前期基础性研究工作：（1）国外药品管理当局或药典委员会发放的对照品（标准品）或国外制药企业的工作对照品（标准品），但应提供其包装标签的彩色照片及使用说明的复印件，说明批号、有效期、使用方法等信息，能保证其量值溯源性；（2）申请人自行标定或委托省所完成对照品（标准品）的标定，申报时提供标准物质的研究资料及相关信息，一般包括如下内容：①主成分对照品--制备工艺、结构及含量方面的研究资料以及通用名、化学名、结构式、分子式、分子量、各种杂质含量（水分、残留溶剂、无机盐等）、主成分含量测定数据（不同分析技术）、用途、贮藏条件等信息。②杂质对照品--制备工艺、结构（UV，IR，NMR，MS，X射线衍射的解析或提供对照图谱）及含量（不同分析技术）方面的研究资料以及化学名称、结构式、分子式、分子量、用途、贮藏条件等信息。③混合对照品（定位）--各组分制备工艺、结构（UV，IR，NMR，MS，X射线衍射的解析或提供对照图谱）及纯度方面的研究资料以及化学名称、结构式、分子式、分子量、含量（如必要）、定性具体方法与限度要求。同时，申请人应及时与中检院接洽对照品（标准品）的标定事宜，以便产品上市后可以及时获得法定标准物质。3、质量标准中用到的对照品如中检院在目前情况下尚不能正常提供，建议申请人在申报资料中明确产品上市后，标准物质的可获得性及相应措施。4、质量标准中涉及到的各已知杂质，应在质量标准中明确其通用名称（或化学名称）、化学结构式、分子式、分子量等相关信息，以准确指称、控制各特定已知杂质。5、一般情况下，为确保标准物质的准确使用和控制，尚需提供对照品（标准品）的质量标准，并规定专属性控制项目，如非对映异构体杂质的比旋度等。

可能原因：1 细胞崩解了；2 培养基可能污染了，取部分培养基进行检菌试验细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染.他们在细胞培养中污染的特点如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显.2、支原体：黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一.而且它不能用过滤的办法除去.支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去.3、黑胶虫：可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的.常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象.对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理.4、真菌：一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物.真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了5、原虫：培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮.他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养.这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环.6.病毒：组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染.目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒.尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的.因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题 。7、非同种细胞污染 ：即是细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染.目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效.非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致.

【产品名称】 MagBeadsTM 1 μm 核酸提取硅羟基磁珠【英文名称】 MagBeadsTM 1 μm Silica Magnetic Beads for Nucleic Acid Extraction 【订货信息】 货号产品名称规格浓度HY-MB1101-02MagBeadsTM  1 μm 核酸提取硅羟 基磁珠2mL30 mg/mL、50 mg/mL mg/mL50 mg/mL50 HY-MB1101- 1050 mL30 mg/mL、50 mg/mL【成  分】 1 μm 硅羟基磁珠【简  介】古朵生物提供 MagBeadsTM   1 μm 核酸提取硅羟基磁珠，具有类似硅胶的表面化学性质， 大小均一， 与 DNA 和 RNA 结合效率高，重复性好，磁响应速度快。可用于植物、 质粒、土壤、血液、唾 液、组织等样本的核酸提取。【产品信息】浓度30 mg/mL、50 mg/mL粒径约 1 μm表面电位约-35 mV磁含量大约 25%-35%保存条件密封， 4 ℃/12 个月，禁止冷冻， 使用前请充分混匀包装塑料瓶【产品参数】扫描电镜：图 1. MagBeadsTM  1 μm 核酸提取硅羟基磁珠 SEM 图 水动力尺寸Z-Average=1059 nm ，PDI=0.159。核酸提取硅羟基磁珠在水中具有良好的单分散性和稳定性。图 2. MagBeadsTM  1 μm 核酸提取硅羟基磁珠水动力尺寸图Zeta 电位Zeta potential=-37.7 mV ，Result quality: Good。图 3. MagBeadsTM  1 μm 核酸提取硅羟基磁珠 Zeta 电位图【注意事项】1.    磁珠取用前应充分混匀， 防止取用改变磁珠浓度， 避免长时间超声对磁珠表面破坏；2.    磁珠取用后，使用前请进行磁分离并用纯水或所用缓冲溶液清洗 2-3 遍；3.    磁珠使用和保存过程中应避免冻融。

技术优势与应用方向 服务内容 检测项目价格备注包埋+切片咨询--单标免疫荧光咨询--双标免疫荧光咨询--三标免疫荧光咨询--四标免疫荧光咨询--五标免疫荧光咨询--六标免疫荧光咨询--七标免疫荧光 咨询-- 

问：样本可以做成冰冻切片吗？答 可以的。抗原修复步骤不推荐用加热的方法，推荐用抗体洗脱液问 所有操作要避光吗？答 不需要，在常规环境下操作就可以，染料的荧光强度很高。问 抗体修复液每一轮修复都要更换吗？答 是的，每一轮都要根据抗体选择相应的修复液。问 染料的选择会影响后染色吗，有共定位的话怎么办？答 共定位的情况，我们可以通过单一通道观察来更好的检测各指标的分布情况，染料不会对染色有影响，串色的情况需要预实验做充足，包括抗体稀释比例，染料与放大液比例，修复条件的确定。问 多色用的一二抗各是什么种属？答 多色的优势在于一二抗种属无需特别要求，一抗根据样本种属选择既可，二抗根据一抗选择即可，多个抗体组合，种属不会有影响。问 抗体洗脱和微波修复哪种方式洗脱效果更好？答 微波修复洗脱更稳定，抗体洗脱液对大多数抗体都管用，难洗的抗体延长洗脱时间就可以啦！问 实验用时真的一天能做完吗？答 相比普通的组织荧光实验，我们一抗的孵育时间只需室温30min，二抗和信号放大步骤只需孵育10min，能大大节约时间，五色左右可在一天内做完。问 多色样本的寄送有条件限制吗？答 正常的石蜡切片和组织芯片很稳定，只要防震盒常温运输即可，冰冻切片的话，需要干冰低温运输。问 我的组织还有GFP蛋白，给结果的时候能排除干扰吗？答 可以的，结果分析的时候可以避免绿色通道，分析软件赋予的颜色是伪彩色，可以更换其他颜色。问 我这边提供抗体的话，抗体需要满足什么条件吗？答 抗体最起码要满足IHC/IF的实验应用，各品牌供应商都会提供相应的实验验证的，我司组化抗体经过严格实验验证，是不错的选择。问 如果我能提供抗体给你们做服务的话，需要的抗体量是多少？答 需要的抗体量要根据样本数来，但一般来讲，50-100ul的抗体足够完成预实验+正式实验了。问 在指标与染料的搭配以及染色顺序上，有什么规律吗？答 并没有一个特别的线性关系，和蛋白的种类、表达量以及修复条件都有关系，所以会多因素考虑，多尝试，预实验很重要。问 TSA技术原理中有抗体洗脱的步骤，但是在你们的试剂盒步骤说明中却没有？答 试剂盒步骤中的抗原修复过程就是抗体洗脱过程。问 B细胞、T细胞、DC细胞常用maker能推荐下吗？答 T细胞：CD3、CD4、CD8、FoxP3（再细化还有：GranzymeB、PD-1、TIM-3、CD45）B细胞：CD19 ；DC细胞：CD8α、CD11b

样本要求: 1. 福尔马林固定的蜡块或玻片，大块组织或TMA,封蜡不能有明显的破损。2. 玻片样本，组织需要紧贴玻片，避免褶皱，玻片不能有破损、划伤或污渍。3. 组织最小应包含大于1000 个细胞。4. 蜡块需包埋实体瘤组织，坏死瘤组织、细针穿剌物、细胞甩片样品会影响染色效果。5. 组织应当用10%中性福尔马林固定，正常固定时间为 18-24小时。6. 切片厚度为4um左右，使用防脱玻片。建议玻片在固定后一周内制备为佳。7. 不要在水浴捞片环节添加任何粘合剂，样本应置于玻片正面、中央。将捞片竖直置于吸水纸上去除水分，轻敲去除水滴，不要用纸擦拭玻片。8. 玻片置于45°C热盘上放置30min(自然风干玻片时长不小于1小 时 ）。注意事项：1. 本试剂盒只用于免疫组化，不做其他用途。2. 本试剂盒仅限于专业人员使用。3. 应采用适当的防护措施，以避免试剂同皮肤和眼睛接触。4. 超过有效期的试剂活性可能降低，因此不得使用超过有效期的试剂。5. 若将本试剂盒的染色组分与其他公司的产品混合使用，在染色过程中可能出现异常情况。6. 脱蜡不彻底，容易影响染色效果。7. 为了防止可能出现的假阴性、假阳性结果，实验过程中需有阳性对照及阴性对照同时进行。8. 使用本试剂盒中所产生的各种废弃物都应按照《医疗废物管理条例》进行处理。

抗体,也叫免疫球蛋白 (Ig),是一种能特异性结合抗原的糖蛋白,而抗原是在易感染动物体内引发抗体产生的物质。在体内,抗体是由于外 源性分子的侵袭而产生的。抗体以一个或者多个 Y 字形单体存在, 每个 Y 字形单体由 4 条多肽链组成,包含两条相同的重链和两条相同的轻链。轻链和重链是根据它们的分子量大小来命名的。Y 字形结构的顶端是可变区,为抗原结合部位。任何一个抗体的轻链都可以分为κ或λ型(基于小分子多肽结构上的差异),每一个抗体的重链则决定了它的类或型。抗体与免疫球蛋白抗体（antibody，Ab）：是由抗原进入机体刺激B细胞分化增殖为浆细胞而合成并分泌的一类能与相应抗原发生特异性结合并产生免疫效应的含有糖基的球蛋白。抗体分布于体液（血液、淋巴液、组织液及粘膜的外分泌液）中，主要存在于血清内。1964年世界卫生组织召开会议，将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。免疫球蛋白除分布于体液中之外，还可存在于B细胞膜上。现代免疫学认为，抗体与免疫球蛋白是等同的概念；只是抗体侧重于其生物学活性的描述，而免疫球蛋白侧重强调其化学结构。抗体的分类1、免疫球蛋白可分为两种类型：（1） 分泌性免疫球蛋白：存在于血清、体液以及分泌液中，具有抗体的各种功能。（2） 膜型免疫球蛋白：位于B淋巴细胞的表面，即膜表面免疫球蛋白（mIg），是B淋巴细胞的抗原识别受体（BCR）。2、根据所对应的抗原分：3、根据有无抗原刺激分：4、根据与抗原反应的性质分：5、根据抗原性分：免疫球蛋白的理化性质免疫球蛋白是多链糖蛋白，具有蛋白质的通性，对物理及化学因素敏感，不耐热，在60～70℃时即被破坏，能被多种蛋白水解酶裂解破坏，可在乙醇、中性盐类中沉淀。因此，通常用50%饱和硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中提取抗体。抗体的结构一、单体Porter等对血清IgG抗体的研究证明：Ig分子的基本结构是由四肽链组成的。即：由二条相同的分子量较小的肽链(轻链)和二条相同的分子量较大的肽链(重链)组成。轻链与重链是由二硫键连接形成一个四肽链分子称为Ig分子的单体；单体是构成所有免疫球蛋白分子的基本结构；所有抗体的单体都是四条肽链的对称结构，即：两条糖基化重链(H)和两条非糖基化轻链(L)；每条重链和轻链分为氨基端(N端)和羧基端(C端)。二、轻链和重链1、轻链（light chain，L链）由214个氨基酸残基组成，通常不含碳水化合物，分子量为24kD，有两个由链内二硫键组成的环肽，L链可分为：Kappa（κ）与 lambda（λ）2个亚型。2、重链（heavy chain，H链）由450-550个氨基酸残基组成，分子量55-75kD，含糖数量不同，4-5个链内二硫键，可分为5类，μ、γ、α、δ、ε链，不同的H链与L链（κ或λ）组成完整的Ig分子。分别称为：IgM，IgG，IgA，IgD和IgE。三、可变区和恒定区　　通过对H链或L链的氨基酸序列比较分析，发现：　　 其N-末端序列变化很大，称此区为可变区（V区）；　　 C-末端氨基酸则相对稳定，变化很小，称此区为恒定区（C区）。1、可变区（Variable region，V区）L链N端1/2处（VL）108-111个氨基酸残基，H链N端1/5-1/4处（VH）118个氨基酸残基，V区有一个肽环65-75个氨基酸残基。可变区可分为高变区（hypervariable region，HVR）和骨架区（framework region，FR），VL的HVR在24-34，50-56，89-97氨基酸位置。VH的HVR在31-35，50-56，95-102氨基酸位置。分别称为VL和VH的HVR1，HVR2，HVR3。高变区为抗体与抗原的结合位置，称为决定簇互补区（complementarity-determining region，CDR），VL和VH的HVR1，HVR2，HVR3又分别称为CDR1，CDR2，CDR3，其中CDR3具有更高的高变程度，H链在与抗原结合中起重要的作用。2、恒定区（constant region，C区）L链C端1/2处，105个氨基酸残基，H链C端3/4-4/5处，331-431个氨基酸残基。在同一种属动物中是比较恒定的，是制备第二抗体进行标记的重要基础。四、功能区链内二硫键折叠成球形区称为功能区（domain）约由110个氨基酸组成。氨基酸的顺序具有高度的同源性。1、L链功能区：2个，（VL，CL各一个）2、H链功能区：IgG，IgA，IgD，4个（V区1个，C区3个），IgM，IgE，5个（V区1个，C区4个）　　　　　　　3、功能区的β片层结构:抗体的L链和H链中V区或C区每个功能区的二级结构是反向平行的β片层结构。4、功能区的作用：（1）VL和VH是抗原结合的部位。（2）CL和CH1上具有同种异型的遗传标记。（3）IgG的CH2和IgM的CH3具有补体C1q结合位点；IgG借助CH2部分可通过胎盘（4）CH3或CH4具有结合单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、B细胞、NK细胞Fc段受体的功能，不同的抗体可与不同的细胞结合，产生不同的免疫效应。5、铰链区（1）铰链区不是一个独立的功能区，位于CH1与CH2之间；包括H链间二硫键，该区富含脯氨酸，不形成α-螺旋。　（2）当Ab与Ag结合时，铰链区发生扭曲，使Ab的2个抗原结合点更好地与2个抗原决定簇互补。（3）由于CH2和CH3构型变化,显示出活化补体、结合组织细胞等生物学活性。（4）含有木瓜蛋白酶、胃蛋白酶的水解位点。五、酶解片段1．木瓜蛋白酶的水解片段1959年 Porter用木瓜蛋白酶（papain）水解兔IgG分子，将IgG从绞链区二硫键的近N端侧切断，从而将免疫球蛋白裂解为三个片段，即2个相同的Fab段和1个Fc段。每一个Fab段即抗原结合片段（fragment antigen binding，Fab），含有一条完整的L链和H链近N 端侧的1/2。每个Fab段结合抗原是单价的，即只能结合一个抗原决定簇。因此不能连结成较大的抗原抗体复合物，不出现凝集或沉淀现象。Fab中的约1/2 H链部分称为Fd段，约含225个氨基酸残基，包括VH、CH1和部分绞链区。Fc段在低温或低离子强度下可形成结晶，故称为可结晶片段（fragment crystallizable，Fc），Fc段含有两条H链羧基端（C端）的一半，包含CH2和CH3两个功能区，它无抗体活性。Ig在异种间免疫所具有的抗原性主要存在于Fc段，同时Fc段还具有活化补体、亲细胞、通过胎盘和介导与细菌蛋白结合等生物学活性。2、胃蛋白酶水解片段1960年Nisonoff等最早用胃蛋白酶水解兔IgG分子，可将IgG从绞链区重链间二硫键近C端切断，将其裂解为大小不等的两个片段。大片段为1个Fab双体，以F(ab')2表示。F(ab')2由一对L链和一对略大于Fd的H链（称为Fd'）组成。Fd'约含有235个氨基酸残基，包括VH、CH1和绞链区。F(ab')2结合抗原为双价，可结合两个抗原决定簇，其结合抗原的亲合力要大于单价的Fab，与抗原结合后可出现凝集或沉淀现象。由于F(ab')2保持了结合相应抗原的生物学活性，又减少或避免了Fc段抗原性可能引起的副作用，因而在生物制品中有实际应用价值。虽然F(ab')2在与抗原结合特性方面同完整的Ig分子一样，但由于缺乏Ig中的Fc部分，故不具备固定补体及与细胞膜表面Fc受体结合的功能。小片段Fc可被胃蛋白酶继续水解为小分子多肽，以Fc'表示，不再具有任何生物学活性。六、J链和分泌成分1、J链（joining chain）（1）存在于二聚体IgA和五聚体IgM中；化学本质为酸性糖蛋白，分子量约15ku，含有8个半胱氨酸残基。（2）以二硫键连接到μ链或α链的羧基端的半胱氨酸，对抗体二聚体、五聚体的组成及在体内转运具有一定的作用。2、分泌成分（secretory component，SC）（1）是二聚体IgA上的一个辅助成分；（2）由上皮细胞合成，化学本质为糖蛋白，分子量约为75ku；（3）以共价形式结合到IgA分子，并一起被分泌到粘膜表面，又称分泌片（secretory piece, SP）；（4）可抵抗外分泌液中的蛋白水解酶对二聚体IgA的降解。

什么是二抗？二抗是指用于靶向结合一抗的抗体。在多种免疫印迹、ELISA以及免疫荧光等免疫实验中，二抗经常和一抗结合使用以检测目标蛋白。很多二抗都带有标记物，例如Alexa Fluor荧光染料或辣根过氧化物酶（HRP），从而使二抗的信号可以被检测到。实验中也可以使用带有标记物的一抗，但是二抗有很多优点。无论是使用哪种一抗进行检测，使用二抗可便于更换不同的标记物。例如，同样的一抗可以与HRP标记二抗一起用于免疫印迹，也可以与另一种Alexa Fluor 488荧光标记二抗一起用于免疫荧光实验。另外，二抗结合在抗原位置的标记染料比直标一抗要多，从而增强检测信号。使用二抗可以避免对一抗进行复杂且昂贵的化学标记（偶联），而且偶联反应（具有氨基酸特异性）可能干扰一抗对抗原的识别。选择最合适的二抗要选择出一种最适用于您的应用和研究的最佳二抗，建议考虑以下因素：种属来源和种属反应性特异性反应纯化方法交叉吸附多重检测能力抗体类型和亚型完整抗体还是抗体片段标记物生物素结合蛋白

抗体是在病原物刺激下由B细胞增值分化为浆细胞后所产生的一种免疫球蛋白，其能够以高特异性结合抗原。抗体分子由四条多肽链组成，即两条重链和两条轻链。每条重链由450～550个氨基酸残基组成，分为μ、γ、α、δ和ε五种类型。轻链约由210个氨基酸残基组成，分为κ链和λ链。重链和轻链通过二硫键结合在一起，形成抗体的基本分子结构，呈现”Y“形。抗体的分类1．根据有无抗原刺激划分天然抗体：天然存在于体液中的抗体，没有明显特异性抗原刺激。免疫抗体：感染或预防接种后产生的抗体。2．根据所对应的抗原划分异种抗体：由异种抗原免疫所产生的抗体，如微生物抗原异种球蛋白免疫动物产生的抗体。同种抗体：同一种属的两个或两个不同近交系动物之间免疫所产生的抗体。自身抗体：由自身抗原导致机体所产生的抗体。异嗜抗体：不同种属的动植物、微生物间存在的共同抗原引起机体所产生的抗体。3．根据与抗原反应的性质划分完全抗体： 即二价或多价抗体，它与抗原结合后可在特定条件下出现可见反应。不完全抗体：即单价抗体或封闭抗体，与抗原不能形成抗原抗体复合物，不出现可见反应。4．根据理化性质和功能划分IgG：血清中最丰富的抗体，占人体免疫球蛋白的70-75％。IgG抗体的重链属于γ亚类，并且它具有两个抗原结合位点。IgG使有害物质解毒，并且在白细胞和巨噬细胞识别抗原-抗体复合物中起重要作用。IgG通过胎盘转移到胎儿并保护婴儿，直到其自身的免疫系统发挥作用。IgM：以五聚体形式存在，是体内发现的最大抗体（称为巨球蛋白），并且是抗原进入体内后先产生的抗体，约占血清总抗体含量的10％。IgM抗体的重链属于μ亚类，并且具有10个抗原结合位点，能够促进免疫系统的有效激活。IgE：以单体形式存在，是血清中含量最少的抗体，占人体免疫球蛋白的比例不超过0.002％。IgE抗体的重链属于ε亚类，具有两个抗原结合位点，它最初的作用是防止寄生虫。IgE也称为反应性抗体，在I型超敏反应或过敏反应中起重要作用。IgA：分为血清型和分泌型两种，占人体免疫球蛋白的10-15％。血清型IgA1主要由肠系膜淋巴组织中的浆细胞产生，以单体形式存在。分泌型IgA2是由消化道、呼吸道、泌尿生殖道等处的固有层中浆细胞产生。IgA抗体的重链属于α亚类，并且它具有四个抗原结合位点。IgA存在于分泌物中，是抵抗微生物和抗原摄入体内的第一道防线。母乳中的IgA可保护新生儿的胃肠道免受病原体侵害。IgD：占血清总抗体含量不到1％，常在具有IgM的B细胞表面共表达。IgD抗体的重链属于δ亚型，具有两个抗原结合位点，在体内作为单体存在。IgD可能参与B细胞中抗体产生的诱导，但其确切功能仍然未知。5．根据抗体的发展划分当注射抗原时，一系列抗体生成细胞会不同程度与抗原结合，受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体。由单一B淋巴细胞产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体。将制备单抗的细胞工程技术与生产重组分子的基因工程技术及蛋白质工程技术结合起来，对编码抗体的基因按不同需要进行加工改造和重组安装，转染适当的受体细胞后表达出来的抗体分子，这种经基因重组的抗体称为基因工程抗体。主要包括嵌合抗体、小分子抗体、双特异性抗体、抗体偶联物和抗体融合蛋白等。第一代抗体：多克隆抗体第二代抗体：单克隆抗体第三代抗体：基因工程抗体抗体的生物学功能1．特异性结合抗原抗体能识别并特异性结合抗原，发挥中和毒素、阻断病原物入侵以及清除病原微生物等功能。2．激活补体IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体。3．结合细胞调理作用：IgG/IgA通过免疫调理作用，增强吞噬细胞的吞噬作用。参与抗体依赖性细胞毒性（ADCC）作用：具有杀伤活性的细胞通过其表面的Fc受体识别包被靶抗原上IgG的Fc段，直接杀伤靶细胞。介导I超敏反应：IgE为亲细胞抗体，其Fc段与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的Fc受体结合后使其致敏，相同变应原再次进入机体就会引发肥大细胞和嗜碱性粒细胞产生并释放生物活性物质，引起I超敏反应。4．穿过胎盘和粘膜IgG是能够通过胎盘进入胎儿血液中的抗体，保护婴儿免遭感染。分泌型IgA可在粘膜中发挥抗感染作用。5．免疫调理抗体对免疫反应具有正面和负面调节作用，并且通过独特和抗独特类型的网络参与机体的免疫调节。

谷氨酸钠是什么？谷氨酸钠也称为味精，是一百多年前由日本化学家池田纪大（Kikunae Ikeda）发明的，当时他发现海藻具有增强风味的特性。尽管谷氨酸从肉类，牛奶，玉米和小麦等各种食物中自然产生，但谷氨酸钠严格来说是通过发酵淀粉，甜菜，甘蔗或糖蜜制成的食品添加剂，包括蘑菇和发酵大豆制品（如酱油）。谷氨酸钠属于称为谷氨酸盐的一类广泛的化合物，它们是被称为鲜味的“第五种味道”的来源。除了自身独特的味道，鲜味还具有通过赋予其深度和饱满度来增强其他风味的特性。食品药品监督管理局不要求在食品包装成分清单中包括谷氨酸钠，因此请注意，并非所有含谷氨酸钠的包装食品都会在标签上明确说明。水解蛋白，自溶酵母和酪蛋白酸钠等成分均含有谷氨酸钠。对味精过敏或敏感的人也应警惕这些成分。谷氨酸钠性质谷氨酸钠化学式C5H8NNaO4谷氨酸钠分子量169.11 g/mol谷氨酸钠密度1.620g/cm³谷氨酸钠熔点232°C谷氨酸钠外观白色或类白色结晶粉末谷氨酸钠溶解性易溶于水；几乎不溶于乙醇或乙醚谷氨酸钠结构谷氨酸钠用途※可用于食品添加剂※化妆品中的清洁剂，表面活性剂※一种调味剂，用于赋予类似肉的味道※在医学上，它已被用于降低氨性氮质血症，治疗肝昏迷，精神病和智力低下的血氨水平※谷氨酸钠用作猪饲料添加剂※谷氨酸钠有时与普通糖一起使用，以改善苦药的适口性。※一种增味剂

氟化钠与氟化物的简介氟化钠是一种化合物，氟化物是一种阴离子，这两种化学物质在不同的应用中非常重要。例如，氟化钠用作药物，在考虑氟化钠的化学结构时，它是由钠阳离子和氟阴离子组成的，因此，氟化钠是氟阴离子的良好来源。有时，术语氟化物用于描述由金属阳离子和氟阴离子组成的任何化合物。换言之，金属氟化物被称为通常使用的氟化物。然而，术语氟化物实际上用于表示阴离子。氟化钠和氟化物之间的主要区别在于氟化钠是一种中性化合物，而氟化物是一种阴离子。1.什么是氟化钠氟化钠是由Na+离子和F-离子组成的离子化合物。氟化钠的化学式为NaF，摩尔质量约为 42 g/mol，它在室温下呈绿白色固体。氟化钠是一种无味化合物，由于是离子化合物，熔点和沸点都很高。氟化钠的熔点为993℃，沸点约为1700℃。固体氟化钠受热时会生成有毒气体：氟化氢（HF）。氟化钠天然存在于一种名为 Villiaumite 的稀有矿物中，数量很少。因此，工业生产是氟化钠的主要来源，它通常由氢氟酸与碱如氢氧化钠反应制备。HF + NaOH → NaF + H2O氟化钠可溶于水，溶于水，生成钠离子和氟离子水溶液，因此，氟化钠的水溶液可以导电。由于氟化钠是钠盐，所以有咸味。氟化钠是一种用于预防蛀牙的药物，它使牙齿更坚固，并能抵抗细菌活动造成的腐烂，因此，牙膏通常是由氟化钠组成的。然而，过量的氟化钠会导致牙齿变黄。此外，氟化钠是一种很好的清洁剂。2.什么是氟化物氟化物是一种无机阴离子，它由元素氟形成，氟化物的化学符号是 F–，摩尔质量约为 19 g/mol。氟原子的最外层轨道由 7 个电子组成，因此，它们缺少一个电子以获得稳定的电子构型（如果原子的最外轨道有8个电子，则非常稳定）。当从外部获得一个电子时，原子核中没有足够的正电荷来中和传入的电子。因此，它形成具有-1 个电荷的阴离子，该阴离子是氟离子。氟离子可以作为一些矿物质的成分被发现。例如，萤石由CaF2单元组成，氟离子与钙离子结合，氟离子有时会作为碱反应。然后它可以通过将电子赋予氢原子来与 H+结合。水与氟离子反应生成氟化氢 (HF)。这是可逆反应。由于氟离子对牙齿有益，因此水生植物会向水中添加一定量的氟离子。

甲酸是什么？甲酸是最简单的羧酸，含有一个碳。天然存在于各种来源，包括蜜蜂和蚂蚁叮咬的毒液，是一种有用的有机合成试剂。甲酸主要用作牲畜饲料中的防腐剂和抗菌剂。在人类受试者中引起严重的代谢性酸中毒和眼损伤。甲酸具有抗菌剂、质子溶剂、代谢物、溶剂和收敛剂的作用。甲酸性质甲酸分子式CH2O2甲酸分子量46.025g/mol甲酸密度1.22g/cm3甲酸熔点8.3℃甲酸沸点101℃甲酸闪点69℃甲酸外观具有刺鼻气味的无色发烟液体甲酸溶解性与水、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇混溶甲酸结构甲酸用途※粘合剂和密封剂化学品※漂白剂※腐蚀抑制剂和防垢剂※电镀剂和表面处理剂※油漆助剂和涂料助剂※石油生产专用的加工助剂

抗体种类繁多，品牌众 多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。 一、怎样选择适合你实验需要的抗体？1. 一抗选择要点（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。（2）确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS。一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型，如果抗体说明 书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证，请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的 抗体。（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验，请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。（4）样本蛋白的结构性质。了解样本蛋白的结构性质有助于选择zui合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。（5）单多克隆抗体的选择。市面上的抗体还是以多克隆抗体为主，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。2. 二抗选择要点（1）种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。（2）标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应，而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。 二、抗体的稳定性1. 抗体的稳定性是自然界长期进化的结果。抗体是免疫系统中zui重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果。在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。2. 抗体分子的高Tm值。在室温下，甚至短时间温度达到50-60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持应有的活性。3. 抗体的纯度。采用先进的抗体纯化技术，确保抗体产品的高纯度，保障其抗体产品的稳定性。4. 抗体的浓度。高浓度的抗体产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体稳定性更好，抗体产品中93%的浓度大于0.5mg/ml。 三、怎样确定抗体购买渠道和品牌？国外著名抗体品牌的质量一般没问题，但价格较贵，而且很多抗体品牌本身不生产抗体，所以能找到OEM抗体生产商生产的原装进口抗体，随着网络技术的越来越普及，我们自己就可以通 过国内外的相关网站来检索，国外zui大的生物试剂查询网站：biocompare，国内zui大的生物试剂查询网站：丁香通，来查找我们所需要的产品资料。 四、怎样保存已获得的抗体？抗体无论是保存还是运输都应尽可能地避免反复冻融，收到抗体后请根据实验的需要，对抗体进行分装，避免同一管抗体反复冻融（反复冻融会导致抗体空间结构变 性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力）。抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果，如果抗体保存得当，抗体活性大部分都可以维持数年。 请谨记，无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确处理和保存抗体。 1. 收到抗体后，请务必在4℃，12000rpm，离心3分钟，（无论是液体还是冻干粉状态），再打开管盖进行分装和保存（如果抗体体积小于50ul，请延长 离心时间至5分钟，以保证全部抗体均离心下来）。抗体一般使用特制的储存管，只有在12000rpm离心3分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下 来（即使是在10000rpm离心也会离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象）。 2. 对于ProSci大部分抗体，比较合适的保存方式是，分装后保存在-20℃或者-80℃。（1）对绝大多数抗体来说，保存在-20℃就完全足够了，没有任何证据显示保存在-80℃会更好。（2）分装可以zui大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。（3）分装的量以一次实验用完为好，zui少不能少于10ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。（4）复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来。（5）抗体工作液应该当天配制当天用完，4℃保存尽量不要超过1天。（6）避免将抗体保存在自动除霜冰箱中，将抗体保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。 3. 大部分抗体收到后4℃短暂保存1~2周对抗体活性没有影响。 4. 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1~2周的时间，所以是在低温4℃的条件下来完成的。4℃运输zui主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻，这就多了一次冻融的过程），所以运输过程中避免干冰运输。 关于叠氮hua na（sodium azide）的使用：为了防止微生物污染，叠氮hua na经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)）。ProSci的绝大部分抗体已经含有了0.02％-0.05%的叠氮hua na，在说明书的储存缓冲液中有标明。 注：叠氮hua na的去除方式可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除，IgG的分子量是150kDa（IgM约600kDa）；叠氮hua na的分子量只有65Da，使用截留分子量为14kDa的滤膜即可将叠氮hua na从抗体中去除

1、加到培养基中的血清 必须灭活吗？ 答：不是必须的，看做什么实验了。 2、四季青胎牛血清灭活是56 ℃30分钟吗？ 答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子 。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56 ℃，30 min。 3、我要做滋养细胞培养，胎牛血清要灭活吗？ 答：进口的一般都已灭活，国产的不一定，最好还是灭活一下再用较安全。4、我用病毒上清转染细胞，培养用的血清需要灭活吗？因为血清中可能有些补体和抗体 ，是不是会影响转染？我想未灭活的血清中含些抗体 补体可能会和病毒相结合，影响转染，正确吗？细胞是单核细胞白血病细胞，病毒是病毒包装细胞PT67 收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时，目的是什么？ 答：血清一定要灭活，可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰，一般是2-6小时，根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活，灭活的目的是将血清中的补体灭活！这要根据实际情况而定，如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时。5、(1)我买的是杭州四季青的新生牛血清，要灭活吗？有些说法是需要，有些说直接解冻后就可以加入到培养基中；我配制胰蛋白酶 液，用的是D-PBS，有关系吗？ 答：关于血清的热灭活，是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。大多数实验室将血清的热灭活还是作为常规来执行，因为有两个作用，第一是灭活补体，第二是灭活血清中可能存在的支原体。但是实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子 、氨基酸 等成分带来的负面影响。 我在实验室处理血清的时候，有一次水浴 箱在灭活过程中出现故障，温度升高到80 ℃，血清变成了凝胶状，我重新处理了另外一份血清，将两份血清对比，发现高温直接影响到血清所含的抗体蛋白。在56 ℃下灭活半小时以上，肯定也会对里面的蛋白起到破坏作用。下次有机会我做个延长灭活时间的实验试试，看看到底有多大的影响。热灭活之后，血清放在四度冰箱久了，就会有沉淀产生，这常常会被认为是微生物污染或者是黑胶虫污染。为了验证到底有没有污染，常常又会把血清放置37 ℃温育，但是血清中的蛋白会进一步析出，最后还是要做镜检，无菌培养试验，和革兰氏染色试验，非常麻烦。 我看过一份资料，里面提到70%的实验者认为灭活是理所当然的。常规灭活建议的温度在45 ℃到62 ℃之间，而时间则从15分钟到60分钟不等。其中最常用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高，许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立，只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。有人比较过11个不同细胞株，发现其中热灭活对6 个细胞株(HBAE，MDBK，Vero，成纤维细胞，MRC-5)的生长带来负面影响，三个细胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受热灭活的影响，而只有两个细胞株(Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid)，在热灭活之后，细胞生长有轻微的改善。所以，在正常的操作下，热灭活通常对细胞的生长没有明显的促进作用。 你可以摸索一下，血清从-20 ℃冰箱拿出来之后在常温解冻，然后混匀分装成两份，一份灭活，一份不灭活，比较这两种血清对细胞是否有影响。然后再确定是灭活还是不灭活。这个过程最多也就一个星期。同时你还要考虑血清灭活与否对你后续的实验有没有影响。 (2)分装后的血清从-20℃取出放4℃让其液化，却见血清比较混浊，有沉淀产生，这属正常吗？ 答：正常。 6、如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首xuanMEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首xuan是AIM V培养基（SFM）。  7、为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。   8、L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？   L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。 9、GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？   GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L－谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。 10、为什么培养基中可以省去加酚红？   酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。 11、如何用台盼兰计数活细胞？   用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2 000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。 12、如何消除组织培养的污染？ 当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。 高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。1） 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。2 ）分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0 mg/ml。3 ）每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。4 ）确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2－3代。5 ）在无抗生素的培养基中培养细胞一代。6 ）重复步骤4。7 ）在无抗生素的培养基中培养4-6代，确定污染是否以已被消除。 13、培养基中丙酮酸钠的作用是什么？   丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。 14、为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？   GIBICO的胎牛血清 没有预老化，储存在2－8 ℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20 ℃储存胎牛血清，避免反复冻融。 15、目录上说，Hank's 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？ Hank's 平衡盐溶液（HBS）和Earle's平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？   HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。 16、Qualified和 Certified 胎牛血清有什么差别? Certified 胎牛血清包括了Qualified 胎牛血清执行的所有的标准检验程序，而且除了这些标准检测，Certified胎牛血清还有如下一些附加的检测： End-Point Determination of Endotoxin Content 噬菌体检验 生物化学检测  激素的检测 血红蛋白检测 Sf9 细胞生长促进及方法学检测 17、二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？   二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。 18、制备 lipid-DNA的方法会影响转染效率吗？   是的。对于LIPOFECTAMlNE Reagent，稀释试剂在100 μl OPTI-MEM中，稀释DNA在100μl OPTI-MEM中。混合两种溶液在室温下孵育15分钟。对于LIPOFECTIN Reagent，在加入DNA溶液前允许稀释的试剂和培养基孵育至少30分钟可以增加3倍的效率。确保复合物在没有血清的情况下形成。孵育15分钟后，在复合物中加入含有血清的培养基（800 μl）。（注意以上是35 mm培养皿使用体积）。对于LIPOFECTAMlNE Plus Reagent DNA应该在与脂质体混合之前首先与Plus Reagent混合。LIPOFECTAMlNE 2000的操作步骤允许在一个很小的体积下混合DNA和脂质体，接下来可以不需要换培养基的情况下直接加入。对于每一种脂质体的详细的信息可以参考产品说明书。 19、我使用SF900 Ⅱ时，细胞生长良好，但是为什么我的蛋白产物不如使用Graces 液和10%胎牛血清时效guo好？   如果目的蛋白是一个后期蛋白，它将与蛋白酶一起表达，这些蛋白酶将会作用于目的蛋白。在加有血清的培养基中，这些蛋白酶将作用到血清中的蛋白，从而使目的蛋白产品保持完好。在无血清配方中，蛋白酶作用的唯yi底物是你的目的蛋白。为了避免这一问题，加入一些蛋白酶抑制剂或加入少量的血清（少于1％），让血清给蛋白酶提供作用底物。 20、如何检测内毒素(热源)水平？   LAL（Limulus Amebocyte Lysate）试验是可用的最敏感和特异的检测细菌内毒素的方法。Levin和Bang 发现细菌可引起鲎（Limulus polyphemus）血管内的凝集作用。内毒素启动一个细胞内酶原系统（丝氨酸蛋白酶级联反应系统），通过修饰凝集素，产生一种透明的胶，LAL中的凝固蛋白，从而，形成不可溶的基质。LAL试剂缓冲的鲎（血细胞）裂解物。 胎牛血清的内毒素检测是在Grand Island，按照手册上Gel-clot 方法进行的。在对血清产品进行内毒素检测前，用无热源的水1：10稀释样品。稀释样品沸水育5分钟，以消除抑制剂。（通常，血液中的内毒素结合成份的出现会抑制凝胶过程，使内毒素不能与LAL反应。样品预先热处理可以消除这种抑制作用。）   21、我可以使用固体形式的Murashige Skog 培养基吗？   如果使用固体形式的培养基，需要加入琼脂。琼脂加入前要先灭菌。应该避免MS培养基的直接灭菌，应该高压灭菌琼脂溶液，然后把融化的琼脂溶液加入到MS培养基中。 22、20 ℃下配制的缓冲液，在较高或较低的温度下PH值会改变吗？   对于普通使用的缓冲液，pH值随温度变化而变化。 下表列出温度改变10 ℃时，pH值的变化情况 例如 20 ℃下配制pH7.4 Tris缓冲液,40 ℃时pH值为 7.4-（2x0.310）＝6.78   23、室温下(25 ℃)配制的Tris-HCl溶液，在37 ℃使用时PH值是多少？ 缓冲液的PH值随温度变化而变化。下表列出了50 mM Tris-HC 溶液在4 ℃，25 ℃，37 ℃时，不同的PH值。  24、昆虫细胞培养的最适PH值和渗透压是多少？   生长培养基的PH值对细胞的增值和病毒或重组蛋白的生产均会产生影响。对于大部分鳞翅类昆虫细胞系，在PH值 6.0－6.4范围的大部分应用效果良好。培养鳞翅类昆虫细胞系时，培养基的最适渗透压是 345－380 mOsm/kg.。为保证可靠和持久的细胞培养方式，减少技术问题，保持PH值和渗透压在以上所列的范围之内。 25、High Five细胞有任何其它名称吗？   High Five细胞也被称为Trichoplasia ni 5B1-4和BTI-TN-5B1-4。

适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。幼年动物的肾、肺、肝、卵巢、上皮、肌肉与肿瘤等组织的细胞较易培养，而神经细胞则较难培养。原代细胞基础上通过胰酶等物质消化后继续用于细胞培养的细胞，它与原代细胞具有相同核型。这类细胞在体外可以无限制分裂.下面小编就讲一下细胞传代的方法以及步骤:1.【无菌环境】在细胞实验之前要注意无菌环境的建立，紫外杀毒灭菌，酒精消毒都是十分有必要的。2.【镜下检查】镜下检查结果非常重要，镜检的结果非常重要，要根据你自己的观察进行细胞密度的识别，从而进行细胞传代比例的确定，进行更好的细胞数量的控制，如果实验要求比较高，需要细胞计数板计数。3.【过火焰】记住，所有开瓶的东西都要进行过酒精灯外焰，瞬间高温进行灰尘的固定。这样会大大减少染菌几率。4.【移液工具】很多人对于移液工具都有偏好，不好说什么就是正确的。但是从无菌角度。使用移液管比微量移液枪减少污染的几率要高。希望大家能用移液管。5.【交叉污染】混匀细胞悬液和移取培养基以及血清的工具要分开；还有就是胰酶和血清也要严格分开，否则容易造成交叉感染，使细胞增加染菌几率。6.【消化时间】对于贴壁细胞，我想要大家注意的是胰酶消化时间，对于常用0.25%的胰酶最好把消化时间控制在30s内，必要是最好镜检看一下是否脱壁。但是这是一个经验活，要多积累经验。7.【细胞混匀】细胞的混匀要轻柔，气泡的产生对细胞的状态是有影响的，希望大家注意。另外，贴壁细胞容易粘连，所以要多吹打几次。

在这周周一时，接到客户的一个电话，他说到马上就要放三天假了，但我在你们这购买的对照品还没用完，不知道怎么保存才好，于是我们的技术人员很细心为他进行了讲述相关的保存方法，客户今早又来电话表示感谢，因为按照我们所说的保存方法让他的对照品十分的完好，为了让更多的用户清楚这些，本文将由古朵标准品对照品网技术人员详细讲述对照品的保存方法及选择，还有使用注意事项等用户所关注的问题。对照品的保存方法及选择有哪些?对照品的使用注意事项对照品保存方法1、对照品应按说明书规定的条件妥善保存，一般置干燥阴凉处保存，某些对照品如维生素E等需避光低温保存。要注意对照品的使用期限，过期、变质的对照品不宜再使用。开瓶后建议短期内用完，避免开瓶后长期不用，同时，在重复使用过程中应尽量避免对照品的分解、污染或吸潮2、使用中检所对照品时，应严格按说明书执行。一般情况下，供鉴别、检查用的对照品不能用于含量测定。红外鉴别用的对照品使用时应注意与样品在晶型上的差异，必要时可采用相同的方法对样品和对照品重结晶。例如氨苄西林钠具有多种不同的晶型，可用丙酮对样品和对照品重结晶后测定，以确保二者晶型和红外光谱图的一致。3、由中国药品检验总所提供的对照品或国际对照品为法定对照品，以法定对照品作对照标化的原料可称为二级对照品或工作对照品。药品生产单位为节约成本，可使用工作对照品进行日常检验，但药品检验所必须使用法定的对照品，出具的检验报告书才具有法律效力。4、除另有规定外，对照品使用时应采用适宜的方法测定其水分的含量，按干燥品(或无水物)进行计算后使用，否则会造成含量测定结果偏高。对热稳定的对照品可直接干燥后使用;对热不稳定的对照品可同时另取一份作干燥失重，扣除水分后使用。此外，对照品若含有结晶水或盐基，使用时应注意其换算。 对照品选择标准1、 对照品的选择标准应包括物质稳定性以及参比物质和测定物质的同质性围绕物质稳定性及同质性我们进行解说对照品的选择吧，在此先允许小编以打比方的方法开始，比如说：克拉维酸的对照品为克拉维酸锂，实际被测物为克拉维酸钾。用阿莫西林三水合物制备阿莫西林对照品而不用一水合物或阿莫西林制备。但是目前研发员对对照品的选择、制备和标化重视程度尚不足，造成同一个品种可能具有不同成盐形式、含不同结晶水，不同晶型的对照品。由于上述不同，某些晶型或者某些成盐形式的药物由于其不稳定性而不适宜制备成为对照品，但仍然发现个别研发员选择了不稳定形式作为对照品。其次，在对照品选择时应该充分关注不同盐基、酸根的不同用途。比如头孢替坦二钠，由于成盐的缘故，头孢替坦与头孢替坦二钠的红外图谱肯定存在不同。但是某些申请人仍采用头孢替坦对照品进行红外鉴别。红外鉴别是抗生素的常规鉴别方法，由于抗生素常常具不同的晶型，因此在使用对照品进行鉴别试验时，要考虑对照品和供试品的晶型是否一致，并注意是否与供试品生产工艺采用的精制方法一致。以避免在研究或者药检所复核时出现不一致现象。2、对照品的制备、标化和质量要求由于来源、选择、制备和质量标准的不同，造成目前在对照品质量控制方面存在不统一现象。所以研发员在对照品选择时要和对照品厂家充分沟通，交流清楚。避免选用了不符合自己要求的试剂。上海远慕标准品对照品网提供的中检所对照品及其他系列对照品在这方面做的不错，可以满足各种需求。 对照品使用注意事项由于对照品的用途广泛，在使用时有些研发人员存在用同一对照品作不同目的。在实际使用中发现部分研发员混杂使用同一对照品，将含量测定用对照品用于鉴别，鉴别用对照品用于含量测定。最后导致实验结果不准确。另外需要注意所选的药品标准物质稳定性和数量应满足整个实验计划的需要，已超过稳定期的标准物质不能使用。另外,美国药典的对照品没有有效期，但美国药典会每2月一期的药典论坛随时发布最新批号的对照品，而在美国药典实验室内，不断地对留样对照品进行监控，保证对照品的有效。

首先我们需要先了解一下标准品具体如何进行分类的，虽然我们常常看到有什么中药标准品，中检所标准品等，这些只能是它的一个系列而已，真正的标准品分类一般我们将其分类为三种，一为基准标准品，二为工作标准品，三为杂质标准品，三种类型，用途不一样，价格不一样，保存方法当然也不一样；下面由上海古朵标准品网技术详细为您讲述标准品过期后如何处理 标准品的保存方法的咨讯吧。标准品过期后如何处理_标准品的保存方法详细讲述　　标准品过期后的处理方法一般来说，如果标准品过期了，我们可以采用这几个方法。1、当作废液或者固废统一分类处理，用来做内部质量控制。2、对过期的标样作一次核查，用新购的标液去定量(请注意成本考量)，参考一下标准品的理化性质，只要变化不大，可用作回收率试验。3、可用于标准品变化规律的研究，在其降解产物响应极弱的前提下，用于色谱分析的峰定性。4、可以用来做内部质量控制，当做盲样进行数据比对，农药做定性分析和快速筛查用，实验室内部用来做摸索实验条件用，优化参数。 标准品过期后是否可以作废物利用如果标准品过期了，那是否可以做废物利用呢，常规来讲，是可以的，很多实验人员就表示到做农药做定性分析和快速筛查用，完全可以的。比如，做农药代谢研究用，一般的分析如果不需要太准确的定量也可以用。其实做残留的实验室或多或少都有过期的标准品，主要是比较难恰好在保质期内全部用完。但有些标准品过期了，还是可以使用的，曾有实验人员拿过期标准品做对比实验，数据表明，如果标准品保存得当的话，过了保质期并不影响它的使用的，甚至过期一年后定量准确性也丝毫不受影响。所以说标准品的保存方法很重要。 标准品的保存方法有哪些呢不同的标准品应根据其理化性质、保存要求的不同选择适宜的贮存环境和条件，分别置于规定的位置。保存环境：保存室应尽量设置空调设施，保证室内阴凉、干燥、避光、通风，温度在25±5℃，相对湿度在50～75%为宜。特殊品种要求严格按照规定的保存条件妥善保存。标准品应放在干燥器或其它适宜容器中保存，每一个干燥器或容器外应有区别于标准品编号的特殊编码，以示存放位置。干燥器置于专用的柜中，依次排列整齐，并由专人管理。标准品的保存期：一般按标准品的规定贮存期限执行，没有期限的原则上化学提纯物标准品为3年，生物试剂和不稳定的以6—12个月为宜。标准品保存应由管理员每天上下午各检查1次温度、湿度并做记录。凡不符合规定要求的，应及时调整纠正。多雨季节时，保管员要增加检查频次。 除以上所说的保存环境，保存期等外，我们需要知道的是不同的标准品保存方法也是不一样的，常见的标准品保存方法主要有以下几点：常温保存：通常用于化学性质比较稳定的标准品，建议保存于干燥阴凉的地方。+4度冷藏：用于常温下不是很稳定的物质，保存于冰箱冷藏室。-20度冷冻：用于化学性质不稳定，常温下容易分解的物质。-80度保存：一些具有生物活性的物质，需要保存于特定的-80度的冰箱。 对于已经配制成溶液的标准品和已经打开使用中的标准品我们又当如何保存呢?对于配制成溶液的标准品在保存的时候还需要注意：除非产品标签指明放入冰箱冷藏或冷冻，否则最好放在阴凉干燥的地方室温保存即可。因为低温的时候物质确实不容易分解，但低温使得化合物的溶解度降低，因而导致常温下就难溶解的化合物在低温下长时间放置时析出晶体，而且一旦析出晶体很难再溶解。对于已经打开使用的标准品溶液型的产品最好一次性使用完，如果不能使用完，请尽量转移到一个能够避免溶液挥发的容器中，按照产品的标签进行保存。但在保存过程中，还是有很大可能性由于溶液挥发导致成分的值与COA不符合。 使用剩余的标准品应当如何保存用试剂专用保存瓶，聚四氟乙烯阀门盖的那种，可以使用N次。取1毫升配成100毫升储备液后，将剩下的装入1毫升自动进样瓶中，旋紧瓶盖，贴上标签;将用后的储备液装入事先洗净烘干的100毫升医用试剂瓶中，盖上20毫升顶空瓶垫(大小刚好)，用铝盖封好(专用压盖器)，贴好标签，将其一并放入标液展示柜冷藏。

鉴于对照品的品种众多，对于它的保存方法我们也是一定的要求，一般来说应将对照品置于干燥阴凉处，大家都知道对照品是实验室常客，所以如果保存不当，会直接影响到它的实验精准性，但是对于不同的对照品，保存方法也是不同，建议开瓶后的对照品尽快使用完，避免对照品的分解、污染或吸潮。本文重点为您讲述对照品的正确使用方法_对照品标定方法注意细节。对照品的正确使用方法_对照品标定方法注意细节 古朵对照品网浅谈对照品的正确使用方法对于对照品的使用方法，我们一般分为四个步骤，比如开启进行时，开启后等，具体的正确使用方法请往下看：1、正确开启(对照品开启进行时)很多对照品是置玻璃安瓿中保存，启开时必须严格防止玻璃屑掉入瓶中。具体可按如下操作：轻微震敲安瓿，尽量使内容物聚集于底部，砂轮切割几圈后，平置或头部略向下斜置安瓿，带好防护手套，双手拇指顶住颈部发力，注意拇指与食指不要捏得过紧，以免捏碎头部。启开安瓿后，将安瓿稍许向下倾斜，轻微振敲，因玻璃屑较重，若混入内容物中，此法可将其振出。2、对照品开启后应严格密封，或转移至经100℃以上烘干后并置干燥器中冷却至室温的西林瓶中，密封，置干燥器中，某些品种应按使用说明再置冰箱中冷藏；对于易吸潮的对照品，如奥美拉唑等，若用于含量测定，应启开后立即使用，剩余部分日后可用于鉴别，但建议不要再用于含量测定；对于引湿性较弱、稳定性良好的品种，如氯霉素等，启开后若保存得当，亦可用于含量测定，使用时间视储存条件而定，必要时做期间检查。3、过期对照品对于过期的对照品，如果继续保存，则需单独放置，以免混淆；必要时(如中检所缺货)，亦可应急使用，可用于鉴别；如用于定量，则需有溯源核查数据保证。4、对照品保存要求a、对照品溶液贮存条件一般是在2～8℃冰箱中贮存，其间隔时限可根据对照品溶液的具体特性来确定；按照药品质量标准，配制对照品溶液，计算该对照品溶液含量，用此对照品溶液按质量标准进行正常产品检验。b、待对照品溶液放置到第一个期限(通常3天、7天、1个月等，根据对照品的稳定性确定)，按照药品质量标准，配制新的对照品溶液(按药品质量标准进行检测)计算含量。c、同时将最初的对照品溶液(当做产品)按药品质量标准进行检测，并计算含量；将所得到的含量求相对偏差，若不大于1.0%(有的规定不大于2.0%，个人觉得偏差有点大),则说明对照品溶液或标准品溶液是稳定的，在第一个期限内可以用于检验；依此继续重复确定对照品的具体贮存时间。相比对照品的使用方法而言，对照品标定方法就比较复杂一些，特别有些细节地方是我们必须要注意到的，不同品种对照品标定方法也不同，比如用于鉴别定性的化学对照品，注重其结构确证的研究资料，纯度和含量的要求一般可适当降低；那么究竟对照品标定方法的注意细节具体有哪些呢?对照品标定方法时需注意的细节要点1、供试品的取用量应满足滴定精度的要求(消耗滴定液约20ml)。2、滴定终点的判断要明确，提供滴定曲线；如选用指示剂法，应考虑其变色敏锐，并用电位法校准其终点颜色。3、为排除因加入其它试剂而混入杂质对测定结果的影响，或便于剩余滴定法的计算，可采用“将滴定的结果用空白试验校正”的办法。4、要给出滴定度(采用四位有效数字)的推导过程；标定结果要根据3个以上实验室各不少于15组测定结果经统计分析，去除离群值和可疑值后的结果，并报告可信限。目前，很多的企业其实对于对照品的管理并不是十分到位，特别是那些对照品本身就不是很了解的企业而言，经常会将对照品配制成浓度较高的储备液，但未能对其稳定性和储存期限进行考查，有些将开启后和开启前的对照品放一起，包装上也没有特别说明。这也让某些对照品失去了原本的实验精准性。

小编在很多的文章中有讲到，标准品对照品的分类有很多种，我们对标准品和对照品的区别应该要有一个明确的了解，有兴趣的朋友可以点击：如何区分标准品与对照品，对照品的作用有哪些，里面有详细的解答，可想而知，进口标准品的品牌，品种都是非常之多，从事科研试剂的商家如此众多，我们应该如何选择正规的进口标准品供应商?本文将为您一一进行详细讲解!在哪里可以购买正品进口标准品：在讲到这个问题之前，我们先一起来了解下进口标准品的品牌有哪些吧。对于科研人员来说，最常见的进口标准品品牌主要有以下几种：witega，cerilliant，Sigma-Aldrich，Dr.Ehrenstorfer GmbH，Accustandard，Honeywell，Accustandard Inc，Amresco、Sigma、Pharmacia(更多进口品牌请来电)一般来说，从事科研试剂的商家都会代理一些进口标准品品牌，但不是所有的商家都有很强的实力代理更多的进口品牌，选择购买进口标准品时，建议从以下几点着手：1，确定该商家是否为正规从事科研试剂的商家。2，公司相关证件是否齐全。3，价格，同样的进口标准品，该商家的价格却十分便宜，此时我们该注意啦。4，代理进口标准品在商家是否有相关的手续或证件。5，商家对于进口品牌的理解度是否有很深的了解。6，商家的售后服务是否到位。 进口标准品厂家：严格来说，进口标准品厂家主指是国外的厂家，因为我们都知道所谓进口即是从国外引进于国内的，在国内，我们一般可以称之为：进口标准品代理商，进口标准品供应商，这种供应商还是非常多，我们在一些搜索平台就可以搜索出很多来，但不是所有的商家都有这个实力能满足于你对进口标准品的要求!在这里，小编推荐上海古朵【进口 国产】标准品对照品厂家，古朵作为一家老牌标准品对照品供应商为客户提供了不同系列不同型号的产品，目前已和国内多所高校，事业单位，医院，生物公司，科研院等都达成了长期合作关系 ，代理的进口品牌主要有：Biotium，calbiochem，TCI，阿拉丁，TEDIA，Abcam，Ambion，BioVision，Biotium，calbiochem，cayman chemical，Cell signaling，Chemicon，Enzo life sciences，Hyclone，systembio，sigma aldrich，Santa Cruz，Qiagen，Prospec，Novus，Novagen，Molecular Probes，MitoSciences，更多的进口品牌请来电！

积雪草苷又称积雪草甙，淡黄色至淡棕黄色的粉末，无臭，味苦，稍具有引湿性；本文易溶于水，乙醇，不溶于乙醚，氯仿等！本品具有促进伤口愈合，刺激肉芽生长，治疗各种皮肤病等用途，下面和小编一些来讨论【中药标准品】积雪草苷的作用及副作用分别是什么吧！【中药标准品】积雪草苷的作用及副作用分别是什么作用：1、肝保护作用：COX-2在炎症过程中起着重要作用；可被内毒素，有丝分裂原，细胞因子等诱导表达！在CCl4所致急性肝损伤中，炎症反应被激活,包括COX-2在内的各种炎症因子大量生成，导致肝细胞进一步坏死，加重了肝损伤程度；而且有报道，COX-2 选择性抑制剂可明显减轻CCl4引起的肝损伤羟基积雪草苷能明显抑制肝组织中COX-2的表达，这是肝保护作用的主要机制之一。2、清热解毒，利湿消肿！是东方人的长寿药，可益脑提神；研究表明具有滋补，消炎，愈合伤口，利尿通便和镇定作用；对麻风病，溃疡也有疗效，对血液净化及免疫力有激活作用，因其可刺激深层皮肤细胞的更替；它是神经滋补剂，能提高记忆力，减轻精神疲劳，还可降血压，治疗肝病等。3、用于跌打肿痛，虫蛇咬伤，关节红肿，抗菌消炎；治疗因病毒或者细菌引起的带状疱疹，痢疾，湿热黄疸，水肿，淋证；也可用于丹毒，瘰疬，亲疮肿毒，利水和脾；治疗因湿热引起的水泻，痢疾，还用于胃胀胃痛，胃气不下，消化不良，胃胀打嗝，小儿疳积症。4、积雪草苷能抑制胶原纤维，具有抑制纤维组织增生的作用，促进皮肤生长，镇静安定作用；积雪草甙能治疗皮肤溃疡，如顽固性创伤，皮肤结核，麻风等；清热利湿，治疗咽喉肿痛，口舌生疮，头痛，身热，口渴等，活血化瘀。5、对LPS诱导小胶质细胞增殖的抑制作用：羟基积雪草苷能抑制Aβ诱导的海马神经元凋亡；可抑制髓过氧化物酶 (myeloperoxidase，MPO)及减少丙二醛(malondi-aldehyde，MDA)的产生，从 而抑制炎症反应及减轻氧自由基损伤；LPS 可以明显诱导体外培养小胶质细胞 的增殖和炎症因子释放。6、美容作用：在功能上，它能促进血液循环，改善痤疮性皮肤，防止色素沉淀；促进皮肤的胶原蛋白生成，改善皮肤弹性，延缓肌肤老化；紫外线照射后的晒后修复都被证实有显著效果，因此在不同类型的美容产品中，都能见到积雪草的身影。7、皮肤损伤修复羟基积雪草酸高剂量组小鼠的伤口面积显著缩小，皮肤组织中羟脯氨酸的含量显著升高；H2O2( 500 μmol/L) 引起 HUVEC 活力下降，LDH 外漏增加，胞内 MDA 含量升高，GSH 含量下降，TUNEL 检测发现 H2O2处理组细胞凋亡率显著升高。 副作用：古语云：“有得必有失，有失必有得”！同样，积雪草苷有着很多的功效与作用，但它同时还是有一定的副作用，而且严重者有可能会中毒，总体来说，积雪草苷的副作用主要有这几种：1、积雪草性寒，寒性体质的人就不适合食用积雪草，与此同时，女性朋友在经期的时候也不可以食用积雪草；寒性体质一般都会感觉手冷脚冷等，因此在吃任何中药前，都需要先了解清楚自己的体质，在服用相应符合自身健康需求的中药，这也是对自己身体健康的一种负责。2、积雪草的副作用还在于起用量的大小，药材不是平常的食物，用量和使用量都拥有明显的限制，一旦积雪草食用过量，使用者就有可能感觉头晕，这显然是得不偿失的；更严重的，过量食用积雪草还可能导致患者凝血功能障碍等中毒症状。

化学试剂的品种有很多，叫法也不一样，我们上篇文章中就给大家讲到过化学试剂的等级分类，这篇将会为大家详细讲述化学试剂的用途！关于化学试剂等级分类详情请点击：化学试剂的等级有哪些，如何进行分类？化学试剂适用范围：1、优级纯：英文代号：G.R，适用范围：用作基准物质，主要用于精密在科学研究和分析实验！2、分析纯：英文代号：A.R ，适用范围：用于一般科学研究和分析实验 ！3、化学纯：英文代号：C.P，用于要求较高的无机和有机化学实验，或要求不高的分析检验！4、实验试剂英文代号：L.R，用于一般的实验和要求不高的科学实验！化学试剂用途：1、钠类  氢氧化钠：用于造纸，肥皂，食品工业，还用于脱色，酸中和。  溴化钠：用于配制胶片感光液，医药工业。  四苯硼钠：用于玻璃和搪瓷行业，防腐剂，防冻剂，医药清毒剂。  溴酸钠：用作化妆品，冷.烫发药剂，羊毛的整理剂。2、铜类  式碳酸铜：用于制造烟火和颜料，杀虫剂，电镀，防腐剂。  氯化铜：电镀工业用作电镀增加铜离子的添加剂，用作玻璃陶瓷着色剂，用于金属冶炼、照相制版作腐蚀剂，木材防腐用作杀虫剂，净水消毒剂。  氯化亚铜：石油工业的脱硫剂和着色剂，用作杀虫剂，防腐剂，还用于冶金，电镀，医药以及制造电池。3、铝类  结晶氯化铝：用作木材防腐剂，造纸施胶沉淀剂，还用于染色和医药工业。硝酸铝：用于制造有机合成催化剂，印染工业的媒然剂，用作鞣革和皮革整理剂。  硫酸铝：主要用于净水和造纸，印染工业，油脂工业，石油工业，木材工业。  氢氧化铝：用作油墨的增稠剂，搪瓷，陶瓷，玻璃器皿和润滑剂的制造颜料。4、铅类  碱式碳酸铅：是制造陶瓷彩釉、绘画、涂料和化妆品的颜料，还用作珠光塑料、珠光漆料以及户外用漆。 硝酸铅：用作玻璃、搪瓷、造纸、鞣革、烟火、炸药以及印染工业。  乙酸铅：用于农药、医药、染料和涂料。  锂类  碳酸锂：在玻璃、陶瓷、医药和食品工业中应用广泛，也用于合成橡胶、染料和半导体。  无水氯化锂：是制造焊接材料、空调设备和制造金属锂的原料。5、铁类 无水三氯化铁：主要用作饮水的净水剂和废水的处理净化沉淀剂，还用于照相与印刷制版的蚀刻剂，是制造颜料和墨水的原料。  三氯化铁：营养增补剂、铁质强化剂，还用于婴儿奶粉。  硝酸铁：催化剂，媒染剂，金属表面处理剂，氧化剂。  硫化亚铁：用于造纸，涂料。 硫酸亚铁：用于农药，医药和食品工业，还用于电镀工业。

    1.先将干粉的纤维素浸泡在蒸馏水中，一段时间大约1小时左右，去除杂质，最好抽干一下；    2.再用0.1mol/l的HCl溶液浸泡2小时，用去离子水洗净至PH中性，并抽干；    3.将抽干的纤维素再浸泡在0.1mol/l的NaOH溶液中2小时，用去离子水洗至中性，抽干。即可用了    对于用过的纤维素，可以重复利用多次，但需要经过再生处理后才可以使用。    再生处理可先用高浓度NaCl (1－2 mol/L)过柱冲洗柱床，以除去DEAE－52阴离子交换纤维所吸附的成份。    然后，再用0.1 mol/L的HCl和NaOH处理，处理方法与预处理完全相同。

PCR技术可用于：（1）检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态；（2）有效检测癌基因的突变，准确检测癌基因的表达量PCR技术实验方法原理PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备； ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。 重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。实验材料模板DNA试剂、试剂盒dNTP Taq DNA聚合酶 蒸馏水 PCR缓冲液 引物 氯化镁仪器、耗材PCR仪 移液枪 PCR板 薄壁管 离心管 离心管盒实验步骤一、标准的PCR反应体系 10×扩增缓冲液 　   10 ul4种dNTP混合物 　 各200 umol/L引物 　　　　 　     各10～100 pmol模板DNA 　　　 　0.1～2 ugTaq DNA聚合酶 　  2.5 uMg2+　　　　　　 1.5 mmol/L加双或三蒸水至 　  100 ul二、PCR引物设计PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。1.   引物设计的基本原则（1）  引物长度：15-30 bp，常用为20 bp左右。（2） 引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。（3） 引物内部不应出现互补序列。（4）两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。（5） 引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。（6）引物3‘端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，最佳选择是G和C。（7） 引物的5 ′端可以修饰。如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。2.   引物设计软件Primer Premier5.0 （自动搜索）*、Oligo6 （引物评价）、Vector NTI Suit、DNAsis、Omiga、DNAstar、Primer3 （在线服务）。三、模板的制备（1）PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。（2）模板的取材主要依据PCR的扩增对象，可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。（3）标本处理的基本要求是除去杂质，并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以破碎的细菌，可用溶菌酶加EDTA处理。所得到的粗制DNA，经酚、氯仿抽提纯化，再用乙醇沉淀后用作PCR反应模板。四、PCR反应条件的控制1.  PCR反应的缓冲液提供合适的酸碱度与某些离子 。 2.  镁离子浓度 总量应比dNTPs的浓度高，常用1.5 mmol/L。　　3.  底物浓度dNTP以等摩尔浓度配制，20～200 umol/L。　4.  TaqDNA聚合酶2.5U(100 ul）。　　5.  引物 浓度一般为0.1 ～0.5 umol/L。　6.  反应温度（1）变性温度和时间95℃，30 s。（2）退火温度和时间 低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。（3）延伸温度和时间72℃，1 min/kb(10 kb内）。（4）Tm值=4(G+C) +2(A+T) 7.  循环次数 ：一般为25 ～30次。循环数决定PCR扩增的产量。模板初始浓度低，可增加循环数以便达到有效的 扩增量。但循环数并不是可以无限增加的。一般循环数为30个左右，循环数超过30个以后，DNA聚合酶活性逐渐达到饱和，产物的量不再随循环数的增加而增 加，出现了所谓的“平台期”。五、PCR的循环参数 1.  预变性（Initial denaturation）模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。2.  循环中的变性步骤循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可 缩短该步骤时间，变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。3.  引物退火（Primer annealing）退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。4.  引物延伸引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000 bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1 min/kbp。5.  循环数大多数PCR含25-40循环，过多易产生非特异扩增。6.  最后延伸在最后一个循环后，反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。六、PCR步骤 1.  DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA。2.  退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.  延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。七、PCR检测 PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物 两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。展开注意事项其他一、  PCR反应的关键环节1.  模板核酸的制备。2.  引物的质量与特异性。3.  酶的质量。4.  PCR循环条件。二、 PCR常见问题及对策 1.  假阴性，不出现扩增条带（1）模板原因①  模板中含有杂蛋白质。②  模板中含有Taq酶抑制剂。③  模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白。④  在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤  模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。（2）酶失活①  需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。②  忘加Taq酶或溴乙锭。（3）引物①  引物质量。②  引物的浓度。③  两条引物的浓度是否对称。解决对策：①  选定一个好的引物合成单 位。②  引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条 带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。③  引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④  引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。（4）Mg2+浓度①  浓度过高降低PCR扩增的特异性。②  浓度过低影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。（5）反应体积的改变①  通常进行PCR扩增采用的体积为20 ul、30 ul、50 ul或100 ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定;②  在做小体积如20 ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。（6）物理原因 ①  变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性。②  退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率；退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。③  扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度有问题。（7）靶序列变异①  靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合。②  靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列。 2.  假阳性，出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。 （1）引物设计不合适①  选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性。②  靶序列太短或引物太短。（2）靶序列或扩增产物的交叉污染①  整个基因组或大片段的交叉污染。解决方案：操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。必要时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的核酸。②  空气中的小片段核酸污染，这些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出PCR产物，而导致假阳性的产生。解决方案：可用巢式PCR方法来减轻或消除。3.  出现非特异性扩增：PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。（1）  引物与靶序列不完全互补或引物聚合形成二聚体。（2） Mg2+离子浓度过高。（3） 退火温度过低。（4） PCR循环次数 过多有关。（5） 酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：必要时重新设计引 物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次 数。适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性，65℃左右退火与延伸）。4.  出现片状拖带或涂抹带 （1）原因①  酶量过多。②  酶的质量差。③  dNTP浓度过高。 ④  Mg2+浓度过高。⑤  退火温度过低。⑥  循环次数过多引起。（2）对策① 减少酶量。②  调换另一来源的酶。③  减少dNTP的浓度。④  适当降低Mg2+浓度。⑤  增加模板量。⑥  减少循环次数。